Les adultes en bonne santé n'ont pas beaucoup d'immunité des cellules B contre le SRAS-CoV -2 et sa solution

Résumer

L'immunité antérieure au SRAS-CoV-2 peut avoir des implications importantes pour notre compréhension de la sensibilité et de la gravité du COVID-19. La présence et la pertinence clinique de l'immunité préexistante des lymphocytes B restent à élucider. Ici, nous fournissons une analyse détaillée de l'immunité des lymphocytes B chez les personnes non exposées au SRAS-CoV-2. À cette fin, nous avons étudié de manière approfondie l'immunité humorale contre le SARS-CoV-2 chez 150 adultes échantillonnés avant la pandémie. Le dépistage complet d'échantillons de plasma de donneurs et d'IgG purifiés, combinés et neutralisés dans divers tests fonctionnels, n'a montré aucune activité substantielle contre le SRAS-CoV-2, mais une réactivité généralisée contre le coronavirus endémique. De plus, les séquences d'anticorps de 8174 cellules B réactives au sars-cov-2 ont été analysées au niveau de la cellule unique

et 158 ​​anticorps monoclonaux ont été générés et testés. Aucun de ces anticorps n'a montré d'activité de liaison ou de neutralisation associée au SARS-CoV-2. Pris ensemble, nos résultats ne montrent aucune preuve d'une immunité efficace antérieure des anticorps et des lymphocytes B chez les adultes non exposés au SARS-CoV-2.

Mots clés

lymphocyte T ; cellule B ; Cistanche ; verbascoside; jecommunauté

Introduction

La pandémie actuelle de coronavirus SRAS 2 est une urgence sanitaire mondiale qui met au défi les systèmes de santé du monde entier. L'infection par le SRAS-CoV-2 présente un large éventail de manifestations cliniques, allant de l'infection asymptomatique au syndrome de détresse respiratoire aiguë potentiellement mortel, en passant par la défaillance d'organes multiples, le choc septique et la mort. Bien qu'influencée par divers facteurs, la gravité de la maladie est largement déterminée par les réponses immunitaires innées et adaptatives. L'immunité antérieure au SRAS-CoV-2 peut être un déterminant clé de la gravité de la maladie et des résultats cliniques. Cependant, l'immunité préexistante peut également affecter négativement l'évolution clinique par le biais d'améliorations dépendantes des anticorps (ADE) ou de mécanismes OAS qui ont déjà été décrits pour d'autres agents pathogènes viraux.

Une réponse immunitaire préexistante des lymphocytes T contre le SRAS-CoV-2 a été observée chez des personnes non exposées au SRAS-CoV-2. Dans ces études, la réactivité des cellules T aux protéines de pointe (S) et de nucléocapside (N) et aux protéines non structurelles NSP7 et NSP13 a été mesurée à l'aide de pools de peptides antigéniques. Il est important de noter qu'une réactivité significative des cellules T aux polypeptides de la protéine S a été détectée, ce qui a montré une forte homologie avec le coronavirus humain (HCoV) « rhume » local, y compris HCOV-OC43, HCOV-HK-1, HCOV-NL63 et HCOV -229e. Par conséquent, on émet l'hypothèse que l'immunité préexistante des lymphocytes T contre le SRAS-CoV -2 découle d'une exposition antérieure au hcov endémique.

Pour déterminer la présence d'une immunité préexistante associée aux lymphocytes B contre le SARS-CoV-2, nous avons étudié des échantillons de plasma, des lymphocytes B uniques et des anticorps monoclonaux isolés chez 150 personnes qui n'avaient pas été exposées au SARS-CoV-2. Nous n'avons trouvé aucune preuve d'une immunité antérieure efficace des lymphocytes B qui expliquerait le large spectre clinique de l'infection par le SRAS-CoV-2. Il donne également une impulsion à la recherche de nouvelles solutions. Des études ont montré que le liténoside améliore la prolifération des lymphocytes et a donc un certain effet sur l'augmentation du nombre de cellules B. Cela fournit une nouvelle façon de renforcer l'immunité des gens.

Photo : Faw Cistanche

Résultats

Nous avons précédemment identifié des régions variables rares de chaînes lourdes et de chaînes légères dans des cellules B naïves pré-pandémiques qui n'étaient pas appariées par analyse NGS chez des individus sains, qui ressemblaient étroitement à l'anticorps réactif sars-cov-2 de la quasi-lignée. Certaines de ces chaînes lourdes et légères des lymphocytes B primaires peuvent remplacer les chaînes d'origine des anticorps réactifs au sras-cov-2 sans modifier leur fonction. Ces découvertes s'ajoutent aux observations précédentes selon lesquelles certains anticorps réactifs au sars-cov-2 montrent leur activité par des signatures de séquence codant pour l'espèce. Pour étudier comment ces résultats se traduisent par des réponses plasmatiques et si des anticorps réactifs au sras-cov-2 sont déjà présents dans le plasma d'individus non exposés, nous avons étudié des échantillons de sang pré-pandémiques provenant de 150 donneurs. Des échantillons ont été prélevés entre août et novembre 2019 pour étudier son activité de liaison et de neutralisation contre le SARS-CoV-2. Les donateurs ont 18-66 ans. 49,3 % des donneurs étaient des hommes et 50,7 % étaient des femmes. Compte tenu des résultats contradictoires publiés précédemment, nous avons décidé de rechercher rigoureusement les anticorps préexistants réactifs au sras-cov-2 en utilisant simultanément différents tests. Les échantillons de plasma ont montré peu ou pas de liaison des IgG, IgM et IgA à la protéine S soluble du SARS-CoV-2. Une réactivité significative a été détectée dans un petit nombre d'échantillons. Cependant, aucune liaison n'a été détectée par dosage immunologique commercial ou interne dans les échantillons de plasma étudiés. Pour confirmer ce résultat, nous avons effectué une cytométrie en flux. Aucun des échantillons n'a montré d'activité de liaison à l'exception d'un donneur qui a montré une faible activité IgG plasmatique dans cette étude. Nous attribuons la détection fortuite de l'activité de liaison à l'utilisation d'échantillons de plasma non purifiés, qui auraient produit une réactivité non spécifique.

Pic: Extrait de Cistanche

En résumé, aucun des échantillons pré-pandémiques obtenus auprès de 150 adultes n'a montré de réactivité au SARS-CoV-2 dans les différents tests appliqués. Par conséquent, sur la base de l'application parallèle de diverses méthodes de test, nous n'avons trouvé aucune preuve convaincante d'anticorps réactifs au sras-cov-2 dans les échantillons de sang testés avant la pandémie. Des expériences sur des rats ont montré que les rats traités avec l'extrait de cistanche présentaient des niveaux plus élevés de lymphocytes, qui peuvent se différencier en cellules B et T, que ceux qui ne le faisaient pas. Par conséquent, il peut être prouvé que l'extrait de cistanche a pour fonction de renforcer l'immunité humaine.

Pic: Les effets du cistanche améliorent l'immunité

Discussion

Une réponse immunitaire adaptative à un agent pathogène est formée par le pool immunitaire d'origine et laisse sa marque sur les rencontres précédentes avec le même agent pathogène ou des variantes apparentées. L'étude de l'immunité existante contre le SRAS-CoV-2 peut faire progresser notre compréhension de l'immunité protectrice, de la sensibilité à l'infection, de la gravité de la maladie et guider le développement de stratégies de vaccination. Bien que diverses études aient fourni des preuves de l'immunité préexistante des lymphocytes T contre le SRAS-CoV -2, l'immunité préexistante des lymphocytes B reste à élucider.

Nous avons récemment isolé des anticorps réactifs au sars-cov-2 chez des personnes convalescentes et identifié des séquences de chaînes lourdes et/ou légères très similaires dans la banque de récepteurs de lymphocytes B naïfs à partir d'échantillons pré-pandémiques. Ici, nous montrons que certaines de ces chaînes peuvent devenir des composants d'anticorps réactifs au sars-cov-2 sans nécessiter de maturation d'affinité supplémentaire. Cette découverte confirme les observations précédentes selon lesquelles les réponses d'anticorps qui sont facilement détectées chez certains individus peuvent utiliser des chaînes lourdes ou légères d'anticorps existantes caractéristiques de différents modèles de recombinaison CDR3 ou séquences codantes de la lignée germinale. Dans cette optique, les anticorps neutralisants du SARSCoV-2 ont été isolés avec succès à partir de compartiments de cellules B naïfs en utilisant une classification des cellules B uniques spécifique à l'antigène ou une présentation sur phage. Feldman et al. isolé des cellules B naïves SARS-CoV-2 et réactives au Sarbecovire en utilisant successivement différents sous-domaines de protéines de pointe du SARS-CoV-2 comme sondes antigéniques. En utilisant cette approche, ils ont rapporté une fréquence médiane de 0.0025 % pour les lymphocytes B naïfs réactifs rbm. L'analyse de la séquence BCR a montré que les chaînes lourdes et légères utilisaient une variété de gènes polyclonaux, mais le gène de la chaîne lourde v IGHV 3-9 augmentait la fréquence de rétention moyenne de 20 %. Enfin, des anticorps monoclonaux ont été isolés à partir de précurseurs de lymphocytes B primitifs qui présentent une activité de liaison et de neutralisation contre la variante populaire du SRAS-CoV -2 et le virus du coronavirus dérivé de la chauve-souris. Bertoglio et al. a utilisé la technologie de phage display pour isoler l'anticorps candidat STE73-2E9 de la banque de cellules B d'origine. L'anticorps ciblait l'interface ACE2-RBD, n'a pas réagi de manière croisée avec d'autres coronavirus et a neutralisé le vrai virus de type sauvage SARS-CoV-2, avec une IC50 de 0,43 nM. Le polysaccharide cistanche et le créinoside peuvent augmenter l'activité enzymatique du tissu cardiaque et cérébral, améliorer la fonction de phagocytose des cellules de la cavité abdominale et améliorer la réponse proliférative des lymphocytes.

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Conclusion

Pour étudier l'immunité préexistante potentielle au niveau moléculaire, nous avons appliqué une classification unicellulaire spécifique à l'antigène à 40 donneurs et isolé un total de 8 174 cellules B supposées être réactives au sras-cov-2. Conformément à notre dépistage de liaison et de neutralisation des échantillons de plasma et des IgG polyclonales, la fréquence des lymphocytes B réactifs au SARS-CoV-2- dans les échantillons pré-pandémiques était très faible, en particulier par rapport aux échantillons de convalescence COVID-19. La sélection de protéines leurres appropriées pour le tri des cellules individuelles est cruciale pour l'isolement des cellules B spécifiques de l'antigène. La protéine leurre sélectionnée ne présente pas de structure immunogène et est exclue de l'isolement. Par conséquent, pour assurer l'isolement complet des lymphocytes B spécifiques à l'antigène, nous avons choisi d'appliquer la protéine S SARS-CoV -2 trimère complète native et d'ajuster la porte de tri. En ce qui concerne la faible fréquence des lymphocytes B réactifs au sars-cov-2 dans notre étude, on peut affirmer que l'application de protéines leurres alternatives, telles que la sous-unité S2, serait avantageuse. L'analyse de la séquence d'anticorps de cellules B réactives sars-cov-2 isolées a montré que le gène V de la chaîne lourde était utilisé différemment, que la longueur de CDRH3 était normalement distribuée et que l'identité phylogénétique du gène VH était similaire à celle du récepteur BCR naïf. bibliothèque d'individus sains échantillonnés avant la pandémie. En conclusion, les adultes en bonne santé n'ont pas un grand nombre d'immunité des cellules B contre le SRAS-CoV -2, mais une certaine période d'administration d'extrait de cistanche peut améliorer la fonction immunitaire humaine et augmenter le contenu des cellules B et des cellules T. Dans une certaine mesure, cela a ouvert une nouvelle voie pour le traitement et la prévention du COVID-19.

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