Un nouveau rôle pour l'interleukine (IL) dans la fibrose

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Partie Ⅰ : L'IL-33 nucléaire limite la conversion précoce des fibroblastes en un phénotype sécrétant une matrice extracellulaire

Francesca Gatti, Sobuj Mia, Clara Hammarström & et al.

Interleukine(IL)-33 est une cytokine qui semble médierfibroseen signalant via son récepteur ST2 (IL(Interleukine)-33R/ILiRL1). Cependant, il s'agit également d'une protéine qui, après synthèse, est triée vers le noyau cellulaire, où elle semble affecter le repliement de la chromatine. Nous décrivons ici un nouveau rôle pour l'IL nucléaire(Interleukine)-33 dans la régulation du phénotype des fibroblastes chez la sourisun reinfibroseentraîné par une obstruction urétérale unilatérale. Profilage transcriptionnel de l'IL(Interleukine)-33-les reins déficients 24 h après la ligature ont révélé une expression accrue des gènes fibrogènes et un enrichissement des ensembles de gènes impliqués dans la formation et le remodelage de la matrice extracellulaire. Ces changements reposaient sur les effets intracellulaires de l'IL(Interleukine)-33 parce qu'ils n'ont pas été reproduits par un traitement avec un anticorps neutralisant anti-L.33 qui prévient l'IL(Interleukine)-la signalisation des récepteurs 33R/ST2L et ils n'ont pas non plus été observés dans les reins déficients en L-33R/ST2-. Pour explorer plus avant la fonction intracellulaire de lL-33, nous avons établi des profils de transcription de fibroblastes humains, en observant que l'inactivation de IL-33 faussait le profil de transcription d'un phénotype inflammatoire vers un phénotype myofibroblastique, reflété par des niveaux plus élevés de COL3Al , COL5A1 et la protéine transgéline, ainsi que des niveaux d'expression plus faibles d'IL6, CXCL8, CLL7 et CCL8. En conclusion, nos résultats suggèrent que l'IL nucléaire(Interleukine)-33 dans les fibroblastes atténue la réponse profibrotique initiale jusqu'à ce que des stimuli persistants, imposés par UUO, puissent annuler ce mécanisme de protection.

Interleukine-33 (IL-33/IL(Interleukine)1F1l) est membre de lainterleukine-1 superfamille qui a reçu une attention considérable en tant que médiateur putatif defibrosedéveloppement. Une grande partie de cet intérêt a été stimulé par l'observation que des injections répétées d'IL(Interleukine)-33, agissant via le récepteur transmembranaire ST2(IL(Interleukine)33RJ/IL(Interleukine)1RL1), cutané induitfibrose' et en observant que IL(Interleukine)-33-la carence a considérablement réduit le foie induit par le tétrachlorure de carbonefibrose. En effet, IL(Interleukine)-33 peut promouvoirfibroseen générant de l'IL profibrotique(Interleukine)-13 à partir de cellules lymphoïdes innées de type 2 (ILC2) et de lymphocytes T auxiliaires 2'.

Interstitiel rénalfibroseet la perte de cellules tubulaires parenchymateuses sont des résultats finaux courants des maladies rénales chroniques et de bons prédicteurs de la progression de la maladie. Les données actuelles générées à partir de deux modèles de souris différents appuient l'hypothèse selon laquelle IL(Interleukine)-33 contribue également à la pathologie rénalefibrose: dans l'obstruction urétérale unilatérale (UUO), Chen et al ont rapporté une perte parenchymateuse réduite et une prolifération épithéliale accrue dans les deux IL(Interleukine)-33- et ST2-souris déficientes', et dans l'ischémie-reperfusion rénale, Liang et al. a montré que l'inhibition de l'IL(Interleukine)-33 signalisation par administration d'IL soluble(Interleukine)-33 récepteur (sST2) également réduitfibrose.

Rapports qui ont abordé les propriétés fibrogéniques de l'IL(Interleukine)-33 sont généralement exécutés et interprétés en vue d'un mécanisme par lequel IL(Interleukine)-33, libéré des cellules stressées ou endommagées, se lie au domaine extracellulaire de son récepteur. En revanche, le tri de IL.(Interleukine)-33 au noyau cellulaire après synthèse - et sa capacité à affecter le repliement de la chromatine indépendant du récepteur suggère que l'IL -33 peut également exercer des fonctions de type facteur de transcription et indépendantes du récepteur, un mode d'action qui a reçu beaucoup moins d'attention expérimentale . Ces considérations sont d'autant plus intéressantes que la localisation nucléaire de l'IL(Interleukine)-33 est vital, comme le révèle une inflammation mortelle qui ne se résout pas lorsque le signal de localisation nucléaire est perturbé ».

Le médiateur cellulaire clé defibroseest le myofibroblaste qui, lorsqu'il est activé, sert de cellule primaire productrice de collagène et contractile pour la réparation des tissus. Les myofibroblastes sont caractérisés par l'expression de l'actine du muscle lisse (a-SMAACTA2) qui permet leur fonction contractile et contribue à l'effet destructeur defibrosedéveloppement, nous avons précédemment démontré que l'I -33 nucléaire est rapidement et fortement induit dans les myofibroblastes lors de la cicatrisation expérimentale des plaies, dans les ulcères gastriques et dans la colite ulcéreuse. En effet, l'expression de IL(Interleukine)-33 semble être une caractéristique générale des myofibroblastes a-SMA-positifs, car on le trouve également dans le pancréasfibroseet dans les cellules étoilées de type myofibroblaste du foie. Pris ensemble, ces résultats rendent intéressant de se demander si IL(Interleukine)-33 pourrait jouer un rôle dans la régulation de la fonction et de la différenciation des myofibroblastes.

Nous décrivons ici un nouveau rôle de lL-33 nucléaire dans la régulation du phénotype des myofibroblastes. Par délétion génétique ou inhibition pharmacologique de l'IL(Interleukine)-33 dans le modèle UUO, ainsi que l'épuisement de l'IL(Interleukine)-33 dans des fibroblastes dermiques primaires humains activés, nous démontrons que l'IL nucléaire(Interleukine)-33 limite la conversion précoce en un phénotype myofibroblastique à part entière et prend en charge un phénotype inflammatoire. Épuisement de l'IL(Interleukine)-33 a augmenté l'expression des composants de la matrice extracellulaire COL1Al, COL1A2, COL3A1, COL5A1 et la transgéline, mais a inhibé l'expression de la cytokine pro-inflammatoire IL(Interleukine)-6 et les chimiokines CXCL8 CCL7 et CCL8. Nos résultats introduisent donc une nouvelle perspective pour comprendre le rôle de l'IL-33 dansfibroseDéveloppement et homéostasie tissulaire.

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Résultats

Les myofibroblastes sont l'IL dominant(Interleukine)-33-exprimant des cellules dans l'UUO murin.Une étude récente de Chen et ses collègues a rapporté une expression accrue de l'IL(Interleukine)-33 et ST2 au jour 4 après une obstruction urétérale unilatérale. Nous avons abordé leur expérience en collectant des reins à 1, 7 et 21 jours après UUO chez des souris C57BL/6J, en observant une augmentation constante de l'IL(Interleukine)33 transcriptions d'ARNm (Fig. 1A) et augmentation du nombre de cellules exprimant l'IL nucléaire(Interleukine)-33(Fig.1B). Nous avons également observé la transcription et l'expression protéique du collagène de type I reflétant le développement defibrose(Fig. IC, D). Nous avons ensuite analysé le phénotype de l'IL(Interleukine)-33-cellules exprimant. Comme Chen et al., nous avons observé que l'IL(Interleukine)-33-le sous-ensemble de cellules exprimant vu au jour 2 consistait principalement en myofibroblastes positifs pour l'a-SMA, cependant, nous n'avons trouvé aucun signal pour l'IL(Interleukine)-33 dans les cellules endothéliales CD31-positives ni dans les leucocytes CD45-positifs (Fig. IE et Figure S1). Nous avons également observé IL(Interleukine)-33 dans les péricytes dispersés (pointe de flèche rouge sur la Fig.1A, panneau du jour 21). Une immunocoloration appariée pour PDGFRB, un autre marqueur des myofibroblastes et des péricytes, a révélé une colocalisation étendue (Fig. IE) De plus, nous avons évalué si IL(Interleukine)33 a été colocalisé avec des marqueurs connus d'activation des fibroblastes, constatant que l'expression de S100A4 (également connue sous le nom de protéine spécifique des fibroblastes, FSP -1), était plutôt exprimée dans les cellules endothéliales des capillaires et des vaisseaux de taille moyenne (Fig. IE) . De même, VIM / vimentine a également été trouvé principalement dans les cellules endothéliales, en particulier dans les glomérules et les vaisseaux de taille moyenne, et il n'y avait pas de co-expression manifeste dans IL(Interleukine).33-cellules positives (Fig 1E). Analyse plus approfondie de l'IL(Interleukine)-33-L'expression des myofibroblastes au jour 7 a révélé qu'ils étaient principalement localisés dans le cortex et la jonction corticomédullaire. et moins abondant dans la moelle et la papille (Fig.1F).

Figure 1. L'obstruction urétérale unilatérale induit l'IL(Interleukine)-33 expression dans les reins de souris.

(A,C) Expression relative de 33 et Collal dans les reins de souris témoins saines (n=2) ou de souris soumises à une opération fictive (n=1) ou UUO après 1, 7 ou 21 jours (n=3 à chaque instant). Les niveaux de transcription ont été quantifiés comme détaillé dans Matériels et méthodes par qRT-PCR. Les points de données représentent des souris individuelles.(B,DF)Photomicrographies représentatives de coupes de tissus colorées pour IL(Interleukine)-33 [signal marron dans (B) et (F), signal marron ou sarcelle dans (E)], COL1 (signal marron dans le panneau D), Asma (rouge, E, F), CD31 (violet, E ),PDGFRB(sarcelle,E),Vimentine (sarcelle,E) et S100A4(violet,E) dans les reins de souris témoins saines ou de souris soumises à UUO2 jours(E),7 jours(B,D,F) ou 21 jours (B,D)précédemment. Le panneau （F） montre différentes zones du rein telles qu'elles sont étiquetées. Barres d'échelle=20 μm.

La suppression génétique de I-33 a un impact négligeable sur la progression de la fibrose dans l'UUO mais négocie une stimulation précoce de la synthèse de collagène.Nous avons ensuite évalué le rôle putatif de l'IL(Interleukine)-33 en comparant la réponse à l'obstruction rénale en IL(Interleukine)-33 et souris de type sauvage. Contrairement à Chen et ses collègues, qui ont signalé une réductionfibrosedéveloppement en IL(Interleukine)-33-souris déficientes soumises à UUO, nous n'avons observé aucune différence entre IL(Interleukine)33--et WT'souris dans le développement de la fibrose au jour 7 ou 21 après UUO par analyse immunohistochimique du collagène de type I (Fig.2A, B). Cependant, en disséquant la réponse fibrotique au niveau transcriptionnel en évaluant les transcrits de collagène, nous avons observé une régulation à la hausse précoce et significative à des niveaux deux fois plus élevés de transcrits Collal et une tendance à l'augmentation de Col3al lors de la comparaison d'IL(Interleukine)-33-reins déficients et de type sauvage au jour 1 (Fig.2C, D). Nous avons donc décidé de reproduire le plan expérimental de Chen et al. en analysant également des échantillons au jour 4 post-UUO et en incluant des souris déficientes en ST2-, en les comparant à IL(Interleukine)-33-souris déficientes et WT. Ces analyses ont révélé une augmentation substantielle de Colla2 en IL(Interleukine).33-reins déficients par rapport aux reins de type sauvage au jour 4, mais aucune augmentation correspondante des reins ST-2-déficients (Fig 2E). Il n'y avait pas de différence manifeste dans les niveaux de transcription de Collar et Col3al entre les génotypes au jour 4, ce qui indique que l'effet sur ces gènes est de plus courte durée (données non présentées et Fig.2F).

Figure 2. Expression du collagène en IL(Interleukine)-33-/et rein de type sauvage pendant UUO.

(A, B) Photomicrographies représentatives de coupes de tissus colorées pour COL1 (marron) dans les reins de souris I-33-- et WT 7 et 21 jours après UUO. (C, D) Évolution temporelle comparant la transcription de l'ARNm de Collal et Col3al dans IL(Interleukine)-33--et des souris WT, montrant des souris témoins saines (n=2), des souris opérées de façon factice (n=1) et des souris soumises à UUO1,7 ou 21 jours auparavant (n{{ 7}} à chaque instant et de chaque génotype).(E,F) Comparaison de la transcription Collal et Col3al dans les reins de l'IL(Interleukine)Souris -33-,ST2-et WT 4 jours après l'opération factice (n=5 par génotype) ou UUO(n=10par génotype). Les niveaux de transcription ont été quantifiés par qRT-PCR de l'ARNm. Les points de données représentent des souris individuelles, les barres indiquent les valeurs moyennes.*p<><><>

IL(Interleukine)-33 atténue l'expression des gènes profibrotiques dans la phase précoce de l'UUO.L'expression accrue de Collar et Col31 au jour 1 (Fig. 1CD) et Colla2 au jour 4 (Fig.2E) en IL(Interleukine).33-les souris déficientes ont indiqué un rôle de l'IL(Interleukine)-33 dans la réponse précoce à une blessure. Nous avons exploré cette possibilité en incluant plus d'animaux dans une expérience élargie, en observant des niveaux accrus de transcription de Collar, Colla2 et Col3al dans IL(Interleukine).-33-souris déficientes au jour 1 (Fig. 3A-C).

Ayant constaté qu'IL(Interleukine)-33 dans les tissus rénaux de souris soumises à une UUO localisée dans les noyaux cellulaires, nous avons ensuite demandé si l'expression génique altérée observée dans l'IL(Interleukine)-33-les souris déficientes au jour 1 après l'UUO étaient dues à la libération de leur impressionnante fonction IL nucléaire-33 ou à l'absence d'IL extracellulaire(Interleukine)-33. Nous avons abordé cette dernière option en administrant un anticorps neutralisant ciblant l'IL(Interleukine)-33 aux souris de type sauvage avant UUO (Fig. 3D). Ce traitement n'a pas reproduit le phénotype fibrogène de l'IL(Interleukine)33 mutants, renforçant l'hypothèse que l'augmentation de l'expression des gènes profibrotiques observée en l'absence d'IL(Interleukine)-33 était dû à un manque d'IL nucléaire plutôt qu'extracellulaire(Interleukine)-33.

Figure 3.IL(Interleukine)-33 atténue l'expression des collagènes dans la phase précoce de l'UUO.

(AC) Transcription de Collal, Colla2 et Col3al dans les reins de l'IL(Interleukine)-33-/et souris WT le jour suivant l'opération fictive (n=5 par génotype) ou UUO(n=10par génotype). (D) Transcription de Col3al dans les reins de souris WT traitées avec des anti-IL(Interleukine)-33, anticorps de contrôle isotypique ou véhicule avant UUO. Les reins ont été prélevés 24 h après UUO (n=10 par groupe de traitement) ou opération fictive (n=5). Les niveaux de transcription ont été quantifiés par qRT-PCR. Les points de données représentent des souris individuelles, les barres indiquent les valeurs moyennes.**p<><>

Analyse du transcriptome de l'IL(Interleukine)-33-les reins déficients révèlent un profil de réorganisation de la matrice extracellulaire et de formation de collagène.Pour étudier plus en détail la réponse précoce à l'UUO par profilage transcriptionnel, l'ARN a été extrait des reins de l'IL(Interleukine)-33-souris déficientes et de type sauvage 24 h après UUO. Un discriminant linéaire de Fisher par paires24 a été utilisé pour identifier les 5 % supérieurs (200 gènes) de gènes exprimés de manière différentielle entre le WT et l'IL(Interleukine)-33-reins déficients révélant une séparation claire entre les génotypes dans une analyse en composantes principales (Fig. 4A). Une approche non contraignante (p<0.05,><0.25, and="" fold="" change="">1.3) ont identifié 134 sondes régulées négativement et 46 sondes régulées positivement dans l'IL de contraste(Interleukine)33−/− (n=5) versus WT (n=4) (Suppl. Tableau S1), parmi ces derniers notamment Col1a1, Col1a12 et Col3a1 ainsi que les Acta2 associés aux myofibroblastes (Fig. 4B) . En outre, l'analyse de l'ontologie des gènes des gènes exprimés de manière différentielle à l'aide du regroupement d'annotations DAVID (tableau S2) a révélé un enrichissement positif pour les termes GO associés aux collagènes et aux inhibiteurs de protéase, ainsi que la liaison PDGF et l'interaction avec les récepteurs ECM, et un enrichissement négatif pour GO-. termes associés à l'activité oxydoréductase et aux transporteurs d'anions indépendants du sodium.

Figure 4. Résumé des différences de transcription entre IL(Interleukine)-33-souris déficientes et de type sauvage 24h après UUO.

(A) Le diagramme de dispersion 3D montre la distribution des échantillons basée sur une analyse en composantes principales de 200 gènes. (B) Carte thermique des meilleurs gènes exprimés de manière différentielle.

L'épuisement du fibroblaste IL.33 favorise une signature génique compatible avec un dépôt accru de matrice extracellulaire.Pour explorer la fonction de l'IL(Interleukine)-33dans l'IL dominant(Interleukine)-33-exprimant la population cellulaire des reins obstrués, nous avons orienté les fibroblastes humains en culture vers un phénotype de myofibroblaste en les exposant à l'IFN-y et au TGF- pendant 24 h² après l'inactivation de l'I-33 par l'ARNsi. Un knockdown efficace a été vérifié à la fois au niveau des protéines et des transcrits (Fig.5A) et s'est accompagné d'une augmentation des niveaux d'ARNm et de protéines de COL3A1, COL5A1 et TAGLN profibrotiques (Fig. 5B-D). Les analyses initiales ont indiqué l'implication du TGF- et nous ont incités à profiler de manière transcriptionnelle des fibroblastes humains mis en culture et regroupés traités avec des siARN en IL(Interleukine)-33 et activé par IFN-y (pour induire IL(Interleukine)-33 expression) ou par la combinaison d'IFN-y et de TGF-B pendant 24 h Cette analyse a identifié 64 gènes différentiellement exprimés associés à la déplétion de l'IL(Interleukine)-33(adj. p<0.05 and="" fold="" change="">1.5, Fig.5E), dont 35 étaient communs aux deux traitements par cytokines (Fig. 5E, F). De plus, la plupart des gènes ont montré des tendances similaires dans les deux conditions, même s'ils n'ont atteint le seuil d'expression différentielle choisi que sous l'un d'eux (Fig. 5F), ce qui appuie l'hypothèse selon laquelle l'effet d'inhibition de l'IL(Interleukine)-33 était similaire dans les deux conditions. Pour l'analyse de l'ontologie des gènes, nous avons donc considéré les gènes exprimés de manière différentielle par IL(Interleukine)Épuisement de -33 sous au moins une condition et regroupement d'annotations effectué (tableau S3), en accord avec nos résultats dans l'IL exposé à l'UUO(Interleukine)-33-reins déficients, nous avons constaté que l'inhibition de l'IL(Interleukine)-33 dans les fibroblastes a conduit à une expression accrue de gènes enrichis en termes GO associés au collagène et aux composants de la matrice extracellulaire. De plus, les gènes réprimés par l'épuisement de I-33 ont été enrichis pour les termes GO associés à une réponse à la stimulation inflammatoire. Ensemble, nos données impliquent qu'IL(Interleukine)L'expression de -33 dans les fibroblastes sert à atténuer la régulation à la hausse des transcrits liés au dépôt de matrice extracellulaire et à l'activation des myofibroblastes, tandis que les transcrits inflammatoires sont dans une certaine mesure soutenus par l'IL(Interleukine)-33.

Figure 5. Épuisement des fibroblastes IL(Interleukine)-33applique une signature génétique compatible avec un dépôt accru de matrice extracellulaire.

Expression de l'IL(Interleukine)Expression de 33(A), COL5A1(B), FIBL5(C) et TGLN(D) dans des fibroblastes humains traités avec IL(Interleukine)-33-l'ARNsi spécifique et brouillé a été mesuré par gRT-PCR (panneaux du haut) et western blot (panneaux du bas). Les barres montrent les valeurs moyennes de 4 expériences indépendantes,*p<0.05.(e)venn diagram="" comparing="" differential="" expression="" of="" transcripts="" in="" response="" to="" the="" silencing="" of="">(Interleukine)33 entre les cellules témoins et activées.

(F) Carte thermique montrant les transcrits exprimés de manière différentielle en réponse au siRNA-silençage de l'IL(Interleukine)-33 dans les cellules de contrôle et activées.

Épuisement de l'IL(Interleukine)-33 dans les fibroblastes activés favorise un phénotype myofibroblastique plutôt qu'un phénotype inflammatoire.Sur la base de notre observation, l'effet de I-33 semble persister et devenir plus important au fil du temps, même si IL(Interleukine)-33 l'expression diminue (Figure S2A, B), nous avons ensuite demandé si la fonction nucléaire principale de IL(Interleukine)-33 pourrait être la régulation de la différenciation des fibroblastes plutôt que la régulation directe des effecteurs pro-fibrotiques. Lors de la stimulation, les fibroblastes quiescents et d'autres cellules mésenchymateuses développent des fonctions inflammatoires et/ou contractiles. Le spectre entre les fibroblastes inflammatoires et les myofibroblastes contractiles reste mal défini et représente probablement une transition glissante plutôt que deux phénotypes distincts. Cependant, une publication récente d'Ohlund et al.23 a comparé les fibroblastes associés au cancer (CAF) aux cellules étoilées pancréatiques quiescentes, identifiant un phénotype inflammatoire appelé iCAF (co-cultivé en Transwells avec des organoïdes tumoraux sécrétant des cytokines et exprimant des niveaux élevés et faibles de IL(Interleukine)6 et SMA, respectivement [IL(Interleukine).dPa-SMAl]) et un phénotype myofibroblastique contractile, myCAFs (IL(Interleukine)6"a-SMA-, cultivé en monocouches denses), le profilage transcriptionnel et la comparaison des iCAFs et mvCAFs ont identifié des profils transcriptionnels caractéristiques. Tandis que les fibroblastes à phénotype inflammatoire (iCAFs) boostaient leur expression deinterleukineset les chimiokines, celles ayant un phénotype myofibroblastique (myCAF) ont été caractérisées par une expression accrue des gènes de réponse au TGF et des composants de la matrice extracellulaire, y compris les collagènes3. Nous avons utilisé cet ensemble de données pour générer des listes de signatures composées des meilleurs gènes régulés de manière différentielle entre les phénotypes et effectué une analyse d'enrichissement de l'ensemble de gènes dans le logiciel GSEA. Les résultats ont indiqué que l'inhibition de I-33 soutenait un phénotype myofibroblastique contractile (myFBL) et inhibait un phénotype inflammatoire (iFBL) dans les fibroblastes humains (Fig. 6A, B, Tableau S4), concordant ainsi avec les résultats de notre analyse d'ontologie génique . À ce stade, nous avons tourné notre attention vers IL(Interleukine)6 et CXCL8, des cytokines qui ont été proposées comme marqueurs des iCAF, constatant que bien que ces gènes ne remplissaient pas les critères d'expression différentielle dans notre analyse du transcriptome, une réduction de leurs niveaux d'expression pouvait être détectée par qRT-PCR suite à l'épuisement de l'IL(Interleukine)-33(Fig.6C, D). Parmi les médiateurs inflammatoires trouvés pour être régulés à la baisse dans notre analyse du transcriptome (Fig. 5F), nous avons également confirmé une réduction de l'expression de CCL7 et CCL8 dans les cellules traitées avec des anti-IL(Interleukine)-33 ARNsi (Fig. 6E, F).

Ces observations nous ont incités à rechercher si nos résultats pouvaient être traduits dans le modèle murin UUO le jour 1. L'analyse immunohistochimique (Fg.6G) et la quantification (Fig. 6H) ont révélé l'induction de l'IL(Interleukine)6- exprimant des cellules dans des reins de type sauvage, similaires aux observations au niveau de la transcription par Chen et al4. En revanche, nous avons observé un nombre significativement réduit d'IL(Interleukine)-6-cellules positives en IL(Interleukine)-33- souris, en bon accord avec nos données sur les fibroblastes humains générés in vitro.

Figure 6. Épuisement de l'IL(Interleukine)-33 oriente les fibroblastes vers un phénotype myofibroblastique.

(A, B) L'analyse d'enrichissement de l'ensemble de gènes a montré que les cellules traitées avec IL(Interleukine)-33-des ARNsi spécifiques ont été enrichis positivement pour une signature myofibroblaste (myFBL) versus fibroblaste inflammatoire (iFBL) et enrichis négativement pour une signature inflammatoire versus fibroblaste quiescent. (CF) Transcription de l'IL(Interleukine)6(C), IL(Interleukine)8(D), CCL7(E) et CCL8(F) dans des fibroblastes humains traités avec IL(Interleukine)L'33-ARNsi spécifique ou brouillé a été mesuré par gRT-PCR. Chaque point de données montre les valeurs moyennes des triplicats techniques d'expériences indépendantes. (G) Photomicrographies représentatives de sections de rein récoltées 4 jours après une chirurgie fictive ou UUO de WT et IL(Interleukine)-33-/- souris et immunocoloration pour IL(Interleukine)-6(signal marron). Barres d'échelle=100 um.(H)Quantification en aveugle du signal énumérant le nombre moyen de cellules positives par champ visuel à haute puissance. Les points de données individuels montrent le nombre moyen de cellules positives dans une souris, en comptant 3 champs de haute puissance dans les zones de densité la plus élevée. *p<>

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