Les polysaccharides de Cistanche inhibent la prolifération des cellules cancéreuses de la prostate et induisent l'apoptose via la génération de ROS et la suppression des gènes antioxydants
Jun 10, 2025
Abstrait:
Objectif:Étudier les effets et les mécanismes sous-jacents dePolysaccharides de cistanchesur la prolifération et l'apoptose decellules cancéreuses de la prostate.
Méthodes :
Les cellules DU145 du cancer de la prostate humaine ont été traitées avec des concentrations faibles, moyennes et élevées dePolysaccharides de cistanche(20, 40 et 80 mg/mL, respectivement). La prolifération cellulaire a été évaluée à l'aide de laDosage MTT, et l'apoptose a été évaluée parcytométrie en flux. Intracellulaireespèces réactives de l'oxygène (ROS)les niveaux ont été mesurés par cytométrie en flux, tandis queglutathion (GSH)les niveaux ont été déterminés en utilisantELISA. Les niveaux d’expression de l’ARNm et des protéines desous-unité catalytique de glutamate-cystéine ligase (GCLC), sous-unité modificatrice de glutamate-cystéine ligase (GCLM), etthiorédoxine réductase 1 (TXNRD1)ont été analysés parRT-PCRetWestern blot, respectivement.
Résultats:
La concentration inhibitrice demi-maximale (IC₅₀) dePolysaccharides de cistanchesur les cellules DU145 était de 40,35 mg/mL, donc 40 mg/mL ont été sélectionnés comme dose moyenne pour les expériences ultérieures. Les doses faibles, moyennes et élevées ont été définies comme étant respectivement 50 %, 100 % et 200 % de la CI₅₀.
Tous les groupes de traitement ont démontré des taux d'apoptose significativement accrus par rapport au groupe témoin. Legroupe Cistanche à haute doseprésentaient la plus grande inhibition de la prolifération cellulaire et le taux d'apoptose le plus élevé, suivis par les groupes à dose moyenne et faible (P< 0,01). Les niveaux de ROS étaient significativement élevés et les niveaux de GSH étaient significativement réduits dans tous les cas.Groupes traités à la cistanchecontre le contrôle. Notamment, legroupe à dose élevéeprésentaient des taux de ROS nettement plus élevés et des taux de GSH inférieurs à ceux des groupes recevant des doses moyennes et faibles (P< 0,05); le groupe à dose moyenne a montré des différences similaires par rapport au groupe à faible dose (P< 0,05).
Niveaux d'expression deGCLC, GLCM, etTXNRD1(à la fois l'ARNm et les protéines) étaient significativement régulés négativement dans tous les groupes traités par Cistanche par rapport au témoin (P< 0,05). Legroupe à dose élevéeont montré la suppression la plus significative de ces gènes et protéines liés aux antioxydants, suivis par les groupes à dose moyenne et faible (P< 0,05).
Conclusion:
Polysaccharides de cistancheinhiber l'expression des facteurs antioxydantsGCLC, GLCM, etTXNRD1, réduisant ainsisynthèse de GSH, favorisantAccumulation de ROS, et finalement induireapoptose dans les cellules cancéreuses de la prostate. Ces résultats suggèrent queCistanchepeut servir deagent thérapeutique naturelpour le cancer de la prostate viamécanismes médiés par le stress oxydatif.
Extrait de Cistanche riche en polysaccharides
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Contexte et méthodes
Cancer de la prostatereprésente environ7,1 % de toutes les tumeurs malignes masculines, avec un pic d'incidence survenant après l'âge de 60 ans. À mesure que la population chinoise continue de vieillir, l'incidence de cette maladie devrait encore augmenter [1]. Des études suggèrent que la forte prévalence du cancer de la prostate chez les hommes âgés pourrait être liée àchangements dégénératifs dans la prostate, prédisposition génétique, habitudes alimentaires, etfacteurs de style de vie [2].
Résection chirurgicalereste un pilier du traitement du cancer de la prostate, visant à éliminer la majeure partie de la masse tumorale. Cependant, elle est associée à des complications importantes, telles queincontinence urinaire, dysfonction sexuelle, et surtout,récidive tumorale et métastases, qui sont des causes majeures de mauvais pronostic [3].
Au cours des dernières années,Médecine Traditionnelle Chinoise (MTC)a attiré une attention croissante pour son rôle dans le traitement du cancer. La MTC peut vous aiderrenforcer l'immunité, contrecarrer les effets secondaires de la chimiothérapie/radiothérapie, etaméliorer la désintoxication. Some medicinal herbs also exhibit propriétés antitumorales directes, y compris l'inhibition de la croissance tumorale etinduction de l'apoptose dans les cellules cancéreuses [4].
Parmi ceux-ci,Cistanche (Cistanche deserticola)est une herbe tonique traditionnelle connue pour sonimmunomodulateur, antioxydant, eteffets antitumoraux. Ses principaux composants bioactifs sontpolysaccharidesetglycosides phényléthanoïdes. Cette étude examine les effets et le mécanisme sous-jacent dePolysaccharides de cistanchesurprolifération et apoptose des cellules DU145 du cancer de la prostate.
1. Matériels et méthodes
1.1 Principaux matériaux et réactifs
Cellules cancéreuses de la prostate humaine DU145ont été obtenus auprès de Tongpai Biotech (Shanghai, Chine).
Polysaccharides de cistanche(N° de lot : 0287181) ont été achetés auprès de Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Chine).
Sérum fœtal bovin, pénicilline/streptomycine, etDMEMont été fournis par Zeta Life (USA).
Dosage MTT, Kits d'apoptose à l'annexine V/PI, Tampon de lyse RIPA, Kits de quantification des protéines BCAont été obtenus auprès d'Elabscience (Shanghai, Chine).
Kit de détection des espèces réactives de l'oxygène (ROS)etKits GSH ELISAont été achetés auprès de BioLab (Shanghai, Chine).
Réactif Trizol, kits de transcription inverse, etKits PCRprovenaient de NeuroSym (Hangzhou, Chine).
Anticorps contreGCLC, GLCM, TXNRD1, -actine, et les anticorps secondaires correspondants ont été achetés auprès d'UnivBio (Shanghai, Chine).
1.2 Essai de culture cellulaire et de prolifération
Les cellules DU145 ont été cultivées dansDMEM complété par 10 % de FBS et 1 % de pénicilline/streptomycinedans un incubateur à CO₂. Pour leDosage MTT, les cellules DU145 en phase logarithmique ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits et traitées avecSolutions de polysaccharides cistancheà des concentrations de10, 20, 40 et 80 mg/mL. Le groupe témoin a reçu uniquement du milieu DMEM.
Après 24 heures de traitement,20 µL de 5 mg/mL de MTTa été ajouté à chaque puits et incubé pendant 4 heures. Le surnageant a été retiré et150 µL de DMSOa été ajouté. Après agitation pendant 10 minutes, l'absorbance a été mesurée à490 nmà l'aide d'un lecteur de microplaques. LeIC₅₀a été calculé, et20, 40 et 80 mg/mLont été sélectionnés commedoses faibles, moyennes et élevéespour des expériences ultérieures. Letaux d'inhibition de la prolifération cellulairea été calculé comme suit :
Taux d'inhibition (%)=(OD_control - OD_treatment) / OD_control × 100
1.3 Test d'apoptose
Les cellules DU145 en phase logarithmique ont été traitées avec différentes concentrations dePolysaccharides de cistancheselon les regroupements. Après fixation et coloration,Annexine V-FITCetPIont été utilisés pour marquer les cellules apoptotiques.Cytométrie en fluxa été réalisée pour détecter les signaux de fluorescence et le pourcentage de cellules apoptotiques a été enregistré.
1.4 Détection des niveaux intracellulaires de ROS et de GSH
Les niveaux de ROS ont été mesurés à l'aide d'unSonde de fluorescence ROSet cytométrie en flux. Les niveaux de GSH ont été quantifiés à l'aideELISA. Une courbe standard a été préparée en utilisant des concentrations connues d'étalons de GSH, et l'absorbance a été mesurée pour calculer les concentrations de GSH dans les échantillons.
1.5 RT-PCR pour l'expression de l'ARNm de GCLC, GCLM, TXNRD1
L'ARN total a été extrait en utilisantTrizol, et l'ADNc a été synthétisé. La PCR a été réalisée à l'aide d'amorces spécifiques :
GCLC:
Avant : 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'
Inverse : 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'
GLCM:
Avant : 5'-CCGATGAGCCCATAAACGTCCGTAGC-3'
Inverse : 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Avant : 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'
Inverse : 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
-actine (contrôle interne):
Avant : 5'-TTAGGCGCCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Inverse : 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'
Conditions d'amplification : 95 degrés pendant 60 s, suivi de 30 cycles de 95 degrés pendant 30 s, 60 degrés pendant 30 s et 72 degrés pendant 60 s. Les produits PCR ont été analysés parélectrophorèse sur gel, et l'expression relative des gènes a été normalisée à-actine.
1.6 Western Blot pour l’expression des protéines
La protéine totale a été extraite en utilisantTampon RIPA, et la concentration en protéines a été déterminée parDosage BCA. Les protéines ont été séparées parPAGE FDS, transféré àMembrane PVDF, bloqué et incubé toute la nuit à 4 degrés avec des anticorps primaires contreGCLC, GLCM, TXNRD1, et-actine. Après incubation avecAnticorps secondaires conjugués à la HRP, les bandes ont été visualisées en utilisantchimiluminescenceet quantifié parLogiciel ImageJ.
1.7 Analyse statistique
Toutes les données ont été analysées à l'aideSPSS25.0. ANOVA unidirectionnelle etTests LSD-tont été utilisés pour déterminer la signification statistique.
