ABSTＲACTE

Objectif : Clarifier si des mesures généralescistanosides(GC) amélioreDysfonctionnement cognitifdes souris vieillissant rapidement (SAMP8) en médiant des récepteurs androgènes spécifiques (AＲ) dans lerégulation de l'expression de la protéine synaptique． 

Méthodes : Un total de 76 7- souris mâles SAMP8 âgées d'un mois ont été réparties au hasard dans le groupe modèle, le groupe GC, le groupe GC + flutamide (F), le groupe GC + fulvestrant (ICI), le groupe F et le groupe ICI. Les fonctions d'apprentissage et de mémoire des souris de chaque groupe ont été testées avec le labyrinthe aquatique Morris. Le Western blot et la RT-PCR ont été utilisés pour tester laniveau d'expression de la synaptophysine( SYN), densité post-synaptique － 95 ( PSD － 95) et facteur neurotrophique dérivé du cerveau ( BDNF) des souris de chaque groupe.

Résultats : Les GC ont amélioré de manière significative l’apprentissage et la fonction cognitive des souris SAMP8.

Par rapport au groupe GCs, la fonction d'apprentissage et de mémoire des souris du groupe GCs + F et du groupe GCs + ICI a été significativement réduite. Les résultats du Western Blot et de la RT-PCR ont montré que le niveau d'expression de BDNF, SYN et PSD－ 95 était significativement augmenté au niveau des protéines et au niveau des gènes dans le groupe GC par rapport au groupe Modèle ( P ＜ 0． {{ 11}}5) ． Le niveau d'expression de SYN a été augmenté dans le groupe GCs + F et GCs + ICI, et les niveaux d'expression de BDNF et PSD － 95 ont été significativement diminués dans le groupe GCs + F et GCs + ICI par rapport au groupe GCs ( P ＜ 0． 05) ．

Conclusion : les GC peuvent médier spécifiquement AＲ pour améliorer la plasticité synaptique chez les souris SAMP8, ce qui à son tour améliore l'apprentissage et la fonction cognitive.

MOTS CLÉS :Cistanosides généraux ; Récepteur aux androgènes ; Plasticité synaptique; Souris SAMP8

Supplément Cistanche Amélioration de la fonction cognitive Complément alimentaire PhGs75% Ech 30% Act 12%

La maladie d'Alzheimer(AD) est un courantmaladie dégénérative neurologique, cliniquement caractérisé par un déclin progressif des fonctions cognitives et des modifications de l'état mental et psychologique [1]. Des études ont montré que les niveaux de testostérone chez les patients masculins atteints de MA sont significativement inférieurs à ceux des hommes normaux.

Lefonction cognitive des patientsa été amélioré à des degrés divers aprèsthérapie de remplacement des cétones[2], qui indiquent que la diminution des taux d'androgènes liée à l'âge pourrait être un facteur de risque de MA chez les hommes âgés.

Glycosides totaux de Cistanche deserticola (cistanosides généraux, GCs) sont l'un des principaux extraits de Cistanche deserticola, qui peuvent améliorer l'apprentissage lié à la MA etDysfonctionnement cognitif[3]. De plus, l’administration de GC par gavage augmentait significativement les taux de testostérone chez les animaux [4]. Les GC ont également pour fonction de promouvoir le yang et peuvent exercer

Effets pharmacodynamiques de type androgène. Des études antérieures ont rapporté que la testostérone peut améliorer les fonctions d'apprentissage et cognitives des animaux modèles de la maladie d'Alzheimer, et ce processus repose sur un récepteur androgène spécifique (récepteur aux androgènes, AR) médié [5].

Il est bien connu que le dysfonctionnement cognitif chez les patients atteints de MA est étroitement lié à la plasticité synaptique. Cependant, le mécanisme spécifique par lequel les GC régulent la plasticité synaptique et améliorent ainsi les fonctions d’apprentissage et cognitives n’est toujours pas clair. Cette étude visait à explorer si les GC interviennent dans l'ARＲ spécifique pour affecter la plasticité synaptique et améliorer ainsi l'apprentissage et les fonctions cognitives dans la MA.

1 Matériels et méthodes

1.1 Animaux et équipements expérimentaux

Des souris SAMP8 mâles de 3-mois ont été achetées à la faculté de médecine de l'Université de Pékin (SCXK [Beijing] 2016-0010) et ont été élevées jusqu'à l'âge de 7 mois. Les animaux ont été gardés dans un environnement propre à (24 ± 1) degrés et

Les animaux ont bénéficié d'un éclairage naturel et d'un libre accès à la nourriture et à l'eau, et des soins humanitaires ont été prodigués conformément aux principes des 3R pour l'utilisation d'animaux de laboratoire. Cette étude expérimentale a été approuvée par le comité d'éthique des animaux expérimentaux du Baotou Medical College (Baotou Medical College n° 20201102).

Les principaux réactifs de l'expérience sont :Glycosides totaux de Cistanche deserticola(GC, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.) ; antagoniste des récepteurs aux androgènes-flutamide (Sigma Company, USA); antagoniste des récepteurs des œstrogènes-fulvestrant (ICI 182780, USA) Med Chem Express ); Anticorps BDNF anti-souris de lapin,

Anticorps PSD-95, anticorps SYN, anticorps -actine (Proteintech Company des États-Unis) ; solution d'électrophorèse de protéines, solution de transfert de protéines, TEMED, tampon acrylamide, persulfate d'ammonium, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.) ; Kit de synthèse d'ADNc, détection quantitative par fluorescence Talent

Kit de réactifs (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), etc. Le principal équipement expérimental comprend un réservoir d'électrophorèse sur plaque verticale, un appareil d'électrophorèse, un réservoir de transfert, un agitateur de coloration (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), un système d'analyse par imagerie de gel de protéines (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), instrument de PCR quantitative à fluorescence en temps réel (USA Roche), etc.

1.2 Regroupement et administration

Deux souris sont mortes naturellement pendant le processus d'alimentation et les 78 souris restantes ont été divisées au hasard en groupe modèle, groupe GC, groupe GC + flutamide (F), groupe GC + fulvestrant (ICI), groupe F, ICI

Groupes de 13 animaux chacun. À l'exception du groupe modèle, du groupe F et du groupe ICI, les autres groupes ont reçu une administration continue de GC à une dose de 50 mg/(kg·j) pendant 30 jours.

À partir du 24ème jour après l'administration des GC, le groupe GCs + flutamide (F) et le groupe GCs + fulvestrant (ICI) ont reçu une injection intrapéritonéale de F (5 mg/kg/j) 30 minutes après l'administration des GC. par gavage. ), ICI (1 mg/kg/j), injection continue pendant 7 jours. Ajustez la concentration de dosage pour garantir que le volume gastrique maximum des souris est de 0,5 mL, 1 fois/j.

1. 3 Test du labyrinthe aquatique Morris

Les souris se sont adaptées à l’environnement aquatique un jour à l’avance. Le labyrinthe aquatique Morris a duré 6 jours. Les 5 premiers jours étaient le test de positionnement et de navigation. Les souris ont été entraînées une fois par jour dans chacun des quatre quadrants pendant 1 minute à chaque fois. Chaque intervalle d'entraînement durait 15 minutes et les enregistrements étaient enregistrés en même temps. Latence d'échappement du test de positionnement et de navigation des animaux ; le 6ème jour, sortez la plate-forme de l'eau et effectuez un test d'exploration spatiale. Enregistrez le nombre de traversées de plate-forme et le pourcentage de temps passé dans le quadrant cible de la souris. le quadrant cible) et la trajectoire de nage d'exploration spatiale (trajectoire de nage du test de sonde spatiale) et d'autres indicateurs.

1.4 Détection par Western blot

Expression des protéines liées aux synapses SYN, PSD-95 et BDNF. Après le test du labyrinthe aquatique de Morris, toutes les souris ont été régulièrement anesthésiées, leur tête a été décapitée, leur cerveau a été retiré et leurs hippocampes ont été retirés. Le tissu hippocampique a été lysé en protéines, rompu par ultrasons à 4 degrés, laissé sur de la glace pendant 30 minutes et centrifugé à 12,000 tr/min pendant 15 minutes à 4 degrés. Le surnageant a été prélevé et la concentration en protéines a été mesurée à l'aide de la méthode BCA. Après avoir chargé la protéine, effectuez une électrophorèse sur gel d’empilement à une tension constante de 80 V, une électrophorèse sur gel de séparation à une tension constante de 120 V et un transfert humide à un débit constant de 300 mA ; retirer la membrane PVDF, la bloquer avec 5% de lait écrémé pendant 80 minutes à température ambiante et laver la membrane trois fois avec du TBST. 15 min/heure, l'anticorps primaire a été incubé toute la nuit sur une table agitée à 4 degrés ; le lendemain, la membrane a été lavée 3 fois avec du TBST.

15 min/heure, l'anticorps secondaire a été incubé à température ambiante pendant 2 h, puis le développement de la couleur ECL a été réalisé et l'imagerie a été réalisée avec un système d'imagerie par chimiluminescence. -actine a été utilisée comme référence interne et la valeur de densité optique de la bande a été analysée à l'aide du logiciel Image J.

1. 5ＲRT－PCRＲDétection

L'expression de l'ARNm de SYN, PSD-95 et BDNF a été extraite de l'ARN total du tissu hippocampique selon la méthode d'extraction Trizol, et l'ADNc a été généré après transcription inverse. Le kit de détection quantitative de fluorescence Talent a été utilisé pour la détection quantitative de fluorescence relative. L'expérience a été répétée trois fois et les résultats ont été convertis en 2 - ΔΔCT a été analysé. Les amorces souris-actine, SYN, PSD-95 et BDNF ont été conçues par la société Shanghai Sangon, et les séquences d'amorces sont présentées dans le tableau 1.

1. 6 Analyse statistique

Via le logiciel statistique SPSS 25. 0 pour le traitement, le logiciel Graphpad Prism 8 a été utilisé pour dessiner des graphiques statistiques et une ANOVA unidirectionnelle a été utilisée pour comparer les moyennes par paires de plusieurs échantillons. P < 0. 05 signifie que la différence est statistiquement significative.