Abstrait

ObjectifÉtudier l'effet réduisant l'acide urique et l'évaluation de l'innocuité de l'échinacoside (Ech) extrait deCistanche tubuleuse. MéthodesDans le test de toxicité aiguë, des souris KM ont reçu par voie orale Ech à la concentration maximale deux fois par jour pour l'observation de la toxicité aiguë. Un modèle de rat hyperuricémique (HUA) a été établi en utilisant 1,5 g·kg⁻¹ d'oxonate de potassium + 0.1 g·kg⁻¹ d'adénine. Les rats modèles HUA ont été divisés au hasard en un groupe modèle, un groupe allopurinol (30 mg·kg⁻¹) et des groupes Ech à faibles, moyennes et fortes doses (50, 75, 100 mg·kg⁻¹), avec un groupe témoin normal (n=10 par groupe). Les médicaments ont été administrés par voie intragastrique une fois par jour pendant 28 jours consécutifs. Après administration, les rats ont été sacrifiés et le sérum a été collecté pour détecter les indicateurs biochimiques pertinents et les niveaux de xanthine oxydase (XOD) ; des modifications histopathologiques rénales ont été observées. Les organes ont été pesés pour calculer les coefficients des organes ; les niveaux d'expression de gènes et de protéines apparentés dans le tissu rénal ont été détectés.RésultatsAucune réaction toxique évidente n’a été observée lors du test de toxicité aiguë. Ech a réduit de manière significative les taux sériques d'acide urique, a nettement amélioré la fonction rénale et les lésions tubulaires/interstitielles rénales chez les rats modèles HUA, et a régulé de manière significative les niveaux de transcription et d'expression protéique des gènes liés au transporteur d'urate dans le tissu rénal.ConclusionL'effet d'Ech sur la réduction de l'acide urique chez les rats modèles HUA peut être lié à la réduction de la production d'acide urique in vivo, à la régulation de la fonction rénale et à la modulation de l'expression des transporteurs d'urate, avec une sécurité favorable.Mots-clés: Cistanche tubuleuse; Échinacoside ; Hyperuricémie ; Acide urique ; Transcription génétique ; Expression des protéines ; Mécanisme d'action ; Évaluation de la sécurité

 

 

 

Cistanche tubuleuse(Schenk) R. Wight est une plante tonifiante pour les reins couramment utilisée en médecine traditionnelle chinoise (MTC). Comme enregistré dans lePharmacopée chinoise, il reconstitue le yang des reins, reconstitue l'essence et le sang, et est utilisé cliniquement pour l'impuissance et l'infertilité, le manque d'essence et de sang et les douleurs à la taille et aux genoux. Les glycosides phényléthanoïdes sont les composants les plus abondants et les plus biologiquement actifs dansCistanche tubuleuse, montrant un grand potentiel de développement et d’application. Notre équipe de recherche a précédemment découvert via la pharmacologie en réseau et des expériences préliminaires sur des souris que l'échinacoside (Ech) deCistanche tubuleusel'extrait peut exercer des effets réduisant l'acide urique, alors que son mécanisme et sa sécurité sont rarement rapportés. Cette étude prend la pathogenèse de l'hyperuricémie comme point d'entrée pour examiner l'effet pharmacologique réduisant l'acide urique d'Ech, dans le but de clarifier son mécanisme et d'évaluer sa sécurité.

1 Matériels et méthodes

1.1 Instruments, réactifs et animaux

Analyseur biochimique automatique 7100 (Hitachi, Japon) ; Lecteur de microplaques Multiskan GO 1510 (Thermo, États-Unis) ; Système d'électrophorèse BG-Power600i (Beijing Baijing Biotechnology Co., Ltd.) ; Système de PCR quantitative fluorescente rapide en temps réel 7500 (Applied Biosystems, États-Unis).

Cistanche tubuleuse extract (Ech, self-prepared, chromatographic purity >98 % ); oxonate de potassium, adénine (Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.); kits de dosage de créatinine (CREA), d'acide urique (UA), d'urée (UREA), d'adénosine désaminase (ADA), d'alanine transaminase (ALT), d'aspartate transaminase (AST), de phosphatase alcaline (ALP) (Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.) ; Kit de test d'activité XOD (Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.) ; anticorps URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 (Jiangsu Qinke Biotechnology) ; Conjugué IgG/HRP anti-lapin de chèvre (Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd., Lot : 245440113) ; DEPC (Amresco, États-Unis) ; Marqueur d'ADN M5 HiClear DL2000 (Beijing Juhemai Biotechnology Co., Ltd.); Réactif TRIzol™ (Thermo Fisher Scientific, États-Unis) ; 5 × MasterMix RT tout-en-un, EvaGreen Express 2 × qPCR MasterMix-Low ROX (Aibimeng Biotechnology Co., Ltd.).

Quarante souris KM de qualité SPF (mâles et femelles, 18 à 22 g) et 90 rats SD mâles de qualité SPF (150 à 180 g) ont été fournis par le Centre animalier expérimental de l'Université médicale du Xinjiang (licence de production n° SCXK Xin 2023-0001).

1.2 Méthodes et résultats

1.2.1 Essai de toxicité aiguë

Les expériences sur les animaux ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Institut de recherche sur les médicaments du Xinjiang (approbations n° IACUC-(Zhun)-2024-008, IACUC-(Zhun)-2024-009). Quarante souris KM de qualité SPF ont été divisées au hasard en un groupe témoin et un groupe de traitement (n=20, mâles et femelles) après quarantaine et acclimatation. Les souris ont été mises à jeun toute la nuit avec un accès libre à l'eau avant l'administration. Selon leLignes directrices pour les tests de toxicité à dose unique de médicaments traditionnels chinois et de produits naturels, la solution à la concentration maximale (250 mg·mL⁻¹) pouvant être passée à travers une aiguille de gavage de calibre 12 a été préparée. Des souris KM ont reçu par voie orale 40 ml·kg⁻¹ deux fois par jour à 4 heures d'intervalle, avec une dose cumulée de 20 g·kg⁻¹. Les conditions générales, la couleur du pelage, l'activité, la démarche, l'état mental, les selles et l'urine ont été étroitement observées pour déterminer les symptômes toxiques, l'heure d'apparition, la durée et la récupération. Aucune réaction toxique indésirable (par exemple, activité restreinte, prostration, apathie, décès) n'a été observée dans le groupe de traitement. La couleur du pelage, l’activité, la démarche, l’état mental, les selles et l’urine sont restés normaux pendant la période d’observation. Le poids corporel et la consommation alimentaire n’ont montré aucune différence significative entre les groupes de traitement et les groupes témoins. L'autopsie macroscopique à la fin de l'observation n'a révélé aucune anomalie dans le volume, la couleur ou la texture des organes.

 

Figure 1 Effets du poids corporel (AB) et de la consommation alimentaire (C, D) d'Echo chez la souris

 

1.2.2 Établissement, regroupement et administration du modèle

Soixante rats SD mâles (150 à 180 g) ont été acclimatés et divisés en un groupe témoin normal (n=10) et un groupe de modélisation (n=50). Le groupe modèle a reçu par voie intragastrique 100 mg·kg⁻¹ d'adénine + 1.5 g·kg⁻¹ d'oxonate de potassium (en suspension dans 0,5 % de CMC-Na) à raison de 10 mL·kg⁻¹ une fois par jour pendant 14 jours ; le groupe témoin a reçu 0,5 % de CMC-Na. Après modélisation, du sang orbitaire a été collecté pour détecter l'URÉE, le CREA et l'acide urique sérique (SUA). Le modèle a été considéré comme réussi lorsque l'UREA, la CREA et la SUA étaient significativement élevées. Les rats modèles HUA réussis ont été divisés en un groupe modèle, un groupe allopurinol (30 mg·kg⁻¹) et des groupes Ech à doses faibles, moyennes et élevées (50, 75, 100 mg·kg⁻¹) (n=10 par groupe). Pour maintenir une hyperuricémie stable, tous les groupes, à l'exception du groupe témoin, ont reçu par voie intragastrique 100 mg·kg⁻¹ d'adénine + 500 mg·kg⁻¹ d'oxonate de potassium (suspension de CMC-Na à 0,5 %) chaque matin et les médicaments correspondants chaque après-midi pendant 14 jours. Les agents de modelage ont ensuite été arrêtés, tandis que l'administration du médicament s'est poursuivie pendant encore 14 jours.

1.2.3 Détermination du SUA et de l'acide urique urinaire (UUA) chez le rat

Après la dernière administration, les rats ont été mis à jeun toute la nuit avec libre accès à l’eau. L'urine a été collectée, centrifugée (3 × 10³ r·min⁻¹, 10 min), diluée au 1:9 avec une solution saline et testée pour l'UUA à l'aide d'un analyseur biochimique. Le sang a été collecté sous anesthésie et le sérum a été séparé (3 x 10³ r·min⁻¹, 10 min) pour la détection du SUA. Par rapport au groupe témoin, le groupe modèle a montré une augmentation significative du SUA (P<0.05) and decreased UUA (P<0.01). The allopurinol group and low-, medium-, and high-dose Ech groups had significantly reduced SUA (P<0.05); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly increased UUA (P<0.05 or P<0.01).

 

Figure 2 Effet de Ech sur SUA (A) et UUA (B) chez des rats modèles d'hyperuricémie

 

1.2.4 Détermination des niveaux sériques d’ADA et de XOD chez le rat

L'ADA sérique a été mesurée à l'aide d'un analyseur biochimique ; L'activité XOD a été détectée par test immuno-enzymatique (absorbance à 290 nm). Par rapport au groupe normal, le groupe modèle présentait des taux d'ADA et de XOD significativement élevés (P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced ADA (P<0.01); the allopurinol group and high-dose Ech group had significantly reduced XOD (P<0.01).

1.2.5 Détermination des niveaux sériques d'URÉE, CREA, ALT, AST, ALP

Par rapport au groupe normal, le groupe modèle présentait des taux d'URÉE et de CREA significativement élevés (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group had significantly reduced UREA (P<0.01); all Ech dose groups had significantly reduced UREA and CREA (P<0.05 or P<0.01); medium-/high-dose Ech groups had significantly reduced ALT (P<0.01); low-dose Ech group had significantly increased ALP (P<0.01).

1.2.6 Détermination du coefficient des organes rénaux chez le rat

Coefficient d'organe=masse d'organe (mg)/poids corporel (g). Par rapport au groupe normal, le groupe modèle présentait une diminution significative du poids corporel à jeun (P<0.01) and increased kidney and adrenal gland coefficients (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, all Ech dose groups had significantly increased body weight (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced kidney coefficients (P<0.01).

 

Tableau 1 Effets de Ech sur les niveaux d'URÉE, de CREA, d'ALT, d'AST et d'ALP chez les rats modèles d'hyperuricémie (x ± s, n =10)

 

Groupe	Dose / mg·kg⁻¹	URÉE / mmol·L⁻¹	CREA / μmol·L⁻¹	ALT / U·L⁻¹	AST / U·L⁻¹	ALP/UL⁻¹
Contrôle	–	8.00 ± 0.71	34.11 ± 3.33	51.22 ± 3.80	109.11 ± 11.62	206.00 ± 42.20
Modèle	–	23.20 ± 6.05**	100.10 ± 43.59*	62.00 ± 9.64	109.10 ± 7.92	173.10 ± 27.30
Allopurinol	30	10.70 ± 1.95##	55.20 ± 13.27	52.70 ± 12.79	117.50 ± 21.71	198.40 ± 52.66
Ech	50	11.20 ± 3.33##	44.80 ± 21.01#	55.70 ± 12.59	106.10 ± 13.80	242.11 ± 55.04##
	75	9.90 ± 1.45##	41.20 ± 4.54#	46.50 ± 5.72##	102.10 ± 16.11	183.70 ± 22.31
	100	8.90 ± 1.10##	35.20 ± 2.74#	46.50 ± 5.72##	106.00 ± 15.19	195.20 ± 33.96

Note:Par rapport au groupe témoin : *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

Tableau 2 Effets de Ech sur les coefficients d'organes chez les rats modèles d'hyperuricémie (x ± s, n =10)

 

Groupe	Dose / mg·kg⁻¹	Poids corporel à jeun / g	Coefficient du foie	Coefficient rénal	Coefficient de la glande surrénale	Coefficient de rate	Coefficient du thymus
Contrôle	–	403.6 ± 28.0	26.92 ± 3.15	6.57 ± 0.55	0.14 ± 0.04	1.88 ± 0.26	1.07 ± 0.15
Modèle	–	352.5 ± 38.5**	26.60 ± 1.78	11.52 ± 1.67**	0.18 ± 0.03*	2.12 ± 0.23	1.03 ± 0.17
Allopurinol	30	367.5 ± 26.3	25.76 ± 1.14	7.93 ± 0.51##	0.16 ± 0.03	1.93 ± 0.35	1.08 ± 0.27
Ech	50	392.3 ± 28.3#	27.04 ± 2.14	8.06 ± 0.54##	0.16 ± 0.04	2.09 ± 0.24	1.09 ± 0.19
	75	388.4 ± 34.8#	26.78 ± 2.37	7.80 ± 0.78##	0.16 ± 0.02	2.00 ± 0.20	0.99 ± 0.25
	100	386.3 ± 41.4#	25.91 ± 1.46	7.58 ± 0.33##	0.18 ± 0.03	2.09 ± 0.28	1.17 ± 0.31

Note:Par rapport au groupe témoin : *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

 

 

1.2.7 Observation histopathologique des reins de rat (coloration HE)

Les tissus rénaux ont été fixés, déshydratés, inclus, sectionnés (4 µm), colorés à l'HE et scellés. Le groupe modèle a montré une excrétion de cellules épithéliales des tubes rénaux, une infiltration de cellules nécrotiques et inflammatoires et une infiltration inflammatoire focale dans l'interstitium rénal. Le groupe allopurinol a présenté des lésions légères ; Chaque groupe de traitement a montré une perte de cellules épithéliales, une nécrose et une infiltration inflammatoire atténuées.

 

 

Figure 4. Image de coloration du tissu rénal de rat du groupe témoin (A), du groupe modèle (B), du groupe allopurinol (C, D), faible (E) et élevé
(F)groupes de doses d'Ech(×400)

 

1.2.8 Expression protéique de URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 dans le rein de rat

L'immunohistochimie a été réalisée pour détecter l'expression des protéines (densité optique intégrée, IOD). Par rapport au groupe normal, le groupe modèle présentait une régulation positive significative de URAT1 et GLUT9 (P<0.01) and downregulated OAT1 and OAT3 (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 and GLUT9 (P<0.05, P<0.01) and upregulated OAT1 (P<0.05, P<0.01); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly upregulated OAT3 (P<0.05, P<0.01).

 

Figure 5 Effets des valeurs EchonURAT1/IOD (A), GLUT9/IOD (B), OAT1/IOD (C) et OAT3/IOD (D) dans
tissu rénald'hyperuricémiemodèlerats

 

Figure 6 Effets de Ech sur l'expression rénale de URAT1 chez des rats modèles d'hyperuricémie

(Groupe témoin (A), groupe modèle (B), groupe allopurinol (C) et groupes Ech 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ (D – F) ; IHC × 400)

 

Figure 7 Effets de Ech sur l'expression rénale de GLUT9 chez des rats modèles d'hyperuricémie

(Groupe témoin (A), groupe modèle (B), groupe allopurinol (C) et groupes Ech 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ (D – F) ; IHC × 400)

Figure 8 Effets de Ech sur l'expression rénale de l'OAT3 chez des rats modèles d'hyperuricémie

(Groupe témoin (A), groupe modèle (B), groupe allopurinol (C) et groupes Ech 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ (D – F) ; IHC × 400)

Figure 9 Effets de Ech sur l'expression rénale de l'OAT1 chez des rats modèles d'hyperuricémie

(Groupe témoin (A), groupe modèle (B), groupe allopurinol (C) et groupes Ech 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ (D – F) ; IHC × 400)

 

 

1.2.9 Expression de l'ARNm de URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 dans le rein de rat

L'ARN total a été extrait et soumis à une transcription inverse ; La qPCR a été réalisée en utilisant la méthode 2⁻ΔΔCt. Par rapport au groupe normal, le groupe modèle présentait une régulation positive significative des ARNm URAT1 et GLUT9 (P<0.05) and downregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and low-/medium-dose Ech groups had significantly downregulated GLUT9 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly upregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05).

 

Tableau 3 Séquences d'amorces

 

Nom de l'amorce	Séquence (5′ à 3′)	Taille du produit
URAT1-	F : GTTCCCATGGCCTCCAGATTR : CATATGCATGCCACACAGCC	121 bp
GLUT9	F : TCTGCCTTGGCTGAGTATTGAR : ATGTGTCCCCCACATCATTGT	2147 bp
OAT1	F : TGTGAAGCCCTTCCGTTCTCR : TGTGAAGCCCCTTCCGTTCTC	218 bp
OAT3	F: TACCTGCATGTGACCTTGCTGR: GAGACACTTCTCAGGCTTCCC	171 bp
-Actine	F : CCCATCTATGAGGGTTACGCR : TTTAATGTCACGCACGATTTC	150 bp

 

1.2.10 Analyse statistique

Les données ont été analysées à l'aide de SPSS 20.0, exprimées en moyenne ± écart type (x̄±s). L'ANOVA unidirectionnelle a été utilisée pour les comparaisons de groupes, et le LSD ou le T2 de Tamhane pour les tests post-hoc. P.<0.05 was considered statistically significant.

Figure 5 Effets des valeurs EchonURAT1/IOD (A), GLUT9/IOD (B), OAT1/IOD (C) et OAT3/IOD (D) dans le tissu rénal de rats modèles hyperuricémiques

 

2 Discussion

L'hyperuricémie persistante provoque des lésions rénales induites par l'acide urique et altère les biomarqueurs de la fonction rénale. Cette étude a établi un modèle de rat HUA utilisant de l'adénine combinée à de l'oxonate de potassium, avec l'URÉE, le CREA et le SUA comme indicateurs clés. Les résultats ont montré que Ech deCistanche tubuleuseamélioration de la fonction rénale et réduction du SUA chez les rats modèles HUA, exerçant des effets thérapeutiques. L'hyperuricémie résulte d'une production excessive d'acide urique et d'une excrétion altérée. La XOD et l'ADA hépatiques sont des enzymes clés dans la synthèse de l'acide urique ; la surproduction est une cause majeure de HUA. Environ les deux tiers de l’acide urique quotidien sont excrétés par les reins, ce qui fait du dysfonctionnement de l’excrétion rénale le principal facteur. URAT1 et GLUT9 assurent la réabsorption de l'acide urique, tandis que OAT1 et OAT3 facilitent l'excrétion de l'acide urique. Tous sont des cibles clés pour le développement de médicaments réduisant l'acide urique. Ech a considérablement réduit l'ADA et le XOD hépatiques, l'URAT1/GLUT9 rénal régulé à la baisse (protéine et ARNm) et l'OAT1/OAT3 régulé positivement (protéine et ARNm), ce qui indique que son effet réduisant l'acide urique agit en réduisant la synthèse et en régulant les transporteurs. Lors des tests de toxicité aiguë, aucune mortalité ni toxicité aiguë évidente n’a été observée chez la souris. Cela a amélioré la fonction rénale et abaissé l'ALT hépatique chez les rats HUA sans affecter les coefficients d'AST ou d'organes, confirmant une sécurité favorable. En conclusion, Ech exerce des effets significatifs sur la réduction de l’acide urique chez les rats HUA induits par l’adénine – oxonate de potassium en supprimant la synthèse d’acide urique médiée par l’ADA/XOD, en protégeant la fonction rénale et en équilibrant l’expression du transporteur d’urate, avec une sécurité fiable pour une application clinique potentielle.

Références

Zhang MH, Du JW, Zhang T et al. Mécanisme de Bixie Fenqing Wan dans l'intervention de rats hyperuricémiques en régulant l'expression du transporteur d'urate [J]. Journal chinois des formules médicales traditionnelles expérimentales, 2023, 29(3) : 1–8.

Niu YF, Zhou YF, Lin H et al. Inhibition de la 3,5,2′,4′-tétrahydroxychalcone sur la production d'acide urique chez des souris hyperuricémiques induites par l'hypoxanthine [J]. Bulletin biologique et pharmaceutique, 2018, 41(1) : 99-105.

Frédéric L. Gout : une mise à jour[J]. Journal de chirurgie osseuse et articulaire, 2019, 86(1) : 103-115.

Takeo N, Kouhei O, Sho S et al. Coopération fonctionnelle de URAT1 (SLC22A12) et URATv1 (SLC2A9) dans la réabsorption rénale de l'urate[J]. Transplantation par dialyse en néphrologie, 2013, 28(3) : 603-611.

Lee SY, Cho SS, Han KM et al. Le ginseng rouge coréen améliore les niveaux d'acide urique sérique en régulant à la baisse URAT1 et en régulant à la hausse OAT1 et OAT3[J]. Bulletin biologique et pharmaceutique, 2024, 47(11) : 1876-1882.

Falah K, Zhang P, Nigam AK et al. Régulation in vivo de produits naturels à petites molécules, d'antioxydants et de nutriments par OAT1 et OAT3[J]. Nutriments, 2024, 16(14) : 2242.

 

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