1. Introduction

L’identification d’ingrédients alimentaires dotés de propriétés immunomodulatrices ainsi que de leurs cibles moléculaires respectives a suscité un intérêt croissant ces dernières années. En raison de leur grande diversité de ligands, la superfamille des canaux ioniques à potentiel de récepteur transitoire (canaux TRP) représente une classe très intéressante de structures cibles potentielles.

La superfamille des canaux TRP chez les mammifères comprend six familles de protéines apparentées, à savoir l'ankyrine (TRPA), la canonique (TRPC), la mélastatine (TRPM), la mucolipine (TRPML), la polycystine (TRPP) et la famille des vanilloïdes (TRPV), qui partagent toutes généralement six segments transmembranaires qui s'assemblent sous forme de tétramères pour former des pores perméables aux cations avec une sélectivité cationique variable.[1] Le canal TRPV1 est peut-être, de loin, le membre de la superfamille TRP le plus étudié. TRPV1 a été initialement identifié comme le récepteur de la capsaïcine, le composant piquant des piments.[2] Plus tard, il a été démontré que les ingrédients piquants du gingembre, les gingérols, activaient également TRPV1.[3]

Le rôle biologique de TRPV1 dans les types de cellules non neuronales fait encore l'objet de recherches approfondies, mais les résultats disponibles impliquent des fonctions bien au-delà de la perception sensorielle et thermique. Par exemple, une intervention de 12 semaines avec une dose quotidienne de 0,15 mg de nonivamide, un agoniste du TRPV1, un analogue structurel de la capsaïcine, a empêché un gain de masse grasse corporelle induit par l'alimentation et une augmentation des taux plasmatiques de sérotonine chez les sujets sains en surpoids.[4]

Dans les adipocytes 3T3-L1, l'activation de TRPV1 par le nonivamide a diminué l'accumulation de lipides pendant la différenciation et la maturation en supprimant l'expression de PPAR𝛾.[5] Dans les macrophages, la capsaïcine et le nonivamide ont atténué la libération de cytokines pro-inflammatoires induite par le LPS comme l'IL6, le CXCL8 et le TNF-alpha, de manière dépendante du TRPV1.[6] Pourtant, les fonctions particulières du TRPV1 dans les leucocytes du sang humain restent vagues. Dans les cellules NK humaines, 10 et 50 μM de capsaïcine ont induit une augmentation des concentrations intracellulaires de Ca2+, indiquant un canal TRPV1 fonctionnel.[7]

Cependant, les fonctions effectrices des cellules NK atténuées, telles que la dégranulation cytotoxique et la sécrétion de cytokines, induites par le prétraitement des cellules avec de la capsaïcine pendant 1 h dans une plage de concentrations de 10 à 100 μM, étaient largement indépendantes de TRPV1.[7] Dans les cellules T, il a été démontré que TRPV1 était impliqué dans les processus de signalisation des récepteurs des cellules T, de prolifération et de différenciation des cellules T, ainsi que dans la production de cytokines.[8] Des travaux antérieurs de notre groupe ont également démontré l'expression fonctionnelle de TRPV1 dans les cellules T primaires humaines.[9] De plus, des analyses dose-réponse à des concentrations allant de 0,03 à 300 μmol L−1 ont révélé que le [6]-gingérol inhibe la sécrétion de cytokines par les leucocytes humains primaires avec une valeur IC50 de 82,2 μmol L−1.

Cependant, la quantification du [6]-gingérol dans des échantillons de plasma de sujets sains a révélé une concentration plasmatique maximale moyenne de seulement 42,0 ± 16,3 nmol L−1 après la consommation de 1 L de thé au gingembre. Étant donné que ces concentrations de [6]-gingérol n'ont eu aucun impact significatif sur la sécrétion de cytokines dans des études antérieures, [9] il n'est pas clair si une concentration alimentaire pertinente de 50 nmol L−1, atteinte dans le plasma sanguin après la consommation de 1 L de thé au gingembre, est suffisante pour moduler les réponses immunitaires cellulaires dans d'autres leucocytes primaires humains.

Pour les neutrophiles humains, les connaissances sur le rôle fonctionnel de TRPV1 sont limitées. Alors que Köse et Nazıroglu˘ [10] ont montré que les flux de Ca2+- dans les neutrophiles en réponse à 10 μM de capsaïcine étaient diminués par la capsazépine, un antagoniste du TRPV1, d'autres résultats n'ont pas démontré que la capsaïcine induisait un influx de Ca2+ lorsqu'elle était testée dans une plage de concentrations de 1 à 100 μM, malgré une expression détectable de l'ARN de TRPV1.[11]

Les neutrophiles sont les leucocytes les plus abondants dans le sang humain, représentant 60 à 70 % de tous les globules blancs en circulation. Ce sont les premières cellules immunitaires recrutées sur les sites d’infection ; ils sont donc souvent considérés comme la première ligne de défense.[12] Le recrutement des neutrophiles est déclenché, entre autres, par le peptide bactérien ou dérivé des mitochondries N-Formylméthionine-leucyl-phénylalanine (fMLF) ou par des chimiokines telles que CXCL8 (IL-8).[13]

Les mécanismes de défense des neutrophiles comprennent la phagocytose,[14] la libération d'enzymes antimicrobiennes par dégranulation,[15] la génération d'espèces réactives de l'oxygène (ROS)[16] et la formation de pièges extracellulaires neutrophiles.[17] Outre ces mécanismes de défense directs, les neutrophiles contribuent également aux réponses immunitaires ultérieures via la libération de diverses cytokines et chimiokines.[18] En outre, les neutrophiles peuvent subir un processus d'amorçage qui leur permet de répondre plus fortement à une activation complète ultérieure.[16b]

Ces dernières années, il est de plus en plus évident que les ingrédients provenant de plantes alimentaires et/ou médicinales peuvent modifier une ou plusieurs des réponses de défense mentionnées des neutrophiles humains. Ces modifications incluent une activité phagocytotique accrue[19] et la génération de ROS[20], une chimiotaxie accrue vers le fMLF[21] et la formation de pièges extracellulaires à neutrophiles.[20] Cependant, le ou les composés actifs n’ont pas été identifiés. Les constituants de Ferula akitschkensis (𝛽-pinène, sabinène, 𝛾-terpinène, géranylacétone et isobornylacétate) ont désensibilisé les neutrophiles à l'afflux de Ca 2+ induit par le fMLF et le CXCL8 et ont inhibé la chimiotaxie induite par le fMLF, les effets induits par la géranylacétone étant médiés via TRPV1.

Sur la base des données disponibles, nous avons émis l'hypothèse que l'activation de TRPV1 induite par un ligand par le [6]-gingérol peut affecter les fonctions générales des neutrophiles, soit directement, soit en améliorant leurs réponses aux stimuli d'activation. Dans le cadre de cette hypothèse, nous avons particulièrement cherché à déterminer si une concentration nutritionnellement pertinente vérifiée est suffisante pour moduler les réponses immunitaires cellulaires chez les neutrophiles primaires humains faisant partie de la population leucocytaire. '

En outre, nous avons cherché à comparer les niveaux d'expression d'ARN de tous les membres de la superfamille TRP chez les mammifères dans cinq des types de cellules les plus importants du sang humain afin d'obtenir un aperçu qualitatif et quantitatif complet de l'expression des canaux TRP dans les leucocytes humains.

2. Résultats

2.1. Abondance et niveaux de transcription relatifs des canaux TRP dans les leucocytes humains

Afin d'évaluer l'expression de l'ARN des canaux TRP dans les leucocytes sanguins, cinq des types de cellules leucocytaires les plus importants ont été isolés du sang de donneurs sains et l'expression de l'ARN des canaux TRP a été analysée par RT-PCR quantitative (Figure 1).

Des transcriptions spécifiques du TRPV ainsi que de la famille TRPM ont été détectées avec des fréquences élevées de 75 à 100 % dans tous les types de cellules analysés. La fréquence globale moyenne, tous types cellulaires confondus, était de 96 % pour la famille TRPV et de 98 % pour la famille TRPM. Les transcrits spécifiques au TRPC étaient beaucoup moins abondants, allant de 0 % dans les monocytes, les cellules NK, les cellules T et les cellules B à 100 % dans les cellules NK et les cellules T avec une fréquence moyenne globale de seulement 53 % (Figure 1A). Le transcrit spécifique de TRPC5 n'a été détecté que dans les neutrophiles, avec une fréquence de 70 %.

En outre, la transcription spécifique de TRPA1 a généralement révélé une abondance plutôt faible dans les types de cellules analysés avec une fréquence de 100 % dans les neutrophiles, 25 % dans les monocytes, 80 % dans les cellules NK, 100 % dans les cellules T et 60 % dans les cellules B. De même, la transcription spécifique de TRPML3 a montré une faible fréquence dans les neutrophiles (50 %), les monocytes (25 %), les cellules NK (40 %) et les cellules B (20 %), mais une fréquence de 100 % dans les cellules T. Le transcrit spécifique de TRPV1 a été détecté dans tous les types de cellules, montrant une fréquence de 100 % dans les monocytes, les cellules NK et les cellules T, et une fréquence de 90 % dans les neutrophiles et de 80 % dans les cellules B.

En ce qui concerne l'expression relative de l'ARN, par rapport aux fréquences respectives, les canaux TRP ont révélé un modèle d'expression plus spécifique au type de cellule, comme en témoigne la comparaison des valeurs Δct respectives dans les différents types de cellules analysés (Figure 1B). Par exemple, TRPP3 a été détecté avec une fréquence de 100 % dans tous les types de cellules, mais a clairement révélé le niveau d'expression le plus élevé dans les monocytes.

En revanche, le canal TRPV2 a été détecté dans tous les types de cellules étudiés, avec un niveau d’expression d’ARN comparable ainsi qu’une fréquence élevée. De même, les niveaux de transcription de TRPV1 étaient similaires dans tous les types de cellules examinés (Figure 1B).

2.2. Expression de surface TRPV1 sur les neutrophiles

Les connaissances actuelles sur la fonction de TRPV1 dans les neutrophiles humains sont encore floues. Pour explorer plus en détail les rôles de TRPV1 dans les neutrophiles humains, nous avons ensuite étudié si le canal TRPV1 était exprimé à la surface des neutrophiles humains primaires à l'aide de la cytométrie en flux de cellules vivantes (Figure 2).

Les neutrophiles isolés ont été colorés pour CD15 en tant que marqueur de surface des neutrophiles (Figure 2A, B) et simultanément soit colorés avec un anticorps dirigé contre un épitope dans la première boucle extracellulaire de la protéine TRPV1 (Figure 2B), soit avec le contrôle isotype respectif, ce dernier servant de substitut pour mesurer la liaison non spécifique (Figure 2A). Au sein de la population CD15+, l'intensité de fluorescence du FITC a été analysée. La coloration des neutrophiles avec l'anticorps TRPV1 a conduit à un signal de fluorescence clairement distinctif par rapport au contrôle isotype, confirmant ainsi l'expression de surface de TRPV1 dans les neutrophiles humains primaires (Figure 2C). L'analyse des neutrophiles de quatre donneurs individuels a révélé une expression de surface comparable de TRPV1 (Figure 2D).

2.3. [6] - Augmentation induite par le gingérol du Ca intracellulaire 2+

Étant donné que l'activation de TRPV1 induite par le ligand entraînera un afflux de Ca2+, [23] les concentrations intracellulaires de Ca2+ de neutrophiles ont été déterminées via le colorant sensible au Ca2+- Fura-2. Sur la base de nos découvertes précédentes, [9] une concentration de 50 nM du ligand bien connu de TRPV1 [6]-gingérol et un temps d'incubation de 2 h ont été choisis. Les analyses ont montré que l'incubation de neutrophiles avec 50 nM de [6]-gingérol entraînait une augmentation des concentrations intracellulaires de Ca2+ qui étaient en moyenne de 18,4 % ± 1,0 % de la valeur maximale, déterminée en appliquant 1 μM d'ionomycine ionophore. L'augmentation induite par le DMSO était de 4,7 % ± 1,2 % (Figure 3).

2.4. Impact du [6]-gingérol sur l'expression de TRPV1

Ensuite, nous avons cherché à analyser l'impact de la stimulation de TRPV1 par le [6]-gingérol sur l'expression de TRPV1 au niveau de la transcription via q-RTPCR ainsi qu'au niveau des protéines de surface via la coloration de cellules vivantes. À cette fin, les neutrophiles humains ont été incubés avec 50 nM de [6]-gingérol pendant 2 h et les niveaux d'expression respectifs ont été quantifiés.

Cette incubation de 2 heures n'a eu d'impact ni sur le transcrit de TRPV1 ni sur les niveaux de protéines (Figure 4) et n'a pas non plus changé, à l'exception de IL6, IL17A, IL24, C5 et GDF5, l'expression de l'ARN des gènes communs de cytokines et de chimiokines étudiés (Figure S1, Tableau S2, Informations complémentaires).

2.5. Impact du [6]-gingérol sur l'expression des marqueurs de surface des neutrophiles

1. Introduction

L’identification d’ingrédients alimentaires dotés de propriétés immunomodulatrices ainsi que de leurs cibles moléculaires respectives a suscité un intérêt croissant ces dernières années. En raison de leur grande diversité de ligands, la superfamille des canaux ioniques à potentiel de récepteur transitoire (canaux TRP) représente une classe très intéressante de structures cibles potentielles.

La superfamille des canaux TRP chez les mammifères comprend six familles de protéines apparentées, à savoir l'ankyrine (TRPA), la canonique (TRPC), la mélastatine (TRPM), la mucolipine (TRPML), la polycystine (TRPP) et la famille des vanilloïdes (TRPV), qui partagent toutes généralement six segments transmembranaires qui s'assemblent sous forme de tétramères pour former des pores perméables aux cations avec une sélectivité cationique variable.[1] Le canal TRPV1 est peut-être, de loin, le membre de la superfamille TRP le plus étudié. TRPV1 a été initialement identifié comme le récepteur de la capsaïcine, le composant piquant des piments.[2] Plus tard, il a été démontré que les ingrédients piquants du gingembre, les gingérols, activaient également TRPV1.[3]

Le rôle biologique de TRPV1 dans les types de cellules non neuronales fait encore l'objet de recherches approfondies, mais les résultats disponibles impliquent des fonctions bien au-delà de la perception sensorielle et thermique. Par exemple, une intervention de 12 semaines avec une dose quotidienne de 0,15 mg de nonivamide, un agoniste du TRPV1, un analogue structurel de la capsaïcine, a empêché un gain de masse grasse corporelle induit par l'alimentation et une augmentation des taux plasmatiques de sérotonine chez les sujets sains en surpoids.[4]

Dans les adipocytes 3T3-L1, l'activation de TRPV1 par le nonivamide a diminué l'accumulation de lipides pendant la différenciation et la maturation en supprimant l'expression de PPAR𝛾.[5] Dans les macrophages, la capsaïcine et le nonivamide ont atténué la libération de cytokines pro-inflammatoires induite par le LPS comme l'IL6, le CXCL8 et le TNF-alpha, de manière dépendante du TRPV1.[6] Pourtant, les fonctions particulières du TRPV1 dans les leucocytes du sang humain restent vagues. Dans les cellules NK humaines, 10 et 50 μM de capsaïcine ont induit une augmentation des concentrations intracellulaires de Ca2+, indiquant un canal TRPV1 fonctionnel.[7]

Cependant, les fonctions effectrices des cellules NK atténuées, telles que la dégranulation cytotoxique et la sécrétion de cytokines, induites par le prétraitement des cellules avec de la capsaïcine pendant 1 h dans une plage de concentrations de 10 à 100 μM, étaient largement indépendantes de TRPV1.[7] Dans les cellules T, il a été démontré que TRPV1 était impliqué dans les processus de signalisation des récepteurs des cellules T, de prolifération et de différenciation des cellules T, ainsi que dans la production de cytokines.[8] Des travaux antérieurs de notre groupe ont également démontré l'expression fonctionnelle de TRPV1 dans les cellules T primaires humaines.[9] De plus, des analyses dose-réponse à des concentrations allant de 0,03 à 300 μmol L−1 ont révélé que le [6]-gingérol inhibe la sécrétion de cytokines par les leucocytes humains primaires avec une valeur IC50 de 82,2 μmol L−1.

Cependant, la quantification du [6]-gingérol dans des échantillons de plasma de sujets sains a révélé une concentration plasmatique maximale moyenne de seulement 42,0 ± 16,3 nmol L−1 après la consommation de 1 L de thé au gingembre. Étant donné que ces concentrations de [6]-gingérol n'ont eu aucun impact significatif sur la sécrétion de cytokines dans des études antérieures, [9] il n'est pas clair si une concentration alimentaire pertinente de 50 nmol L−1, atteinte dans le plasma sanguin après la consommation de 1 L de thé au gingembre, est suffisante pour moduler les réponses immunitaires cellulaires dans d'autres leucocytes primaires humains.

Pour les neutrophiles humains, les connaissances sur le rôle fonctionnel de TRPV1 sont limitées. Alors que Köse et Nazıroglu˘ [10] ont montré que les flux de Ca2+- dans les neutrophiles en réponse à 10 μM de capsaïcine étaient diminués par la capsazépine, un antagoniste du TRPV1, d'autres résultats n'ont pas démontré que la capsaïcine induisait un influx de Ca2+ lorsqu'elle était testée dans une plage de concentrations de 1 à 100 μM, malgré une expression détectable de l'ARN de TRPV1.[11]

Les neutrophiles sont les leucocytes les plus abondants dans le sang humain, représentant 60 à 70 % de tous les globules blancs en circulation. Ce sont les premières cellules immunitaires recrutées sur les sites d’infection ; ils sont donc souvent considérés comme la première ligne de défense.[12] Le recrutement des neutrophiles est déclenché, entre autres, par le peptide bactérien ou dérivé des mitochondries N-Formylméthionine-leucyl-phénylalanine (fMLF) ou par des chimiokines telles que CXCL8 (IL-8).[13]

Les mécanismes de défense des neutrophiles comprennent la phagocytose,[14] la libération d'enzymes antimicrobiennes par dégranulation,[15] la génération d'espèces réactives de l'oxygène (ROS)[16] et la formation de pièges extracellulaires neutrophiles.[17] Outre ces mécanismes de défense directs, les neutrophiles contribuent également aux réponses immunitaires ultérieures via la libération de diverses cytokines et chimiokines.[18] En outre, les neutrophiles peuvent subir un processus d'amorçage qui leur permet de répondre plus fortement à une activation complète ultérieure.[16b]

Ces dernières années, il est de plus en plus évident que les ingrédients provenant de plantes alimentaires et/ou médicinales peuvent modifier une ou plusieurs des réponses de défense mentionnées des neutrophiles humains. Ces modifications incluent une activité phagocytotique accrue[19] et la génération de ROS[20], une chimiotaxie accrue vers le fMLF[21] et la formation de pièges extracellulaires à neutrophiles.[20] Cependant, le ou les composés actifs n’ont pas été identifiés. Les constituants de Ferula akitschkensis (𝛽-pinène, sabinène, 𝛾-terpinène, géranylacétone et isobornylacétate) ont désensibilisé les neutrophiles à l'afflux de Ca 2+ induit par le fMLF et le CXCL8 et ont inhibé la chimiotaxie induite par le fMLF, les effets induits par la géranylacétone étant médiés via TRPV1.

Sur la base des données disponibles, nous avons émis l'hypothèse que l'activation de TRPV1 induite par un ligand par le [6]-gingérol peut affecter les fonctions générales des neutrophiles, soit directement, soit en améliorant leurs réponses aux stimuli d'activation. Dans le cadre de cette hypothèse, nous avons particulièrement cherché à déterminer si une concentration nutritionnellement pertinente vérifiée est suffisante pour moduler les réponses immunitaires cellulaires chez les neutrophiles primaires humains faisant partie de la population leucocytaire. '

En outre, nous avons cherché à comparer les niveaux d'expression d'ARN de tous les membres de la superfamille TRP chez les mammifères dans cinq des types de cellules les plus importants du sang humain afin d'obtenir un aperçu qualitatif et quantitatif complet de l'expression des canaux TRP dans les leucocytes humains.

2. Résultats

2.1. Abondance et niveaux de transcription relatifs des canaux TRP dans les leucocytes humains

Afin d'évaluer l'expression de l'ARN des canaux TRP dans les leucocytes sanguins, cinq des types de cellules leucocytaires les plus importants ont été isolés du sang de donneurs sains et l'expression de l'ARN des canaux TRP a été analysée par RT-PCR quantitative (Figure 1).

Des transcriptions spécifiques du TRPV ainsi que de la famille TRPM ont été détectées avec des fréquences élevées de 75 à 100 % dans tous les types de cellules analysés. La fréquence globale moyenne, tous types cellulaires confondus, était de 96 % pour la famille TRPV et de 98 % pour la famille TRPM. Les transcrits spécifiques au TRPC étaient beaucoup moins abondants, allant de 0 % dans les monocytes, les cellules NK, les cellules T et les cellules B à 100 % dans les cellules NK et les cellules T avec une fréquence moyenne globale de seulement 53 % (Figure 1A). Le transcrit spécifique de TRPC5 n'a été détecté que dans les neutrophiles, avec une fréquence de 70 %.

En outre, la transcription spécifique de TRPA1 a généralement révélé une abondance plutôt faible dans les types de cellules analysés avec une fréquence de 100 % dans les neutrophiles, 25 % dans les monocytes, 80 % dans les cellules NK, 100 % dans les cellules T et 60 % dans les cellules B. De même, la transcription spécifique de TRPML3 a montré une faible fréquence dans les neutrophiles (50 %), les monocytes (25 %), les cellules NK (40 %) et les cellules B (20 %), mais une fréquence de 100 % dans les cellules T. Le transcrit spécifique de TRPV1 a été détecté dans tous les types de cellules, montrant une fréquence de 100 % dans les monocytes, les cellules NK et les cellules T, et une fréquence de 90 % dans les neutrophiles et de 80 % dans les cellules B.

En ce qui concerne l'expression relative de l'ARN, par rapport aux fréquences respectives, les canaux TRP ont révélé un modèle d'expression plus spécifique au type de cellule, comme en témoigne la comparaison des valeurs Δct respectives dans les différents types de cellules analysés (Figure 1B). Par exemple, TRPP3 a été détecté avec une fréquence de 100 % dans tous les types de cellules, mais a clairement révélé le niveau d'expression le plus élevé dans les monocytes.

En revanche, le canal TRPV2 a été détecté dans tous les types de cellules étudiés, avec un niveau d’expression d’ARN comparable ainsi qu’une fréquence élevée. De même, les niveaux de transcription de TRPV1 étaient similaires dans tous les types de cellules examinés (Figure 1B).

2.2. Expression de surface TRPV1 sur les neutrophiles

Les connaissances actuelles sur la fonction de TRPV1 dans les neutrophiles humains sont encore floues. Pour explorer plus en détail les rôles de TRPV1 dans les neutrophiles humains, nous avons ensuite étudié si le canal TRPV1 était exprimé à la surface des neutrophiles humains primaires à l'aide de la cytométrie en flux de cellules vivantes (Figure 2).

Les neutrophiles isolés ont été colorés pour CD15 en tant que marqueur de surface des neutrophiles (Figure 2A, B) et simultanément soit colorés avec un anticorps dirigé contre un épitope dans la première boucle extracellulaire de la protéine TRPV1 (Figure 2B), soit avec le contrôle isotype respectif, ce dernier servant de substitut pour mesurer la liaison non spécifique (Figure 2A). Au sein de la population CD15+, l'intensité de fluorescence du FITC a été analysée. La coloration des neutrophiles avec l'anticorps TRPV1 a conduit à un signal de fluorescence clairement distinctif par rapport au contrôle isotype, confirmant ainsi l'expression de surface de TRPV1 dans les neutrophiles humains primaires (Figure 2C). L'analyse des neutrophiles de quatre donneurs individuels a révélé une expression de surface comparable de TRPV1 (Figure 2D).

2.3. [6] - Augmentation induite par le gingérol du Ca intracellulaire 2+

Étant donné que l'activation de TRPV1 induite par le ligand entraînera un afflux de Ca2+, [23] les concentrations intracellulaires de Ca2+ de neutrophiles ont été déterminées via le colorant sensible au Ca2+- Fura-2. Sur la base de nos découvertes précédentes, [9] une concentration de 50 nM du ligand bien connu de TRPV1 [6]-gingérol et un temps d'incubation de 2 h ont été choisis. Les analyses ont montré que l'incubation de neutrophiles avec 50 nM de [6]-gingérol entraînait une augmentation des concentrations intracellulaires de Ca2+ qui étaient en moyenne de 18,4 % ± 1,0 % de la valeur maximale, déterminée en appliquant 1 μM d'ionomycine ionophore. L'augmentation induite par le DMSO était de 4,7 % ± 1,2 % (Figure 3).

2.4. Impact du [6]-gingérol sur l'expression de TRPV1

Ensuite, nous avons cherché à analyser l'impact de la stimulation de TRPV1 par le [6]-gingérol sur l'expression de TRPV1 au niveau de la transcription via q-RTPCR ainsi qu'au niveau des protéines de surface via la coloration de cellules vivantes. À cette fin, les neutrophiles humains ont été incubés avec 50 nM de [6]-gingérol pendant 2 h et les niveaux d'expression respectifs ont été quantifiés.

Cette incubation de 2 heures n'a eu d'impact ni sur le transcrit de TRPV1 ni sur les niveaux de protéines (Figure 4) et n'a pas non plus changé, à l'exception de IL6, IL17A, IL24, C5 et GDF5, l'expression de l'ARN des gènes communs de cytokines et de chimiokines étudiés (Figure S1, Tableau S2, Informations complémentaires).

2.5. Impact du [6]-gingérol sur l'expression des marqueurs de surface des neutrophiles

Coupez les pilules Jinkui Shenqi en morceaux, pesez avec précision environ 2,0 g de l'échantillon et transférez-le dans une fiole conique bouchée. Ajouter 25 ml de méthanol à 70 %, peser la masse totale et effectuer une extraction par ultrasons (300 W, 40 kHz) pendant 35 minutes. Après refroidissement à température ambiante, reconstituer le poids perdu avec 70 % de méthanol et bien agiter. Filtrer la solution sur une membrane microporeuse de 0,45 μm pour obtenir la solution à tester.

 

Un balayage sur toute la longueur d'onde (190 à 400 nm) a été effectué pour sélectionner la longueur d'onde de détection. Bien que le morroniside et la loganine aient une absorption maximale entre 230 et 240 nm, cette longueur d'onde souffre d'un bruit de base élevé. La longueur d'onde de 254 nm garantit une réponse stable et de faibles interférences de fond. Le paéonol, l'acide cinnamique, l'acteoside et la 7-hydroxycoumarine produisent tous une absorption stable des ultraviolets à 254 nm. Par conséquent, 254 nm a été sélectionnée comme longueur d’onde de détection unifiée pour l’analyse synchrone multi-composants.

 

Parmi toutes les matières premières naturelles à base de plantes,Cistanche tubulosa (Cistanche vivant dans le désert)se distingue comme l'herbe avec leteneur en actéoside la plus élevéeà l'échelle mondiale. En tant que glycoside phényléthanoïde de base, l'actéoside est réputé pour ses propriétés anti-inflammatoires, antioxydantes, neuroprotectrices et de régulation immunitaire. Notre usine est spécialisée dans l'extrait de Cistanche tubulosa de haute pureté, qui contient des niveaux bien plus élevés d'acteoside et d'autres ingrédients actifs que les matières végétales courantes, ce qui en fait une matière première idéale pour le développement de compléments alimentaires, d'aliments fonctionnels, de boissons à base de plantes et de produits de soin de la peau de qualité supérieure pour les marchés européens et américains.

 

 

L'Acteoside, le composant signature de notre extrait de Cistanche tubulosa, offre de multiples avantages essentiels correspondant aux exigences de santé des consommateurs européens et américains : anti-inflammatoire, renforcement du système immunitaire, anti-hypoxie, élimination des radicaux libres, réparation de l'ADN et protection du foie. Combiné avec de l'échinacoside (antioxydant, neuroprotection, protection cardiovasculaire) et des polysaccharides (régulation immunitaire), notre extrait intègre toutes les efficacités traditionnelles des ingrédients végétaux de qualité supérieure mentionnés ci-dessus, notammentanti-inflammatoire, antibactérien, antioxydant, régulation immunitaire et protection cardiovasculaire.