Le choix d’un ingrédient botanique pour un soin de la peau ne devrait pas se limiter à la découverte d’une histoire végétale attrayante. Pour une marque de soins de la peau, un fabricant sous contrat ou un distributeur d'ingrédients, les questions les plus utiles sont :

Quels composés sont présents dans l’extrait ?

Avec quelle cohérence le fabricant peut-il contrôler ses concentrations ?

Quelles expériences soutiennent l’application proposée ?

Les preuves s’appliquent-elles à l’ingrédient réellement acheté ?

Quels tests supplémentaires sont nécessaires avant de lancer un produit fini ?

Le document technique examiné dans cet article se concentre surverbascoside dérivé de Cistancheet ses applications proposées dans la production de lipides cutanés, l'hydratation et la recherche liée à la barrière.

Il décrit à la fois un processus de purification et des expériences en laboratoire comparant le verbascoside purifié avec plusieurs extraits de Cistanche et d'autres ingrédients.

 

 

16% d'extrait de verbascoside cistanche

La leçon commerciale centrale est simple : un extrait général de Cistanche et un composé dérivé de Cistanche hautement purifié ne doivent pas être traités comme des ingrédients interchangeables.

Note sur les preuves :Les résultats de la recherche ci-dessous sont rapportés dans le texte du brevet chinois fourni pour traduction. Le matériel fourni n'inclut pas les chiffres originaux, les ensembles de données numériques complets, les détails de publication de brevet ou les études cliniques sur l'homme. Il doit donc être lu comme une divulgation technique et non comme une confirmation indépendante de l'efficacité du produit fini ou une approbation réglementaire.

 

1. Qu'est-ce que le verbascoside ?

Le verbascoside est également connu sous le nom deacéoside. Il s’agit de noms désignant la même substance chimique, plutôt que deux ingrédients actifs différents. Le registre des substances de la FDA répertorie les deux noms sous la même identité de substance. (precision.fda.gov)

 

 

Dans la description fournie, le verbascoside est décrit comme un glycoside phényléthanoïde obtenu à partir des tiges charnues séchées de l'espèce Cistanche. Les principales sources botaniques citées sont :

Cistanche désertique

Cistanche tubuleuse

Cistanche sinensis

Salsa à la cistanche

Le document étudie le verbascoside en tant qu'actif botanique potentiel pour les formulations topiques, avec une attention particulière au métabolisme des lipides, à la production d'acide hyaluronique, aux protéines à jonction serrée et à la migration cellulaire.

Pourquoi le nom est important lors de l'achat d'ingrédients

Lorsque vous comparez les offres des fournisseurs, demandez la confirmation de :

Les espèces botaniques et la partie végétale.

Que le matériau soit un extrait entier, un extrait standardisé ou un composé purifié.

La teneur mesurée en verbascoside.

La méthode analytique et l’étalon de référence utilisés.

Si le pourcentage indiqué représente un dosage en masse ou un pourcentage de surface chromatographique.

Une citation de "l'extrait de Cistanche" à elle seule ne fournit pas suffisamment d'informations pour déterminer si elle correspond au matériau évalué dans une expérience particulière.

2. Pourquoi la divulgation se concentre-t-elle sur la barrière cutanée ?

Le document présente un concept de recherche multi-effets plutôt qu’une simple allégation hydratante en surface.

La séquence proposée est la suivante :

Renouvellement cellulaire épidermique → connexions de cellule à cellule plus fortes → soutien lipidique → production d'acide hyaluronique → activité liée à la réparation

Pour étudier ce concept, les chercheurs ont utilisé des cellules HaCaT. HaCaT est une lignée cellulaire de kératinocytes humains immortalisée établie comme modèle de laboratoire pour l'étude de la biologie épidermique et de la kératinisation. Il ne s'agit pas d'un type de cellule naturellement appelé « HaCaT » dans la peau d'une personne. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Pour les acheteurs d’ingrédients, cette distinction est importante :les résultats obtenus sur des cellules cultivées constituent un point de départ pour la recherche et ne remplacent pas le test d'un produit fini sur la peau humaine.

Les principaux paramètres signalés

Domaine de recherche	Mesures décrites dans le document fourni	Interprétation pratique
Réponse cellulaire	CCK-8 test	Un critère de dépistage ; des méthodes supplémentaires renforceraient une allégation de prolifération
Activité liée aux lipides	Activité synthase des acides gras ; Expression de l'ACC, du FASN et de la N-SMase	Prend en charge une étude plus approfondie du métabolisme lipidique, mais ne quantifie pas directement le profil lipidique complet de la barrière cutanée
Acide hyaluronique	Contenu HA ; Expressions HAS2, HAS3 et CD44	Prend en charge une enquête plus approfondie sur les voies liées à l’HA
Connexions de cellule à cellule	Niveaux de claudine-1 et d'occludine	Mesure certaines protéines à jonction serrée plutôt que la fonction de barrière complète
Activité liée à la réparation	Test de grattage cellulaire	Un critère d’évaluation in vitro visant à combler les lacunes, et non un essai clinique de cicatrisation des plaies
Rétention d'humidité	Rétention de masse de formulation sur plaques de verre	Un test en laboratoire au niveau de la formulation, pas une étude d'hydratation sur la peau

Ces interprétations découlent des méthodes expérimentales décrites dans le texte fourni.

 

3. Qu’est-ce qui rend cette recherche utile pour les entreprises de soins de la peau ?

L'invention compare plusieurs matériaux plutôt que de supposer que chaque ingrédient dérivé du Cistanche produit la même réponse.

Les matériaux testés comprennent :

Un extrait polysaccharidique de Cistanche.

Plusieurs extraits contenant des phényléthanoïdes glycosides.

Un extrait total de phényléthanoïde glycoside.

Échinacoside.

Verascoside purifié.

Selon le document fourni, le verbascoside purifié a montré une activité sur plusieurs des paramètres mesurés. Certains extraits mixtes ont montré une activité dans certains tests mais pas dans d’autres.

Le point à retenir des achats

Achetez la spécification qui correspond à votre objectif de développement, pas seulement le nom de l'usine.

Par exemple:

Si votre projet est basé sur des expériences de verbascoside purifié, demandez des données sur le matériau purifié.

Si votre formulation utilise un extrait entier standardisé, demandez des tests sur cet extrait.

Si un fournisseur cite des recherches sur un autre procédé d'extraction, demandez si la composition testée est comparable au matériau proposé.

Les preuves d’une qualité d’ingrédient ne devraient pas être automatiquement transférées à une autre.

4. Comment le verbascoside est-il préparé dans la divulgation ?

Le processus décrit comporte quatre étapes principales :

Préparation botanique :Prétraiter et pulvériser les tiges charnues séchées de Cistanche.

Extraction:Utilisez 50 à 80 % d’éthanol aqueux.

Enrichissement:Séparez les fractions à l’aide d’une résine d’adsorption macroporeuse AB-8.

Purification:Utiliser une chromatographie sur gel de silice, suivie d'une concentration et d'une lyophilisation.

La pureté finale déclarée estau moins 98%, bien que le texte fourni n'inclue pas la validation analytique ou les données de lot nécessaires pour confirmer de manière indépendante cette spécification.

Une question critique en matière de fabrication : les solvants résiduels

L'étape de chromatographie divulguée utilisechloroforme et méthanol.

Pour un projet d'approvisionnement commercial, demandez au fabricant la liste réelle des solvants de production, les contrôles d'élimination des solvants et les résultats des solvants résiduels spécifiques au lot. ICH Q3C fournit un cadre pharmaceutique pour évaluer les risques liés aux solvants résiduels ; il ne doit pas être présenté comme une norme d’acceptation cosmétique universelle. (ema.europa.eu)

Ne présumez pas que « d’origine végétale » signifie « fabriqué uniquement avec de l’eau et de l’éthanol ».

 

5. Que montre réellement le test de rétention d’humidité ?

Le document fourni décrit une comparaison de :

Un sérum contenant2% de verbascoside.

Un sérum contenant2% d'échinacoside.

Un sérum de contrôle positif contenant5% de glycérine.

Les échantillons ont été placés à25 degrés et 50% d'humidité relative, et leur masse a été mesurée au fil du temps.

La divulgation rapporte que l'échantillon contenant du verbascoside a conservé plus de masse dans ces conditions.

Il s’agit d’une observation de sélection de formulation potentiellement utile. Cependant, la méthode décrite n'établit pas :

Hydratation supérieure sur la peau humaine.

Diminution de la perte d’eau transépidermique.

Supériorité clinique sur la glycérine.

De meilleures performances dans chaque formulation.

Que la différence observée résultait uniquement de l'actif nommé, sans comparaison de véhicules appariés entièrement divulguée.

Pour une marque planifiant une allégation comparative, testez les formulations finies à l’aide d’une étude conçue de manière appropriée.

 

6. Une liste de contrôle pratique pour l'approvisionnement en ingrédients Cistanche

Utilisez les questions suivantes lors de l’évaluation d’un fournisseur d’extrait de Cistanche ou d’un fabricant de verbascoside purifié.

Question d'achat	Documentation à demander
Quelle est la source botanique ?	Identification des espèces, déclaration des parties de plantes et informations de traçabilité
Qu'est-ce qui est exactement fourni ?	Composition complète, y compris les supports, les auxiliaires technologiques et les excipients le cas échéant
Quelle quantité de verbascoside est présente ?	Certificat d'analyse et méthode de dosage spécifique au lot
Comment l’identité est-elle confirmée ?	Identification chromatographique et informations sur les étalons de référence
Quels solvants sont utilisés ?	Déclaration réelle des solvants de fabrication et résultats des tests de solvants résiduels
Dans quelle mesure la production est-elle cohérente ?	Résultats représentatifs de plusieurs lots
Le matériau est-il adapté à l’usage prévu ?	Documentation sur l'utilisation prévue et dossier de sécurité approprié
Est-ce que cela fonctionnera dans la formule sélectionnée ?	Données de solubilité, de compatibilité, de stabilité et de développement d'emballages
Qu’est-ce qui soutient les allégations proposées ?	Rapports d’études pour le même grade d’ingrédient et, de préférence, la formulation finie

 

N'utilisez pas « Naturel » comme conclusion de sécurité

Le texte du brevet fourni fait une déclaration de sécurité favorable basée sur l'origine botanique de l'ingrédient. Cette déclaration nécessite une qualification pour l'édition commerciale.

La FDA explique que la source d'un ingrédient ne détermine pas sa sécurité : les matériaux d'origine végétale peuvent également contenir des substances toxiques ou allergènes. La sécurité doit être évaluée en fonction des conditions d'utilisation prévues. (fda.gov)

Pour cette raison, demandez une justification de sécurité plutôt que de vous fier aux garanties « naturel », « à base de plantes » ou « de haute pureté ».

 

7. Comment une marque devrait-elle discuter de la recherche ?

Gardez trois couches séparées :

Ce que prétend la divulgation.

Ce que les expériences rapportées ont mesuré.

Ce que le produit fini a démontré faire.

Par exemple, « étudié dans les cellules HaCaT pour leur activité liée aux lipides » est sensiblement différent de « cliniquement prouvé pour réparer la barrière cutanée ».

De même, les références au traitement de l’eczéma, à la gestion de la dermatite atopique ou à la cicatrisation des plaies ne doivent pas être copiées directement dans les allégations des produits cosmétiques ordinaires. Aux États-Unis, les allégations visant à traiter une maladie ou à affecter la structure ou la fonction du corps peuvent entraîner la réglementation d'un produit en tant que médicament. (fda.gov)

Un article de recherche ou une référence à un brevet ne constitue pas, en soi, une autorisation de faire une allégation marketing thérapeutique.

8. Chemin de développement recommandé

Pour une entreprise envisageant le verbascoside dérivé du Cistanche, une séquence de développement utile est la suivante :

Définir la catégorie de produits prévue et le marché cible.

Sélectionnez la qualité de l'ingrédient et les spécifications analytiques.

Examinez la composition, les contaminants, les solvants résiduels et la documentation de sécurité.

Développer un prototype et évaluer la compatibilité des ingrédients.

Évaluer la stabilité de la formulation et de l’emballage.

Effectuer des évaluations microbiologiques et de sécurité appropriées.

Testez le produit fini par rapport aux performances annoncées.

Vérifiez le site Web final, l'étiquette et le langage publicitaire avant le lancement.

La plage de concentrations dans la divulgation-0.01%–5.0%-doit être traité comme une plage divulguée et non comme une recommandation de formulation universellement validée.

 

Conclusion pour les acheteurs d’ingrédients

Les recherches fournies font du verbascoside dérivé de Cistanche un candidat pour un développement ultérieur des soins de la peau, en particulier pour les projets explorant les paramètres de laboratoire liés à l'hydratation et à la barrière.

 

Liste du contenu du cistanche acteoside

 

Cliquez pour visiter différents contenus de la liste des extraits d'acteoside cistanche

 

 

 

Sa leçon la plus utile n’est pas simplement que « la cistanche est bonne pour la peau ». C'est çala méthode d’extraction, la teneur en composés actifs, l’identité des ingrédients et la qualité des preuves influencent toutes l’adéquation d’un ingrédient botanique à un projet commercial spécifique.

Lorsque vous vous adressez à un fabricant de Cistanche, commencez par une demande précise :

"Veuillez fournir l'identité botanique, la spécification du verbascoside, la méthode d'analyse, les certificats d'analyse représentatifs, les résultats des solvants résiduels, la documentation de sécurité et les conseils de formulation pour la qualité d'ingrédient proposée pour notre projet."

Cette demande crée une base beaucoup plus solide pour le développement de produits qu’une demande générique concernant la poudre d’extrait de plantes.

 

(54) Titre de l’invention

Procédé de préparation du verbascoside et procédé de son application pour favoriser la production de lipides cutanés

(57) Résumé

L'invention concerne un procédé de préparation de verbascoside et un procédé d'application pour favoriser la production de lipides cutanés, appartenant au domaine technique des produits de soin de la peau et topiques.

Le procédé comprend les étapes suivantes :

Sélection des tiges charnues séchées des plantes OrobanchaceaeCistanche désertique, Cistanche tubuleuse, Cistanche sinensis, ouSalsa à la cistanche; pulvériser les tiges après prétraitement ; les extraire sous reflux avec une solution aqueuse d'éthanol à 50-80 % deux à quatre fois pendant une à trois heures à chaque fois ; combiner les extraits ; et les concentrer sous pression réduite jusqu'à ce qu'il ne reste plus d'odeur d'éthanol, obtenant ainsi une solution concentrée.

Faire passer la solution concentrée à travers une colonne de résine d'adsorption macroporeuse AB-8 ; éluer séquentiellement avec de l'eau déminéralisée et une solution aqueuse d'éthanol à 30 % à 50 % pour éliminer les impuretés ; puis élution des constituants cibles avec une solution aqueuse d'éthanol à 60 % à 90 % ; collecter l'éluat et le concentrer sous pression réduite ; le purifier par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant du chloroforme-méthanol dans un rapport volumique allant de 5:1 à 2:1 comme éluant ; collecter les fractions cibles ; et les concentrer sous pression réduite, suivi d'une lyophilisation, pour obtenir du verbascoside purifié.

Les effets bénéfiques indiqués pour l'invention sont que le verbascoside protège la peau et présente une activité de soin de la peau améliorée lorsqu'il est incorporé dans des produits.

 

Réclamations

Réclamation 1

Procédé de préparation de verbascoside, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :

Sélection des tiges charnues séchées des plantes OrobanchaceaeCistanche désertique, Cistanche tubuleuse, Cistanche sinensis, ouSalsa à la cistanche; les pulvériser après prétraitement ; les extraire sous reflux avec une solution aqueuse d'éthanol à 50-80 % deux à quatre fois pendant une à trois heures à chaque fois ; combiner les extraits ; et les concentrer sous pression réduite jusqu'à ce qu'il ne reste plus d'odeur d'éthanol, obtenant ainsi une solution concentrée.

Faire passer la solution concentrée à travers une colonne de résine d'adsorption macroporeuse AB-8 ; éluer séquentiellement avec de l'eau déminéralisée et une solution aqueuse d'éthanol à 30 % à 50 % pour éliminer les impuretés ; puis élution des constituants cibles avec une solution aqueuse d'éthanol à 60 % à 90 % ; collecter l'éluat et le concentrer sous pression réduite ; le purifier par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant du chloroforme-méthanol dans un rapport volumique allant de 5:1 à 2:1 comme éluant ; collecter les fractions cibles ; les concentrer sous pression réduite ; et les lyophiliser pour obtenir du verbascoside purifié ayant une pureté d'au moins 98 %.

 

Réclamation 2

Procédé de préparation du verbascoside selon la revendication 1, dans lequel le rapport matière/solvant pendant l'extraction par reflux est compris entre 1:10 et 1:20, et la température d'extraction est comprise entre 60 degrés et 80 degrés.

 

Réclamation 3

Procédé de préparation du verbascoside selon la revendication 1, dans lequel le rapport diamètre/hauteur de la colonne de résine d'adsorption macroporeuse AB-8 va de 1:8 à 1:15, et le débit d'élution va de 1 à 3 BV/h.

 

Réclamation 4

Procédé de préparation du verbascoside selon la revendication 1, dans lequel les conditions de lyophilisation comprennent une température allant de -40 degrés à -50 degrés, une pression sous vide allant de 10 à 30 Pa et un temps de séchage allant de 12 à 24 heures.

 

Réclamation 5

Procédé d'application de verbascoside pour favoriser la production de lipides cutanés, utilisant du verbascoside préparé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le procédé d'application comprend :

Ajouter du verbascoside à une base de produit topique à une fraction massique prédéterminée et agiter uniformément pour produire un produit fini ; appliquer le produit fini sur la surface de la peau une à deux fois par jour ; permettre au verbascoside de pénétrer et d'agir sur les cellules épidermiques HaCaT pour réguler positivement l'expression des gènes et des protéines de l'ACC, du FASN et de la N-SMase et augmenter l'activité de la synthase des acides gras ; et utilisation continue pendant une à quatre semaines pour améliorer la synthèse des lipides cutanés.

Le verbascoside favorise la prolifération des cellules HaCaT, la cicatrisation des plaies, l'expression des protéines à jonction serrée et la production de lipides et d'acide hyaluronique, fournissant ainsi des fonctions de réparation de barrière multi-cibles.

Il est utilisé tout au long de la chaîne de maintien de la barrière cutanée comprenant le renouvellement cellulaire épidermique, l'amélioration des connexions intercellulaires, la reconstitution de la matrice lipidique et la synthèse d'acide hyaluronique comme facteur hydratant naturel.

 

Réclamation 6

Procédé d'application selon la revendication 5, dans lequel la fraction massique de verbascoside dans le produit topique est comprise entre 0,01 % et 5,0 %.

 

Réclamation 7

Procédé d'application selon la revendication 5, dans lequel 0,1 à 0,5 g du produit fini est utilisé par application, suivi d'un massage doux pendant une à trois minutes pour favoriser l'absorption.

 

Réclamation 8

Procédé d'application selon la revendication 5, dans lequel le produit topique est un pansement médical, un produit de réparation post-intervention, un produit de traitement d'appoint de la dermatite atopique, un produit de soin spécifiquement destiné aux peaux sensibles, ou un produit de soin intensif hydratant et réparateur.

 

Réclamation 9

Procédé d'application selon la revendication 5, dans lequel des excipients peuvent en outre être incorporés pendant l'application du verbascoside.

 

Réclamation 10

Procédé d'application selon la revendication 9, dans lequel l'excipient est choisi parmi un humectant, un émulsifiant, un conservateur, un parfum ou un agent apaisant, et la forme posologique de la composition contenant l'excipient est choisie parmi une lotion, une crème, un gel, un sérum ou une solution de masque en feuille.

 

Procédé de préparation du verbascoside et procédé de son application pour favoriser la production de lipides cutanés

 

Domaine technique

[0001]L'invention appartient au domaine technique des produits de soin et topiques. En particulier, l'invention concerne un procédé de préparation du verbascoside et un procédé de son application pour favoriser la production de lipides cutanés.

Plus spécifiquement, l'invention concerne un procédé de préparation de verbascoside destiné à exercer des effets sur la séquence complète de réparation de la barrière cutanée comprenant le renouvellement cellulaire de l'épiderme → l'amélioration des jonctions serrées intercellulaires → la reconstitution de la matrice lipidique → la synthèse d'acide hyaluronique → la cicatrisation des plaies, destiné à être utilisé pour protéger la peau.

 

Art de fond

[0002]Le renouvellement cellulaire épidermique, l'amélioration des jonctions serrées intercellulaires, la reconstitution de la matrice lipidique, la synthèse de l'acide hyaluronique et la cicatrisation des plaies jouent chacun un rôle indispensable dans le maintien de l'homéostasie de la barrière cutanée.

Le renouvellement des cellules épidermiques est le fondement de la construction de la barrière. En accélérant la prolifération et la différenciation des kératinocytes basaux, il garantit qu'un nombre suffisant de cellules se déplacent vers le haut de manière ordonnée, fournissant ainsi le matériel cellulaire adéquat pour la formation d'une barrière.

Les structures jonctionnelles intercellulaires, notamment les jonctions serrées et les desmosomes, ancrent les cellules nouvellement formées ensemble pour créer une barrière physique dense et continue qui résiste efficacement à l'entrée d'irritants externes.

La matrice lipidique remplissant les espaces entre les cellules forme une structure lamellaire organisée et constitue le principal moyen de sceller les voies par lesquelles l'eau est perdue.

L'acide hyaluronique synthétisé dans l'épiderme et le derme forme un puissant réseau de rétention d'eau, hydrate la couche cornée et maintient l'homéostasie cellulaire. Il peut également fournir un environnement humide adapté à ces processus physiologiques et transmettre des signaux cellulaires.

La cicatrisation des plaies dépend fortement de ces quatre processus. Premièrement, l’acide hyaluronique fournit une matrice provisoire et des fonctions de signalisation. Un renouvellement cellulaire épidermique est alors nécessaire pour recouvrir la plaie. Les cellules nouvellement formées doivent rétablir des jonctions serrées et reconstituer la matrice lipidique pour achever la restauration de la fonction barrière.

Ces cinq processus sont initiés séquentiellement pendant la cicatrisation. Leurs actions interdépendantes et coordonnées, du renouvellement cellulaire et du renforcement structurel au remplissage de la matrice et au stockage de l'eau, conduisent collectivement à une barrière cutanée entièrement stabilisée.

Ils fournissent non seulement la force physique nécessaire pour résister aux irritants externes, mais également la capacité de rétention d’humidité nécessaire pour prévenir la perte d’eau interne, permettant ainsi à la peau de maintenir une santé à long terme dans un état d’équilibre dynamique.

En conséquence, une reconstruction multidimensionnelle et systématique est plus fondamentale que la simple amélioration de l’humidité de surface. Il peut améliorer la résistance de la peau et la rétention d’humidité à la source, favorisant ainsi un état de santé plus durable et plus stable.

[0003]La production de lipides et d'acide hyaluronique par la peau est fondamentale pour maintenir la santé de la peau, résister aux irritations environnementales et préserver sa jeunesse.

Grâce à la rétention d’humidité et à la défense contre les micro-organismes et les polluants, ces substances contribuent à assurer le fonctionnement physiologique normal de la peau.

Par rapport à la supplémentation externe seule, la promotion de la propre production de lipides et d'acide hyaluronique par la peau est décrite comme une stratégie plus fondamentale et plus durable qui renforce directement sa « capacité d'auto-réparation » et sa « résistance ».

Pour les maladies de la peau telles que la dermatite atopique et l’eczéma, le renforcement de la production de lipides et d’acide hyaluronique est décrit comme ayant une importance préventive et thérapeutique centrale.

La source explique que ces conditions impliquent souvent des défauts génétiques qui affaiblissent la structure « brique et mortier » de la peau, permettant aux allergènes et aux irritants de pénétrer plus facilement et déclenchant un cycle immuno-inflammatoire persistant.

Par conséquent, l'identification des ingrédients actifs qui activent les enzymes clés de la synthèse des lipides, telles que FASN et ACC, ou induisent directement la production d'acide hyaluronique peut maintenir et réparer de manière proactive la production de lipides cellulaires et d'acide hyaluronique.

Selon la divulgation, cette stratégie peut atténuer la sécheresse, les démangeaisons et les épisodes inflammatoires tout en réduisant les déclencheurs externes à leur source, en diminuant la fréquence et la gravité des récidives et en aidant à faire passer la gestion de la maladie d'un traitement passif à une prévention active.

 

[0004]Le verbascoside est un glycoside phényléthanoïde et l'un des constituants majeurs des plantes Orobanchaceae :

Cistanche désertiqueYC Ma ;

Cistanche tubuleuse(Schenk) Wight ;

Cistanche sinensisBeck ; et

Salsa à la cistanche(CA Mey.) Beck.

 

La recherche a montré que le verbascoside est un puissant antioxydant et possède des activités pharmacologiques, notamment des effets anti-inflammatoires, neuroprotecteurs, hépatoprotecteurs et anti-âge.

Lors du criblage d'agents protecteurs de la peau provenant de nombreuses plantes, les inventeurs ont découvert que le verbascoside favorise non seulement la prolifération des cellules HaCaT et l'expression des protéines à jonction serrée, mais régule également l'activité de la synthase des acides gras, améliorant ainsi la synthèse des lipides cutanés.

Il active également les voies impliquées dans la production d’acide hyaluronique et favorise par la suite la cicatrisation des plaies.

Ces actions englobent la séquence complète d'entretien et de réparation de la barrière cutanée : renouvellement cellulaire épidermique → connexions intercellulaires améliorées → reconstitution de la matrice lipidique → synthèse d'acide hyaluronique → cicatrisation des plaies.

Le verbascoside peut donc être utilisé comme agent protecteur et hydratant multi-cibles pour la peau dans les soins fonctionnels et les produits topiques.

Les exemples incluent les pansements médicaux et les produits de réparation post-opératoire ; produits d'appoint pour la dermatite atopique ou l'eczéma ; produits de soin spécifiquement destinés aux peaux sensibles ou à la couperose ; et des produits hydratants et réparateurs intensifs pour un usage quotidien.

 

Résumé de l'invention

[0005]L'invention concerne un procédé de préparation du verbascoside et un procédé de son application pour favoriser la production de lipides cutanés.

La méthode de préparation concerne le verbascoside destiné à soutenir la séquence complète de réparation de la barrière cutanée : renouvellement cellulaire épidermique → connexions intercellulaires améliorées → reconstitution de la matrice lipidique → synthèse d'acide hyaluronique → cicatrisation des plaies.

Elle répond au problème technique consistant à fournir un nouvel ingrédient actif de base aux effets multi-cibles pour les produits de soin de la peau ou topiques.

Le verbascoside est décrit comme ayant l'avantage d'agir sur toute la chaîne de réparation de la barrière cutanée, avec des effets supérieurs aux ingrédients de soin de la peau existants à cible unique, tels que les ingrédients qui favorisent uniquement la synthèse de l'acide hyaluronique, favorisent uniquement la prolifération cellulaire ou fournissent uniquement une hydratation.

[0006]Pour atteindre les objectifs précédents, l'invention adopte la solution technique suivante.

[0007]Un procédé de préparation de verbascoside comprend les étapes suivantes.

[0008]Sélectionnez les tiges charnues séchées des plantes OrobanchaceaeCistanche désertique, Cistanche tubuleuse, Cistanche sinensis, ouSalsa à la cistanche.

Après blanchiment, séchage et pulvérisation, extraire le matériau sous reflux avec une solution aqueuse d'éthanol à 50 % à 80 % deux à quatre fois pendant une à trois heures à chaque fois.

Combiner les extraits et les concentrer sous pression réduite jusqu'à ce qu'il ne reste plus d'odeur d'éthanol, obtenant ainsi une solution concentrée.

[0009]Passez la solution concentrée à travers une colonne de résine d’adsorption macroporeuse AB-8.

Éluer séquentiellement avec de l'eau désionisée et une solution aqueuse d'éthanol à 30 % à 50 % pour éliminer les impuretés, suivi d'une solution aqueuse d'éthanol à 60 % à 90 % pour éluer les constituants cibles.

Récupérer l'éluat et le concentrer sous pression réduite.

Purifier le concentré par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant du chloroforme-méthanol dans un rapport volumique allant de 5:1 à 2:1 comme éluant.

Recueillir les fractions cibles, les concentrer sous pression réduite et les lyophiliser pour obtenir du verbascoside purifié avec une pureté d'au moins 98 %.

[0010]Facultativement, le rapport matériau/solvant lors de l'extraction par reflux varie de 1:10 à 1:20, exprimé en g/mL, et la température d'extraction varie de 60 degrés à 80 degrés.

Note du traducteur : La source indique en outre que ce rapport signifie « 1 g de matière première est ajouté à 1 ml de solvant ». Cette déclaration n'est pas cohérente avec la plage spécifiée de 1:10 à 1:20, qui correspond à 10 à 20 ml de solvant par gramme de matière première.

[0011]Facultativement, le rapport diamètre/hauteur de la colonne de résine d'adsorption macroporeuse AB-8 va de 1:8 à 1:15, le rapport étant le diamètre de la colonne, d, à la hauteur de la colonne, h. Le débit d'élution varie de 1 à 3 BV/h.

[0012]Facultativement, les conditions de lyophilisation comprennent une température allant de -40 degrés à -50 degrés, une pression sous vide allant de 10 à 30 Pa et une durée de séchage allant de 12 à 24 heures.

[0013]L'invention concerne un procédé d'application de verbascoside pour favoriser la production de lipides cutanés.

[0014]Ajoutez du verbascoside à une base de produit topique à une fraction massique prédéterminée et remuez uniformément pour produire un produit fini.

Appliquer le produit fini sur la surface de la peau une à deux fois par jour.

Par pénétration, le verbascoside agit sur les cellules épidermiques HaCaT pour favoriser la prolifération cellulaire et renforcer les jonctions serrées.

Dans le même temps, il régule positivement l'expression des gènes et des protéines de l'ACC, du FASN et de la N-SMase, augmente l'activité de la synthase des acides gras, régule positivement HAS2, HAS3 et CD44 et augmente la teneur en acide hyaluronique.

Continuez à utiliser pendant une à quatre semaines pour obtenir une amélioration globale de la barrière cutanée.

[0015]Eventuellement, la fraction massique de verbascoside dans le produit topique va de 0,01 % à 5,0 %.

[0016]Éventuellement, utilisez 0,1 à 0,5 g de produit fini par application et massez doucement pendant une à trois minutes après l'application pour favoriser l'absorption.

[0017]Eventuellement, le produit topique est un pansement médical, un produit de réparation post-intervention, un produit de traitement d'appoint de la dermatite atopique, un produit de soin spécifiquement destiné aux peaux sensibles, ou un produit de soin intensif hydratant et réparateur.

[0018]Eventuellement, des excipients peuvent également être ajoutés lors de l'application du verbascoside.

[0019]En outre, l'excipient est choisi parmi un humectant, un émulsifiant, un conservateur, un parfum ou un agent apaisant.

La forme posologique de la composition contenant un excipient est choisie parmi une lotion, une crème, un gel, un sérum ou une solution de masque en feuille.

 

Effets bénéfiques de l'invention

[0020]Les effets bénéfiques de l'invention sont les suivants.

[0021]L'invention démontre que le verbascoside possède des activités essentielles dans la promotion de la production de lipides cutanés et d'acide hyaluronique.

Il peut également favoriser la prolifération des cellules cutanées, renforcer les jonctions intercellulaires serrées et accélérer la cicatrisation des plaies, formant un mécanisme en boucle fermée « favorisant la prolifération cellulaire → stabilisant les connexions intercellulaires → améliorant la production de lipides et d'acide hyaluronique → accélérant la réparation et la guérison ».

Par rapport à l'art antérieur, l'invention est décrite comme présentant les avantages suivants.

[0022]Le verbascoside est un actif naturel d'origine végétale doté d'un haut niveau de sécurité et d'une activité pharmacologique clairement définie, évitant les risques potentiels d'irritation cutanée associés aux ingrédients chimiquement synthétisés.

Qualification éditoriale : Il s'agit de l'allégation de sécurité de la source, et non d'une conclusion établie simplement par l'origine botanique.

[0023]L'efficacité de préparation et le rendement du verbascoside sont améliorés.

[0024]Le verbascoside agit sur une gamme complète de cibles, régulant simultanément plusieurs processus clés, notamment la prolifération cellulaire, l'expression des protéines à jonction serrée, la synthèse lipidique, la production d'acide hyaluronique et la cicatrisation des plaies.

Il améliore ainsi la fonction barrière cutanée de manière intégrée, avec des effets décrits comme supérieurs à ceux des ingrédients à cible unique.

[0025]Ses applications sont vastes, notamment la réparation médicale, le traitement complémentaire des maladies de la peau, les soins des peaux sensibles, ainsi que l'hydratation et la réparation quotidiennes, répondant aux besoins de santé cutanée de différentes populations.

 

Brève description des dessins

[0026]Pour expliquer plus clairement les solutions techniques des modes de réalisation de l'invention ou de l'art antérieur, les dessins nécessaires à la description des modes de réalisation ou de l'art antérieur sont brièvement présentés ci-dessous.

Les dessins décrits ci-dessous ne représentent que certains modes de réalisation de l'invention. Une personne du métier peut en tirer d'autres dessins sans effort créatif.

[0027]La figure 1 est un organigramme schématique du procédé de préparation de l'invention.

[0028]La figure 2 présente les données de viabilité cellulaire HaCaT.

[0029]La figure 3 présente les données sur l'activité de la synthase des acides gras.

[0030]La figure 4 présente les données sur la teneur en acide hyaluronique.

[0031]La figure 5 présente les données de viabilité cellulaire HaCaT pour l'invention.

[0032]La figure 6 présente les données d'activité de synthase d'acide gras pour l'invention.

[0033]La figure 7 présente l'expression de gènes associés à la synthèse des acides gras.

[0034]La figure 8 présente l'expression de protéines associées à la synthèse des acides gras.

[0035]La figure 9 présente les résultats du Western blot associés à la synthèse des acides gras.

[0036]La figure 10 présente les données sur la teneur en acide hyaluronique.

[0037]La figure 11 présente l'expression de gènes associés à la synthèse de l'acide hyaluronique.

[0038]La figure 12 présente l'expression de protéines associées à la synthèse de l'acide hyaluronique.

[0039]La figure 13 présente les résultats du Western Blot associés à l'acide hyaluronique.

[0040]La figure 14 présente les niveaux d'expression de la claudine-1.

[0041]La figure 15 présente les niveaux d'expression de l'occludine.

[0042]La figure 16 présente les taux de fermeture des plaies.

[0043]La figure 17 présente des images du test de grattage cellulaire.

[0044]La figure 18 présente une évaluation des performances hydratantes de différents échantillons.

 

Description détaillée des modes de réalisation

[0045]Les modes de réalisation de la demande sont décrits en détail ci-dessous en référence aux dessins annexés.

Exemple 1 : Préparation de Verbascoside purifié

[0046]Exemple 1.

[0047]Comme le montre la figure 1, cet exemple fournit un procédé de préparation du verbascoside, en abrégé Ver, comprenant les étapes suivantes.

[0048]Sélectionnez les tiges charnues séchées deCistanche désertiqueouCistanche tubuleuse, tous deux appartenant à la famille des Orobanchaceae.

Tranchez le matériau, blanchissez-le dans l'eau bouillante pendant 10 à 25 minutes et séchez-le au four à 40 degrés – 60 degrés, augmentant ainsi la teneur en verbascoside de plus de quatre fois.

 

 

Note:* par rapport au groupe témoin vierge, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Après pulvérisation, extraire le matériau sous reflux avec une solution aqueuse d'éthanol à 50 % à 80 % deux à quatre fois pendant une à trois heures à chaque fois.

Combiner les extraits et les concentrer sous pression réduite jusqu'à ce qu'il ne reste plus d'odeur d'éthanol, obtenant ainsi une solution concentrée.

 

[0049]Passez la solution concentrée à travers une colonne de résine d’adsorption macroporeuse AB-8.

Éluer séquentiellement avec de l'eau désionisée et une solution aqueuse d'éthanol à 30 % à 50 % pour éliminer les impuretés, suivi d'une solution aqueuse d'éthanol à 60 % à 90 % pour éluer les constituants cibles.

Récupérer l'éluat et le concentrer sous pression réduite.

Purifiez-le par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant du chloroforme-méthanol dans un rapport volumique allant de 5:1 à 2:1 comme éluant.

Recueillir les fractions cibles, les concentrer sous pression réduite et les lyophiliser pour obtenir du verbascoside purifié avec une pureté d'au moins 98 %.

[0050]Plus précisément, le rapport matériau/solvant lors de l'extraction par reflux varie de 1:10 à 1:20 et la température d'extraction varie de 60 degrés à 80 degrés.

[0051]Le rapport diamètre/hauteur de la colonne de résine d'adsorption macroporeuse AB-8 va de 1:8 à 1:15, et le débit d'élution va de 1 à 3 BV/h.

[0052]Les conditions de lyophilisation comprennent une température allant de -40 degrés à -50 degrés, une pression sous vide allant de 10 à 30 Pa et un temps de séchage allant de 12 à 24 heures.

 

Tableau 2. Résumé de la bioactivité des différents échantillons

Indice	Contrôle vide	Contrôle positif	CTE	Ech	Ver
Viabilité cellulaire (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
Activité FAS (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
Teneur en HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Expression de la claudine-1 (pg/mL)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Expression de l'occludine (pg/mL)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
Taux de cicatrisation des plaies en 24 heures (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
Taux de cicatrisation des plaies en 48 heures (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Note:* par rapport au groupe témoin vierge, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Exemple 2 : Préparation d'un extrait de polysaccharide de cistanche

[0053]Exemple 2.

[0054]Extraire Cistanche deux fois sous reflux chauffé avec des quantités d'eau 20 fois et 15 fois pendant trois heures et deux heures, respectivement.

Filtrer, combiner les filtrats et concentrer à 80 degrés –90 degrés.

Ajouter 215 ml d'éthanol à 95 % pour obtenir une concentration finale d'éthanol de 80 % et laisser toute la nuit à 4 degrés.

Recueillir le précipité soit par filtration en retenant le gâteau de filtration, soit par centrifugation à 4 000 tr/min pendant 10 minutes.

Laver le précipité trois fois avec de l'éthanol absolu et le sécher à 50 degrés pour obtenir un extrait polysaccharidique de Cistanche, désigné POL.

 

Exemple 3 : Préparation d'un extrait de phényléthanoïde glycoside

[0055]Exemple 3.

[0056]Extraire Cistanche deux fois sous reflux chauffé avec des quantités d'eau 20 fois et 15 fois pendant trois heures et deux heures, respectivement.

Filtrer, combiner les filtrats et concentrer à 80 degrés –90 degrés.

Ajouter 215 ml d'éthanol à 95 % pour obtenir une concentration finale d'éthanol de 80 % et laisser toute la nuit à 4 degrés.

Recueillir le filtrat par filtration ou le surnageant par centrifugation à 4 000 tr/min pendant 10 minutes.

Concentrer et sécher pour obtenir un extrait de glycoside phényléthanoïde de Cistanche, désigné POLS.

Les tests ont montré une teneur en échinacoside de 21,8 % et une teneur en verbascoside de 1,2 %.

 

Exemple 4 : Préparation de l'extrait RE1

[0057]Exemple 4.

[0058]TremperCistanche désertiquedans six fois sa quantité d'éthanol à 52% à température ambiante pendant 10 jours.

Filtrer et retenir les résidus végétaux.

Après séchage, extraire le résidu une fois à reflux avec six fois sa quantité d'éthanol à 95% pendant deux heures.

Filtrer, combiner les filtrats, concentrer à 60 degrés et sécher pour obtenir un extrait de glycosides phényléthanoïdes de Cistanche et de leurs dérivés, désigné RE1.

L'extrait contient des constituants dont l'échinacoside, le verbascoside, l'isoverbascoside et le 2′-acétylverbascoside.

 

Exemple 5 : Préparation de l'extrait RE2

[0059]Exemple 5.

[0060]ExtraitCistanche tubuleusedeux fois avec de l'éthanol à 75 % pendant une heure à chaque fois.

Filtrer et retenir les résidus.

Après séchage, extraire le résidu une fois à reflux avec six fois sa quantité d'éthanol à 95% pendant deux heures.

Filtrer, combiner les filtrats, concentrer à 60 degrés et sécher pour obtenir un extrait de glycosides phényléthanoïdes de Cistanche et de leurs dérivés, désigné RE2.

L'extrait contient des constituants dont l'échinacoside, le verbascoside, l'isoverbascoside et le 2′-acétylverbascoside.

 

Exemple 6 : Préparation d'un extrait total de phényléthanoïde glycoside

[0061]Exemple 6.

[0062]Trancher Cistanche et extraire deux fois avec une solution d'éthanol à 75 % pendant 1,5 heure à chaque fois.

Combiner les extraits, concentrer et sécher pour obtenir un extrait de glycoside phényléthanoïde Cistanche, désigné CTE.

Les tests ont montré une teneur en échinacoside de 22,6 % et une teneur en verbascoside de 4,5 %.

 

Exemple 7 : Méthode d'application

[0063]Exemple 7.

[0064]Basé sur l'exemple 1, cet exemple fournit une méthode d'application par laquelle le verbascoside exerce des effets sur la séquence complète de réparation de la barrière cutanée : renouvellement cellulaire épidermique → connexions intercellulaires améliorées → reconstitution de la matrice lipidique → synthèse d'acide hyaluronique → cicatrisation des plaies.

La méthode d’application spécifique est la suivante.

[0065]Ajoutez du verbascoside à une base de produit topique à une fraction massique prédéterminée et remuez uniformément pour produire un produit fini.

Appliquer le produit fini sur la surface de la peau une à deux fois par jour.

Par pénétration, le verbascoside agit sur les cellules épidermiques HaCaT pour favoriser la prolifération cellulaire et renforcer les jonctions serrées.

Dans le même temps, il régule positivement l'expression des gènes et des protéines de l'ACC, du FASN et de la N-SMase, augmente l'activité de la synthase des acides gras, régule positivement HAS2, HAS3 et CD44 et augmente la teneur en acide hyaluronique.

Continuez à utiliser pendant une à quatre semaines pour obtenir une amélioration globale de la barrière cutanée.

[0066]Plus précisément, la fraction massique de verbascoside dans le produit topique varie de 0,01 % à 5,0 %.

[0067]Utilisez 0,1 à 0,5 g de produit fini par application et massez doucement pendant une à trois minutes après l'application pour favoriser l'absorption.

[0068]Le produit topique est un pansement médical, un produit de réparation post-intervention, un produit de traitement d'appoint de la dermatite atopique, un produit de soin spécifiquement destiné aux peaux sensibles, ou un produit de soin hydratant et réparateur intensif.

[0069]Des excipients peuvent également être ajoutés lors de l'application du verbascoside.

En outre, l'excipient est choisi parmi un humectant, un émulsifiant, un conservateur, un parfum ou un agent apaisant.

La forme posologique de la composition contenant un excipient est choisie parmi une lotion, une crème, un gel, un sérum ou une solution de masque en feuille.

 

Exemple 8 : Matériaux et équipements expérimentaux

[0070]Exemple 8.

[0071]Sur la base des exemples 1 et 7, les matériaux expérimentaux utilisés dans l'invention sont les suivants.

[0072]Les cellules expérimentales étaient des cellules HaCaT épidermiques humaines immortalisées achetées auprès de Shanghai Yaji Biotechnology.

Les cellules ont été cultivées dans du DMEM à haute teneur en glucose additionné de 10 % de sérum de veau fœtal et de 1 % de pénicilline-streptomycine à 37 degrés dans une atmosphère contenant 5 % de dioxyde de carbone à une humidité saturée.

[0073]Le matériel expérimental était :

Échinacoside, abrégé en Ech, des Instituts nationaux de contrôle des aliments et des drogues de Chine.

Sérum fœtal bovin, FBS, d'EXCELL.

DMEM à haute teneur en glucose de Gibco.

0,25 % de trypsine-EDTA de Gibco.

Poudre saline tamponnée au phosphate de Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 Kit de test de prolifération cellulaire/cytotoxicité de TransGen Biotech.

Occludine humaine, OCLN, kit ELISA de Wuhan CUSABIO.

Kit Claudin-1 humain, CLDN1, ELISA de Wuhan CUSABIO.

Synthase d'acide gras, FAS, kit de test d'activité de Solarbio.

Kit ELISA d'acide hyaluronique humain de Wuhan CUSABIO.

Protéine EGF humaine recombinante, sans support, de R&D Systems.

DEPC d'Amresco.

Marqueur d'ADN M5 HiClear DL2000 de Mei5 Biotechnology.

Réactif TRIzol d'Ambion.

5X MasterMix RT tout-en-un d'abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Faible ROX d'abm.

Kit quantitatif de protéines Easy II, BCA, de TransGen Biotech.

Tampon de lyse RIPA de Boster.

Inhibiteur de protéase de Boster.

IgG H&L anti-lapin de chèvre, HRP, d'Abcam.

IgG H&L anti-souris de chèvre, HRP, d'Abcam.

Marqueur protéique précoloré de Solarbio.

-Mercaptoéthanol d'Amresco.

Membrane de transfert PVDF, 0,45 µm, de chez Millipore.

Glycine de Sangon Biotech.

Glycérol de Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS de Thermo Fisher.

Anticorps de contrôle de charge bêta-actine, monoclonal de souris, de Sino Biological.

Anticorps ACC1 d’Affinity.

Anticorps FASN d’Affinity.

Anticorps SMPD2 d'Affinity.

Anticorps Hyaluronan Synthase 2, HAS2, d'Affinity.

Anticorps HAS3 d’Affinity.

Anticorps CD44 d'Affinity.

[0074]Le matériel expérimental comprenait :

SmartCell HF-90 incubateur de culture cellulaire au dioxyde de carbone, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

Poste de sécurité biologique HF1200LC du même fabricant.

DK-80 centrifugeuse de paillasse à basse vitesse, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse Heraeus Multifuge X1R, Thermo Fisher Scientific.

Spectrophotomètre pour microplaques xMark, Bio-Rad.

GL-88B mélangeur vortex, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Système d'imagerie sur gel modèle 2500, Shanghai Tianneng.

Instrument PCR MyCycler Thermal Cycler, Bio-Rad.

Instrument PCR rapide en temps réel 7500, ABI.

Système d'imagerie par chimiluminescence Chemiscope 3000, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Appareil de transfert de protéines du système Mini-PROTEAN Tetra, Bio-Rad.

DYCZ-24DN appareil d'électrophorèse, Pékin Liuyi.

Note du traducteur : les descriptions des fabricants et des instruments ci-dessus suivent la source fournie ; les détails du catalogue n’ont pas été vérifiés de manière indépendante.

 

 

 

Exemple 9 : méthodes expérimentales

[0075]Exemple 9.

[0076]Sur la base des exemples 1 à 8, les méthodes expérimentales utilisées dans l'invention étaient les suivantes.

CCK-8 Test de prolifération cellulaire

[0077]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1045 \\times 10^45×104 cellules/mL.

Semez les cellules dans une plaque de 96 puits à 100 μL par puits.

Après avoir laissé les cellules s'attacher pendant 24 heures à 37 degrés sous 5 % de dioxyde de carbone, jeter le milieu de culture et administrer les différentes substances à tester. Inclure un groupe de contrôle vide, avec n=5n=5n=5.

Après 48 heures de traitement, jetez le milieu et ajoutez 100 μL de solution à 10 % CCK-8 fraîchement préparée dans chaque puits.

Continuer l'incubation dans l'incubateur de culture cellulaire pendant une heure, puis mesurer la densité optique à 450 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques.

Test d'activité de synthèse des acides gras

[0078]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1045 \\times 10^45×104 cellules/mL et ensemencer les cellules dans des flacons de culture.

Après avoir laissé les cellules s'attacher pendant 24 heures à 37 degrés sous 5 % de dioxyde de carbone, jeter le milieu de culture et administrer les différentes substances à tester.

Inclure un groupe témoin vierge et un groupe témoin positif traité avec le facteur de croissance épidermique humain recombinant, rhEGF, à 20 ng/mL, avec n=3n=3n=3.

Après 48 heures de traitement, collectez les cellules et mesurez l’activité de la synthase des acides gras selon les instructions du kit de test.

Test de teneur en acide hyaluronique

[0079]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1045 \\times 10^45×104 cellules/mL et ensemencer les cellules dans des flacons de culture.

Après avoir laissé les cellules s'attacher pendant 24 heures à 37 degrés sous 5 % de dioxyde de carbone, jeter le milieu de culture et administrer les différentes substances à tester.

Inclure un groupe témoin vierge et un groupe témoin positif traité avec du rhEGF à 20 ng/mL, avec n=3n=3n=3.

Après 48 heures de traitement, collectez les surnageants de culture cellulaire et mesurez la teneur en acide hyaluronique conformément aux instructions du kit de test.

PCR quantitative à transcription inverse

[0080]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1045 \\times 10^45×104 cellules/mL et ensemencer les cellules dans des plaques à six puits.

Après avoir laissé les cellules s'attacher pendant 24 heures à 37 degrés sous 5 % de dioxyde de carbone, jeter le milieu de culture et administrer les différentes substances à tester.

Inclure un groupe témoin vierge et un groupe témoin positif traité avec du rhEGF à 20 ng/mL, avec n=3n=3n=3.

Après 48 heures de traitement, jetez le surnageant et ajoutez 1 mL de TRIzol dans chaque puits pour détacher et lyser les cellules, en veillant à ce que le réactif recouvre la couche cellulaire.

Agiter à plusieurs reprises le récipient de culture jusqu'à ce que les cellules soient libérées et transférer le matériel dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 mL.

Extrayez l’ARN total et utilisez qRT-PCR pour déterminer l’expression de ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 et CD44.

Western Blot

[0081]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1045 \\times 10^45×104 cellules/mL et ensemencer les cellules dans des flacons de culture.

Après avoir laissé les cellules s'attacher pendant 24 heures à 37 degrés sous 5 % de dioxyde de carbone, jeter le milieu de culture et administrer les différentes substances à tester.

Inclure un groupe témoin vierge et un groupe témoin positif traité avec du rhEGF à 20 ng/mL, avec n=3n=3n=3.

Après 48 heures de traitement, récoltez les cellules.

Extrayez la protéine totale et utilisez le Western blot pour déterminer l’expression de ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 et CD44.

Évaluation de l'expression des protéines à jonction étroite

[0082]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1045 \\times 10^45×104 cellules/mL et ensemencer les cellules dans des flacons de culture.

Après avoir laissé les cellules s'attacher pendant 24 heures à 37 degrés sous 5 % de dioxyde de carbone, jeter le milieu de culture et administrer les différentes substances à tester.

Inclure un groupe de contrôle vide, avec n=3n ​​= 3n=3.

Après 48 heures de traitement, collecter les lysats cellulaires et mesurer l'occludine et la claudine-1 à l'aide d'ELISA selon les instructions du kit.

Test de grattage cellulaire

[0083]Préparer une suspension unicellulaire de cellules HaCaT dans un milieu de culture complet à une densité de 5×1055 \\times 10^55×105 cellules/mL.

Semer 500 μL par puits dans une plaque de 24 puits.

Après la fixation des cellules, administrer les traitements, en divisant les cellules en un groupe témoin vierge, un groupe témoin positif traité avec du sérum bovin fœtal et des groupes de substances à tester.

Traiter pendant 48 heures.

Après le traitement, créez délicatement une rayure droite à l’aide d’une pointe de pipette.

Remplacez le milieu par un milieu sans sérum dans tous les groupes, à l’exception du groupe témoin positif.

Photographiez les zones rayées à 0, 24 et 48 heures.

Utilisez ImageJ pour calculer la zone de grattage et évaluer la capacité de migration cellulaire.

 

Exemple 10 : Évaluation de la rétention d'humidité

[0084]Exemple 10.

[0085]Une méthode gravimétrique in vitro a été utilisée pour évaluer les performances hydratantes des sérums contenant du Ver, de l'Ech ou de la glycérine.

Peser les quantités spécifiées d’échantillon 1 prétraité, contenant 2 % de Ver ; Échantillon 2, contenant 2 % d'Ech ; et le contrôle positif, contenant 5% de glycérine.

Conservez les échantillons dans une chambre à température et humidité constantes à 25 degrés et 50 % d'humidité relative.

Pesez les échantillons à différents moments et tracez les courbes de rétention d’humidité.

[0086]Le taux de rétention d’humidité est calculé comme suit :

Taux de rétention d'humidité (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Taux de rétention d'humidité (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Taux de rétention d'humidité (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100%

[0087]Où:

[0088]M0M_0M0​ est la masse de l'assiette vide, en grammes.

[0089]M1M_1M1​ est la masse de la plaque de verre après ajout de l'échantillon, en grammes.

[0090]M2M_2M2​ est la masse après stockage dans un dessicateur pendant plusieurs heures, en grammes.

Note du traducteur : Le paragraphe [0085] décrit le stockage dans une chambre à température et humidité contrôlées, tandis que [0090] fait référence à un dessiccateur. Les deux descriptions sont conservées de la source.

 

Résultats expérimentaux

[0091]Les résultats expérimentaux de cet exemple sont les suivants.

Effets sur la prolifération cellulaire HaCaT

[0092]Comme le montre la figure 2, différents extraits de Cistanche ont eu des effets différents sur la viabilité des cellules HaCaT.

Ver et POL ont significativement augmenté la viabilité cellulaire, avec P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Effets sur l'activité de synthase des acides gras

[0093]Comme le montre la figure 3, les lipides intercellulaires de la couche cornée constituent le principal composant « mortier » de la structure « brique et mortier » de la peau.

Les céramides, le cholestérol et les acides gras libres forment une structure bicouche lamellaire dense dans des proportions spécifiques.

Le maintien d’une synthèse lipidique normale peut renforcer cette structure, prévenir la perte d’eau, résister aux dommages externes, maintenir l’équilibre du microbiome cutané et favoriser l’auto-réparation.

Il peut ainsi traiter à la source la sécheresse, la sensibilité et la capacité réduite de défense de la peau.

[0094]La synthase d’acide gras est décrite comme une enzyme centrale limitante et un moteur d’approvisionnement central régulant la synthèse des lipides cutanés.

Sa fonction principale est de catalyser la synthèse de l'acide palmitique, C16:0, à partir de l'acétyl-CoA et du malonyl-CoA. L’acide palmitique est décrit comme le principal acide gras saturé endogène à longue chaîne de la peau.

L'acide palmitique a deux fonctions.

Premièrement, en tant qu’élément structurel fondamental, il est directement utilisé dans la synthèse des lipides de la barrière couche-cornée, notamment les céramides et les acides gras libres, fournissant ainsi la base matérielle de la formation de bicouches lamellaires.

Deuxièmement, en tant que précurseur et molécule de signalisation importante, elle peut être ensuite transformée par des élongases en aval, telles que ELOVL1, en acides gras à très longue chaîne. Ces acides gras distinctifs sont nécessaires à l’intégrité de la barrière.

En conséquence, l’activité de la synthase des acides gras détermine directement l’approvisionnement en matières premières disponibles pour la propre production de lipides barrières de la peau.

La régulation positive de sa fonction est une étape initiale et critique pour favoriser la synthèse des lipides épidermiques et ainsi réparer et renforcer la barrière physique de la peau, favorisant ainsi la rétention d'humidité et la défense.

[0095]Les données ont montré que les contrôles positifs rhEGF et Ver augmentaient significativement l'activité de la synthase des acides gras, avec P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1 et RE2 n'ont pas augmenté l'activité de la synthase des acides gras.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Note du traducteur : La source inclut d'abord RE2 parmi les matériaux qui n'ont pas augmenté l'activité, puis signale une augmentation non significative pour RE2. Cette incohérence est retenue.

 

Effets sur la teneur en acide hyaluronique

[0096]Comme le montre la figure 4, l'acide hyaluronique est un polysaccharide naturellement présent dans la peau avec une forte capacité de rétention d'eau, décrit dans la source comme étant principalement présent dans le derme et la couche cornée.

L'augmentation de la teneur en acide hyaluronique peut retenir l'humidité à des niveaux plus profonds, maintenir une structure cutanée saine, fournir des effets antioxydants et anti-inflammatoires, favoriser la cicatrisation et la réparation des plaies et améliorer la fonction de la couche cornée.

Ces effets sont décrits comme produisant de l’hydratation, de la plénitude et de la résilience de l’intérieur.

[0097]Les données ont montré que les contrôles positifs rhEGF, Ver et RE2 augmentaient significativement la teneur en acide hyaluronique, avec P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS et RE1 n'ont pas augmenté la teneur en acide hyaluronique.

 

Comparaison des classes d'extraits et du verbascoside purifié

[0098]Cistanche contient principalement des glycosides et des polysaccharides phényléthanoïdes.

Les activités de l'extrait polysaccharidique, POL ; extraits de glycosides de phényléthanoïde, POLS, RE1 et RE2 ; et le verbascoside, Ver, ont donc été comparés.

Les résultats des figures 2 à 4 indiquent que les extraits de glycosides phényléthanoïdes de Cistanche préparés par différentes méthodes et que le composé individuel présentaient différentes activités pour favoriser la prolifération des cellules HaCaT, augmenter l'activité de la synthase des acides gras et augmenter la teneur en acide hyaluronique.

Seul Ver a présenté une activité dans les trois domaines, comme le résume le tableau 1.

[0099]–[0101] Ces numéros de paragraphe et le contenu du tableau 1 n'étaient pas présents dans la source fournie. Aucune traduction ou reconstruction n'est possible pour le matériel manquant.

Tableau 1. Résumé de la bioactivité des différents échantillons

Indice	Contrôle vide	Contrôle positif	Pôle	POLS	RE1	RE2	Ver
Viabilité cellulaire (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
Activité FAS (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
Teneur en HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

Comparaison plus approfondie du CTE, de l'échinacoside et du verbascoside

[0102]Comme le montre la figure 5, les principaux glycosides phényléthanoïdes du Cistanche comprennent l'échinacoside et le verbascoside.

Les effets de l'extrait total de phényléthanoïde glycoside de Cistanche, CTE, contenant 22,6 % d'échinacoside et 4,5 % de verbascoside ; échinacoside, Ech; et le verbascoside, Ver, sur la prolifération des cellules HaCaT ont donc été comparés davantage.

[0103]Les données ont montré que CTE, Ech et Ver favorisaient tous la prolifération des cellules HaCaT.

CTE et Ver ont produit les effets les plus forts, suggérant des effets protecteurs sur les cellules de la peau.

Autres effets sur l'activité de la synthase des acides gras

[0104]Comme le montre la figure 6, les effets sur l'activité de la synthase des acides gras étaient les suivants.

[0105]Les données ont montré que les contrôles positifs rhEGF, Ech et Ver augmentaient significativement l'activité de la synthase des acides gras, avec P<0.05P < 0.05P<0.05.

Le CTE n’a pas augmenté l’activité de la synthase des acides gras.

 

Expression de gènes et de protéines associées à la synthèse des acides gras

[0106]Les figures 7 à 9 montrent les effets sur l'expression des gènes et des protéines associés à la synthèse des acides gras.

[0107]L'ACC et le FASN sont décrits comme l'enzyme limitante et le moteur principal de l'anabolisme lipidique.

Ensemble, ils catalysent la génération d'acides gras à longue chaîne, notamment l'acide palmitique, fournissant des matières premières essentielles à la synthèse de lipides barrières clés tels que les céramides.

La N-SMase est un initiateur clé de la dégradation des lipides et de la signalisation du stress, jouant un double rôle.

Il est activé pendant une blessure et hydrolyse la sphingomyéline pour générer des céramides de signalisation, déclenchant l'inflammation et l'apoptose et supprimant la synthèse normale des lipides.

Dans les cellules normales, il joue cependant un rôle régulateur dans le métabolisme des lipides.

[0108]Comme le montrent les figures 7 à 9, les résultats de la qPCR et du Western blot ont indiqué que Ver, comme le rhEGF, régulait positivement l'expression des gènes et des protéines de l'ACC, du FASN et de la N-SMase, avec P<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Les résultats indiquent que Ver régule positivement l'ACC et le FASN pour réguler la synthèse des lipides cellulaires pour la construction de la membrane, le stockage d'énergie ou la sécrétion.

Dans le même temps, la régulation positive de la N-SMase peut activer le cycle métabolique des sphingolipides.

Les céramides produits ne sont pas seulement des signaux de stress. Dans des conditions physiologiques normales, ils sont également des précurseurs importants pour la synthèse d’autres sphingolipides complexes, tels que les glycosphingolipides, ou pour le remodelage dynamique des membranes.

Ainsi, la régulation positive coordonnée de ces trois gènes et protéines améliore l’activité anabolique cellulaire globale et la capacité de remodelage membranaire.

 

Autres effets sur la teneur en acide hyaluronique

[0109]Comme le montre la figure 10, les données indiquent que rhEGF, CTE, Ech et Ver augmentent tous de manière significative la teneur en acide hyaluronique, avec P<0.05P < 0.05P<0.05.

L'ordre d'effet était CTE, suivi de Ver, suivi de Ech.

 

Expression de gènes et de protéines associées à la synthèse de l'acide hyaluronique

[0110]Comme le montrent les figures 11 à 13, HAS2, HAS3 et CD44 forment une boucle de rétroaction « synthèse-détection-réponse » dans le métabolisme de l'acide hyaluronique dans les cellules HaCaT.

HAS2 et HAS3 sont les principales enzymes de synthèse catalytique.

HAS2 produit principalement de l'acide hyaluronique de haut poids moléculaire et est associé au maintien de l'homéostasie cutanée et aux effets anti-inflammatoires.

HAS3 a tendance à produire de l’acide hyaluronique de poids moléculaire inférieur et participe plus directement aux processus tels que la migration et la prolifération cellulaire.

Le CD44 est le principal récepteur de surface cellulaire de l'acide hyaluronique.

Il assure non seulement la transmission de signaux intracellulaires et extracellulaires impliquant l’acide hyaluronique, mais régule également de manière dynamique l’acide hyaluronique par endocytose et recyclage et, à son tour, régule l’expression et l’activité de HAS2 et HAS3.

[0111]Comme le montrent les figures 11 à 13, les résultats de la qPCR et du Western blot ont indiqué que Ver, comme le rhEGF, régulait positivement de manière significative l'expression des gènes et des protéines de HAS2, HAS3 et CD44, avec P<0.05P < 0.05P<0.05.

Les effets régulateurs de Ver sur l'expression des gènes HAS2, HAS3 et CD44 étaient supérieurs à ceux du rhEGF.

Les résultats indiquent que Ver régule HAS2, HAS3 et CD44 pour contrôler le processus complet de « synthèse-assemblage-transmission du signal » de l'acide hyaluronique, contribuant ainsi à l'hydratation, à la réparation et à la fonction de barrière de l'épiderme.

Effets sur l'expression des protéines à jonction serrée

[0112]Le maintien de la production de lipides cutanés et d’acide hyaluronique est décrit comme fournissant un soutien synergique fondamental et une stabilisation des protéines à jonction étroite entre les cellules HaCaT.

Des lipides adéquats permettent aux kératinocytes de former des bicouches lipidiques intercellulaires complètes et organisées.

Ces structures sont décrites non seulement comme la structure physique de la barrière, mais également comme un environnement structurel stable et hydrophobe pour l'assemblage et l'ancrage des protéines à jonction étroite.

Dans le même temps, l’état d’hydratation favorable maintenu par l’acide hyaluronique contribue à assurer un métabolisme et une signalisation normaux des kératinocytes.

Grâce à des voies impliquant des récepteurs tels que CD44, l’acide hyaluronique régule également indirectement l’expression et la distribution des protéines à jonction étroite.

Ensemble, les lipides et l'acide hyaluronique fournissent les bases physiques et biochimiques nécessaires à la formation et au maintien de jonctions serrées du point de vue respectif de la stabilité structurelle et de l'homéostasie microenvironnementale.

Ils renforcent ainsi les connexions physiques intercellulaires et l’intégrité globale de la barrière.

[0113]Les résultats précédents ont indiqué que Ver présentait la plus forte activité dans la promotion de la production de lipides cutanés et d'acide hyaluronique.

Une étude plus approfondie de ses effets sur les jonctions serrées intercellulaires a montré que CTE, Ech et Ver favorisaient tous de manière significative l'expression de la protéine de jonction serrée claudin-1, avec P<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Comme le montre la figure 15, seuls Ech et Ver ont favorisé de manière significative l'expression de l'occludine.

L’effet de Ver était significativement supérieur à celui de Ech, avec P<0.05P < 0.05P<0.05.

Cela concorde avec la plus forte activité attribuée à Ver dans la promotion de la production de lipides cutanés et d'acide hyaluronique.

 

Effets sur la cicatrisation des plaies

[0114]Comme le montrent les figures 16 et 17, HAS3 participe directement à des processus tels que la migration et la prolifération cellulaire.

Le CD44 transmet les informations de l'acide hyaluronique aux cellules et régule finalement la migration, la prolifération et l'hydratation des cellules, jouant un rôle central dans la cicatrisation des plaies, l'hydratation de la peau et l'homéostasie de la barrière.

Les expériences précédentes ont montré que le verbascoside favorisait de manière significative l’expression de HAS3 et CD44.

Sa capacité à favoriser la cicatrisation des plaies a donc été étudiée plus en détail.

[0115]Comme le montrent les figures 16 et 17, les résultats ont indiqué que CTE, Ech et Ver favorisaient tous la cicatrisation des plaies.

Cependant, seul Ver a montré un effet promoteur significatif après 24 heures.

Il a présenté la plus forte activité favorisant la cicatrisation des plaies, ce qui est cohérent avec sa promotion significative de l’expression du gène et de la protéine HAS3.

Qualification éditoriale : La méthode expérimentale fournie pour ce résultat est un test de grattage cellulaire. La « cicatrisation des plaies » est la terminologie utilisée dans la source et ne doit pas être interprétée ici comme un résultat clinique démontré.

 

Performance de rétention d'humidité des formulations

[0116]Comme le montre la figure 18, la capacité de rétention d'humidité de l'échantillon a été évaluée à partir des tendances des courbes de rétention d'humidité afin d'évaluer les performances d'hydratation de la peau.

Les données ont montré que la courbe de rétention d'humidité de l'échantillon 1 était supérieure à celle de l'échantillon 2 et du contrôle positif.

Under conditions of 25℃ and 50% relative humidity, Sample 1 had better moisturizing performance than Sample 2 and the 5% glycerin control, indicating the strongest moisturizing performance.

L'échantillon 1 contenait Ver et l'échantillon 2 contenait Ech.

Selon la source, ces résultats indiquent que, lorsqu'il est incorporé dans les produits, Ver a une meilleure homogénéité et activité hydratante que Ech, comme le résume le tableau 2.

[0117]Tableau 2. Résumé des activités de différents échantillons.

Le contenu du tableau n’était pas inclus dans la source fournie.

[0118]Remarque : [Le symbole de signification n'a pas été reproduit dans le texte fourni.] Par rapport au groupe témoin vierge, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Interprétation globale présentée dans la divulgation

[0119]Les résultats précédents indiquent que le verbascoside présente une activité hydratante exceptionnelle en activant avec précision un mécanisme complet de réparation de la barrière cutanée en boucle fermée.

Il agit d’abord sur la couche basale pour accélérer considérablement le renouvellement cellulaire épidermique et la différenciation ordonnée, fournissant ainsi suffisamment d’éléments de base cellulaires pour la construction de la barrière.

Il favorise ensuite le renforcement des jonctions serrées et des structures desmosomales entre kératinocytes, renforçant l'ancrage physique entre les cellules et augmentant la densité barrière et la résistance mécanique.

En même temps, il active efficacement les enzymes clés du métabolisme lipidique et reconstitue la matrice lipidique intercellulaire, remplissant les espaces « mortier » entre les « briques » pour éviter la perte d'eau.

Enfin, en régulant positivement l’expression de l’acide hyaluronique synthase, il augmente simultanément la teneur en acide hyaluronique du derme et de l’épiderme, capturant et retenant des quantités substantielles d’eau.

Cela forme une boucle fonctionnelle complète englobant le renouvellement à la source, le renforcement structurel, la reconstitution de la matrice et le stockage de l'eau.

Il peut ainsi réaliser une séquence en boucle fermée de « promotion de la prolifération cellulaire → renforcement des connexions physiques intercellulaires → promotion de la production de lipides et d'acide hyaluronique → promotion de la cicatrisation des plaies ».

La source conclut qu'il produit de meilleurs effets d'application que l'échinacoside de Cistanche et la glycérine humectante couramment utilisée et qu'il peut être utilisé comme agent de protection de la peau dans les soins fonctionnels de la peau et les produits topiques.

[0120]Les descriptions précédentes ne sont que des modes de réalisation spécifiques de l'invention.

La portée de la protection de l'invention n'est pas limitée à ces modes de réalisation.

Toutes modifications ou substitutions qu'un homme du métier pourrait facilement concevoir dans le cadre technique divulgué dans l'invention entrent dans le champ de protection de l'invention.

En conséquence, l'étendue de la protection de l'invention sera déterminée par les revendications.