Étude expérimentale de l’effet protecteur du prétraitement des glycosides de Cistanche sur les lésions d’ischémie rénale et de reperfusion

pour plus d’information:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Département de chirurgie, Hôpital du district de Baoshan de médecine traditionnelle chinoise et occidentale intégrée, Shanghai 201900)

【Résumé】Objectif Établir un modèle de réanimation du choc hémorragique chez le rat et observer l’effet protecteur deCistancheglycosides totaux (CTG) sur les lésions d’ischémie rénale-reperfusion. Méthodes Les rats SD ont été répartis au hasard en 3 groupes: groupe d’opération simulée, groupe expérimental (groupe de réanimation de choc), groupe de traitement CTG, 10 rats dans chaque groupe. Le groupe expérimental et le groupe de traitement CTG ont établi des modèles d’ischémie rénale-reperfusion. Les rats du groupe de traitement ont reçu une injection de CTG de 400 mg / kg par voie intrapéritonéale, et le groupe expérimental et le groupe d’opération simulée ont été injectés avec une solution saline. La teneur en myocarde sanguin, la teneur en azote uréique et la cystatine C de chaque groupe ont été détectées pour déterminer la fonction rénale, l’analyse par cytométrie en flux a été utilisée pour détecter le taux d’apoptose des cellules rénales; un immunodosage enzymatique (ELISA) a été utilisé pour détecter la liaison chromosome X chez le ratreintissu Expression de l’inhibiteur lié à l’X de la protéine d’apoptose (XIAP). Résultats La comparaison du groupe CTG avec le groupe expérimental, le Cr sanguin, le BUN et la cystatine C ont été significativement réduits (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistancheont un effet protecteur sur les lésions d’ischémie rénale-reperfusion chez le rat, ce qui peut être lié à la promotion de l’expression de XIAP.

[Mots-clés] rein; lésion d’ischémie-reperfusion; glycosides totaux de cistanche; inhibiteur lié aux chromosomes de la protéine d’apoptose; apoptose; rat

[Numéro de classification de la bibliothèque chinoise] R692 [Code de marquage du document] A [Numéro d’article] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

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La lésion d’ischémie-reperfusion (I / R) est un phénomène physiopathologique courant de lésions rénales dans le processus de choc hémorragique, de traumatisme grave,reintransplantation, etreinchirurgie tumorale. Des études ont montré que l’apoptose est une partie importante des lésions de la fonction rénale causées par une lésion I/R (1). L’inhibiteur lié à l’X de la protéine d’apoptose (XIAP) est l’un des inhibiteurs endogènes de l’apoptose les plus puissants trouvés jusqu’à présent (2). Il existe peu d’études sur l’effet anti-apoptotique du XIAP dans le tissu rénal après une lésion I/R.Cistancheles glycosides totaux (CTG) sont un composé de glycosides totaux phényléthanoïdes extrait deCistanche, qui a diverses fonctions biologiques. Il existe peu d’études sur sa protection rénale après une lésion I/R. . Cette étude a établi un modèle de réanimation par choc hémorragique chez le rat et a établi un modèle de lésion systémique I / R pour explorer l’effet protecteur des glycosides totaux de la hernie carnée sur lereinde la blessure I/R et explorer son mécanisme possible.

1Matériaux et méthodes

1.1 Animaux et regroupement

Il y a 30 rats mâles propres et en bonne santé fournis par le Centre expérimental de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Shanghai, pesant (320 ± 30) g. Répartis au hasard en 3 groupes: groupe d’opération simulée, groupe expérimental (groupe de réanimation de choc), groupe CTG, chacun avec 10 rats.

1.2 Principaux réactifs et instruments

Les glycosides totaux de riz gluant (numéro de lot: 20081516) ont été achetés auprès de Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; le pentobarbital de sodium, Hoechst 33258 et l’iodure de propionyle ont été achetés auprès de Sigma, aux États-Unis; Le kit d’essai de protéine (XIAP) et le kit ELISA de l’inhibiteur de l’apoptose lié au chromosome X de souris ont été achetés auprès de Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; le lecteur de microplaques a été acheté à Thermo Company, aux États-Unis; le détecteur physiologique multiparamètre a été acheté à Nihon Kohden Company, au Japon; cytomètre en flux BDFACSAria a été acheté de Becton, États-Unis -Dickinson Company; Le trocart 24G a été acheté à Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Méthode expérimentale

1.3.1 La préparation de modèles animaux de SD a été jeûnée 12h avant l’expérience et anesthésiée par injection intrapéritonéale de pentobarbital de sodium (50 mg/kg).

Le rat a été fixé en position couchée, une incision de 3 cm a été pratiquée dans le bas-ventre gauche, l’artère fémorale a été séparée, un trocart 24G a été inséré et un détecteur physiologique multiparamètre a été connecté. La pression artérielle moyenne du rat a été mesurée comme (113 ± 15) mmHg, 20 ml d’héparine de seringue La pression artérielle a été abaissée à 40 mmHg (l mmHg = 0, 133 kPa) avec un dispositif à trois voies à connexion chimique. Le choc a été considéré comme ayant commencé et la pression artérielle a été maintenue pendant 90 minutes. Le volume de saignée était de (13 ± 3) ml, puis le sang autologue dans la seringue La réinfusion lente prend environ 30 minutes, et la pression artérielle revient à plus de 90% de la valeur de base, et la réanimation est considérée comme réussie (3). Le trocart a été retiré, l’artère fémorale a été ligaturée et l’incision a été suturée. Une fois les rats réveillés, ils ont été renvoyés dans la cage pour observation, et ils étaient libres de manger et de boire. 24 heures après la réanimation, une injection intrapéritonéale de pentobarbital de sodium (50 mg / kg) a été utilisée pour l’anesthésie, la laparotomie, 5 ml de sang ont été prélevés dans la veine cave inférieure, les rats ont été immédiatement sacrifiés et les reins gauche et droit ont été retirés pour utilisation.

1.3.2 Méthodes médicamenteuses Le groupe de traitement CTG a reçu CTG 2 heures avant la saignée des rats et injecté dans la cavité abdominale à une dose de 400 mg / kg. Le groupe expérimental a été injecté par voie intrapéritonéale avec 3 ml de solution saline normale 2 heures avant la saignée ; le groupe d’opération simulée n’a subi qu’une anesthésie, une laparotomie et une séparation de l’artère fémorale, la mise en place d’un trocart et une suture de l’incision, mais pas de saignement ou de réanimation. Le reste était le même que le groupe expérimental.

1. 4 indicateurs et méthodes de détection

1.4.1 Détermination de la teneur sanguine en BUN, Cr et cystatine C La cystatine C est un marqueur endogène des changements dans le taux de filtration glomérulaire. Lorsque la fonction rénale est altérée, le taux de filtration glomérulaire diminue, la concentration de cystatine C dans le sang peut augmenter de 10 fois et la précision diagnostique de la cystatine C est significativement meilleure que celle de l’intoxication musculaire sérique. La teneur en SANG BUN, Cr et Cystatin C a été soumise au laboratoire de notre hôpital pour détermination.

1.4.2 Détermination du taux d’apoptose cellulaire La cytométrie en flux a été utilisée pour détecter le taux d’apoptose des cellules rénales. Prenez le rein et hachez-le avec une lame, ajoutez un peu de PBS et transférez-le dans un tube à essai. Ajouter 0,3% de trypsine à digérer dans un bain-marie de 37 P, incuber pendant 20 min, lorsque le contenu du tube à essai devient trouble, ajouter 2 fois pbS pour arrêter la digestion, filtrer avec une maille de nylon de 300 mailles, éliminer les impuretés et centrifuger dans une centrifugeuse à basse température. Rayon de centrifugeuse 8 cm, 12 000 r/min, centrifugeuse pendant 5 min, jeter le surnageant, ajuster la concentration de la cellule à 1 ~ 1,5 x 106/ml, prendre 0,4 ml de la suspension cellulaire ci-dessus et ajouter 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), sombre 37 t : incuber au bain-marie, coiffer le tube à essai, rincer au PBS après 5 min, rayon de centrifugeuse 8 cm, 12 000 r/min, centrifugeuse pendant 5 min, jeter le surnageant, rincer à nouveau de la même manière. Ajouter 0,4 ml d’IP, coloré pendant 5 minutes, et détecter le pourcentage de cellules normales, nécrotiques et apoptotiques dans le rein. Selon l’affinité des deux colorants de différents types de cellules, on sait que seules les cellules de couleur PI sont des cellules mortes, seules les cellules colorées Hoechst 33258 sont des cellules apoptotiques, et aucune d’entre elles n’est colorée de cellules vivantes normales.

1.4.3 Dosage immunoenzymatique (ELISA) pour détecter l’expression de XIAP dans les tissus rénaux de rat Prélever chaque groupe de reins et traiter les tissus rénaux frais avec du lysat tissulaire. Centrifuger dans une centrifugeuse basse température à 12 000 tr/min pendant 5 min. Prenez le surnageant et utilisez-le conformément aux instructions du kit XIAP ELISA Kit. Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. est responsable des tests.

1.5 Traitement statistique

Les données expérimentales de chaque groupe sont représentées par yuan sol s, et SPSS 17. 0 logiciel est utilisé pour l’analyse statistique. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche peut améliorer la fonction sexuelle

2 résultats

Les indices de la fonction rénale Cr, BUN et Cystatin C étaient statistiquement significatifs (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tableau 1 Indices de la fonction rénale Valeurs Cr, BUN et Cystatin-C des rats de chaque groupe Tab. 1 Indices de la fonction rénale dans trois groupes

Par rapport au groupe d’opérations fictives, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Le mécanisme de l’ischémie-reperfusion lésion rénale est très compliqué. C’est un processus pathologique qui se produit de nombreuses façons sous l’action de divers facteurs, tels que la surcharge en ions calcium, les dommages à la peroxydation lipidique, l’apoptose cellulaire et la nécrose, parmi lesquels l’apoptose cellulaire dépendante de la caspase est l’une des principales formes de lésions des cellules épithéliales tubulaires rénales induites par une lésion rénale rénale (4). L’inhibiteur de la famille des protéines d’apoptose (IAP) est le seul inhibiteur endogène de la caspase trouvé dans les cellules de mammifères jusqu’à présent, ce qui peut prévenir efficacement l’apparition de l’apoptose cellulaire. XIAP est le membre ayant le plus fort effet inhibiteur sur la caspase dans la famille IAP. Il peut inhiber l’apoptose cellulaire causée par une variété de stimuli pathologiques et jouer un effet protecteur sur les organes endommagés (5).

À l’heure actuelle, la plupart des méthodes permettant d’établir des modèles animaux de lésion rénale I/R consistent à enlever un rein et à serrer l’autre côté du pédicule rénal ou de l’artère rénale (6) pour simuler l’état de la transplantation rénale. Cette étude utilise un modèle de choc hémorragique / réanimation, qui est plus proche du processus physiopathologique de l’ischémie systémique-reperfusion qui se produit dans le choc traumatique clinique. Dans cette expérience, les taux sanguins de BUN, cr et cystatine C des rats SD Amélioration significative, fonction rénale gravement altérée, est un modèle animal idéal pour étudier les lésions rénales I / R.

CTG est un ingrédient médicinal important de la médecine traditionnelle chinoise pâte de fille de fille. La pâte d’aubergine, qui est de nature chaude, sucrée et salée, retourne au méridien des reins et du gros intestin et était à l’origine contenue dans la Materia Medica de Shennong. « Ben Sutra »: Cinq principaux travaux et sept blessures, nourrissent le milieu, nourrissent les cinq organes internes, renforcent le yin, nourrissent l’essence et le qi;Cistancheest utilisé dans mon pays depuis deux mille ans. Il se classe n ° 1 dans les formules augmentant la force dans le passé et se classe n ° 2 dans les formules nourrissantes après le ginseng. Des études ont montré queCistanchepouvoiraméliorer la fonction sexuelle,réguler le neuroendocrinienetaméliorer la fonction immunitaire. ,Antioxydants, favoriser le métabolisme des matériaux, protéger le myocarde ischémique et d’autres fonctions. En tant que principal ingrédient médicinal de la purée de la famille de viande, le CTG a de nombreuses fonctions. La recherche sur les modèles d’ischémie-reperfusion cérébrale a révélé que le CTG peut réduire les acides aminés excitateurs dans le tissu cérébral après une ischémie-reperfusion et protéger le tissu cérébral des rats SD (7). CTG dispose d’uneffet antioxydantsur les tissus de souris et a un certain effet protecteur sur l’hypoxie cérébrale aiguë chez la souris et les lésions musculaires cardiaques chez la souris (9). CTG peut améliorer considérablement le neurocomportement deLa maladie de Parkinsonmodéliser des souris et inhiber la diminution du nombre de neurones dopaminergiques dans la substantia nigra (9). En améliorant l’activité des enzymes piégeuses des radicaux libres, en prévenant la peroxydation lipidique, en inhibant le dépôt de peptide B-amyloïde dans le cerveau et en inhibant l’apoptose des cellules cérébrales, le CTG améliore considérablement l’apprentissage deMaladie d’Alzheimersouris causées par le peptide B-amyloïde Capacité de mémoire w. Cette étude a montré qu’après l’application du prétraitement CTG, les teneurs en BUN sanguin, Cr et cystatine C des rats ont diminué de manière significative et les lésions rénales ont été réduites. CTG a augmenté la protéine XIAP inhibitrice de l’apoptose dans le tissu rénal blessé I / R et l’apoptose cellulaire bloquée. La survenue de la mort a un effet protecteur sur les dommages au rein.