Composition chimique du cistanche de médecine chinoise et analyse des composants du corps Ⅲ

Chapitre 3 Analyse quantitative des composants multi-composants de Cistanche deserticola basée sur RPLC-HILIC-MS/MS

La composition chimique de la médecine traditionnelle chinoise est complexe et contient une variété de composés tels que des métabolites primaires et secondaires [55-561. Réaliser une analyse complète et fiable des composants chimiques de la médecine traditionnelle chinoise (y compris les composants hydrophiles et hydrophobes) reste un problème technique majeur. De plus, le contenu de chaque composant dans la médecine traditionnelle chinoise varie considérablement et les méthodes conventionnelles de spectrométrie de masse liquide sont difficiles à quantifier avec précision à la fois les composants majeurs et les traces. 1571 La séparation traditionnelle sur une seule colonne ne suffit pas et l'analyse des composés traces en médecine traditionnelle chinoise sera limitée par des constantes. En raison de l’interférence des composés, le phénomène de chevauchement des pics est grave. Bien qu'une variété de techniques de chromatographie avancées aient été utilisées pour améliorer la séparation de matrices complexes, telles que les colonnes de chromatographie cœur-écorce et de particules submicroniques, les colonnes de chromatographie d'interaction hydrophile, etc., il reste difficile de parvenir à une séparation complète de différents composés à l'aide d'un une seule colonne [58 -59. La chromatographie multicolonne qui combine au moins deux mécanismes chromatographiques orthogonaux, tels que la LC bidimensionnelle, la LC à commutation de colonnes et la LC tandem à deux colonnes, a été considérée comme un outil réalisable pouvant étendre considérablement la couverture des métabolites. Il ne fait aucun doute que le LC bidimensionnel et le LC à commutation de colonnes peuvent augmenter considérablement la capacité de pointe (160). Cependant, les deux méthodes dépendent des vannes, l’instrumentation est complexe et prend du temps, et les tubes de connexion et les régulateurs sont faciles à installer. Des résidus existent, et ces deux méthodes sont susceptibles d'introduire une série de facteurs d'incertitude conduisant à une irréproductibilité quantitative1571. Bien que la chromatographie d'interaction hydrophile en phase inversée en tandem (RPLC-HILIC) ne puisse pas augmenter de manière significative la capacité maximale, l'équipement de l'instrument est simple, il n'y a aucun résidu dans les tubes de connexion et les régulateurs, et il peut toujours réaliser le passage d'hydrophile à hydrophobe. Rétention complète d'un grand nombre de composés largement polaires [61-66. De plus, le mode de surveillance des réactions multiples (MRM) unique au spectromètre de masse triple quadripôle (QgQ) peut être utilisé comme une autre dimension de séparation pour améliorer encore la capacité de séparation du RPLC-HILIC. En bref, RPLC-HILIC-MRM intègre les avantages inhérents du RPLC, HILIC et MRM et devrait devenir une méthode analytique fiable.

COMBIEN DE TEMPS FAUT-IL POUR CISTANCHE FONCTIONNE?

Le contenu de chaque composante de la médecine traditionnelle chinoise varie considérablement. Par rapport aux composants principaux, les gens accordent plus d'attention au développement de méthodes plus sensibles pour compléter la détection de ces composés traces, voire ultra-traces. Le mode MRM est souvent recommandé en raison de son excellente sensibilité et de sa bonne plage dynamique linéaire167. Cependant, et en raison de la saturation de la multiplication électronique terminale de la chambre Q3 du spectromètre de masse QqQ, la plage linéaire est généralement rétrécie et la limite supérieure de quantification (ULOQ) ne peut pas couvrir entièrement le contenu de certains composés majeurs sans une surveillance fiable. ces composants traces. Par conséquent, la suppression de la production d’ions produits peut augmenter l’ULOO. En utilisant des paramètres composés affaiblis tels que les paires d'ions,dépôt(DP) eténergie de collision(CE) peut réduire le nombre d'ions produits cibles et ainsi élargir l'ULOQ[68-69]

La médecine traditionnelle chinoiseCistanches Herbaest la tige charnue séchée aux feuilles écailleuses duUsine de cistanches. C'est l'un des médicaments traditionnels chinois les plus utilisés et il est connu sous le nom de « ginseng du désert ». Les glycosides phényléthanoïdes ont toujours été un sujet de recherche brûlant chez Cistanche deserticola, mais ces dernières années, les effets pharmacologiques d'autres composants hydrophiles tels que le mannitol ont également été bien reconnus ! 70-721. Cependant, dans notre analyse quantitative de routine du CH, le contenu des principaux composants tels queéchinacée,verbascoside, et le mannitol étaient parfois trop élevés pour dépasser la plage de mesure du détecteur UV ou du détecteur à diffusion de lumière par évaporation (ELSD). Par conséquent, du point de vue de l’évaluation globale de la qualité, il est important d’établir une méthode analytique capable de surveiller simultanément les composants hydrophiles et hydrophobes et de quantifier avec précision les composants majeurs et les traces.

L'expérience présentée dans ce chapitre a établi une méthode fiable adaptée à l'analyse de matrices complexes - spectrométrie de masse liquide RPLC-HILIC-MS/MS (chromatographie d'interaction hydrophile en phase inversée couplée en série-spectrométrie de masse en tandem), qui a permis de détecter 23 polarités chez Cistanche deserticola. . Séparation, analyse et détermination simultanées de la teneur d'une large gamme de composés (couvrant les composants hydrophiles et hydrophobes) ; tout en utilisant le mode SMRM pour garantir la reproductibilité de cette méthode, en utilisant des valeurs CE appropriées et différentes paires d'ions pour développer la pomme de pin. L'ULOQ des composants principaux tels que l'inuline et le verbascoside permet la quantification simultanée des composants majeurs et des composants traces dans Cistanche deserticola, fournissant ainsi une outil réalisable pour améliorer le contrôle de la qualité de Cistanche deserticola et contribuer à atteindre un métabolisme ciblé et généralisé des plantes. Génomique.

Section 1 Matériel expérimental

1. Instrument

Le spectromètre de masse liquide HPLC-Qtap-MS est équipé d'une HPLC Shimadzu (équipée de 2 pompes LC-20ADxR, d'un échantillonneur automatique SIL-20ACxR, d'un détecteur UV SPD-M20A, d'un CTO-20AC thermostat, dégazage en ligne DGU-20A3R. Il se compose d'une machine, d'un contrôleur CBM-20A, Shimadzu Corporation, Japon) et d'un spectromètre de masse SCIEX5500 Qtrap (source d'ions ESI, SCIEX, Foster City, CA, USA) . L'acquisition des données et le calcul ont été réalisés par le logiciel Analyst Software1.6.2. Système de purification d'eau ultrapure Mili-Q (Milipore Company, USA), balance analytique électronique Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Suisse), extracteur à ultrasons (230 V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. Matériels et réactifs

Colonne Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), colonne Waters XBridge Amide (4,6 mm x 150 mm, 3,5 μm).Polyétheréthercétone(PEEK) (Agilent Company, États-Unis). Du méthanol, de l'acétonitrile et de l'acide formique de qualité chromatographie et spectrométrie de masse ont été achetés chez ThermoFisher (Pittsburgh, PA, USA), et l'eau était de l'eau ultrapure Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA) fabriquée en laboratoire. . La niacine (acide nicotinique, cLogP, 0.799), l'acide succinique (cLogP, -0.526) ont été achetés auprès de Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, USA) : uridine (cLogP, -2.219), adénosine adénoïde (cLogP, -2.158), inosine (cLogP, {{10}}.106) et guanosine (cLogP , -3.326) ont été achetés auprès de Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidroside (cLogP -0.296), 6-déoxycatalpol (cLogP, -3.071), phénylalanine (cLogP, -1.556), 8-acide épiloganique (cLogP, -2.366), mannitol (cLogP, -2.046), saccharose (cLogP , -3.087), gluroside (cLogP, -1.757), alaschanioside A (alaschanioside A, cLogP -0.971), échinacoside (échinacoside, cLogP, -1 .811), acide férulique (cLogP, 1.421), acteoside (cLogP, -0.890), isoacteoside (cLogP, -0.057) et pinorésinol- -D-glucopyranoside (cLogP, -0.384) a été fourni par le Laboratoire clé des médicaments naturels et biomimétiques de l'Université de Pékin, cistanoside F (cistanoside F, cLogP, -2.211) acheté auprès de Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., Le cistanoside A (cistanoside A, cLogP, -1.365), le 2'-acétylacteoside (cLogP, -0.040) et l'apioside de liquiritine (cLogP, -0.267) ont été achetés à Shanghai. Shidande Biotechnology Co., Ltd. et le tubuloside A (tubulosideA, cLogP, 0,287) ont été achetés auprès de Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. La pureté de toutes les substances de référence a été testée par HPLC-DAD-IT-TOF-MS et le la pureté était supérieure à 98 %. Toutes les valeurs cLogP de la substance témoin ont été calculées par le logiciel ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, USA).