Détermination de l’échinacoside à Cistanche par CLHP

Détermination PAR CLHP de l’échinacoside à Cistanche

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Mots-clés:cistanche,échinacoside

Objectif:

HpLC a déterminé la quantité deéchinacosidedansCistanchebroyé à l’état d’azote liquide ainsi qu’à l’air naturel séché, en le comparant à l’état sauvagecistancheet cultivé artificiellementCistanche.

Méthodes : le système HPLC lc-20a (Shimadzu, Japon) a été utilisé. La colonne était YMC inertielle ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5 μ m;YMC Co Ltd, Japon); Phase mobile: acétonitrile-méthanol-acide formique à 1% (10:15:75); Longueur d’onde de détection 334 nm; Débit 0,7 mg · Ml^-1. Température de la colonne 30 ° C.

Résultats : différentes conditions de traitement ont eu un effet très clair sur leéchinacoside, avec des niveaux généralement plus élevés deéchinacosidedansCistanchebroyés sous azote liquide que dans ceux broyés dans des conditions naturelles séchées à l’air; La teneur en ingrédients actifs de la nature sauvageCistancheétait beaucoup plus élevé que celui de la culture artificielle.

Cistancheest une espèce en voie de disparition, une plante parasite qui habite les racines de Clostridium, Salix rubrum. En Chine,Cistancheest principalement distribué en Mongolie intérieure, au Ningxia, au Gansu et au Xinjiang, avec une excellente réputation pour le " ginseng du désert « , qui est d’une grande valeur médicinale. Ses principaux ingrédients médicinaux sont les glycosides phényléthanoïdes, qui peuvent être divisés enéchinacoside, cohésif des feuilles,Cistanche, et d’autres en fonction de leurs substituants. Parmi eux,échinacosidea amélioré la fonction sexuelle, les effets antioxydants et de piégeage des radicaux libres, mais a également des effets anti-apoptotiques. Depuis les années 1980, la technologie HPLC, qui fournit une méthode simple et rapide pour la séparation des glycosides phényléthanoïdes, est largement utilisée dans la séparation des produits naturels. Une méthode HPLC a été choisie pour analyser le contenu deCistanche, le principal constituant actif de la nature sauvage et cultivé artificiellementCistanche, à différentes périodes de croissance, fournissant une base scientifique pour le développement rationnel et l’utilisation deCistancheet l’évaluation efficace de sa qualité.

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Instruments et réactifs

Shimadzu, Japon appareil HPLC lc-20a, pompe à double piston tandem lc-20at, four à colonne CTO-20a, détecteur à double longueur d’onde UV Vis soda-20a; Nettoyeur à ultrasons Kunshan kq-100; Acétonitrile (chromatographiquement pur, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Méthanol (chromatographiquement pur, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Acide formique (chromatographiquement pur, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); eau distillée

Contrôle:échinacoside, contenu ≥ 98,43 % (Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd.).

Cinq échantillons deCistanche: plantés artificiellement pendant un an avec les éléments suivants :Cistanche, planté artificiellement pourCistanche, séché artificiellementCistanchesauvageCistanche, et planté artificiellement pendant plus de trois ans avecCistanche.

méthodes et résultats

détermination des conditions chromatographiques

Pour séparer le pic de la mesureéchinacosidedans le chromatogramme LC d’autres substances, ainsi que pour contrôler la pression de la pompe et le calendrier pour être dans une plage appropriée, la modification expérimentale des conditions chromatographiques a été effectuée, et après des expériences d’optimisation avec la phase mobile, il a été conclu que plus la température est élevée, plus le temps de rétention est court et plus la concentration est faible, plus la pression de la pompe est courte et plus le temps de rétention est faible, mais la hauteur de crête est devenue plus basse, ce qui était défavorable pour la mesure. La phase mobile a finalement été déterminée comme étant l’acide formique acétonitrile-méthanol-1% (10:15:75), la longueur d’onde de détection 334 nm, le débit 0,7 mL / min et la température de la colonne 30 ° C, en fonction des conditions objectives de la température ambiante et de la pression maximale de la pompe, ce qui a donné des informations abondantes avec des formes de pic nettes et une bonne séparation des constituants.

détermination des colonnes

YMC-Inertsil ODS-SP(4,6 mm × 150 mm,5 μ m; YMC Co Ltd, Japon).

préparation de solution expérimentale

de solutions standard

Une quantité appropriée d’étalon d’echineoside a été pesée avec précision et enrichie en acide formique acétonitrile-méthanol-1% en phase mobile (10:15:75) pour obtenir 0,06 mg · ML - 1, 0,05 mg · ML - 1, 0,04 mg · ML - 1, 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1, et 0,005 mg · ML - 1 solutions deéchinacosidestandard.

préparation de la solution d’essai

Quantités appropriées de produits frais plantés artificiellementCistanche(moins d’un an), fraîchement artificielleCistancheet sauvage fraisCistancheont été broyés en poudre à l’aide d’un mortier sous azote liquide; En outre, une quantité appropriée des 3 Cistanche ci-dessus a été coupée en blocs, séchée à l’air naturellement dans la ventilation à l’ombre, et après séchage, elle a été pulvérisée et broyée en poudre. Sec artificielcistancheet sauvage sur trois ans secCistancheont été broyés directement dans la poudre. 0,5 g de poudre de Cistanche préparée ci-dessus a été prélevé et placé dans un tube de centrifugeuse, 25 ml de phase mobile ont été ajoutés, pesés et trempés pendant 30 min, soniqués pendant 40 min, refroidis, puis pesés à nouveau pour compenser le poids manquant avec la phase mobile, secoués et centrifugés, et le surnageant a été pris pour une filtration membranaire microporeuse de 0,45 μ M.

les diagrammes des courbes de régression pour l’échantillon standard deéchinacoside

Les échantillons standard préparés deéchinacosideont été injectés séparément dans l’appareil LC et la concentration du témoin (mg · L-1) a été utilisé comme abscisse, et les zones de pic correspondantes ont été coordonnées pour tracer la courbe standard, ce qui a donné l’équation de régression: y = 66 867 100x-46 360,83, R2 = 0,98637, qui a montré leéchinacosideà 0,1 ~ 1,2 μg dans une bonne relation linéaire.

Discussions

Echinacosideest l’un des principaux composants actifs deCistanche, qui peut bien représenter la base chimique de l’effet pharmacologique deCistanche, en faisant correspondre l’évaluation de la qualité du matériel médicinal et de son effet pharmacologique et en améliorant la pertinence de laCistancheévaluation de la qualité.

Les différentes conditions de traitement ont eu un effet clair sur leéchinacoside, avec des niveaux généralement plus élevés deéchinacosidedansCistanchebroyés sous azote liquide que dans ceux broyés dans des conditions naturelles séchées à l’air. Le séchage à l’air commun a diminué la quantité deéchinacoside, qui peuvent avoir été consommés pendant le séchage à l’air ou convertis. Pour prévenir la diminution de la teneur en ingrédients actifs et garantir l’efficacité deCistanche, un traitement approprié doit être choisi.

De manière constante, la plupart croyaient que l’environnement de culture artificielle deCistanche, ainsi que les habitudes de croissance, étaient indiscernables de la nature sans différence de qualité, avaient tendance à mettre l’accent uniquement sur le rendement et n’analysaient pas la qualité. La présente étude a montré que la quantité de culture artificielleCistancheéchinacosideétait inférieur à celui de wildCistancheéchinacoside. Le plus élevé était de 0,3360% de la nature sauvagecistancheet le plus bas était de 0,007 0 % desCistanche. Par conséquent, il doit encore être étudié dans la technologie de culture pour améliorer la teneur en ingrédients actifs.

La qualité deCistanchedépend de la quantité de son ingrédient actif,échinacoside, qui à son tour a une relation forte avec la saison, le moment et la méthode de récolte, de sorte que la récolte deCistanchedevrait tenir compte de l’état d’accumulation du principe actif et du stade de croissance et de développement. Tenez compte à la fois de la qualité et du rendement.

La méthode mentionnée dans cet article est simple, précise, reproductible et précise pour déterminer l’échinacoside. Utile pourCistanchedétermination.