Application de l'extrait de feuilles d'Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) en tant qu'agents de blanchiment de la peau et anti-âge dans un prototype cosmétique naturel

Contact : Audrey Hu Whatsapp/hp : 0086 13880143964 E-mail :audrey.hu@wecistanche.com

Yan Yi Sim et Kar Lin Nyam

ABSTRAIT

En Malaisie, les déchets industriels de laHibiscus cannabinusL'industrie de L. (kenaf), en particulier les feuilles, pose des problèmes de durabilité. L'activité biologique des feuilles de kénaf a été rapportée par quelques études antérieures, il est donc vraisemblable que l'extrait de feuilles de kénaf (KLE) puisse être utilisé comme ingrédient fonctionnel dans les formulations cosmétiques. Ainsi, le but de cette étude était de développer une formulation cosmétique naturelle contenant de la KLE et d'évaluer ses caractéristiques physico-chimiques, ses propriétés microbiologiques, sa stabilité au stockage, ses activités biologiques (antioxydant, antityrosinase, etanti-âge), cytotoxicité in vitro (sur fibroblastes dermiques humains normaux et cellules de mélanome B16F10) et test de mélanogénèse (activité intracellulaire de la tyrosinase et réduction de la production de mélanine). Les résultats ont montré que la lotion KLE (KLEL) préparée avec 15 % d'huile de graines de kénaf (KSO) (F2) avec 0.1 % w/w KLE donne la meilleure stabilité physique et microbiologique, sans toxicité pour les cellules humaines. Le KLEL présentait également une teneur en antioxydants allant jusqu'à 1,84 ± 0.07 mg d'équivalent d'acide caféique (CAE)/g et 21,62 ± 0,76 mg d'équivalent d'hydrate de catéchine (CHE)/g pour la teneur totale en phénols (TPC ) et la teneur totale en flavonoïdes (TFC), respectivement. De plus, le KLEL a présenté une capacité antityrosinase sur l'inhibition de la formation de mycophénolate (30,28 ± 3,90 %) et de diphénols (11,40 ± 0,29 %) et a révélé, pour la première fois,anti-âgepropriétés en inhibant les activités de la collagénase (36,41 ± 0,54 %) et de l'élastase (23,13 ± 1,56 %). En ce qui concerne l'activité inhibitrice de la mélanogénèse, KLEL a présenté une efficacité élevée dans la suppression de l'activité de la tyrosinase cellulaire et de la teneur en mélanine des cellules B16F10. Dans l'ensemble, les résultats de cette étude sont très prometteurs pour le développement de prototypes cosmétiques naturels utilisant les feuilles de kénaf.

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1. Introduction

Récemment, le modèle économique circulaire qui peut améliorer la durabilité de la gestion des déchets en minimisant la production de déchets et en maintenant la valeur à long terme, tout en diminuant les conséquences négatives de la rareté des ressources et de la dégradation de l'environnement, a suscité l'intérêt du public (Morseletto, 2020). En général, une quantité importante de sous-produits à faible valeur économique est générée chaque année par les industries de cultures industrielles.Hibiscus cannabinusL'industrie L. KR9 (kenaf) est l'un des secteurs agricoles contribuant au PIB (produit intérieur brut) de la Malaisie, le poids de la production de tige sèche de kénaf étant passé de 7,1 (000 tonnes) en 2013 à 7,6 ({{7} } tonne) en 2014, et le marché mondial du kénaf devrait dépasser 854 millions de dollars US d'ici 2025 (Abdelrhman et al., 2016). Cependant, de grandes quantités de sous-produits sont générés, tels que les graines et les feuilles de kénaf, ce qui contribue aux problèmes de durabilité.

Les feuilles de kénaf, qui représentent une quantité importante des sous-produits totaux, sont les moins caractérisées et valorisées parmi tous les sous-produits générés. En raison de l'approche circulaire, il est important de réutiliser ou de récupérer les feuilles de kénaf en produits à valeur ajoutée car elles offrent de multiples avantages dans les domaines économique, environnemental et social (Coderoni et Perito, 2019). Les feuilles de kénaf sont constituées de riches sources de composés bioactifs tels que l'acide chlorogénique, l'aide caféique, le kaempférol et l'hydrate de catéchine, comme le prouvent les études menées par Kho et al. (2019); Sim et Nyam (2019), et Haw et al. (2020). Cependant, il est généralement destiné à la production de produits à faible valeur économique : fibres alimentaires et aliments pour animaux (Lim et al., 2020).

Le terme "retour à la nature" a été largement utilisé dans la recherche et le développement de l'industrie cosmétique, car l'utilisation d'extraits d'origine botanique s'est traduite par une bonne acceptation par les consommateurs. Selon l'étude réalisée par Sim et al. (2019), l'extrait de feuilles de kénaf (KLE) a démontré des propriétés antioxydantes et antityrosinase prometteuses, avait le potentiel d'être utilisé comme ingrédients à valeur ajoutée dans le développement de produits cosmétiques. Il est important de développer des formulations stables et sûres contenant le KLE car il contient beaucoup de composés polyphénoliques qui ont démontré la peaublanchimentetanti-âgePropriétés. Plusieurs exigences doivent être prises en compte lors du développement de nouvelles formulations cosmétiques, telles que le type de formulation, l'intention d'utilisation et l'interaction potentielle entre les ingrédients utilisés dans les formulations, qui, dans leur ensemble, contribuent au besoin d'études de stabilité et de sécurité. (Garbossa et Maia Campos, 2016).

Des études de stabilité, qui incluent l'étude des caractéristiques physiques, chimiques et microbiennes, sont nécessaires pour les formulations cosmétiques après le processus de développement. De plus, pour prévenir tout effet indésirable ou réaction allergique, les produits cosmétiques doivent également être testés en utilisant un test de cytotoxicité in vitro sur une lignée cellulaire de peau humaine normale. Ainsi, l'objectif de ce travail est de développer une formulation cosmétique naturelle à base de KLE (KLE lotion- KLEL). Ensuite, le KLEL a été évalué pour ses caractéristiques physicochimiques, ses propriétés microbiologiques, sa stabilité au stockage, sa cytotoxicité in vitro (sur des fibroblastes dermiques humains normaux et des cellules de mélanome B16F10) et son test de mélanogénèse (activité de la tyrosinase intracellulaire et réduction de la production de mélanine). Cette étude nous a également permis de déterminer, pour la première fois, non seulement l'activité antioxydante et anti-tyrosinase des KLEL mais également leur activité inhibitrice sur la collagénase et l'élastase.

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2. Matériels et méthodes

2.1. Matières végétales et produits chimiques

FraisHibiscus cannabinusLes feuilles de L. KR9 (kenaf) 90 jours après le semis et les graines ont été obtenues auprès de Lembaga Kenaf & Tembakau Negara (LKTN, Malaisie). Span 20 et Tween 80 ont été achetés auprès de Sigma Aldrich (Munich, Allemagne), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG et Emulgade® SE-PF ont été achetés auprès de BASF (Malaisie) et la glycérine a été achetée auprès de Croda International Plc. (Royaume-Uni). La lignée cellulaire normale de fibroblastes dermiques humains (NHDF) provient de Lonza (Bâle, Suisse) et le mélanome de souris (B16F10) a été acheté auprès de l'ATCC (Manassas, VA, États-Unis). Le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) a été acheté auprès de Nacalai Tesque (Japon). Tous les autres produits chimiques utilisés étaient de qualité analytique (Belgique, Allemagne, Malaisie). L'eau ultra-pure (Millipore, USA) a été utilisée tout au long de l'analyse.

2.2. Méthodes

2.2.1. Séchage des feuilles de kénaf

Les feuilles de kénaf ont été nettoyées avec de l'eau ultra-pure, séchées, puis conservées à − 80 ◦C pendant la nuit. Ensuite, l'échantillon a été séché dans un lyophilisateur (Christ, Allemagne), sous 0,0004 bar pendant 48 h, broyé, emballé sous vide et stocké à - 20 degrés.

2.2.2. Préparation d'extrait de feuilles de kénaf partiellement purifié (KLE)

L'extraction assistée par ultrasons pulsés (PUAE) de KLE a été réalisée selon Sim et al. (2019). Les échantillons ont été pesés avec des solvants d'extraction (éthanol) dans un rapport de 1:10. Ensuite, le mélange a été soumis à l'extraction assistée par ultrasons pulsés (Sartorius, Allemagne) à une amplitude de sonication de 50 %, une durée d'impulsion de 1 min et une période d'intervalle d'impulsion de 1 min avec une température maintenue à 18–22 ± 3 degrés (trois cycles ). Ensuite, l'extrait a été filtré et concentré dans un évaporateur rotatif sous vide (Buchi, Suisse). La purification partielle de KLE a été réalisée selon Seabra et al. (2010) avec une légère modification. L'extrait brut a été appliqué sur une colonne remplie de gel de silice et élué avec un gradient de solvant de n-hexane-acétate d'éthyle (100 :00, 90 :10, 80 :20, 50 :50 , 20:80, 10:90, 00:100) et acétate d'éthyle méthanol (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90 , 00:100). Le KLE partiellement purifié a été concentré à sec à l'aide d'un évaporateur rotatif et stocké à - 20 degrés pour une utilisation future.

2.2.3. Extraction par solvant de l'huile de graines de kénaf (KSO)

Le KSO a été extrait selon Chew et al. (2015). Les graines de kénaf ont été broyées en une fine poudre à l'aide d'un broyeur (Panasonic, Japon) et additionnées d'hexane dans un rapport de 1:5. Les huiles ont été extraites à l'aide d'un extracteur Soxhlet à 60 °C pendant 3 h, et l'hexane a été éliminé à l'aide d'un évaporateur rotatif. Après rinçage à l'azote, le KSO a été stocké à -20 degrés pour une utilisation future (Chew et al., 2015).

2.2.4. Développement expérimental d'une formulation de lotion contenant le KLE

Au début, la formulation de base de la lotion (sans KLE) a été optimisée en utilisant 4 concentrations différentes d'huile de graines de kénaf (KSO) (10 %, 15 %, 20 % et 25 % ). La base de lotion a ensuite été évaluée de manière comparative pour divers paramètres : apparences physiques, odeur, homogénéité, pH, viscosité, centrifugation et évaluation de congélation-décongélation, afin de sélectionner la meilleure formulation de base de lotion pour une étude plus approfondie. En ce qui concerne les résultats des paramètres ci-dessus, la formulation de base de lotion la plus appropriée (15 % de KSO) a été sélectionnée pour être incorporée avec le KLE (0 0,1 % p/p) (KLEL). En bref, les ingrédients de la phase non polaire (Emulgade® SE PF, Span 20 et KSO) et de la phase polaire (eau, Tween 80 et glycérine) ont été chauffés jusqu'à 75 ± 2 degrés. Ensuite, la phase non polaire a été ajoutée goutte à goutte à la phase polaire sous agitation rapide à l'aide d'un agitateur magnétique (Thermo Fisher Scientific, USA) à 350 tr/min pour former une émulsion primaire, suivie d'une homogénéisation à haut cisaillement à l'aide d'IKA T25 digital ULTRA -TURRAX® (équipement de laboratoire IKA, Allemagne) à 3200 tr/min pendant 3 min et homogénéisation ultrasonique à 40 % d'amplitude pendant 3 min. Le Cosmedia® ACE, l'Iscaguard® PEG et le KLE ont été ajoutés et mélangés à l'émulsion H/E à température ambiante. La base de lotion KSO sans KLE sert de témoin (KSOL). Tandis que la base de lotion additionnée d'acide kojique (0,1 % p/p) (KAL) servait de témoin positif pour l'activité anti-tyrosinase et le test de mélanogénèse. La base de lotion additionnée d'hydrate de catéchine (0,1 % p/p) (CHL) a servi de contrôle positif pour l'activité anti-collagénase et anti-élastase.

2.2.5. Analyse physicochimique

2.2.5.1. Apparences, odeur et homogénéité.

Selon Hanifah et Jufri (2018), les formulations de lotion ont été inspectées pour leur couleur, leur odeur, leur homogénéité et leur séparation de phase.

2.2.5.2. pH. Les solutions standard ont été utilisées pour calibrer l'électrode du pH-mètre avant la mesure.

Le pH des échantillons a été déterminé avec un pH-mètre (Mettler Toledo, Suisse) à température ambiante.

2.2.5.3. Couleur.

La couleur sera évaluée à l'aide d'un colorimètre (Hunter Lab, États-Unis). Les résultats seront exprimés en fonction de l'espace colorimétrique L* (clarté), a* (vert), b* (jaune) et du différentiel de couleur total (ΔE). Le différentiel de couleur totale (ΔE) pour tous les échantillons a été calculé en utilisant l'équation comme suit: ΔE = ̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ (l ∗ - l ∗ 0) 2 plus (a ∗ - a ∗ 0) 2 plus (b ∗ - b ∗ 0) 2√

2.2.5.4. Viscosité.

La viscosité des échantillons a été évaluée dans un viscosimètre de terrain Brook à l'aide d'une broche LV-64 selon Gyawali et al. (2016) avec une légère modification. L'échantillon a été directement immergé dans la broche avec une vitesse de rotation de 100 tr/min et la viscosité (cP) a été mesurée.

2.2.5.5. Spreadabilité.

La capacité d'étalement des échantillons a été déterminée par la méthode des plaques parallèles (Gyawali et al., 2016). L'échantillon a été pesé précisément (1 g) et placé sur l'une des lames de verre (20 × 20 cm2). Ensuite, l'autre lame a été placée sur le dessus de l'échantillon et un poids de 100 g a été placé sur la lame supérieure, pour s'assurer que l'échantillon était pressé uniformément. Après 1 min, le poids a été retiré et le diamètre étalé (cm) a été mesuré.

2.2.5.6. Évaluation de la centrifugation.

L'échantillon a été chargé dans un tube de centrifugation puis centrifugé à 3750 rpm pendant 30 min (Eppendorf 5417R, USA). Ce test de centrifugation (égal à 1-année de gravité) détermine la stabilité de l'échantillon (Hiola et al., 2018).

2.2.5.7. Évaluation gel-dégel.

Des études de gel-dégel ont été réalisées selon les méthodes précédentes avec quelques modifications (Krongrawa et al., 2018). Chaque échantillon a été conservé alternativement à température froide, 4 ± 1 ◦C (24 h) et à température chaude, 45 ± 1 ◦C (24 h) avec 75 % ± 2 % HR (humidité relative) pendant 6 cycles dans des récipients en verre hermétiques. La viscosité des échantillons a été déterminée après le cycle de contrainte thermique.

2.2.6. Déterminant de la teneur en antioxydants

2.2.6.1. Contenu phénolique total (TPC).

La teneur phénolique totale a été déterminée selon Lim et al. (2007). L'échantillon (10 mg/mL) a été mélangé avec 10 % de réactif de Folin-Ciocalteu et 7,5 % (p/p) de Na2CO3, suivi d'une incubation de 30 minutes dans l'obscurité. L'absorbance a été prise à 765 nm en utilisant un spectrophotomètre UV-vis (Secoman, France). L'équation d'étalonnage pour l'acide caféique était y=0.0269 plus 9.69x ( r2=0.999) (Sim et al., 2019). Les résultats ont été exprimés en mg d'équivalent acide caféique (CAE)/g d'échantillon.

2.2.6.2. Teneur totale en flavonoïdes (TFC).

La teneur totale en flavonoïdes a été évaluée selon Ogbunugafo et al. (2011). En général, l'échantillon (10 mg/mL) a été mélangé avec une solution de NaNO2 à 15 %, d'AlCl3 à 10 %, d'eau ultra pure et de NaOH 1 M. L'absorbance a été mesurée immédiatement à 510 nm par rapport au standard préparé à l'aide d'hydrate de catéchine (0,02-0,1 mg/mL). L'équation d'étalonnage pour l'hydrate de catéchine était y=0.004 plus 3.1x ( r2=0.999) (Sim et al., 2019). La teneur totale en flavonoïdes (TFC) a été exprimée en milligrammes d'équivalents d'hydrate de catéchine (CHE)/g d'échantillon.

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2.2.7. Activité anticollagénase

L'activité anti collagénase basée sur la dégradation protéolytique entre la collagénase et le substrat synthétique (FALGPA- N-(3-[2-Furyl]- acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala) à 345 nm dans le présence d'inhibiteurs de la collagénase a été réalisée selon Barrantes et Guinea (2003) avec quelques modifications. La collagénase 0,25 unités/mL (40 μL) dérivée de Clostridium histolyticum a été laissée réagir avec 10 μL d'échantillons de test et 20 μL de tampon tricine 50 mM (pH 7,5, avec 100 mM CaCl2 et 5 mM NaCl) dans l'obscurité pendant 15 min. Après la pré-incubation, une quantité de 40 μL de la solution de FALGPA 2 mM a été ajoutée à chaque puits. Chaque échantillon était accompagné d'un blanc qui avait tous les composants sauf FALGPA et l'absorbance a été déterminée après incubation pendant 20 min.

2.2.8. Analyse bactériologique de la durée de conservation du KLEL

Les méthodes utilisées pour la numération microbienne aérobie totale (TAMC) et la numération totale des levures et moisissures (TYMC) du KLEL ont été modifiées à partir du manuel d'analyse bactériologique (BAM) de la FDA (Huang et al., 2017). L'échantillon (1 g) a été mélangé avec 1 ml de Tween 80 stérile et le volume a été ajusté avec de l'eau peptonée stérile pour obtenir une série complète de dilutions de 10− 1 à 10− 3. Pour le TAMC, les échantillons ont été ensemencés sur gélose nutritive à l'aide d'un méthode des plaques étalées, puis les plaques ont été incubées à 30 ± 2 ◦C pendant 48 h. Dans le cas TYMC, les échantillons ont été inoculés sur des plaques de gélose au dextrose de pomme de terre en utilisant une méthode de plaque étalée, et les plaques ont ensuite été incubées à 30 ± 2 ◦C pendant 7 jours. Les plaques ont été examinées pour la croissance microbienne après la période d'incubation.

2.3. analyses statistiques

Tous les résultats ont été analysés à l'aide du package statistique Minitab 16.2.1 (Minitab Inc., Pennsylvanie, États-Unis), une analyse de variance à un facteur (ANOVA) a été effectuée, suivie du test de Tukey pour déterminer la différence significative (p < 0="" .05).="" moyenne="" ±="" écart="" type="" (sd)="" (n="3)" a="" été="" présenté="" pour="" l'analyse="" des="">

3. Résultats et discussions

3.1. Optimisation de la formulation de base de lotion

Selon Hiola et al. (2018), l'optimisation de la base de la lotion (pré-formulation) joue un rôle important pour obtenir une formulation bonne et stable. Par conséquent, la base de la lotion a été optimisée en utilisant 4 pourcentages différents de KSO comme indiqué dans le tableau 1. Ils ont été évalués par l'apparence, l'odeur, l'homogénéité, la stabilité physique, le pH, l'étalement, la viscosité et l'analyse gel-dégel (matériaux supplémentaires - S1 et S2). Toutes les formulations de base de lotion préparées à l'aide de KSO avaient une couleur jaune laiteux clair à jaune laiteux, avec une bonne odeur (Chu et Nyam, 2020). Sur la base des résultats obtenus, toutes les valeurs de pH des formulations de base de lotion se situaient dans la plage de pH de la peau (4 à 6), ce qui est important pour minimiser la réaction allergique et assurer la stabilité de la formulation cosmétique pendant le temps de stockage (Chu et Nyam , 2020). Toutes les formulations de base de lotion ont montré une baisse de viscosité après l'analyse de congélation-décongélation, mais toujours dans la plage d'une bonne lotion (500 à 5000 cP) (Kusuma et al., 2017). Pour l'étalement, plus la concentration de KSO est élevée, plus le diamètre d'étalement est petit en raison de la viscosité élevée. Plus la capacité d'étalement est grande, plus la formulation cosmétique peut être appliquée facilement sur la surface de la peau. Pour le test de stabilité par résistance à la centrifugation, F2 et F3 n'ont montré aucune séparation de phase, suggérant que les deux formulations étaient stables pendant 1 an. Cependant, F3 ne peut pas être versé facilement et donne l'apparence d'une préparation de crème car il a une viscosité plus élevée que F2. Par conséquent, F2 a été sélectionné comme base de lotion optimisée à incorporer au KLE.

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3.2. Évaluation de la formulation de la lotion KLE (KLEL)

3.2.1. Analyse physicochimique

Sur la base des résultats du tableau 2, la base de lotion additionnée de KLE a présenté une couleur laiteuse claire avec une odeur agréable et aucune séparation de phase n'a été observée. Le KLEL a montré une valeur de pH plus élevée que le témoin, indiquant que l'ajout de KLE dans la formulation cosmétique peut entraîner une augmentation de la valeur du pH. Les valeurs de pH des échantillons étaient toutes compatibles avec la plage de pH de la peau et sans danger pour la peau. Il n'y avait pas de différences significatives de viscosité et d'aptitude à l'étalement entre KLEL et le témoin, ce qui indiquait que l'ajout de KLE dans l'émulsion n'affectait pas la viscosité et l'aptitude à l'étalement. Des changements significatifs ont été observés dans les valeurs L*, a* et b* de KLEL par rapport au témoin, ce qui a prouvé que la couleur de la lotion était affectée par la couleur verte naturelle des feuilles de kénaf. KLEL a le plus vert pour la valeur a* (-2.24 ± 0.03) et le plus jaune pour la valeur b* (15.54 ± 0.{{13} }1). La différence de couleur totale (ΔE) du KLEL par rapport au témoin était statistiquement significative p < 0,05,="" avec="" une="" valeur="" de="" 6,82="" ±="" 0,04="" pour="" le="" klel.="" des="" études="" antérieures="" considéraient="" δe="2" comme="" le="" seuil="" de="" discrimination="" visuelle="" (zhou="" et="" al.,="" 2009).="" ainsi,="" les="" résultats="" de="" δe="" ont="" prouvé="" que="" l'ajout="" de="" kle="" peut="" affecter="" la="" couleur="" de="" la="" formulation="">

3.2.2. Analyse de la teneur en antioxydants

Le tableau 3 présente la quantité de teneur totale en composés phénoliques (TPC) et en flavonoïdes (TFC). Les résultats obtenus ont indiqué que la base de lotion formulée avec KLE contient des TPC significativement plus élevés (1,84 ± 0.07 mgCAE/g) que le contrôle (1,64 ± 0.0 6 mgCAE/g). Alors que, pour le TFC, KLEL a également montré une teneur significativement plus élevée en TFC (21,62 ± 0,76 mgCHE/g) par rapport au témoin (19,42 ± 0,27 mgCHE/g). Dans la même gamme de certains co-produits végétaux, l'inclusion de KLE sur une base dermatologique présente toujours des teneurs élevées en antioxydants, mettant en évidence sa source potentielle de composés polyphénoliques dans l'industrie cosmétique (Adhikari et al., 2019 ; Rodrigues et al., 2014 ). Selon l'étude de Haw et al. (2020), les feuilles de kénaf sont riches en différents types de composés polyphénols tels que l'acide caféique, l'acide tannique, la catéchine et l'acide chlorogénique.

3.2.3. Analyse de l'activité antioxydante

Les capacités de piégeage des radicaux libres des lotions ont été étudiées en utilisant les tests DPPH et ABTS. Le tableau 3 indique que le KLEL a démontré une DPPH plus élevée (1,16 ± 0.18 mgTEAC/g) et ABTS (0.50 ± 0.0 4 mgTEAC/g) d'activité de piégeage des radicaux par rapport au témoin. Les résultats des tests DPPH et ABTS ont montré des schémas similaires à ceux du TPC et du TFC, où il peut grandement améliorer l'activité antioxydante en ajoutant du KLE dans la base de la lotion. Ces résultats ont suggéré que le KLE contient des piégeurs de radicaux libres qui, lorsqu'ils sont appliqués dans des formulations cosmétiques, peuvent jouer un rôle. rôle important en tant qu'antioxydant primaire dans la suppression des radicaux libres responsables du vieillissement cutané. De plus, le KLEL (0.69 ± 0.20 mgTEAC/g) a également démontré une capacité significativement plus élevée de réduction des ions ferriques que le contrôle (0,46 ± 0,09 mgTEAC/g), en accord avec la DPPH et l'ABTS. Il est nécessaire d'avoir un approvisionnement constant en composés antioxydants provenant de sources externes telles que les cosmétiques pour restaurer le système de défense antioxydant de la peau individuelle contre les ROS qui ont causé le vieillissement cutané (Działo et al., 2016). De plus, des formulations de lotions ayant une activité de piégeage des radicaux et un pouvoir réducteur peuvent être utilisées comme soin cutané.blanchimentagent par la production de mélanine induite par les UV régulée à la baisse (Działo et al., 2016).

3.2.4. Activité inhibitrice enzymatique

Les lotions ont été testées contre la tyrosinase, une enzyme métalloprotéique contenant du cuivre impliquée dans la biosynthèse de la mélanine, pour l'évaluation de l'activité antityrosinase in vitro. Le tableau 5 montre que le KLEL (30.28 ± 3.90 pour cent) ne présentait aucune différence significative dans l'activité anti-tyrosinase avec le contrôle positif (34.05 ± 4.60 pour cent) lors de l'utilisation de la L-tyrosine comme substrat . Cependant, ALL (11,40 ± 0,29 pour cent) a démontré une activité antityrosinase inférieure à celle du témoin positif (15,01 ± 0,84 pour cent), lors de l'utilisation de L-DOPA comme substrat. Cela a montré que KLEL inhibait principalement les mycophénolates plutôt que les diphénols. L'in-vitroanti-âgeles propriétés ont été évaluées par l'activité inhibitrice de la collagénase et de l'élastase. Une enzyme telle que la collagénase et l'élastase peut dégrader le collagène et l'élastine, responsables de l'intégrité et de l'élasticité de la peau (Jesumani et al., 2019). Ainsi, l'inhibition de l'activité de l'élastase et de la collagénase réduirait la dégradation de l'élastine et du collagène empêchant ainsi la formation des rides, l'un des signes majeurs du vieillissement. Comme le montre le tableau 5, KLEL a démontré une activité anti-collagénase (36,41 ± 0.54 %) et anti-élastase (23,13 ± 1,56 %) remarquable par rapport au témoin positif (CHL). Le KSOL a également démontré une antityrosinase (18,82 ± 0.17 % (L-tyrosine comme substrat) ; 8,48 ± 0.29 % (L-DOPA comme substrat), anti-collagénase (18,84 ± {{26 }}.63 pour cent ) et antiélastase (5,78 ± 0,59 pour cent ), mais inférieure à ALL. Cela pourrait indiquer que la combinaison de KLE et de KSO a démontré un effet synergique avec une meilleure activité inhibitrice enzymatique. Ceci est soutenu par les études menées par Pascoal et al (2015) et Chew et al (2016), dans lesquels le KSO est riche en tocophérols, tandis que le KLE est riche en dérivés de quercétine et de kaempférol.blanchimentetanti-âgepropriétés, avec un intérêt dans la réduction de l'hyperpigmentation cutanée et de la production de rides (Lin et al., 2007; Keen et Hassan, 2016).

3.2.5. Test de mélanogénèse in vitro

Pour explorer davantage la peaublanchimentpropriétés du KLEL, le modèle cellulaire de mélanome B16F10 a été utilisé pour étudier l'effet inhibiteur sur la mélanogénèse. Pour l'activité de la tyrosinase cellulaire, comme le montre la figure 5a, le KLEL (32,35 %) à 500 ug/mL a démontré une inhibition significativement plus forte de l'activité de la tyrosinase cellulaire que le KAL (14,85 %) et le KSOL (13,64 %) par rapport à l'a-MSH. cellule témoin traitée. Pour la teneur en mélanine extracellulaire et intracellulaire, KLEL a réduit de manière dose-dépendante la teneur en mélanine des cellules B16F10 (Fig. 5b et c). L'ALL (500 ug/mL) s'est avéré avoir un effet inhibiteur comparable sur la teneur en mélanine extracellulaire (56,13 %) (par rapport à une cellule témoin traitée au MSH) avec KAL (54,53 %). De plus, le KLEL (36,52 %) ​​a également démontré un effet inhibiteur plus fort sur la teneur en mélanine intracellulaire que le KAL (7,98 %). Alors que, KSOL a également montré un effet inhibiteur sur la teneur en mélanine extracellulaire (17,73 pour cent), mais aucun effet sur la teneur en mélanine intracellulaire. Comparé à KAL, l'impact inhibiteur plus fort de KLEL sur l'inhibition de la mélanogenèse peut être clarifié par l'activité synergique entre KSO et KLE, qui peut améliorer les propriétés de blanchiment de la peau de KLE dans la base de lotion. Ces résultats ont en outre prouvé que KLE peut être utilisé comme agent de blanchiment de la peau efficace dans le prototype cosmétique naturel.

3.2.6. Test de cytotoxicité in vitro

En évaluant la biocompatibilité du KLEL (analyse MTT), la viabilité des cellules NHEF (après 24, 48, 72 h) cultivées en présence de différentes concentrations de KLEL (0.125− 2 mg/mL) a été maintenue au-dessus 95 % (figure 4a). Cela a montré que le KLEL ne causera pas de toxicité pour l'homme. Alors que les cellules de mélanome B1610 sont largement utilisées dans les études sur la peaublanchiment(Chatatikun et al., 2019 ; Lee et al., 2019). Avant la mesure de la capacité de KLEL à supprimer la mélanogenèse dans les cellules de mélanome B16F10, la cytotoxicité de KLEL a été évaluée. Comme le montre la figure 4b, il a été confirmé que KLEL n'était pas toxique pour les cellules de mélanome B16F10 à une concentration inférieure à 500 ug/mL. Ainsi, 32,5 à 500 ug/mL de KLEL ont été utilisés pour les expériences suivantes.

4. Conclusion

Cette étude s'est avérée d'une grande importance dans le modèle économique circulaire réalisé, car elle introduit de nouvelles applications possibles pour les feuilles de kénaf en tant qu'ingrédients à haute valeur ajoutée avec des propriétés de soin de la peau pour l'industrie cosmétique, à savoir antioxydant,anti-âge, et des activités anti-mélanogènes. Les résultats présentés dans l'étude ont également indiqué que la formulation de lotion préparée avec 15 % de KSO (F2) avec 0.1 % de KLE donne la meilleure stabilité physique et microbiologique, sans toxicité pour les cellules humaines. Dans la continuité, d'autres études devraient également se concentrer sur le test de provocation microbienne KLEL et son efficacité clinique.

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