Détermination de l'actéoside et de l'échinacoside de Cistanche Tubulosa

[Abstrait]Objectif : Construire la méthode de détermination (composant d'efficacité côté états et côté échinacée－) dans la Cistanche Tubulosa par chromatographie liquide à haute performance. Comparer la teneur en composants principaux dans deux habitats, quatre hôtes et quatre lots chez Cistanche tubulosa. Fournir des preuves scientifiques de l'utilisation des espèces de Cistanche tubulosa. Méthodes : Utilisation d'une colonne chromatographique Kromasil C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm) ; Phase mobile : méthanol, acétonitrile-1 pour cent d'acide acétique (14∶9∶77) ; Débit : 1,0 ml·min-1 ; Longueur d'onde de détection de 334 nm ; La température de la colonne était de 30 degrés. Résultats : deux composants présentaient une bonne plage linéaire de courbe standard dans le test (r=0.999,9). Le taux de récupération moyen est de 96,89 % et 100,7 % , et le pourcentage de RSD était de 0,91 % et 1,96 % . Les résultats de l'analyse ont montré qu'il y avait une différence significative entre le contenu du principal composant d'efficacité (aux États-Unis et échinacoside) dans différentes régions, lots et hôtes chez Cistanche tubulosa. Conclusion : La méthode est simple, précise et reproductible. Il fournit la base expérimentale de la valeur médicinale de Cistanche tubulosa.

[Mots clés] Cistanche tubulosa; Actéoside; échinacoside ; détermination du contenu

Expérience Cistanche deserticola

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Cistanche deserticola a été enregistrée pour la première fois dans le "Shennong Materia Medica Classic" et est l'un des médicaments les plus fréquemment utilisés dans les prescriptions de tonification des reins et de renforcement du yang. Ces dernières années, la fouille à grande échelle de Cistanche deserticola a entraîné une réduction rapide des ressources sauvages. En remplacement de Cistanche deserticola, la fleur tubulaire Cistanche deserticola produite au Xinjiang a représenté 60 % de l'approvisionnement du pays.

Poudre de cistanche

Les glycosides de phényléthanol tels que l'échinacoside et les glycosides d'ergostérol sont l'un des principaux composants pharmacologiques de Cistanche tubulosa. L'échinoside a des effets neuroprotecteurs [3], des effets ostéoprotecteurs [4] et des effets anti-âge [5]. L'ergostéroside a pour effet d'améliorer les troubles de la mémoire, de traiter la maladie d'Alzheimer et d'avoir des effets de type androgène. Tubular Cistanche : également connu sous le nom de Hongliu Dayun, hébergé par diverses plantes de Tamarix L. [8-9]. L'auteur a utilisé la méthode HPLC pour déterminer le contenu des deux composants ci-dessus dans Cistanche deserticola. La méthode de détermination et les résultats fournissent une base scientifique pour le contrôle de la qualité et la valeur médicinale de ce médicament.

Le glycoside de phényléthanol est le principal composant actif de Cistanche deserticola

1 Instrument et médicament d'essai

Réactif et drogue à tester : échinacétine (numéro de lot 111670-200401), ergostérol (numéro de lot 111530-200505), substance de référence fournie par l'Institut chinois pour le contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques. L'acétonitrile et le méthanol sont chromatographiquement purs, tandis que l'eau est de l'eau ultra pure ; Tous les autres réactifs sont analytiquement purs. Tous les matériaux médicinaux de Cistanche deserticola ont été collectés et identifiés par le professeur Ju Aihua de l'Université médicale de Mongolie intérieure. Instrument : Chromatographie liquide haute performance American Agilent 1100.

2 Méthodes et résultats

2.1 Conditions chromatographiques et test d'adaptabilité du système

Colonne chromatographique : colonne chromatographique Kromasil C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μ m) ; phase mobile : solution d'acide acétique à 1 % de méthanol acétonitrile (9:14:77 ); la longueur d'onde de détection est de 334 nm ; flux débit : 1,0 mL · min-1 ; Température de la colonne 30 degrés ; Volume d'injection 20 μ L. Le nombre théorique de plaques ne doit pas être inférieur à 5 000 sur la base du calcul des glycosides d'échinacée. Le degré de séparation des deux composants pharmacologiques est bon, avec un degré de séparation supérieur à 1,5 par rapport aux pics adjacents. (Voir Figure 1-3)

Figure 1 Chromatogramme de la substance de référence de l'échinacétine

Figure 2 Chromatogramme de la substance de référence ergostérol

Figure 3 Chromatogramme de Cistanche deserticola

2.2 Préparation de la solution d'échantillon

Pesez avec précision environ 0,5 g de poudre de Cistanche deserticola (tamis à travers un tamis de 60 mesh) et placez-la dans une fiole conique brune de 100 mL. Ajouter avec précision 50 ml de phase mobile, peser la masse, soniquer pendant 40 minutes et la placer à température ambiante ; Peser à nouveau la masse, utiliser la phase mobile pour compenser la perte de poids, bien agiter, filtrer, reprendre le filtrat et le mettre de côté.

2.3 Préparation de la solution de référence

Pesez avec précision une quantité appropriée de matériaux de référence d'échinacétine et d'ergostérol et ajoutez une phase mobile pour préparer une solution contenant environ {{0}}.14 mg d'échinacétine et 0,10 mg d'ergostérol pour 1 mL, respectivement.

2.4 Inspection des relations linéaires

Pesez précisément respectivement 6,4 mg de substance de référence d'échinacée et 3,0 mg de substance de référence d'ergostérol, placez-les dans une fiole jaugée de 10 mL, diluez-les avec la phase mobile et agitez-les uniformément ; Aspirez avec précision 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 et 3.0 mL respectivement dans une fiole jaugée de 5 ml, diluer à l'échelle avec la phase mobile et agiter ; Absorber respectivement 20 μ Injecter l'échantillon L et mesurer selon les conditions chromatographiques ci-dessus. L'axe Y représente la surface du pic et l'axe X représente le volume d'injection. Dessinez une courbe standard. Les données mesurées montrent que la quantité d'échinacétine est de 0,26 μ g-7.75 μ Il existe une bonne relation linéaire entre la surface du pic et le volume d'injection entre g, et l'équation de régression est Y=831.41X21. 88, R2=0.9999 ; La quantité de glycoside d'ergostérol est de 0,30 μ g-7.50 μ Il existe une bonne relation linéaire entre la surface du pic et le volume d'injection entre g, et l'équation de régression est Y=671.53X plus 158,71, R{ {39}}.9999.

L'échinoside, principal composant chimique de Cistanche deserticola

2.5 Essai de précision

Pesez précisément 0.5 g de la poudre médicinale ci-dessus, préparez la solution à tester selon la méthode décrite en "2.2", injectez 6 fois consécutives et notez les aires des pics des 2 composants. Le pourcentage RSD de la surface du pic de son échinacoside est de 1,46 % ; La teneur en glycoside d'ergostérol est de 1,62 %.

2.6 Essai de stabilité

Prélever {{0}}.5 g de poudre d'échantillon et préparer la solution d'essai selon la méthode décrite en "2.2". Injectez l'échantillon à 0, 1, 2, 4, 8 et 12 heures après la préparation. Les résultats ont montré que le pourcentage RSD de la surface du pic d'échinacétine était de 1,5 % ; La teneur en glycoside d'ergostérol est de 2,0 %.

2.7 Test de répétabilité

Pesez avec précision 6 échantillons de poudre du même lot produit à Minfeng, Hotan, Xinjiang, chacun pesant environ 0,5 g. Préparer et mesurer la surface du pic selon la méthode sous "2.2". Calculer le pourcentage RSD de la surface du pic d'échinacoside dans 6 échantillons à 1,85 % et l'ergostérol à 1,93 %.

2.8 Essai d'addition et de récupération d'échantillon

Pesez avec précision 6 échantillons de poudre médicinale du même lot produit à Minfeng, Hotan, Xinjiang, chaque échantillon pesant environ 0,1 g. Ajouter une certaine quantité d'échinacétine et d'ergostérol, et préparer la solution à tester selon la méthode décrite en "2.2". Les taux de récupération moyens étaient de 96,89 % et 100,7 %, respectivement, avec un pourcentage RSD de 0,91 % et 1,96 %, respectivement. (Voir les tableaux 1-2)

Tableau 1 Résultats du test de récupération des glucosides dans le jus d'ananas

Tableau 2 Résultats du test de récupération des glycosides d'ergostérol

2.9 Détermination de l'échantillon

Prélever la poudre médicinale de Cistanche deserticola de chaque tube et opérer selon la méthode en « 2.2 ». Les résultats mesurés sont présentés dans le tableau 3.

Tableau 3 Dosage de l'échinacétine et de l'ergostéroside dans Cistanche deserticola

3 Débat

3.1 Sélection de la phase mobile

Deux ensembles de phases mobiles ont été comparés : 1) solution d'acide acétique à 1 % de méthanol acétonitrile (14:9:77); (2) Méthanol : 1 % d'acide formique (21,5 : 78,5). Les résultats ont montré que l'élution avec la phase mobile (1) entraînait un temps de rétention relatif modéré, moins de pics d'impuretés et une bonne séparation des deux composants.

3.2 Sélection des conditions d'extraction

Les effets de différentes méthodes d'extraction (reflux chauffant, ultrasons) et durées d'extraction (40 min, 50 min) sur la teneur en principes actifs ont été comparés en utilisant la phase mobile comme solvant d'extraction. Enfin, il a été constaté que bien que la teneur la plus élevée ait été mesurée après chauffage et reflux pendant 50 minutes, il n'y avait pas de choix en raison de la mauvaise forme du pic. Le contenu mesuré par ultrasons pendant 40 minutes et par ultrasons pendant 50 minutes est similaire, donc des ultrasons pendant 40 minutes ont été sélectionnés comme condition d'extraction.

3.3 La recherche a montré

Cistanche aux herbes chinoises

Que différents hôtes et habitats présentent des différences significatives dans la teneur en échinacoside et en ergostérol chez Cistanche deserticola, ce qui indique que la qualité du matériel médicinal est significativement affectée par l'emplacement et l'hôte. Par conséquent, l'étude systématique de la corrélation entre l'origine, l'hôte et la qualité du matériel médicinal de Cistanche tubulosa est d'une grande importance pour sélectionner les plantes hôtes optimales et évaluer la qualité de Cistanche tubulosa.

référence

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[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Progrès de la recherche sur les composants chimiques de Cistanche tubulosa [J]. Médecine traditionnelle chinoise du Xinjiang, 2010, 28 (01) : 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Une exposition transitoire à l'échinacoside est suffisante pour activer la signalisation Trk et protéger les cellules neu－ronales de la roténone [J].J Neurochem,2013,124(4): 571-580. [4] LIF YANG X,YANG Y,etal.Activité antiostéoporotique de l'échinacoside chez les rats ovariectomisés [J].Phytomedicine, 2013,20(6):549-557.

[5] XIE H, ZHU H, CHENG C, et al. L'échinacoside retarde la sénescence cellulaire des cellules fibroblastiques humaines MRC-5[J]. Pharmazie,2009,64(11) :752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian, et al. L'amélioration du trouble d'acquisition de la mémoire induite par la scopolamine par coeliaoside [J]. Bulletin pharmacologique chinois, 2001, 17 (6) : 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui, et al. Les progrès de la recherche sur le traitement de l'ostéoporose avec Cistanche deserticola [J]. Journal de l'Université de médecine traditionnelle chinoise du Liaoning, 2016, 18 (3) : 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei, et al. Analyse RAPD du parasite Cistanche deserticola sur différentes espèces de Tamarix [J]. Journal chinois de médecine traditionnelle chinoise, 2009, 34 (3) : 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun, et al. État de la recherche et perspectives sur les caractéristiques de l'habitat, les mécanismes parasitaires et le transport des nutriments de Cistanche deserticola [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 37 (19): 2831-2835