Explorer les effets des glycosides phényléthanoïdes de cistanche sur la stéatose hépatique non alcoolique sur la base de la pharmacologie en réseau et d'expériences cellulaires

 

Abstrait

Objectif: Pour étudier les effets améliorateurs des glycosides phényléthanoïdes de Cistanche sur la stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD).

Méthodes: La pharmacologie en réseau a été utilisée pour prédire les mécanismes potentiels des glycosides phényléthanoïdes de Cistanche contre la NAFLD. Un modèle NAFLD in vitro a été établi en induisant des cellules HepG2 avec des acides gras libres (FFA). La viabilité cellulaire a été évaluée à l'aide du test CCK-8 ; La coloration Oil Red O a été utilisée pour observer l’accumulation de lipides ; Les taux de triglycérides (TG) et de cholestérol total (TC) ont été mesurés à l'aide de kits de dosage ; La coloration JC-1 a été utilisée pour évaluer le potentiel de la membrane mitochondriale ; les niveaux de ROS intracellulaires ont été évalués avec une sonde fluorescente DCFH-DA ; l'apoptose a été détectée par coloration Hoechst 33342 ; et l'expression des protéines TNF-, PI3K, Akt et Bax a été mesurée par Western blot.

Résultats: Dix composés actifs et 77 cibles potentielles liées aux effets anti-NAFLD ont été identifiés, avec des cibles principales comprenant le TNF, le NFKB1 et le TLR4. Les composés ont montré une bonne affinité de liaison avec les cibles, notamment le TNF. Par rapport au groupe modèle, les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche ont réduit de manière significative l'accumulation de lipides induite par les FFA dans les cellules HepG2 (P < 0,01), diminué les niveaux intracellulaires de TG, TC et ROS (P < 0,01), restauré le potentiel de membrane mitochondriale, atténué les dommages mitochondriaux, réduit l'apoptose, abaissé l'expression de la protéine Bax (P < 0,05) et régulé négativement le TNF-, le PI3K et Expression de la protéine Akt (P < 0,05, P < 0,01).

Conclusion: Les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche exercent des effets anti-NAFLD en améliorant l'accumulation de lipides induite par les FFA, le dysfonctionnement mitochondrial, le stress oxydatif et l'apoptose dans les cellules HepG2. Ces effets peuvent être associés à la voie de signalisation TNF/PI3K/Akt.

Mots-clés: Glycosides phényléthanoïdes de cistanche; stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD); métabolisme lipidique ; stress oxydatif ;apoptose; Voie de signalisation TNF/PI3K/Akt ; pharmacologie de réseau ; expérience cellulaire

 

Glycosides phényléthanoïdes de cistanche

 

 

 

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1. Présentation

La stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD) est une maladie hépatique chronique caractérisée par une stéatose hépatique sans consommation excessive d'alcool. La prévalence en Chine a atteint 32,9 %. Sa pathogenèse implique de multiples mécanismes, notamment la résistance à l'insuline, le stress oxydatif et le déséquilibre du microbiote intestinal. Les symptômes cliniques comprennent la fatigue, une gêne au niveau du foie et des douleurs abdominales. Dans les cas graves, ils peuvent évoluer vers une stéatohépatite non alcoolique (NASH).

Actuellement, les interventions liées au mode de vie constituent le traitement principal de la NAFLD. Bien que la FDA ait approuvé le premier médicament contre la NAFLD, Resmetirom (Rezdiffra), en 2024, il présente des effets indésirables potentiels tels que des lésions hépatiques et des risques cardiovasculaires. Il existe donc un besoin urgent de trouver des traitements sûrs et efficaces contre la NAFLD.

La médecine traditionnelle chinoise (MTC), avec ses caractéristiques composées de multiples composants, de multiples cibles et de multiples voies, s'aligne bien sur la pathogenèse complexe de la NAFLD et offre des avantages uniques dans son traitement.

Cistanche désertiqueetCistanche tubuleusesont des plantes médicinales de la famille des Orobanchaceae, répertoriées auShennong Bencao Jing. Leurs tiges charnues, riches en écailles, sont traditionnellement utilisées pour tonifier le foie et les reins, reconstituer l'essence et le sang et humidifier les intestins. Les principaux composants actifs, les glycosides phényléthanoïdes, ont des propriétés anti-inflammatoires, hypolipidémiantes et hépatoprotectrices. Cependant, les études systématiques sur leurs effets contre la NAFLD font encore défaut.

Cette étude vise à analyser la base pharmacologique et les mécanismes potentiels des glycosides phényléthanoïdes de Cistanche dans le traitement de la NAFLD à l'aide de la pharmacologie de réseau, et à explorer davantage leurs mécanismes par le biais d'expériences cellulaires, fournissant une base théorique pour le développement de nouveaux médicaments.

 

2. Matériaux

2.1 Outils de pharmacologie en réseau

TCMSP : https://tcmspw.com/tcmsp.php

CNKI : https://www.cnki.net/

PubMed : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/

PubChem : https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/

SwissTargetPrediction : http://www.swisstargetprediction.ch/

NetInfer : http://lmmd.ecus.edu.cn/netinfer/

SuperPred : https://prediction.charite.de/subpages/target_prediction.php

GeneCards : https://www.genecards.org/

DisGeNET : http://www.disgenet.org/

CHAÎNE : https://string-db.org/

Bioinformatique : https://www.bioinformatics.com.cn/

UniProt : https://www.uniprot.org/

BPD RCSB : https://www.rcsb.org/

Cytoscape 3.9.1 : https://cytoscape.org/

R 4.3.3 : https://www.r-project.org/

AutoDock Vina 1.5.7 : https://vina.scripps.edu/

2.2 Lignée cellulaire

Cellules cancéreuses du foie humain HepG2, achetées auprès de Wuhan Procell Life Science & Technology Co., Ltd.

2.3 Réactifs et médicaments

Glycosides phényléthanoïdes de Cistanche (numéro de lot . 201610, pureté supérieure ou égale à 80 %, contenant 44,5 % d'échinacoside et 16,1 % de verbascoside), achetés auprès de Hotan Dechen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. Solution mère préparée à 6,40 mg/mL, filtrée et conservée à –20 degrés.

Les réactifs supplémentaires comprennent :

Sérum fœtal bovin (FBS), milieu DMEM, pénicilline-streptomycine, kit de coloration Oil Red O, kit BCA, kit de détection ROS, Hoechst 33342, BSA-V, oléate de sodium, palmitate de sodium, kits de dosage TG et TC, test CCK-8, kit de potentiel de membrane mitochondriale JC-1, anticorps contre le TNF-, PI3K p85, Akt, Bax, -actine et anticorps secondaires conjugués à la HRP.

2.4 Instruments

Incubateur CO₂ (Forma 371)

Armoire de biosécurité (HERASAFE KS18)

Lecteur de microplaques (Multiskan GO)

Microscope inversé (Nikon TS2-S-SM)

Bain-marie, centrifugeuse (H1750R), balance analytique, système d'imagerie par chimiluminescence (Azure 600), microscope à fluorescence (Leica DMi8)