Que savez-vous de l'insuffisance rénale chronique ?
Mar 03, 2022
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Évaluation de l'albuminurie et de sa relation avec la pression artérielle chez les chiens atteints d'insuffisance rénale chronique
Angela Bacic1, Marcia M. Kogika1, et al
Mots clésAlbuminurie canine,maladie rénale chronique, ELISA, HTA,fonction rénale
Arrière planLa microalbuminurie et l'hypertension ont longtemps été associées à un pronostic réservé chez les patients humains atteints de diverses maladies. En médecine vétérinaire, les tests de microalbuminurie ont été utilisés pour détecter précocementlésions rénales, mais il existe peu d'informations concernant son association avec l'hypertension artérielle chez les chiens atteints demaladie rénale chronique(CKD). Objectif : L'objectif de cette étude était d'évaluer l'albuminurie et son association avec l'hypertension artérielle chez les chiens atteints d'IRC.
MéthodesLe rapport albumine urinaire : créatinine (UAC), le rapport protéine urinaire : créatinine (UPC) et la pression artérielle systolique ont été déterminés chez 39 chiens cliniquement sains et 40 chiens atteints d'IRC.
RésultatsL'UAC chez les chiens atteints d'IRC (plage, {{0}}.002–7,99 ; médiane, {{10}}.38) était statistiquement différente de celle des chiens témoins (plage, 0.0005–0.01 ; médiane, {{42} }.002). Une microalbuminurie (UAC 0,03–0,3) et une microalbuminurie (UAC 4 0.3) ont été détectées chez 32,5 % et 50 % des chiens atteints d'IRC, respectivement. Soixante pour cent (24/40) des chiens atteints d'IRC avaient une pression systolique Z180 mmHg ; chez ces chiens, le rapport UAC (intervalle, 0,006–7,99 ; médiane, 1,72) était significativement plus élevé que chez les chiens atteints d'IRC et de pression systolique o 180 mmHg (intervalle, 0,002–4,83 ; médiane, 0,10). Parmi les chiens hypertendus atteints d'IRC, ceux avec UPC 41,0 avaient généralement une macroalbuminurie, ceux avec UPC 0,5–1,0 avaient généralement une microalbuminurie et ceux avec UPC o 0,5 manquaient généralement d'albuminurie.
conclusionLe rapport UAC était plus élevé chez les chiens hypertendus que chez les chiens normotendus atteints d'IRC. Les tests conçus pour détecter la microalbuminurie peuvent être utiles pour les chiens hypertendus atteints d'IRC et d'un CUP 1.0 pour détecter l'apparition et l'ampleur de l'albuminurie. Une fois que la macroalbuminurie est manifeste, le rapport UPC lui-même peut être utilisé dans le même but.
Cistanche traite les maladies rénales
Introduction
La protéinurie a été impliquée comme médiateur indépendant de la progression demaladie rénale.1,2Chez les rats atteints de protéinurie induite expérimentalement et chez les humains atteints deinsuffisance rénale, l'ampleur de la protéinurie est corrélée avec le taux de progression deinsuffisance rénale.3,4 Récemment, la mortalité globale et le nombre de crises urémiques ont été associés à la protéinurie chez les chiens atteints demaladie rénale chronique(CKD).5
La microalbuminurie est généralement définie comme une albuminurie subclinique, c'est-à-dire un taux d'excrétion d'albumine anormalement élevé mais non détectable par des procédures de laboratoire standard telles que la méthode de routine de la bandelette réactive.6 Cela signifie que le taux d'excrétion d'albumine est supérieur au niveau normal mais inférieur au niveau protéinurique habituel. Chez l'homme, la microalbuminurie est reconnue depuis longtemps comme un facteur prédictif de protéinurie clinique tardive et d'insuffisance rénale terminale6ainsi que du développement de la néphropathie diabétique.7De même, la microalbuminurie peut précéder la protéinurie chez les chiens atteints de néphropathie héréditaire,8chez les chiens infectés par Dirofilaria immitis,9et chez les Wheaten Terriers à poil doux génétiquement prédisposés au développement de la maladie glomérulaire.10
La coexistence de l'hypertension et de la protéinurie a déjà été rapportée chez des chiens atteints d'hyperadrénocorticisme11–13et le diabète sucré,14,15mais aucun rapport n'a été publié sur l'association de la pression artérielle systémique avec la sévérité de la protéinurie et/ou de l'albuminurie chez les chiens atteints d'IRC. Whittemore et al16ont mentionné que chez les chats, il existe une association significative entre le rapport albumine urinaire: créatinine (UAC), l'hypertension et l'azotémie, et des résultats similaires seraient attendus chez les chiens, mais l'étude n'a pas étayé cette conclusion.
Il est essentiel non seulement de diagnostiquer l'albuminurie et/ou la protéinurie, mais aussi d'identifier et de contrôler les autres facteurs qui l'aggravent également.17–19Hypertension systémique, très probablement secondaire chez les chiensmaladie rénale,20peut entraîner une glomérulosclérose, une atrophie glomérulaire et une glomérulite proliférative. Les lésions artériolaires rénales hypertensives peuvent entraîner une dégénérescence tubulaire rénale et une fibrose interstitielle.21
Les tests semi-quantitatifs (p. ex. bandelettes réactives) sous-estiment souvent la protéinurie car les chiens atteints d'IRC ont généralement des échantillons d'urine dilués. D'autre part, le rapport UAC est fortement corrélé à la concentration d'albumine urinaire mesurée par la collecte d'urine chronométrée et corrige la variabilité de la diurèse et de la concentration urinaire.22,23 Chez l'homme, la microalbuminurie est définie comme 30–300 mg d'albumine/g de créatinine, avec un rapport UAC de 0,03–0,3 mg/mg.24,25Ainsi, le but de cette étude était de déterminer la prévalence et l'ampleur de l'albuminurie chez les chiens atteints d'IRC et d'étudier si l'hypertension est associée à l'augmentation de l'excrétion d'albumine. Pour atteindre cet objectif, un ELISA de capture quantitative a été développé pour quantifier l'albumine dans les échantillons d'urine de chiens atteints d'IRC, et le rapport UAC a été déterminé pour évaluer la sévérité de l'albuminurie.
Cistanche à améliorerfonction rénale
Matériaux et méthodes
Animaux
Toutes les procédures impliquant l'utilisation d'animaux ont été approuvées par le Comité d'éthique pour le soin et l'utilisation des animaux de l'École de médecine vétérinaire de l'Université de Sa˜o Paulo (protocole #378/2003). Le groupe témoin comprenait 39 chiens normotendus cliniquement sains des deux sexes (23 mâles et 16 femelles), âgés de 1 à 5 ans et de races différentes. Le groupe CKD comprenait 40 chiens (20 mâles et 20 femelles), âgés de 2 à 18 ans, et également de races différentes, avec un diagnostic clinique de CKD classé en stades 3 ou 4 selon la classification du système de stadification proposée par l'International Renal Interest Society.26 Les critères d'inclusion des chiens dans le groupe CKD étaient : les antécédents et les résultats de laboratoire complémentaires compatibles avec la CKD, y compris l'anémie non régénérative, l'isosthénurie et l'azotémie rénale chronique (concentration sérique de créatinine Z2,0 mg/dL pendant 4 2 mois chez les chiens hydratés), ainsi qu'aucune administration antérieure de médicaments antihypertenseurs.
Pression artérielle
La pression artérielle systolique a été mesurée à l'aide du détecteur de débit Doppler (Doppler Ultrasound Parks Medical Model 811B, Las Vegas, NV, USA). La largeur du brassard a été choisie pour être de 30 à 40 % de la circonférence du membre au site de placement. Pour cette étude, l'hypertension était considérée comme présente lorsque la moyenne d'au moins 5 mesures différentes effectuées successivement étaitZ180 mmHg.27 Les chiens ont été placés et gardés dans un environnement calme avec le propriétaire avant la procédure. Le même clinicien a effectué les mesures de la tension artérielle chez tous les chiens de l'étude.
Analyse d'urine
Des échantillons d'urine ont été recueillis aseptiquement par cystocentèse ou cathétérisme urétral, et soumis à une analyse d'urine complète, y compris une évaluation microscopique du sédiment urinaire. Les animaux dont les échantillons d'urine présentaient des signes macroscopiques d'hématurie et/ou des signes microscopiques de pyurie et de bactériurie ont été exclus. Des aliquotes de surnageant d'urine ont été congelées et conservées à -20°C pendant 1 an maximum pour la détermination ultérieure du rapport UAC.
Purification de l'albumine canine et immunisation des lapins
Tout d'abord, l'albumine canine lyophilisée (Fraction V, #A9263, Sigma, St Louis, MO, USA) a été purifiée davantage par chromatographie d'affinité sur des colonnes Blue Sepharose et Q-sepharose (GE Biotech, Piscataway, NJ, USA). Par la suite, 2 lapins ont été immunisés par voie intramusculaire avec
l'albumine purifiée dans l'adjuvant de Freund à des intervalles de quinze jours et l'IgG a été isolée du sérum.28
Électrophorèse et Western blot d'albumine canine purifiée
Western blot a été réalisé par modification d'un protocole précédemment décrit.29 En bref, des échantillons d'urine non réduite d'un chien en bonne santé et d'un chien atteint d'IRC, un échantillon de sérum d'un chien en bonne santé et de l'albumine canine purifiée ont été soumis à une électrophorèse dans des gels de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide à 11 %.30Les protéines ont été transférées sur des feuilles de membrane de nitrocellulose ({{0}}, taille des pores de 22 mm, Sigma) à 15 V pendant 2 h, à l'aide d'un système de transfert semi-sec (BioRad, Hercules, CA, USA). Les membranes ont été rincées avec un tampon de lavage (Tris 10 mM, NaCl 150 mM, 0,1 % [v/v] Tween 20, pH 7,5), puis incubées avec une solution de blocage (5 % [v /v] gélatine de peau de poisson d'eau froide [Sigma G7765] dissoute dans un tampon de lavage) pendant 18 h à 41C. Les membranes ont été incubées avec des anticorps dissous dans un tampon de lavage contenant 0,5 % (v/v) de gélatine de poisson pendant 2 h à température ambiante sous agitation. Pour évaluer la spécificité des anticorps dirigés contre l'albumine canine purifiée, les membranes ont été incubées avec des IgG totales de lapin anti-albumine canine. Après lavage, les bandelettes ont été incubées avec un conjugué IgG-peroxydase de chèvre anti-lapin (Sigma A6154) pendant 2 h à température ambiante sous agitation. Tous les anticorps et conjugués ont été dilués dans un tampon de lavage contenant 0,5 % (v/v) de gélatine de poisson. La réaction a été développée comme décrit précédemment.31
ELISA pour l'albumine canine dans les échantillons d'urine
Pour mesurer l'albumine dans les échantillons d'urine, des plaques de microtitration (Maxisorp-Nunc Immunoplate, Montréal, Canada) ont été enduites pendant une nuit à 41 C d'une solution à 100 mg/mL d'albumine anti-canine IgG de lapin dissoute dans 0. Tampon carbonate 1 M (pH 9,6), puis bloqué avec 3 % de caséine dissoute dans un tampon carbonate. Des courbes standard à six points pour l'albumine ont été construites en utilisant de l'albumine canine purifiée, diluée en série (à des concentrations de 250.0, 83,3, 27,8, 9,3, 3,1 et 1,0 ng/mL) en incubation tampon (0,05 % de Tween 20 et 0,6 % de gélatine de poisson dans une solution saline tamponnée au phosphate, pH 7,4). Les échantillons d'urine ont également été dilués de manière appropriée (1:100, 1:300, 1:500, 1:1000, 1:10,000 et 1:50 000) dans un tampon d'incubation afin que les réactions surviennent dans la plage linéaire de la courbe standard (1,03–250 ng/mL). Les échantillons et les standards ont été analysés en triple. Le même anticorps a été utilisé comme anticorps secondaire, mais il a été conjugué avec de la biotine29,32 et utilisé à une concentration de 3,15 ng/mL, dissous dans un tampon d'incubation. Les plaques ont ensuite été incubées avec 100 ng/mL de conjugué avidine-peroxydase (Sigma A3151) puis avec un réactif de développement de couleur frais, comme décrit ailleurs.33 La concentration d'albumine urinaire pour chaque échantillon a été extrapolée à partir de la courbe standard, et les résultats ont été corrigés pour la dilution initiale de l'échantillon.
Cistanche pourun rein
Rapports UAC et protéines urinaires : créatinine (UPC)
La concentration totale de protéines urinaires (mg/dL) a été mesurée à l'aide d'un test Coomassie G{{0}}34 ; chaque échantillon a été analysé en triple et les valeurs ont été obtenues à partir d'une courbe standard de points 8-(0.025, 0.075, {{16 }}.10, 0,50, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 et 3,0 mg/mL). La concentration de créatinine urinaire (mg/dL) a été déterminée à l'aide d'un dosage d'acide picrique35 sur un analyseur de chimie clinique automatisé (Liasys, AMS, Rome, Italie) et exécuté avec des contrôles de qualité (Precinorm Uplus et Precipath Uplus, Roche Diagnostics, Mannheim, Allemagne). L'UAC a été déterminée en utilisant la concentration d'albumine (mg/dL) obtenue par ELISA. Étant donné que toutes les analyses ont été rapportées en mg/dL, UAC et UPC ont été exprimés sans unités.
analyses statistiques
La distribution gaussienne a été étudiée en utilisant le test de Kolmogorov-Smirnov. Les ratios UPC et UAC n'étaient pas distribués normalement, de sorte que le test de Mann-Whitney a été utilisé dans les comparaisons. Le progiciel SigmaStat 3.1 (Chicago, IL, USA) a été utilisé pour l'analyse statistique. Les différences avec P < 0,05="" ont="" été="" considérées="" comme="" statistiquement="">
Résultats
L'albumine anti-canine IgG de lapin était spécifique de l'albumine canine purifiée basée sur le Western blot (Figure 1), car une seule bande protéique de masse moléculaire relative similaire à celle de l'albumine canine a été trouvée dans toutes les voies. Le protocole ELISA utilisé pour mesurer la concentration d'albumine dans les échantillons d'urine était extrêmement sensible, avec une limite de détection d'environ 0,5 ng/mL.
Le ratio UPC chez les chiens normotendus cliniquement sains (n {{0}} ; plage, 0.04–0.29 ; médiane, 0 .10) était significativement plus faible (P o.0{{30}}01) que chez les chiens atteints d'IRC (n=40 ; plage, 0,13–25,08 ; médiane, 1.86). Soixante-cinq pour cent (26/40) des chiens atteints d'IRC avaient un CUP 4 1.0, 20 % (8/40) avaient un CUP entre 0,5 et 1,0, et 15 % (6/40) avaient un CUP o 0,5 (tableau 1). La majorité (38/40, 95 pour cent) des chiens atteints d'IRC avaient un ratio UPC Z0,2.
Le ratio UAC chez les chiens cliniquement sains (plage, {{0}}.0005–0.01 ; médiane, 0,002) était également significativement plus faible (P < 0,0001)="" que="" chez="" les="" chiens="" atteints="" d'irc="" (intervalle,="" 0,002–7,99 ;="" médiane,="" 0,38)="" (figure="" 2).="" le="" rapport="" uac="" variait="" de="" 0,03="" à="" 0,3="" (microalbuminurie)="" chez="" 32,5 %="" (13/40)="" des="" chiens="" atteints="" d'irc="" et="" était="" de="" 4="" 0,3="" (macroalbuminurie)="" chez="" 50 %="" (20/40)="" des="" chiens="" atteints="" d'irc="" (tableau 1="">
L'hypertension a été détectée chez 24/40 (60 pour cent) chiens atteints d'IRC. Les chiens hypertendus étaient âgés de 2 à 18 ans (moyenne plus -ET, 9,1 plus - 3,7 ans), tandis que les chiens normotendus avaient entre 2 et 12 ans (7,9 plus - 3,3 ans ).
Considérant la microalbuminurie comme la plage UAC définie pour les humains ({{0}}.03–0,3), la microalbuminurie a été plus fréquemment détectée chez les normotendus (7/16, 43,7 %) que chez les hypertendus (6 /24, 25 pour cent) chiens avec CKD. À l'inverse, la macroalbuminurie a été plus fréquemment observée chez les chiens hypertendus (15/24, 62,5 %) que chez les chiens normotendus (5/16, 31,3 %) atteints d'IRC. Aucune albuminurie n'a été observée chez 3 chiens hypertendus sur 24 (12,5 %) et chez 4 chiens normotendus sur 16 (25,0 %) atteints d'IRC (tableau 1).
Le ratio UAC chez les chiens hypertendus atteints d'IRC (n {{0}} ; plage, {{10}}.006–7,99 ; médiane, 1,72 ) était significativement plus élevé (P =.0183) que chez les chiens normotendus atteints d'IRC (n=16 ; plage, 0,002–4,83 ; médiane, 0,10) (Figure 3). Une hypertension a été observée chez 6/13 (46,1 pour cent) des chiens microalbuminuriques et chez 15/20 (75 pour cent) des chiens macroalbuminuriques avec des chiens CKD. Aucune différence significative (P =.062) dans le rapport UPC n'a été observée entre les hypertendus (n=24 ; plage, 0,20–25,08 ; médiane, 3,07) et les normotendus (n=16 ; plage, 0,13–4,70 ; médiane, 1,10) chiens atteints d'IRC.
Discussion
Les ratios UAC obtenus chez des chiens cliniquement sains à l'aide de notre technique ELISA de capture quantitative étaient similaires à ceux rapportés pour les personnes en bonne santé36,37et les chats.38L'ampleur de l'albuminurie chez les chiens atteints d'IRC, telle qu'évaluée par l'UAC, était statistiquement plus élevée que celle des chiens témoins en bonne santé. Compte tenu du fait que les chiens atteints d'IRC ont été classés comme ayant les stades 3 et 4 de la maladie, la plus grande ampleur de l'albuminurie dans ce groupe pourrait être corrélée avec le taux de progression de la maladie rénale, comme cela a été démontré précédemment chez les rats et les humains.3,4
La moitié des chiens atteints d'IRC avaient des concentrations d'albumine dans l'urine dans la gamme macroalbuminurique comme on pouvait s'y attendre, mais 32,5 % des chiens atteints d'IRC étaient microalbuminuriques et 17,5 % étaient normoalbuminuriques. Par conséquent, dans ce dernier groupe, l'utilisation de méthodes de routine pour détecter la microalbuminurie pourrait présenter certains avantages. De plus, des tests de détection de la microalbuminurie pourraient être utilisés pour surveiller le traitement ainsi que pour suivre la progression de la maladie non seulement chez les chiens microalbuminuriques mais aussi chez les chiens normoalbuminuriques atteints d'IRC. L'utilisation de ces tests chez les chiens normoalbuminuriques pourrait aider les cliniciens à reconnaître l'apparition précoce de l'albuminurie et à introduire des mesures thérapeutiques adéquates dès qu'elle est détectée ; en revanche, chez les chiens microalbuminuriques, l'objectif serait d'ajouter de nouveaux médicaments au schéma thérapeutique et/ou d'augmenter la posologie des médicaments actuels pour réduire l'ampleur de l'albuminurie et donc retarder sa progression vers la macroalbuminurie.
The data reported herein that all dogs with CKD and macroalbuminuria also had a UPC>1.0 peut suggérer que lorsque la macroalbuminurie s'est déjà manifestée, les valeurs UPC peuvent être utilisées aux fins mentionnées précédemment puisque les chiens ont évolué vers une protéinurie manifeste ; il serait inutile d'utiliser des tests aussi sensibles que l'ELISA. La plupart des chiens CKD avec des ratios UPC entre 0.5 et 1.0 présentaient une microalbuminurie et la plupart de ceux avec UPC< 0.5="" were="" no="" albuminuria.="" these="" findings="" suggest="" that="" upc="" values="" between="" 0.5="" and="" 1.0="" reflect="" the="" presence="" of="" microalbuminuria.="" for="" upc=""><0.5, the="" specific measurement="" of="" albuminuria="" would="" be="" recommended to="" detect="" the="" initial="" development="" of="">
L'hypertension a été diagnostiquée chez 60 % des chiens atteints d'IRC, un résultat en accord avec les études précédentes.20,39,40Un pourcentage élevé (62,5 %) de chiens hypertendus souffraient d'IRC macroalbuminurique. Une pression artérielle systolique élevée était présente chez 46,1 % des chiens atteints d'IRC microalbuminurique. Étant donné que la protéinurie est associée à un risque accru de développement de la crise urémique, de progression de l'IRC et de décès,5 les traitements conçus pour diminuer l'hypertension pourraient ralentir la progression de l'insuffisance rénale et prolonger la survie des chiens hypertendus atteints d'IRC. La comparaison entre les valeurs UAC chez les chiens normotendus et hypertendus atteints d'IRC s'est avérée statistiquement significative, démontrant à la fois la relation probable entre ces paramètres et les effets indésirables qu'une pression artérielle systolique élevée pourrait avoir dans le développement de l'albuminurie, similaire à ce qui a été montré pour humains.41–43
Des questions pourraient être soulevées concernant les différences de valeurs UAC entre les chiens hypertendus et normotendus atteints d'IRC dans cette étude, car elles pourraient être attribuées à une répartition inégale des animaux ; cependant, tous les chiens étaient aux stades 3 et 4 de la maladie, et la gravité de l'anémie et de l'azotémie était similaire pour les deux groupes, ce qui correspond aux stades avancés de la maladie.
En médecine humaine, la découverte concomitante d'une microalbuminurie et d'une HTA incite généralement à adopter des stratégies thérapeutiques spécifiques. L'utilisation d'inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine chez les humains atteints de diabète sucré de type 1, d'hypertension et de microalbuminurie peut diminuer l'évolution progressive vers une protéinurie massive.44Ce même traitement est également bénéfique chez les diabétiques normotendus microalbuminuriques.45,46Chez les rats hypertendus avec restereins,le traitement par l'énalapril a maintenu la pression artérielle systémique à des niveaux normaux et a considérablement limité le développement de la protéinurie et des lésions glomérulaires.47Nos résultats indiquent que le dépistage de la microalbuminurie peut être utilisé comme outil de suivi pour évaluer la progression de la maladie et établir des approches thérapeutiques et préventives chez les patients canins, en particulier lorsque la microalbuminurie s'aggrave progressivement en raison de l'hypertension.
En conclusion, les ratios UAC chez les chiens hypertendus atteints d'IRC dans notre étude étaient plus élevés que ceux des chiens normotendus, ce qui suggère qu'une pression systolique élevée pourrait être associée à des modifications de la structure glomérulaire. Les tests conçus pour détecter la microalbuminurie peuvent être utiles chez les chiens hypertendus atteints d'IRC et d'UPC 1.0 pour détecter l'apparition de l'albuminurie ou pour surveiller la posologie des médicaments antihypertenseurs. Une fois que la macroalbuminurie est manifeste, le rapport UPC lui-même peut être utilisé dans le même but.
Cistanche pour améliorerfonction rénale
Remerciements
Soutenu par une subvention (#03/10,426-3) de la Fundaca˜o de Amparo a` Pesquisa do Estado de Sa˜o Paulo – FAPESP.
Divulgation : les auteurs ont indiqué qu'ils n'avaient aucune affiliation ou implication financière avec une organisation ou une entité ayant un intérêt financier dans, ou en concurrence financière avec, le sujet ou les matériaux abordés dans cet article.
De: 'Évaluation de l'albuminurie et de sa relation avec la tension artérielle chez les chiens atteints d'insuffisance rénale chronique» parAngela Bacic1, Marcia M. Kogika1, et al
-----Vet Clin Pathol39/2 (2010) 203–209 c 2010 Société américaine de pathologie clinique vétérinaire DOI :10.1111/j.1939-165X.2009.00207.x
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