Effets de Cistanche Deserticola Deserticola et de Kaempferol sur le développement des cellules de la granulosa dans les follicules pré-agrégés de poulet

Abstrait:Pour explorer les effets de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur le développement folliculaire du poulet, l'expérience a analysé les effets de différentes concentrations de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur l'activité des cellules de granulosa pré-classées de poulet par la méthode MTT et a déterminé la concentration optimale. La PCR quantitative fluorescente en temps réel a été utilisée pour détecter les effets de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur l'antigène nucléaire des cellules de prolifération (PCNA), le récepteur de l'hormone folliculo-stimulante (FSHR) et le récepteur des œstrogènes des cellules de granulosa pré-graduées de poulet (ER ） Le impact de l'expression de l'ARNm; Les effets de Cistanche deserticola et de kaempferol sur le développement folliculaire ovarien ont été analysés par culture in vitro de tissu ovarien. Les résultats ont montré que Cistanche deserticola et Kaempferol à la concentration de 1 × At 10-4 mol/L , peut favoriser de manière significative la prolifération des cellules de la granulosa, tout en favorisant également PCNA, FSHR et ER dans l'expression de l'ARNm des cellules de la granulosa (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Mots-clés : Cistanche deserticola; Kaempférol; Poulet; Cellules granuleuses avant le grade ; Tissu ovarien

Cistanche aux herbes chinoises

Pour les élevages de poules pondeuses à grande échelle, le niveau de taux de production d'œufs affecte ses avantages économiques et le développement des follicules ovariens affecte directement les performances de production des poules pondeuses. Les follicules sont divisés en trois stades selon leur statut fonctionnel : follicules primaires, follicules secondaires et follicules matures [1]. Chaque jour, un follicule est sélectionné pour se développer jusqu'à maturité, et l'œuf est expulsé dans la trompe de Fallope, en passant par l'entonnoir, l'élargissement, l'isthme, l'utérus et le vagin, formant une structure semblable à un œuf [2-3]. L'initiation des follicules primitifs est liée au développement des cellules folliculaires de la granulosa. L'hormone folliculo-stimulante (FSH) se lie au récepteur de l'hormone folliculo-stimulante (FSHR) sur les cellules de la granulosa, induisant la formation du récepteur de l'hormone lutéinisante (LHR) et stimulant la synthèse des hormones stéroïdes [4-6]. La FSH et l'hormone lutéinisante (LH) agissent en synergie sur les cellules de la granulosa pour favoriser le développement et la maturation folliculaire, participant à la sélection des follicules dominants. La recherche a montré que bien que les follicules primordiaux dépourvus de cellules de la granulosa aient été activés, ils finissent tous par développer une atrésie [7]. Au cours du développement folliculaire, les œstrogènes peuvent favoriser la prolifération des cellules de la granulosa ovarienne, tout en coopérant avec la FSH et la LH pour favoriser la prolifération et la différenciation des cellules de la granulosa ovarienne. Lorsque la teneur en œstrogène dans le plasma augmente, il sera réinjecté négativement dans l'hypothalamus par le système de circulation périphérique, inhibant ainsi la sécrétion de l'hormone de libération des gonadotrophines (GnRH) par l'hypothalamus. La GnRH peut stimuler l'adénohypophyse pour synthétiser et sécréter la FSH et la LH afin de favoriser le développement du follicule ovarien. Lorsque la sécrétion de GnRH est faible, elle peut inhiber la sécrétion de FSH et de LH, conduisant finalement à l'inhibition du développement folliculaire [8-9].

Des études antérieures ont montré que Cistanche deserticola et Cuscuta chinensis avaient un bon effet de réparation sur les oviductes atrophiques et les oviductes endommagés après récupération, et pouvaient améliorer le taux de ponte des poules pondeuses basses [10]. Dans la production animale, l'application de flavonoïdes peut améliorer considérablement les performances de la production animale, améliorer la résistance aux maladies animales et améliorer la fonction immunitaire des animaux.

Médicaments chinois tels que le ginseng, Cistanche deserticola et l'astragale

Les flavonoïdes totaux de Cistanche deserticola peuvent favoriser de manière significative la prolifération des cellules de la granulosa folliculaire de poulet pré-grade et grade in vitro, le niveau de transcription de la protéine régulatrice rapide stéroïdogène (StAR), l'ARNm de l'enzyme de clivage de la chaîne latérale du cholestérol (CYP11A1) et la sécrétion de progestérone. Le composant représentatif des flavonoïdes totaux de Cistanche deserticola est Cistanche deserticola. Son poids moléculaire est faible et il a l'avantage de traverser la barrière hémato-encéphalique. En même temps, il a des effets anti-inflammatoires, anti-tumoraux et de type œstrogène [11]. Le principal composant chimique de Cuscuta chinensis est le total des flavonoïdes de Cuscuta chinensis. À l'heure actuelle, une variété de flavonoïdes ont été isolés de Cuscuta chinensis, principalement la quercétine et le kaempférol, qui ont une activité antioxydante élevée.

L'application d'extrait de flavonoïdes de graines de cuscute chez les rats femelles présente une activité œstrogénique, qui a un certain effet sur la promotion de l'amélioration de la fonction des récepteurs hCG/LH ovariens ; Il a un effet gonadotrophine sur les souris juvéniles et peut favoriser le développement de leur système reproducteur [12-14].

Dans cette expérience, nous avons sélectionné des cellules folliculaires de granulosa pré-grade de poulet et exploré l'effet promoteur de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur la prolifération des cellules folliculaires de granulosa folliculaire de poulet pré-grade et l'expression des récepteurs associés grâce à l'effet de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur le développement folliculaire du poulet, fournir une référence théorique pour la recherche et le développement d'additifs alimentaires sûrs, efficaces et sans résidus pour améliorer les performances de production des pondeuses.

Effets du rein Cistanche-Tonifiant

1 Matériel et Méthodes

1.1 Matériel d'essai

Cistanche deserticola (pureté supérieure ou égale à 98 %) a été acheté auprès de Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd ; Le kaempférol (pureté supérieure ou égale à 98 %) a été acheté auprès de Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

1.2 Principaux réactifs et instruments

Principaux réactifs : la collagénase de type II et le DMEM ont été achetés auprès de Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd ; Le DMSO a été acheté auprès de Beijing Solebao Technology Co., Ltd; Le kit M5 Super qPCR RT avec kit de transcription inverse pour supprimer l'ADNg a été acheté auprès de Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. Instrument principal : BCM-1300Un établi de purification acheté auprès de Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory ; La centrifugeuse de congélation à grande vitesse AXTGL20M a été achetée auprès de Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd ; L'incubateur à température constante Heracell 150i GP a été acheté auprès de Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd; LightCycle ® L'instrument de PCR quantitative de fluorescence de type 96 et l'instrument de marquage enzymatique de type DR-200BS ont tous deux été achetés auprès de Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd.

1.3 Isolement et extraction des cellules de la granulosa des follicules avant le classement du poulet

Trente 150-poules pondeuses brunes Hailan en bonne santé (fournies par Hebei Baoding Dingnong Company) ont été sélectionnées, tuées par saignée dans l'artère carotide, et leurs ovaires ont été prélevés de manière aseptique (les tests de recherche sur les animaux in vivo étaient conformes aux directives approuvées par le Comité d'éthique animale de l'Université agricole du Hebei). Les follicules pré-grade peuvent être divisés en petits follicules blancs (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Remarque : SWF représente de petits follicules blancs, LWF représente de grands follicules blancs, SYF représente de petits follicules jaunes, LYF représente de grands follicules jaunes et F1, F2, F3, F4 et F5 représentent cinq follicules matures.

Les follicules collectés ont été lavés trois fois avec de l'alcool à 75 % et finalement lavés une fois avec du PBS. L'aiguille stérile a été utilisée pour libérer le liquide vitellin dans le PBS contenant 3 % de pénicilline et de streptomycine, retirer la couche cellulaire membranaire et séparer la couche cellulaire granulaire. 15 ml de tube EP ont été prélevés pour ajouter la couche de cellules de la granulosa coupée des follicules et 4 ml de 0 0,1% de collagénase de type II ont été ajoutés. Il a été secoué dans un shaker à 37 degrés pendant 3 minutes. Une fois l'oscillation terminée, ajoutez une quantité égale de solution de culture contenant 0.5 % de FBS pour terminer la digestion. Filtrer avec un tamis de 200 mesh et un tamis de 400 mesh, respectivement. Centrifuger le filtrat à température ambiante à 1200 tr/min pendant 5 minutes et répéter la centrifugation deux fois. Jeter le surnageant, ajouter le milieu de culture, souffler et aspirer uniformément et diluer la suspension cellulaire à 5 × 106 pièces/mL, puis l'ajouter uniformément dans une boîte de Pétri d'un diamètre de 100 mm et la cultiver à 37 degrés et 5 % de CO2 .

1.4 Effets de Cistanche deserticola et Kaempferol sur l'activité des cellules de la granulosa

Les cellules granulaires ont été cultivées en routine dans un milieu DMEM contenant 10 % de sérum bovin fœtal. Les cellules en phase de croissance logarithmique ont été prélevées et digérées avec 2,5 g/L de trypsine. Les cellules ont été réparties uniformément dans des plaques à 96 puits. Chaque plaque a été divisée en 10 groupes avec 6 trous répétés dans chaque groupe. Ajouter 200 aux trous autour de la plaque de culture μ L PBS sert de pore hydratant. La concentration de Cistanche deserticola est fixée à 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/L. Définissez un groupe de contrôle vide. Après co-culture de cellules avec Cistanche deserticola pendant 24 heures, ajouter 10 pour cent à chaque puits μ 5 mg/mL MTT de L. Après une culture supplémentaire pendant 4 heures, ajouter 150 à chaque puits μ L DMSO et osciller pendant 3 minutes dans un shaker à température constante à 37 degrés. Mesurer l'absorbance à 450 nm. L'expérience a été répétée trois fois, et le processus de sélection de la dose sûre optimale de Kaempferol pour les cellules de la granulosa était le même que ci-dessus.

Cistanche vivant du désert-Rein tonifiant

1.5 Effets de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur l'antigène nucléaire des cellules proliférantes, le récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et le récepteur des œstrogènes dans les cellules de la granulosa

L'effet de l'expression de l'ARNm a été observé dans les cellules de la granulosa de la phase de croissance logarithmique, inoculées dans trois boîtes de culture avec une densité cellulaire de 5 × 106 pièces/mL. Les boîtes de Pétri ont été divisées en groupe de contrôle à blanc ; groupe Cistanche deserticola, c'est-à-dire après 24 heures de culture cellulaire, ajouter 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola ; Dans le groupe Kaempferol, ajouter 1 après 24h de culture cellulaire × 10-4 mol/L Kaempferol ; Groupe œstrogène, ajouter 5 après 24 heures de culture cellulaire × Traiter avec 10 à 8 mol/L d'œstrogène. Après 24 heures de culture, jeter tout le milieu de culture, rincer avec du PBS, ajouter 1 ml d'enzyme pancréatique pour la digestion et après quelques minutes, ajouter une quantité égale de milieu de culture pour terminer la digestion. Centrifuger la suspension cellulaire à 1000 tr/min pendant 5 minutes, jeter le surnageant et ajouter le réactif Trizol dans une glacière. Par la suite, du chloroforme a été ajouté et vigoureusement secoué, placé dans une glacière pendant environ 3 minutes et centrifugé à 4 degrés à 12 000 tr/min pendant 10 minutes. Transférer l'ARN dans un nouveau tube EP, ajouter un volume égal d'isopropanol, bien mélanger doucement et laisser reposer dans une glacière pendant 10 minutes. Après centrifugation à 4 degrés pendant 10 minutes à 12 000 tr/min, jeter le surnageant et laver le précipité avec 80 % d'éthanol. Centrifuger à 10 000 tr/min et 4 degrés pendant 5 minutes, jeter l'éthanol, sécher à l'air pendant 5-10 minutes et ajouter de l'eau DEPC pour souffler et aspirer pour dissoudre le précipité. Mesurer la concentration d'ARN à l'aide d'un spectrophotomètre UV.

Utilisez le kit M5 Super plus qPCR RT avec le kit de suppression d'ADNg pour la transcription inverse afin d'obtenir de l'ADNc. Détection de l'antigène nucléaire cellulaire proliférant, du récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et du récepteur des œstrogènes dans les cellules de la granulosa par le niveau de transcription relatif de l'ARNm par PCR quantitative fluorescente en temps réel. Les informations sur les amorces sont présentées dans le tableau 1, et les amorces ont été conçues et synthétisées par Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Groupe de référence interne - Actine, le niveau de transcription relatif de l'ARNm pour chaque gène est déterminé par 2- ΔΔ Calculé par Ct.

Tableau 1 Informations sur l'amorce

1.6 Culture in vitro et observation morphologique du tissu ovarien

Prenez le tissu ovarien de 30 40-poules pondeuses brunes Hailan âgées d'un jour et rincez-le trois fois avec de l'alcool à 75 %. Couper le tissu ovarien en petits morceaux de 1-2 mm3 dans une table ultra-propre, à raison de 500 μ L par puits ajoutés au milieu DMEM et ITS (10 μ G/mL insuline, 5 μ G/mL transferrine , et 30 nmol/L de sélénite de sodium). Après 72 heures de culture en incubateur, traiter selon la situation de regroupement. Le tissu ovarien a été divisé en un groupe témoin à blanc, un groupe Cistanche deserticola, un groupe Kaempferol et un groupe œstrogène. Après 72 heures de culture, le tissu ovarien a été fixé avec du formaldéhyde à 4 % et des coupes de tissu ont été préparées en routine pour observation au microscope optique.

1.7 Statistiques et analyse

Les données qPCR ont été analysées à l'aide du logiciel Biorad CFX Manager 2.0 et du logiciel Microsoft Excel, et le logiciel SPSS 21.0 a été utilisé pour l'ANOVA unidirectionnelle. La méthode de Duncan a été utilisée pour les comparaisons multiples. Les résultats sont représentés sous forme de "moyenne ± écart type" et tracés à l'aide du logiciel GraphPad Prism 5.0. P<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Résultats et analyse

2.1 Effets de Cistanche deserticola et Kaempferol sur la prolifération des cellules de la granulosa

On peut voir sur les figures 2 et 3 que Cistanche deserticola et Kaempferol peuvent favoriser la prolifération des cellules de la granulosa. À 1 × 10-4~1 × Dans un gradient de concentration de 10-10 mol/L, par rapport au groupe témoin blanc, la concentration est de 1 × 10-4 mol/L, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × À 10-7 mol/L, la différence était extrêmement significative (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Remarque : "* *" indique une différence significative par rapport au groupe témoin blanc (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

Fig. 2 Valeurs d'absorbance des cellules de la granulosa exposées à Cistanche deserticola à différentes concentrations pendant 24 heures

Fig. 3 Valeurs d'absorbance des cellules de la granulosa exposées au Kaempférol à différentes concentrations pendant 24 heures

2.2 Effets de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur l'antigène nucléaire des cellules proliférantes, le récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et le récepteur des œstrogènes des cellules prégranuleuses de poulet L'impact de l'ARNm sur les niveaux de transcription relatifs

On peut voir dans le tableau 2 que les groupes Cistanche deserticola et Kaempferol ont des effets sur l'antigène nucléaire des cellules proliférantes, le récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et le récepteur des œstrogènes des cellules de granulosa pré-graduées de poulet Le niveau transcriptionnel relatif de l'ARNm était significativement plus élevé que celui du blanc groupe témoin et groupe oestrogène (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Tableau 2 Effets de Cistanche deserticola et de Kaempferol sur l'antigène nucléaire des cellules proliférantes, le récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et le récepteur des œstrogènes des cellules prégranulosa de poulet L'impact de l'ARNm sur les niveaux de transcription relatifs

2.3 Observation histologique des ovaires

On peut voir sur la figure 4 que par rapport au groupe témoin, le nombre de follicules dans le tissu ovarien traité avec Cistanche deserticola et Kaempferol a augmenté de manière significative, et les cellules de la granulosa ont proliféré de la monocouche à la multicouche. Par rapport au groupe des œstrogènes, le groupe Cistanche deserticola et le groupe Kaempferol ont une capacité plus évidente à favoriser la maturation et le développement du tissu ovarien, et le groupe Cistanche deserticola et le groupe Kaempferol ont un effet plus évident que le groupe Kaempferol.

3 Débat

3.1 Effet de Cistanche deserticola et Kaempferol

L'ensemble du processus de développement folliculaire s'accompagne de la prolifération des cellules de la granulosa, qui sont d'une grande importance pour le développement folliculaire. Ils initient la croissance des follicules primitifs en construisant des microenvironnements moléculaires favorables. Au cours du développement folliculaire, l'apoptose des cellules de la granulosa joue un rôle important dans la régulation de la croissance folliculaire, la maturation des ovules et la sécrétion d'œstrogènes [15-16]. Cistanche deserticola, une plante médicinale chinoise, a un effet semblable à celui des hormones sexuelles, qui peut favoriser le développement des follicules animaux et la production de sperme, favoriser l'arrivée normale de l'œstrus, améliorer la fonction et l'activité ovarienne et améliorer la fonction de reproduction. Cuscuta chinensis, en tant que médicament traditionnel chinois tonifiant pour les reins, a des effets antioxydants, reproductifs et anti-âge en tant que composants efficaces des flavonoïdes. Des études ont montré qu'une certaine dose de flavonoïdes de Cuscuta chinensis a un effet prolifératif sur les cellules interstitielles testiculaires de souris [17-18]. Dans cette expérience, Cistanche deserticola et Kaempferol, en tant que composants principaux des médecines traditionnelles chinoises Cistanche deserticola et cuscute, ont été sélectionnés pour étudier leurs effets sur la capacité d'expression des cellules folliculaires de la granulosa de poulet et de leurs récepteurs associés, et du tissu ovarien, pour confirmer les effets. de Cistanche deserticola et Kaempferol sur le développement du système reproducteur des volailles.

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3.2 Antigène nucléaire des cellules proliférantes, récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et récepteur des œstrogènes Le rôle de

Le PCNA est un antigène nucléaire cellulaire proliférant, qui joue un rôle important dans l'initiation de la prolifération cellulaire et est un bon indicateur de la prolifération cellulaire. Par conséquent, l'augmentation de PCNA dans les résultats des tests a confirmé que Cistanche deserticola et Kaempferol favorisent la prolifération cellulaire lorsqu'ils agissent sur les cellules de la granulosa. La FSH est la principale hormone qui favorise le développement folliculaire [19], et le site d'expression du récepteur de l'hormone folliculo-stimulante (FSHR) est principalement concentré dans l'ovaire et les follicules. La principale façon dont la FSH participe aux activités de reproduction des poules est de réguler le développement des follicules. Lorsque la sécrétion de FSH augmente, elle peut favoriser l'augmentation de FSHR dans les cellules de la granulosa, et la combinaison des deux peut induire la synthèse de LHR en activant l'aromatase. La poule peut induire l'ovulation sous l'effet synergique de la FSH et de la LH [20-22]. Avant la sélection folliculaire, les cellules de la granulosa n'expriment que des niveaux basaux de FSHR, qui sont utilisés pour recevoir des signaux FSH et produire de faibles niveaux d'adénosine phosphate cyclique pour maintenir l'activité cellulaire. Lorsque l'expression de FSHR est significativement régulée à la hausse dans les cellules de la granulosa d'un follicule de pré-grade, cela suggère que le follicule sera sélectionné pour devenir un follicule de grade [23-24]. Dans cette étude, par rapport au groupe témoin, l'expression de l'ARNm FSHR dans les groupes Cistanche deserticola et Kaempferol a été significativement augmentée, indiquant que Cistanche deserticola et Kaempferol peuvent favoriser la transcription de l'ARNm FSHR, augmenter la sécrétion de FSH et favoriser la sélection. des follicules comme des follicules de grade. E2 est une sorte d'hormone stéroïde sécrétée par les cellules de la thèque. Sa fonction est de favoriser la maturité sexuelle des animaux femelles et de montrer la deuxième caractéristique sexuelle. Sous l'action de la FSH, l'aromatase produite par les cellules de la granulosa ovarienne convertit les androgènes en E2, qui est régulé par deux récepteurs aux œstrogènes (ER et ER ） Il a des effets sur divers organes des animaux femelles et joue un rôle important dans la reproduction animale, en particulier dans les conditions physiologiques. activités telles que le développement folliculaire Au cours de la croissance folliculaire, l'œstrogène est une molécule régulatrice intracellulaire clé qui accélère la prolifération des cellules de la granulosa et améliore les effets de la FSH et de la LH sur la prolifération et la différenciation des cellules ovariennes ER Le principal ajustement est la rétroaction négative, ER Le développement des follicules est régulé par les voies internes et externes de l'ovaire [26] ER Il est principalement exprimé dans les tissus et les organes tels que la glande mammaire, l'utérus et le vagin des animaux, tandis que ER Il est principalement exprimé dans les testicules , ovaires, prostate et hypothalamus [27].

Dans cette étude, ER Les niveaux d'expression de Cistanche deserticola et de Kaempferol étaient significativement régulés à la hausse dans les groupes Cistanche deserticola et Kaempferol, ce qui suggère que cistanche et kaempferol ont des effets positifs sur le développement, la maturation et l'ovulation des ovaires de poulet. Les résultats de cette étude ont révélé que ER a été mesuré Le niveau d'expression est relativement faible. Ceci est cohérent avec les résultats de recherche de Guo Miao [28] selon lesquels, dans le développement embryonnaire des poulets, les ovaires des poulets précoces ont des sites de liaison spécifiques pour ER. Dans les follicules blancs, les follicules jaunes et les cellules de la granulosa des poulets, ER L'expression est significativement plus élevée que ER . Les flavonoïdes de soja, en tant qu'œstrogènes à base de plantes, peuvent augmenter le taux de production d'œufs des poules pondeuses lorsqu'ils sont ajoutés à l'alimentation [29], indiquant une relation directe entre les niveaux d'hormones œstrogènes et le taux de production d'œufs.

Figure 4 Tissu ovarien après coloration HE (10 ×）

3.3 Effets de Cistanche deserticola et Kaempferol sur le tissu ovarien

Dans cette expérience, en co-cultivant Cistanche deserticola et Kaempferol avec du tissu ovarien respectivement, il a été constaté que le nombre de follicules dans le tissu ovarien affecté par Cistanche deserticola et Kaempferol augmentait de manière significative et que les cellules de la granulosa proliféraient de monocouche à multicouche. Cela prouve en outre que Cistanche deserticola et Kaempferol peuvent favoriser le développement ovarien d'un point de vue histologique. L'antigène cellulaire proliférant, le récepteur de l'hormone folliculo-stimulante et le récepteur des œstrogènes mesurés dans les résultats de cette expérience Les changements d'indicateurs ont confirmé que Cistanche deserticola et Kaempferol ont des effets de type œstrogène, ce qui fournit une base expérimentale pour explorer la cible des principaux composants de Cistanche deserticola et de cuscute.

4. Conclusion

Cette étude a confirmé que Cistanche deserticola et Kaempferol peuvent favoriser la prolifération des cellules de la granulosa prégradées de poulet et augmenter le PCNA, le FSHR et l'ER. Le niveau de transcription de l'ARNm peut favoriser de manière significative le développement des follicules.

Référence:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al Le rôle des cellules de la granulosa dans la formation des œufs [J] Poultry Science, 2021 (11) : 50-54

［2］ HUO SY, LI YR, GUO Y, et al. Amélioration des effets des flavonoïdes Epimedi⁃ um sur les caractéristiques reproductives sélectionnées chez les poules pondeuses après la mue forcée［J］. Sciences avicoles, 2020,99（5） : 2757-2765.

［3］ HUO SY, LI YR, ZHANG S, et al. Fonctions d'Epimedium sur l'oviducte régressé et les follicules des poules pondeuses mues de force ［J］. Journal de la recherche mondiale sur la volaille, 2020,10（2） :326- 335.

［4］ RAJU GR, CHAVAN R, DEENADAYAL M, et al. Synergie de l'hormone lutéinisante et de l'hormone folliculo-stimulante : un examen du rôle dans l'hyperstimulation ovarienne contrôlée［J］. Journal of hu⁃ man reproductive ences,2013,6（4） :227-234.

［5］ SCHMIDT D. Le facteur de transcription murin en hélice ailée Foxl2 est requis pour la différenciation des cellules de la granulosa et le maintien des ovaires［J］. Développement,2004,131（4） :933-942.

［6］ SULLIVAN MW,STEWART-AKERS A,KRASNOW JS,et al. Réponses ovariennes chez la femme à l'hormone recombinante de stimulation folliculaire et à l'hormone lutéinisante（LH） : un rôle pour la LH dans les dernières étapes de la maturation folliculaire［J］. Journal d'endocrinologie clinique et métabolisme, 1999,84（1） :228-232.

［7］ GUO Y, LI YR, ZHANG S, et al. L'effet des flavonoïdes totaux de l'épimédium sur le développement des cellules de la granulosa chez les poules pondeuses ［J］. Sciences avicoles, 2020,99（9） :4598-4606.

［8］ ZHANG WD, LI N, DU ZR, et al. Le récepteur IGF-1 est impliqué dans les effets régulateurs de l'icariine et de l'icaritine dans les astrocytes dans des conditions basales et après une provocation inflammatoire［J］. Journal européen de pharmacologie, 2021,906（5） :174269- 174278.

［9］ FRÉDÉRIQUE RZ, MIGUEL F, GE Y, et al. Architecture de régulation de la cellule gonadotrope L T2 sous-jacente à la réponse à l'hormone de libération des gonadotrophines［J］. Frontiers in endocrinol⁃ gy,2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong, et al L'effet de "Yimu Powder" sur la réparation des trompes de Fallope et les performances de ponte chez les poules pondeuses [J] Chinese Poultry, 2018, 40 (19): 4

［11］ WANG S, WANG Q, WANG H, et al. L'induction de la sénescence dépendante des ROS et des dommages à l'ADN par l'icaritine contribue à son activité antitumorale dans les cellules de carcinome hépatocellulaire［J］. Biologie pharmaceutique,2019,57（1） :424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al L'effet des flavonoïdes de Cuscuta chinensis sur la fonction endocrinienne ovarienne chez les rats stressés [J] Phytothérapie chinoise, 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia Progrès de la recherche sur les composants actifs et le mécanisme d'action de la graine de cuscute dans la régulation de la reproduction//Actes de la conférence académique sur la phytochimie pharmaceutique et le développement durable des ressources de la médecine traditionnelle chinoise (I), 2009 : 323-325

［14］ TAO CC, WU Y, GAO X, et al. Les effets antitumoraux de l'étain Icari⁃ contre le cancer du sein sont liés aux récepteurs des œstrogènes［J］. Médecine moléculaire actuelle,2020,21（1） :73-85.

［15］MONNIAUX,DANIELLE. Conduite de la folliculogenèse par le dialogue oo⁃ cyte-cellule somatique : leçons tirées des modèles génétiques［J］. La⁃ riogénologie, 2016,86（1） :41-53.

［16］TAKASHI SHIMIZU A,NAOMICHI KOSAKA A,CHIAKIMU⁃ RAYAMA A,et al. Expression des récepteurs de l'apéline et de l'APJ dans les cellules de la granulosa et de la thèque à différents stades du développement folliculaire dans l'ovaire bovin : implication de l'apoptose et de la régulation hormonale - sciencedirect［J］. Science de la reproduction animale, 2009,116（1-2） :28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al Effet œstrogénique des flavonoïdes totaux de Cistanche deserticola deserticola sur la promotion de la différenciation ostéogénique ［ J ］ Recherche et développement de produits naturels, 2020, 32 (3): 373-378

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al L'effet protecteur des flavonoïdes de Cuscuta chinensis sur le BPA induit une sécrétion anormale d'hormones mâles dans les cellules interstitielles testiculaires de souris [J] Progress in Animal Medicine 2019, 40 (5): { {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al Danzhou Chicken FSH Study on Single-nucleotide polymorphism of gene ［ J ］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2018, 10 (19): 19-22

［20］ ZHANG M,SHI H,SEGALOFF DL,et al. Expression et localisation du récepteur de l'hormone lutéinisante dans l'appareil reproducteur de la souris femelle［J］. Biologie de la reproduction,2001,64（1） : 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- Progrès de la recherche et perspectives des membres de la famille régulant le développement folliculaire chez la volaille ［ J ］ Chinese Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Progrès de la recherche sur l'hormone folliculo-stimulante [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Localisation immunohistochimique de FSHR et LHR dans les ovaires de Laiwu Black Goat ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

［24］ TISCHKAU SA,HOWELL RE,HICKOK JR,et al. Le pic d'hormone lu⁃ teinizing régule l'expression du gène de l'horloge circadienne dans l'ovaire de poulet［J］. Chronobiologie internationale, 2011,28（1） :10-20.

［25］Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong, et al Progress in oestrogen function research [J] Reproduction and Contraception, 2019, 39 (4): 334-340

［26］ Liu Lingbin Effet de la lumière de rayonnement monochromatique sur le récepteur des œstrogènes (ER , ER ）, L'effet de l'expression du récepteur de la progestérone (PR-A, PR-B) dans le tissu ovarien Ya'an: Université agricole du Sichuan, 2013

［27］ COUSE JF,LINDZEY J,GRANDIEN K,et al.Distribution tissulaire et analyse quantitative du récepteur d'oestrogène-alpha (ERal⁃ pha) et du récepteur d'oestrogène-bêta (ERbeta) acide ribonucléique⁃ messager chez le type sauvage et souris ERalpha-knockout［J］. En⁃ docrinologie,1997,138（11） :4613-4621.

［28］Guo Miao ER dans le tissu ovarien des poules pondeuses Régulation apparente des changements dynamiques et dépistage du gène régulateur Tai'an : Université agricole du Shandong, 2017. [ Zhao Biqian Progrès de la recherche sur l'application de la daidzéine dans la production de poules pondeuses [J ] Flux Guangdong, 2017, 26 (8) : 31-33