Différence des glycosides de phényléthanol dans le tableau Cistanches Herba de 2 hôtes BaDifférence des glycosides de phényléthanol dans le tableau Cistanches Herba de 2 hôtes basée sur l'analyse UPLC-QQQ-MS et PLS-DA analysée sur l'analyse UPLC-QQQ-MS et PLS-DA
May 30, 2025
Cistanche désertiqueest une plante holoparasite vivace appartenant à la famille des Orobanchaceae. C'est la tige charnue séchée recouverte de feuilles écailleuses deCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Cette plante est principalement distribuée en Mongolie intérieure, au Xinjiang et au Gansu, où elle parasiteHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, une plante xérophyte du désert des Chenopodiaceae [3-4]. Les principaux composants actifs deCistanche désertiquecomprennent les glycosides phényléthanoïdes, les iridoïdes et les polysaccharides [5-7], qui présentent des propriétés telles que la protection de la fonction reproductive, l'antioxydation et la protection du foie [8-10]. Utilisé depuis plus de 2 000 ans en Chine, il occupe la première place dans les prescriptions de la médecine traditionnelle chinoise visant à renforcer la vitalité et la deuxième dans les formulations anti-âge [11]. Cependant, en raison de la surexploitation et de la destruction de l'environnement, les ressources sauvages deCistanche désertiquesont en voie d'extinction, ce qui a conduit à son classement comme plante protégée au niveau national (catégorie II) et à son inclusion dans laListe internationale de protection des plantes sauvages[12]. Pour remédier au déséquilibre offre-demande sur le marché médicinal, la culture artificielle est devenue essentielle au développement durable du secteur.Cistanche désertiqueindustrie.
Extrait de Cistanche deserticola à vendre
Des études récentes ont rapporté une inoculation réussie deCistanche désertiquesurAtriplex canescens[13], un arbuste à feuilles persistantes de la famille des Chénopodiacées. Communément appelé « dessalinisateur biologique »,Atriplex canescensest une espèce d’arbre de haute qualité pour l’amélioration des sols salins-alcalis [14]. CultiverCistanche désertiquesurAtriplex canescensoffre des avantages significatifs, tels qu’un rendement élevé et une qualité supérieure. En conséquence, évaluer la qualité deAtriplex canescens-Cistanche deserticolaest devenu un haut lieu de la recherche [15-16]. Les recherches antérieures se sont principalement concentrées sur les propriétés médicinales des plantes séchées.Cistanche désertique, alors que les études sur les composants actifs sous sa forme fraîche restent rares. En particulier, suite à l'inclusion deCistanche désertiqueen tant qu'aliment et substance médicinale dans le cadre du système de gestion des essais (Avis n° . 9 de la Commission nationale de la santé, 2023), son développement et son utilisation en tant qu'herbe médicinale à double usage ont attiré une attention considérable dans le domaine de la médecine traditionnelle chinoise [17]. FraisCistanche désertiqueest apprécié pour son excellent goût et sa commodité, ce qui le rend très prometteur pour le développement. Les matières médicinales fraîches font référence à des substances végétales, animales ou fongiques fraîches non transformées ayant des propriétés thérapeutiques ou bénéfiques pour la santé. Parmi les 2 000 herbes médicinales chinoises couramment utilisées, 486 sont des variétés fraîches [18].
La méthode de spectrométrie de masse en tandem par chromatographie liquide ultra-performante (UPLC-QQQ-MS) est très sensible, ce qui la rend adaptée à la détection de composants complexes et à faible concentration [19]. Pour résoudre le problème de la teneur élevée en eau dansCistanche désertique, où les glycosides phényléthanoïdes sont sujets à une hydrolyse enzymatique entraînant une teneur réduite, une méthode de séchage par inactivation enzymatique préserve efficacement la teneur en glycosides phényléthanoïdes [20]. Cette étude utilise UPLC-QQQ-MS pour évaluer 8 glycosides phényléthanoïdes, dont l'échinacoside et l'actéoside, en tant que composants actifs clés des produits frais.Cistanche désertiqueà partir de deux plantes hôtes [21-22]. L'étude examine les différences dans la teneur en composants du jus et des résidus de jus frais.Cistanche désertiquecultivé sur deux hôtes. De plus, le résidu a été soumis à un traitement d'inactivation enzymatique à 80 degrés pendant 5 minutes, suivi d'un séchage, pour comparer davantage la rétention des composants actifs dansCistanche désertique. Les résultats visent à fournir des preuves scientifiques et un soutien technique à la double valeur des produits frais.Cistanche désertiqueet l'optimisation de ses techniques de traitement.
1 Instruments et matériaux
1.1 Instruments
Spectromètre de masse tandem triple quadripôle pour chromatographie liquide ultra-performante 1290-6460 (Agilent Technologies, États-Unis).
Balance analytique électronique AL104 (Mettler-Toledo, Suisse).
Centrifugeuse H-2050R (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
Nettoyeur à ultrasons SB25-12DTD (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Matériaux
LeAtriplex canescens-Cistanche deserticolaetHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolades échantillons ont été collectés en mars, avril et mai 2024 auprès duCistanche désertiquebase de culture dans la ville de Xiquan, comté de Jingtai, province du Gansu. Les échantillons ont été identifiés par le professeur Sun Xuegang de l'Université agricole de Gansu comme étant des tiges charnues deCistanche deserticola YC Maavec des feuilles d'écailles.
Normes de référence:
Echinacoside (numéro de lot : 23031605 ; pureté : 99,74%).
Actéoside (numéro de lot : 21102103 ; pureté : 98,83%).
Cistanoside A (numéro de lot : 23041703 ; pureté : 98,30%).
Isoacteoside (numéro de lot : 23052508 ; pureté : 99,90%).
2'-Acétylactéoside (numéro de lot : 210053102 ; pureté : 97,12 %).
Salidroside (numéro de lot : 22051208 ; pureté : 98,43 %).
Cistanoside B (numéro de lot : 20120903 ; pureté : 98,57%).
Tubuloside A (numéro de lot : 21060302 ; pureté : 93,24 %).
Tous ont été achetés auprès de Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Réactifs:
Méthanol (numéro de lot : O1140576, chromatographiquement pur).
Acétonitrile (numéro de lot : S3641440, chromatographiquement pur). Les deux ont été achetés auprès de Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
L'acide formique (numéro de lot : 20230710, chromatographiquement pur) a été acheté auprès de Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Eau purifiée (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Méthodes et résultats
2.1 Méthodes
2.1.1 Préparation des échantillons
Trois lots deAtriplex canescens-Cistanche deserticola(numéros de lots : 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) et trois lots deHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(numéros de lots : 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), totalisant six lots, avec cinq plantes par lot, ont été collectés. Les plantes ont été lavées à l’eau.
Traitement:
Les échantillons ont été broyés et extraits du jus, ce qui a donné du jus et des résidus provenant des deux dérivés de l'hôte.Cistanche désertique.
Les résidus ont été séchés dans deux conditions :
Sans inactivation enzymatique.
Avec inactivation enzymatique (5 minutes à 80 degrés au four).
Les résidus séchés ont été stockés pour une analyse plus approfondie. Chaque lot de matériel médicinal a été divisé en quatre groupes, comme le montre le tableau 1.
Onglet. 1 Exemples d'informations de regroupement
| Groupe | Taper | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Résidu | C1 | S1 |
| ② | Jus | C2 | S2 |
| ③ | Résidu inactivé par l'enzyme (séchage 5 min, broyé) | C3 | S3 |
| ④ | Résidu non inactivé par une enzyme (séché et broyé) | C4 | S4 |
2.1.2 Conditions chromatographiques
Colonne: Colonne Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).
Débit: 0,3 ml/min.
Volume injecté: 1 μL.
Température de la colonne: 35 degrés.
Phase mobile: 0,1% d'acide formique dans l'eau (A) et l'acétonitrile (B).
Temps d'analyse: 12 minutes.
Gradient d'élution:
0 à 1,5 min : 10 % → 20 % B.
1,5 à 3 minutes : 20 % → 30 % B.
3 à 5 minutes : 30 % → 32 % B.
5 à 8 minutes : 32 % → 38 % B.
8 à 9,6 minutes : 38 % → 10 % B.
9,6 à 12 minutes : 10 % B.
Les chromatogrammes des étalons de référence mixtes et des échantillons de test sont présentés à la figure 1.(Veuillez confirmer si la phase mobile est constituée de 0,01 % d'acide formique dans l'eau (A) et d'acétonitrile (B).)
Fig. 1 Chromatogrammes des substances de référence (A) et de l'échantillon (B) 1−salidroside ; 2−échinacoside ; 3-cistanosideA ; 4-tubulosideA ; 5−actéoside ; 6−isoactéoside ; 7−2'-acétylactéoside ; 8-tubuloside B.
2.1.3 Conditions de spectrométrie de masse
Type de source d'ions: Ionisation par électrospray (ESI).
Mode: Surveillance de réactions multiples (MRM) en mode ions négatifs.
Température de la source d'ions: 350 degrés.
Pression du nébuliseur: 35 livres par pouce carré.
Gaz de collision: Azote, réglé sur niveau moyen.
Les paramètres de spectrométrie de masse pour les composants à analyser sont présentés dans le tableau 2.
2.1.4 Préparation de la solution étalon mixte
Peser avec précision les quantités appropriées d’étalons de référenceéchinacoside, acéoside, cistanoside A, isoactéoside, 2'-acétylactéoside, salidroside, cistanoside B, ettubuloside A, et placez-les dans des flacons de réactifs ambrés de 10 ml. Ajoutez 50 % de méthanol pour préparer une solution étalon mixte avec une concentration de 0,2 mg·mL⁻¹ et conservez-la pour une utilisation ultérieure.
2.1.5 Préparation des solutions de test
Pesez avec précision 0,2 g de fraisAtriplex canescens-Cistanche deserticolarésidu (C1), fraisHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolarésidu (S1), séchéAtriplex canescens-Cistanche deserticolarésidus (C3, C4), et séchésHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolarésidus (S3, S4). Placer les échantillons dans des fioles jaugées ambrées de 10 mL, ajouter 50 % de méthanol, porter au volume et enregistrer la masse. Faire tremper pendant 0,5 heure, passer aux ultrasons pendant 40 minutes (250 W, 35 kHz), laisser refroidir à température ambiante et enregistrer à nouveau la masse. Utilisez 50 % de méthanol pour compenser toute perte de poids, mélangez bien, centrifugez et laissez la solution se déposer. Filtrer le surnageant sur une membrane microporeuse de 0,22 µm pour obtenir le filtrat.
Pour le fraisAtriplex canescens-Cistanche deserticolajus (C2) et fraisHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajus (S2), prélever 10 ml de chacun, peser avec précision, bien mélanger, centrifuger et laisser décanter la solution. Filtrer le surnageant sur une membrane microporeuse de 0,22 µm pour obtenir le filtrat.
2.1.6 Étude de linéarité
Des quantités appropriées de la solution étalon mélangée préparée à la section 2.1.4 ont été diluées pour créer un gradient de concentration de51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4 000,0 et 20 000,0 ug·L⁻¹. Les échantillons ont été injectés séquentiellement de concentrations faibles à élevées selon les conditions décrites dans les sections 2.1.2 et 2.1.3. Une régression linéaire a été réalisée, en utilisant la concentration d'injection comme axe X et la surface du pic comme axe Y. Les relations linéaires des huit composants sont présentées dans le tableau 3.
Onglet. 3 Résultats de l'examen des relations linéaires de 8 composants dans le tableau Cistanches Herba
| Composant | Équation de régression | r | Plage linéaire (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Échinacoside | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Actéoside | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Isoactéoside | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-Acétylactéoside | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidroside | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubuloside A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubuloside B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Cistanoside A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Test de précision
La solution étalon mixte préparée dans les conditions de la section 2.1.4 a été diluée avec 50 % de méthanol et injectée six fois consécutives dans les conditions des sections 2.1.2 et 2.1.3. Les écarts types relatifs (RSD) des zones de pic pouréchinacoside, acéoside, isoactéoside, 2'-acétylactéoside, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, etcistanoside Aétaient respectivement de 0,95 %, 1,47 %, 0,56 %, 1,05 %, 0,93 %, 1,08 %, 1,19 % et 0,91 %, ce qui indique une bonne précision.
2.1.8 Test de stabilité
Un seul échantillon deCistanche désertique(S4) a été préparé dans les conditions décrites dans la section 2.1.5. La solution d'essai a été injectée et analysée à 0, 2, 4, 8, 12 et 24 heures dans les conditions décrites dans les sections 2.1.2 et 2.1.3. Les RSD des zones de pointe pouréchinacoside, acéoside, isoactéoside, 2'-acétylactéoside, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, etcistanoside Aétaient respectivement de 1,46 %, 0,79 %, 0,95 %, 1,29 %, 1,22 %, 0,56 %, 0,49 % et 1,18 %, ce qui indique que la solution échantillon était stable dans les 24 heures.
2.1.9 Test de répétabilité
Un seul lot deCistanche désertiqueL'échantillon (S4) (numéro de lot : 20240420-2) a été préparé dans six solutions de test parallèles dans les conditions décrites dans la section 2.1.5. Les échantillons ont été injectés et analysés dans les conditions décrites aux sections 2.1.2 et 2.1.3. Les RSD du contenu pouréchinacoside, acéoside, isoactéoside, 2'-acétylactéoside, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, etcistanoside Aétaient respectivement de 1,26 %, 0,98 %, 1,55 %, 1,06 %, 1,33 %, 0,99 %, 1,65 % et 0,95 %, démontrant une bonne répétabilité.
2.1.10 Test de récupération
Neuf échantillons du même lot deCistanche désertique(S4, numéro de lot : 20240420-2) ont été préparés, à raison de 0,1 g par échantillon. Les échantillons ont été divisés en trois groupes, avec trois répétitions par groupe. Chaque groupe a reçu 80 %, 100 % et 120 % du contenu standard de référence dans leCistanche désertiqueéchantillon. Les solutions d'essai ont été préparées selon la méthode décrite dans la section 2.1.5 et analysées dans les conditions des sections 2.1.2 et 2.1.3. Les récupérations des huit glycosides phényléthanoïdes ont été calculées et les résultats sont présentés dans le tableau 4.
Tab. 4 Taux de récupération de 8 composants testés dans Cistanches Herba
| Composant | Contenu de l'échantillon (mg) | enrichi (mg) | Mesuré (mg) | Récupération moyenne (%) | DSR (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Échinacoside | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Échinacoside | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Échinacoside | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Actéoside | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Actéoside | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Actéoside | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Isoactéoside | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Isoactéoside | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Isoactéoside | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-Acétylactéoside | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-Acétylactéoside | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-Acétylactéoside | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
