Activité anti-nociceptive et anti-inflammatoire causée par Cistanche Deserticola chez les rongeurs

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Li-Wei Lin, et al

Résumé

Dans la présente étude, les rhizomes deCistanchedésertique(Orobanchaceae, en abrégé CD) ont été extraites avec de l'éthanol à 50 % et isolées de façon ordonnée par de l'acétate d'éthyle, du n-butanol et de l'eau. L'analgésique etanti-inflammatoireles effets de l'extrait de CD et des trois couches ont été évalués dans plusieurs modèles animaux. CD(Cistanchedésertique)les extraits ont efficacement inhibé la réponse de torsion induite par 1 % d'acide acétique et les réponses de léchage biphasique causées par 1 % de formol, et ont également réduit l'œdème induit par 1 % de carraghénane mais pas de zymosan. De plus, les couches butanoïque et aqueuse de CD(Cistanchedésertique)l'extrait a non seulement réduit la douleur induite par l'acide acétique et le formol, mais a également diminué l'œdème induit par le carraghénane. Effets de la couche butanoïque du CD(Cistanchedésertique)l'extrait sont meilleures que celles de la couche aqueuse. De plus, l'effet de la couche butanoïque de CD(Cistanchedésertique)l'extrait n'a pas été aboli par la naloxone. Ces résultats ont révélé que possède des propriétés analgésiques etanti-inflammatoireeffets, et les couches butanoïque et aqueuse sont principalement des constituants actifs. De plus, l'analgésique etanti-inflammatoireeffets de la couche butanoïque du CD(Cistanchedésertique)l'extrait n'étaient pas liés aux récepteurs opioïdes et au système immunitaire.

Mots clés:Cistanche deserticola; Activité analgésique ; Activité anti-inflammatoire

1. Introduction

CistanchedésertiqueMaman. (Orobanchaceae, en abrégé CD), une herbe indigène en Chine est largement utilisée en médecine traditionnelle pour divers traitements thérapeutiques, y compris des indications sédatives, analgésiques et renforçant le système immunitaire (Lee, 1986). Des études pharmacologiques modernes ont souligné CD(Cistanchedésertique)l'extrait possédait un effet immunostimulant (Chin et Su, 1993), un effet de piégeage des radicaux libres (Hsu et al., 1995) et une augmentation de l'activité SOD (Chang et al., 1995). Dans une étude récente, la réaction des radicaux libres a joué un rôle important dans les processus inflammatoires (Arrigoni-Martelli, 1985). Par conséquent, la présente étude a tenté d'étudier les effets analgésiques putatifs de la CD(Cistanchedésertique)extrait chez la souris avec test de contorsion induite par l'acide acétique (Taber et al., 1969) et test de léchage induit par le formol (Shibata et al., 1989). Dans un deuxième temps, nous avons également étudié la possibilitéanti-inflammatoireactivités du CD(Cistanchedésertique)extrait sur le processus inflammatoire classique avec test d'oedème induit par la carraghénane (Winter et al., 1962) et processus inflammatoire alternatif avec test d'oedème induit par le zymosan (Tarayre et al., 1989). Enfin, nous avons recherché des couches actives d'extrait de CD séparées avec différents solvants. '

2. Matériels et méthodes

2.1. Matériel végétal et extraits

Rhizomes de CD(Cistanchedésertique)ont été achetés sur le marché taïwanais et confirmés par le professeur MT Hsieh. Un échantillon de référence (no. CMC-ICPS-000626) a été conservé dans l'herbier de l'Institut des sciences pharmaceutiques chinoises, China Medical College pour référence future. Extraction et isolement de CD(Cistanchedésertique)ont été suivis comme les rapports précédents (Lu, 1998). CD(Cistanchedésertique)extrait (le rendement en 34,2 pour cent) et trois couches * / couche d'acétate d'éthyle, couche butanolique et couche aqueuse (leurs rendements en 3,4, 10,2, 30,6 pour cent) (abrégés en CDE, CDB et CDW, respectivement) * / ont été utilisés pour la préparation des extraits.

2.2. Préparation d'extraits et de médicaments

CD(Cistanchedésertique)extrait ({{0}}.1, 0.3, 1 g/kg) et trois couches de CD(Cistanchedésertique)extraits ({{0}}.03, 0.1, 0.3 g/kg) ont été dissous dans 0,5 % de carboxyméthylcellulose et administrés par voie orale 60 minutes avant à l'injection d'un inducteur. L'acide acétylsalicylique (ASA) (100, 300 mg/kg) et l'indométhacine (IN DOL) (10 mg/kg) ont été préparés sous forme de suspension avec 0,5 % de carboxyméthylcellulose et administrés par voie intrapéritonéale avant l'injection d'un inducteur. La naloxone (1 mg/kg) a été dissoute avec une solution saline normale.

2.3. Animaux

Des rats mâles Sprague-Dawley (200-250 g) ont été utilisés pour l'étude deanti-inflammatoireActivités. Des souris ICR mâles (20-25 g) ont été utilisées pour tester les effets analgésiques. Tous les animaux ont été utilisés dans les expériences conformément aux Principes directeurs concernant le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire. Ils ont été hébergés pendant au moins 1 semaine avant de commencer l'expérience dans un environnement régulé à 239/1 8 C et à 60 % d'humidité, avec libre accès à de la nourriture standard en granulés (fournie et conçue par Fwusow Industry Co. LTD., Taïwan ) et de l'eau du robinet, dans laquelle un cycle lumière/obscurité de 12-12 h (phase lumineuse : 08 :00-20 :00 h) a été maintenu. Ensuite, des médicaments ont été administrés et l'analgésique etanti-inflammatoireles dosages ont été opérés par la méthode en double aveugle. Après mesure comportementale, tous les animaux ont été tués par le dioxyde de carbone.

2.4. Étude antinociceptive

2.4.1. Réponse de contorsion abdominale induite par l'acide acétique chez la souris

Les souris ont été réparties au hasard en plusieurs groupes. Chaque souris a reçu par voie intrapéritonéale une solution d'acide acétique à 1 % (10 ml/kg de poids corporel). Les souris ont été placées dans des boîtes d'observation individuelles. Les symptômes des contorsions abdominales induites par l'acide acétique étaient similaires à ceux décrits par Taber et al. (1969). Les animaux témoins ont reçu des solutions de véhicule dans les mêmes expériences. Cinq minutes après l'injection d'acide acétique, le nombre de réponses de contorsions par souris a été compté pendant 10 minutes pendant les contorsions abdominales induites par l'acide acétique. Enfin, le nombre de réponses de contorsions nous a permis d'exprimer le pourcentage de protection selon le rapport suivant : (moyenne témoin - moyenne traitée) /100/moyenne témoin.

2.4.2. Réponse de léchage induite par le formol chez la souris

Cette méthode représentait une modification de celle décrite par Shibata et al. (1989). Chaque souris a été placée dans la chambre d'observation sur un plancher de plaque transparente acrylique pendant 5 min avant l'injection de formol. Sous le sol, un grand miroir était incliné à 45° afin de permettre une observation claire des pattes de l'animal. Les animaux ont reçu 25 ml de formol à 1 pour cent dans le sous-plantaire droit. Ensuite, chaque animal a été remis dans la chambre et les deux périodes distinctes de la réponse de léchage intensif ont été observées. La première période (phase précoce) a été enregistrée 0 /5 min après l'injection de formol et la deuxième période (phase tardive) a été enregistrée 10 /35 min après l'injection. Le temps (s) passé à lécher les réponses de la patte injectée a été mesuré comme un indicateur de la réponse à la douleur.

2.5. Etude anti-inflammatoire chez le rat

Laanti-inflammatoirel'activité a été déterminée chez le rat en mesurant l'augmentation moyenne du volume de la patte postérieure après l'injection sous-plantaire d'agents inflammatoires tels que le carraghénane (Winter et al., 1962) ou le zymosan (Tarayre et al., 1989). Les animaux ont reçu une injection de 0.1 ml de carraghénane à 1 % ou de zymosan à 2 % dans la patte arrière droite sous l'aponévrose plantaire. L'inflammation a été quantifiée en millilitres à l'aide d'un pléthysmomètre (7150 Ugo Basile), qui a enregistré de petites différences de niveau d'eau causées par le déplacement de volume. Avant tout traitement, le volume moyen des pattes arrière de chaque animal a été déterminé (Vo) avec trois mesures ne différant pas de plus de 4 % (précision de l'appareil). Puis 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 min après l'injection des agents inflammatoires, le volume moyen des pattes arrière de chaque animal a été déterminé (Vt) avec trois mesures qui ne différaient pas de plus de 4 pour cent.

Les pourcentages d'œdème à chaque enregistrement ont été calculés en comparant le volume moyen des pattes arrière de chaque animal (Vt) après l'injection des agents inflammatoires avec le volume moyen des pattes arrière de chaque animal (Vo) avant tout traitement (Palanichamy et Nagarajan, 1990). Les pourcentages d'inhibition ont été obtenus pour chaque groupe en utilisant le ratio suivant : [(Vt-Vo)témoin /(Vt-Vo)traité]-100/ (Vt-Vo)témoin.

2.6. analyses statistiques

Toutes les données obtenues pendant l'analgésie etanti-inflammatoirel'activité a été exprimée en termes de moyenne et d'erreurs standard et analysée plus en détail en utilisant l'analyse de variance unidirectionnelle ANOVA, suivie du test de Scheff. Lorsque la probabilité (P) était inférieure à 0.05, la différence était considérée comme significative.

3. Résultats et discussion

Les animaux en prétraitement avec des doses orales de CD(Cistanchedésertique)extrait (0.1-1 g/kg) a entraîné une inhibition dose-dépendante et significative de la réponse de contorsion induite par l'acide acétique (tableau 1) et des phases biphasiques des réponses de léchage induites par le formol chez la souris ( figure 1(A)). L'inhibition provoquée par le CD(Cistanchedésertique)extrait à 1 g/kg sur la réponse de contorsion induite par l'acide acétique et les réponses de léchage induites par le formol étaient d'environ 54 et 45 pour cent, respectivement. L'acide acétylsalicylique témoin positif à 0.1-0.3 g/kg a également diminué la réponse de torsion induite par l'acide acétique avec une inhibition de 45-64 % (tableau 1). Cependant, l'autre indométhacine témoin positif à 10 mg / kg n'a inhibé que la phase tardive mais pas précoce de la réponse de léchage induite par le formol chez la souris avec une inhibition maximale de 32% (Fig. 1 (A)). De plus, seules les couches butanoliques et aqueuses parmi les trois couches de CD(Cistanchedésertique)extrait à 0.1-0.3 g/kg a également produit une antinociception significative, et ces effets analgésiques de la couche butanolique étaient meilleurs que ceux de la couche aqueuse (tableau 1 et fig. 1(B)) . Dans un deuxième temps, nous avons évalué laanti-inflammatoireactivité du CD(Cistanchedésertique)extrait et trois couches contre la formation d'œdèmes classiques (induits par le carraghénane) et alternatifs (induits par le zymosan). Nous avons trouvé ce CD(Cistanchedésertique)extrait à 0.1-1 g/kg a également inhibé de manière significative la formation d'œdème induite par le carraghénane d'une manière liée à la dose et l'indométhacine à 10 mg/kg a également inhibé efficacement la formation d'œdème induite par le carraghénane chez les rats (Fig. 2). Cependant, la formation d'œdème induite par le zymosan n'a pas été inhibée par CD(Cistanchedésertique)extrait à 0.1-1 g/kg chez le rat (données non présentées). De plus, seule la couche butanolique parmi les trois couches de CD(Cistanchedésertique)l'extrait à 0.1-0.3 g/kg a également inhibé de manière significative la formation d'œdème induite par la carraghénane chez les rats (Fig. 2). Selon les rapports phytochimiques, l'actéoside et l'acide succinique, appartenant aux ingrédients de la couche butanolique de CD(Cistanchedésertique)extrait (Hsu et al., 1994, 1995), possédait leanti-inflammatoireactivité sur la formation d'œdème induite par des produits chimiques (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). D'après nos données actuelles et d'autres rapports antérieurs, nous avons suggéré des rhizomes de CD(Cistanchedésertique)possédait des analgésiques etanti-inflammatoireactivité chez les rongeurs, et les constituants actifs sortent principalement dans la couche butanolique de CD(Cistanchedésertique)extrait. Si l'actéoside et l'acide succinique sont des ingrédients actifs de CD(Cistanchedésertique), nous isolerons et évaluerons leurs effets antalgiques etanti-inflammatoireactivité à l'avenir.

Fig. 1. Effet du CD(Cistanchedésertique)extrait ({{0}}.1, 0,3 et 1 g/kg), acétate d'éthyle, couches butanolique et aqueuse de CD(Cistanchedésertique)extrait (CDE, CDB et CDW) ({{0}}.03, 0.1 et 0.3 g/kg) et indométhacine (INDOL, 10 mg/kg) sur les phases précoce (0/5 min) et tardive (10/35 min) de la réponse de léchage induite par le formol chez la souris. Chaque valeur est représentée par la moyenne9/SE (N/7). *PB/0,05, ***PB/0,001, par rapport au groupe VEH.

Fig. 2. Effet du CD(Cistanchedésertique)extrait ({{0}}.1, 0,3 et 1 g/kg), acétate d'éthyle, couches butanolique et aqueuse de CD(Cistanchedésertique)extrait (CDE, CDB et CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 et 0,3 g/kg) et indométhacine (INDOL, 10 mg/kg) sur l'œdème de la patte induit par la carraghénane chez le rat. Chaque valeur est représentée par la moyenne9/SE (N/6). *PB/0,05, **PB/0,01, par rapport au groupe VEH

De plus, Shibata et al. (1989) suggèrent que la phase précoce de la réponse de léchage induite par le formol était liée à la bradykinine et à la substance P, et que la phase tardive était liée à la bradykinine, à l'autocrine et à la prostaglandine. Nos données actuelles indiquent que la naloxone n'a pas aboli leanti-inflammatoireactivité de la couche de butanol de CD(Cistanchedésertique)extrait sur les deux phases de la réponse de léchage induite par le formol (Fig. 3) et l'effet analgésique sur la réponse de contorsion induite par l'acide acétique (Tableau 1). Par conséquent, l'analgésique etanti-inflammatoireles effets de la couche de butanol de l'extrait de CD pourraient ne pas être liés aux récepteurs opioïdes. De plus, CD(Cistanchedésertique)l'extrait et sa couche butanolique n'ont inhibé que la formation d'œdème induite par la carraghénane chez les rats. L'œdème induit par le carraghénane via l'infiltration de leucocytes polymorphonucléaires et le système de kinine activé, en particulier la bradykinine, est différent de l'œdème induit par le zymosan via l'afflux de monocytes et le système immunitaire activé (Damas et al., 1990 ; Dawson et al., 1991). L'acide succinique, un ingrédient de la couche butanolique de l'extrait de CD, a inhibé la fonction des leucocytes polymorphonucléaires (Rotstein et al., 1985). Ces résultats ont révélé que l'analgésique etanti-inflammatoireeffets de la couche de butanol du CD(Cistanchedésertique)l'extrait pourrait être lié au système kinine mais pas aux récepteurs opioïdes et au système immunitaire bien que CD(Cistanchedésertique)possédait l'effet immunostimulant (Chin et Su, 1993). Pour détailler le mécanisme de l'analgésie etanti-inflammatoireactivité, nous étudierons plus avant avec des couches actives ou des ingrédients d'extrait de CD.

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