Effets de l'extrait de Cistanche Deserticola sur la réponse érectile du pénis chez les rats castrés

Résumé:Cistanche désertique(CD) est considéré depuis des millénaires comme un tonique de la fonction reproductrice. Les effets de l'extrait de CD surpénis érectileréponse ont été étudiées dans la présente étude. Après la chirurgie de castration, les rats ont été traités par voie intragastrique avec de l'extrait de CD ({{0}}.45, 0,90 et 1,8 g/kg) par jour pendant quatre semaines.Pénis érectilela réponse a été mesurée et les hormones sériques ont été dosées à la fin de l'expérience. Il a été évalué que lelatence érectileest devenu plus long et ledurée érectilesignificativement plus courte chez les rats castrés par rapport aux témoins opérés de manière fictive. Cependant, l'extrait de CD a raccourci lelatence érectileet prolongé la durée de l'érection pour minimiser les effets négatifs de la castration. À la dose de 0.9 g/kg, l'extrait de CD a régulé l'approche de la concentration sérique de l'hormone lutéinisante à un niveau normal chez les rats castrés. Ces découvertes ont indiqué que la CD facilitait la réponse érectile du pénis et modulait dans une certaine mesure le taux d'hormones sériques.

Mots clés:Cistanche désertique; réponse érectile; castration; hormone

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INTRODUCTION

CistancheHoffmg. Et Link, un des genres de la famille des Orobanchaceae, est principalement distribué dans les zones arides et désertiques de l'hémisphère nord, comme la Mongolie intérieure,Xinjiang, Régions autonomes de Ningxia de Chine, Iran, Inde, Mongolie, etc. Les espèces de Cistanche appartiennent aux herbes parasites vivaces, qui s'attachent généralement aux racines des plantes fixatrices de sable comme Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatum et Tamarix, etc. (Jiang et Tu 2009). Herba Cistanche, la tige de l'espèce Cistanche, a été considérée comme un tonique supérieur et a mérité l'honneur de "Ginseng des déserts". Parmi les espèces de Cistanche, Cistanche deserticola YC MA a été indiquée comme le principal matériau source de Cistanche (Stefanova et al.2011). Cependant, en raison de la surexploitation de ces dernières années, les ressources naturelles de C. deserticola (CD) sauvage sont déficientes, ce qui a été collecté comme l'une des plantes de classe II nécessitant une protection en Chine, ainsi d'autres espèces de ce genre, telles que C. salsa et C. sinensis, sont également utilisés comme substituts dans certaines régions. Depuis le premier enregistrement dans le Chinese Material Medica de ShenNong (un ancien recueil pharmacologique), le CD a été pensé pour tonifier le rein et revigorer le "Yang" dans la pratique clinique selon la théorie de la médecine traditionnelle chinoise, qui est censée être efficace pour la reproduction, le développement et la fonction de fertilité. Pendant ce temps, le CD a également été bouilli avec du mouton, de la pomme de terre ou du riz pour produire un aliment tonique pour traiter les déficiences induites par le surmenage pendant des centaines d'années, ce qui suggère qu'il est sûr de le prendre par voie orale (Xiong et al.2013). Cependant, ces utilisations anecdotiques existent principalement dans les incunables chinois, avec des informations scientifiques limitées discutées en termes de concepts pharmacologiques modernes. ). En réponse aux agents chimiques modernes et sophistiqués, il y a eu un regain d'intérêt pour la recherche de médicaments efficaces et sûrs à partir de plantes pour le traitement de la dysfonction érectile (Adimoelja 2000). Une étude précédente (Liuet al. 2009) a indiqué que la CD électuaire accélérait l'érection du pénis chez les rats normaux, cependant, il n'y avait aucune donnée impliquée dans l'effet de la CD sur la dysfonction érectile. Chez l'animal, la castration chirurgicale avec orchidectomie bilatérale a été considérée comme la norme de castration. pour enquêter sur la dysfonction érectile (Tombal 2005). Par conséquent, la présente étude a été entreprise pour évaluer les effets potentiels de la CD contre la DE en étudiant la latence et la durée de l'érection chez des rats castrés.

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 pour cent) ont été achetés auprès des National Institutes for Food and Drug Control (Pékin, Chine). Le méthanol de qualité HPLC a été acheté chez Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). L'eau purifiée a été produite à l'aide d'un système MilliporeMilli-Q Integral 3 et d'un système Q-POD Milli-Q (Bedford, MA, États-Unis). Les tiges de C. deserticola ont été achetées à Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (GuangDong, Chine) et broyées en poudre fine avec un pulvérisateur passé à travers un tamis de 60 mesh. L'analyse HPLC et la préparation du matériel végétal Les teneurs en échinacoside et en actéoside de la poudre de CD ont été déterminées selon notre méthode précédente (Zhao et al.2011). Ensuite, chaque 100 g de poudre séchée a été bouillie dans 1,5 L d'eau pendant 1,5 h. En refroidissant à température ambiante, la liqueur mélangée a été centrifugée à 2 000 tr/min pendant 10 minutes (Eppendorf 5810R, Allemagne) et le précipité a été réextrait deux fois dans les mêmes conditions. Les surnageants combinés ont été concentrés par un évaporateur rotatif sous vide (Heidolph laborota 4001-efficace, Allemagne) à 60 degrés, puis lyophilisés et ont donné environ 42 % de poudre d'extrait séché. Lors de la réalisation de l'expérience animale ultérieure, l'extrait séché a été dissous dans de l'eau purifiée à température ambiante.

Animaux d'expérimentation

Des rats Sprague-Dawley mâles adultes (200-220 g) ont été obtenus auprès de Medicine Experimental Animal

Centre de la province du Guangdong (Guangzhou, République populaire de Chine), maintenu dans des locaux à température contrôlée avec des cycles lumière/obscurité de 12- heures à température ambiante (22-24 degré) et une humidité constante (40-70 %) en SPF (spécifique laboratoire exempt d'agents pathogènes et nourris à volonté. Les procédures expérimentales étaient conformes au National Institutes of Health Guide for Care and Use of LaboratoryAnimals.Procédure expérimentale

Une semaine avant l'administration, cinquante rats SD mâles ont été anesthésiés avec du pentobarbital sodique par voie intrapéritonéale (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) et répartis au hasard dans cinq groupes : à l'exception des rats du groupe opéré de manière fictive (Sham), les autres ont été castrés bilatéralement par voie scrotale (Anderes 2003, Schlatt et al. 2002). Pendant ce temps, les groupes traités par CD ont reçu par voie intragastrique 0,45 g/kg (faible dose d'extrait de CD, LCD plus Cas), 0,9 g/kg (dose médiane d'extrait de CD, MCD plus Cas) et 1,8 g/kg (dose élevée de CD extrait, HCD plus Cas) CD extrait, respectivement, tandis que les groupes simulés et castrés ont été administrés avec la quantité d'eau correspondante uniquement. La mesure du poids corporel a été prise au début de la procédure, puis chaque semaine. Tous les rats ont subi une laparotomie immédiatement après leur mort pour le prélèvement et la pesée postérieure des organes suivants : glandes préputiales, vésicule séminale, glande prostatique et muscle releveur de l'anus.

Mesure de la réponse érectile du pénis

La fonction érectile des rats de chaque groupe a été évaluée en suivant les méthodes précédentes (Ji et al. 2009, Luo et al.2006). En bref, une électrode bipolaire en acier inoxydable (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China) a été soigneusement positionnée sur le pénis jusqu'à ce qu'elle soit érigée avec l'impulsion de la stimulation électrique (5 V) 0,2 s. Le temps écoulé entre la stimulation et l'érection a été enregistré en tant que latence érectile du pénis. Lorsque la réponse érectile du pénis a été observée, l'électrode pouvait être retirée du pénis et la durée pendant laquelle le pénis maintenait l'érection a été enregistrée en tant que durée érectile.

Prise de sang et analyse des hormones sériques

Des rats ont été anesthésiés avec du pentobarbital sodique par voie intrapéritonéale (40 mg/kg) (Jung et al. 1999).

Des échantillons de sang ont été prélevés et coagulés à 4 degrés pendant 4 h, à partir desquels le sérum a été recueilli par centrifugation à 4000 t/min pendant 5 min à 4 degrés (Eppendorf 5810 R, Allemagne) et immédiatement stocké à -20 degrés de congélateur jusqu'à analyse plus approfondie. Les niveaux totaux de LH et de FSH ont été mesurés à l'aide de kits commerciaux de dosage radioimmunologique (RIA) (Beijing NorthInstitute of Biological Technology, Pékin, Chine) en se référant aux instructions du fabricant (Matsumoto et al. 1986). Sur la base de la technique immunitaire radioactive compétitive, la LH (ou FSH) marquée à l'I125- a été utilisée dans le test. Brièvement, 100 µl d'agent LH (ou FSH) marqué à l'I125- ont été ajoutés à un échantillon de sérum de 100 µl et incubés avec 100 µl d'anticorps de lapin purifié à 4 degrés (ou 37 degrés) pendant une nuit. Ensuite, un agent de séparation immunitaire anti-lapin d'âne a été ajouté au complexe antigène-anticorps et centrifugé (3500 tr/min, 15 min) pour séparer la 125I-LH (ou FSH) libre et liée à l'anticorps. Ensuite, la radioactivité du précipité a été mesurée au compteur de dosage radio-immunitaire (DMF-96, Zhongcheng electrical technology development Co., Ltd., Hefei, Chine). Les limites de sensibilité des dosages LH et FSH étaient toutes deux de 1,0 mUI/ml.

ANALYSES STATISTIQUES

L'analyse des données a été effectuée à l'aide du logiciel SPSS version 16.0.

Les valeurs ont été exprimées en moyenne ± écart-type (SD). Les données paramétriques ont été analysées à l'aide d'analyses de variance unidirectionnelle (ANOVA) suivies de tests LSD post hoc. Les données non paramétriques ont été analysées par le test de Kruskal-Wallis. Les différences étaient considérées comme statistiquement significatives si la probabilité d'écart était inférieure à 0.05.

RÉSULTATS

Détermination quantitative de la teneur en échinacoside et en acétonide de la poudre de CD

Le contenu de l'échinacoside et de l'acétonide dans la poudre de CD était de 1,27±0.01 % et 0.52±0,003 %, ce qui était conforme aux exigences de la pharmacopée chinoise. Le chromatogramme HPLC de la poudre de CD a été illustré à la fig. 1.

(4.6mm×250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, USA);phase mobile : 0.5 pour cent (V/V) solution aqueuse d'acide acétique(A) et méthanol ( B) gradient (0min, A : B=25 : 75 ; 10-30 min, A : B=40 : 60 ; 30 min, A : B=0 : 100) ; débit : 1 ml/min ; longueur d'onde de détection : 330 nm ; température : 30.

Fig. 2 : Latence et durée de l'érection du pénis chez les rats castrés. Les données sont exprimées sous forme de moyenne ± SD (n=10). ##p<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Fig. 3 : Effets de l'extrait de CD sur les concentrations sériques de LH chez des rats castrés. Les données sont exprimées sous forme de moyenne ± SD (n=10). #p<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

De plus, les poids relatifs moyens des glandes préputiales, de la prostate et des vésicules séminales et des rats incastrés du muscle releveur de l'anus étaient significativement plus faibles (p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Taux d'hormones sériques

Analysée par dosage RIA, la concentration sérique moyenne de LH chez les rats castrés était de 2,50±0,34 mUI/ml, ce qui montre une augmentation par rapport au contrôle opéré de manière fictive (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

DISCUSSION

Nos résultats ont démontré que la castration prolongeait significativement la latence érectile du pénis et raccourcissait la durée érectile, avec une remarquable atrophie des organes accessoires. Cependant, l'extrait de CD a facilité la réponse érectile du pénis et modulé le taux sérique de LH dans une certaine mesure chez les rats castrés. L'érection spontanée est principalement stimulée et maintenue par les androgènes via des mécanismes cellulaires, moléculaires et physiologiques, impliquant la relaxation du muscle lisse caverneux (Traish et al. 2007, Talha et al.2007). Des niveaux insuffisants de testostérone entraînent une diminution de sa relaxation (McClure 1988), ce qui entraîne par conséquent l'impuissance chez l'homme (Bivalacqua et al. 2000).

Spécialement chez les rats, il est maintenu par une large gamme de concentrations systémiques de testostérone en {{0}} %, en dessous desquelles la réponse érectile est atténuée de manière dose-dépendante (Armagan et al. 2006). Dans la présente étude, la concentration de testostérone en circulation était trop faible pour atteindre la limite de sensibilité (0,02 ng/ml) chez tous les rats castrés (les données n'ont pas été présentées dans les résultats). Cependant, CDextract a considérablement raccourci la latence érectile du pénis à trois doses et prolongé la durée érectile à 0,90 g/kg et 1,8 g/kg. C'était probablement la conséquence de l'effet de type androgène de la MC mentionné dans certaines études antérieures (He et al. 1996a, He et al. 1996b). Certains organes accessoires, tels que la prostate et la vésicule séminale, dépendent des androgènes. altérations du statut endocrinien (Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011).

Il existait un niveau seuil de testostérone, en dessous duquel le métabolisme de ces organes était inhibé (Trachtenberg1985). Il a été confirmé dans notre étude que la castration induisait une diminution du poids des organes reproducteurs accessoires en raison du déficit en testostérone. un rôle important dans le maintien de la fonction du pénis des animaux castrés (Robert et al. 2004). Comme l'axe hypothalamus-hypophyse-gonade (HPG) est un mécanisme de contrôle de rétroaction en boucle fermée, de faibles niveaux d'hormones gonadiques peuvent réguler la sécrétion de LH et de FSH à leur tour (Morales et al. 2004). Notre étude a enquêté sur le fait que le taux sérique de LH était significativement augmenté chez les rats castrés, puis redescendu à des niveaux normaux par l'extrait de CD à 0,90 g/kg, ce qui était en accord avec la conclusion précédente selon laquelle l'augmentation du taux de LH était associée à un risque plus élevé de dysfonction érectile (Kupelian et al. 2006).

Dans les testicules, la LH stimule la synthèse et la libération de testostérone, dont le contrôle par rétroaction est relativement constant, tandis que la FSH agit directement sur les cellules de Sertoli pour se nourrir avec le complexe de contrôle par rétroaction (Hellqvist et al. 2008). Ces découvertes étayaient davantage l'hypothèse selon laquelle CD exprimait un effet de type androgène, qui pourrait être principalement responsable de la réduction de la LH sérique plus que de la FSH. et al. 2006), contrairement aux résultats chez les rats femelles (Pantaleão et al. 2010). L'extrait de CD n'a pas été en mesure d'améliorer significativement le poids corporel, ce qui était probablement dû à la durée insuffisante du traitement ou aux impacts complexes sur l'état de santé général. L'extrait de CD a facilité la réponse érectile du pénis en raccourcissant la latence érectile et en prolongeant la durée érectile chez les rats castrés. Ces effets étaient probablement dus à l'effet de type androgène, qui a été étayé par l'observation que l'extrait de CD normalisait les concentrations sériques de LH, en particulier à la dose de 0,90 g/kg.

Cependant, des preuves supplémentaires sont nécessaires pour démontrer l'effet de l'extrait de CD contre les niveaux hypothalamique et limbique de la dysfonction érectile et une plus grande attention pourrait être accordée à cette précieuse médecine traditionnelle dans le monde moderne.