Détermination HPLC de l’échinacoside à Cistanche Cistanche

Détermination PAR CLHP de l’échinacoside à Cistanche Cistanche

Pour plus information:ali.ma@wecistanche.com

Objectif:HpLC a déterminé la quantité deéchinacosidedansCistanchebroyé à l’état d’azote liquide ainsi qu’à l’état naturellement séché à l’air, en le comparant danscistanche sauvageetCistanche cultivé artificiellement.

Méthode:le système HPLC lc-20a (Shimadzu, Japon) a été utilisé. La colonne était YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5μm;YMC Co Ltd, Japon); Phase mobile: acétonitrile-méthanol-acide formique à 1% (10:15:75); Longueur d’onde de détection 334 nm; Débit 0,7 mg · ml-1. Température de la colonne 30 ° C.

Résultats:différentes conditions de traitement ont eu un effet très clair sur la teneur en échinacoside, avec des niveaux généralement plus élevés d’échinacoside dans le Cistanche broyé sous azote liquide que dans les sols dans des conditions naturelles séchées à l’air; La teneur en ingrédients actifs de la nature sauvageCistancheétait beaucoup plus élevé que celui de la culture artificielle.

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Cistanche est une espèce en voie de disparition, une plante parasite qui habite les racines de Clostridium, Salix rubrum. En Chine, le Cistanche est principalement distribué en Mongolie intérieure, au Ningxia, au Gansu et au Xinjiang, avec une excellente réputation pour le « ginseng du désert », qui est d’une grande valeur médicinale. Ses principaux ingrédients médicinaux sont les glycosides phényléthanoliques, qui peuvent être divisés en échinacoside, cohoside des feuilles, Cistanche et autres en fonction de leurs substituants. Parmi eux, l’échinacoside a amélioré la fonction sexuelle, les effets antioxydants et piégeurs de radicaux libres, mais a également des effets anti-apoptotiques. Depuis les années 1980, la technologie HPLC, qui fournit une méthode simple et rapide pour la séparation des glycosides phényléthanoliques, est largement utilisée dans la séparation des produits naturels. Une méthode HPLC a été choisie pour analyser le contenu de Cistanche, le principal constituant actif de Cistanche sauvage et cultivé artificiellement, à différentes périodes de croissance, fournissant une base scientifique pour le développement rationnel et l’utilisation de Cistanche et pour l’évaluation efficace de sa qualité.

Instruments et réactifs

Shimadzu, Japon appareil HPLC lc-20a, pompe tandem à double piston lc-20at, four à colonne cto-20a, détecteur spda-20a UV Vis à double longueur d’onde; Nettoyeur à ultrasons Kunshan kq-100; Acétonitrile (chromatographiquement pur, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Méthanol (chromatographiquement pur, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Acide formique (chromatographiquement pur, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); eau distillée

Contrôle: echineoside, teneur ≥ 98,43% (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Cinq échantillons de Cistanche: plantés artificiellement pendant un an avec le Cistanche suivant, plantés artificiellement pour Cistanche, Cistanche séché artificiellement, Cistanche sauvage et planté artificiellement pendant plus de trois ans avec Cistanche.

2 méthodes et résultats

2.1 détermination des conditions chromatographiques

Afin de séparer le pic de l’éthiénoside mesuré dans le chromatogramme LC des autres substances, ainsi que de contrôler la pression de la pompe et le calendrier pour être dans une plage appropriée, la modification expérimentale des conditions chromatographiques a été effectuée et, après des expériences d’optimisation avec la phase mobile, il a été conclu que plus la température était élevée, plus le temps de rétention est court et plus la concentration est faible, plus la pression de la pompe est courte et plus le temps de rétention est faible, mais la hauteur de crête est devenue plus faible, ce qui était défavorable pour la mesure. La phase mobile a finalement été déterminée comme étant l’acide formique acétonitrile-méthanol-1% (10:15:75), la longueur d’onde de détection 334 nm, le débit 0,7 mL / min et la température de la colonne 30 ° C, selon les conditions objectives de la température ambiante et la pression maximale de la pompe, ce qui a donné des informations abondantes avec des formes de pic nettes et une bonne séparation des constituants.

2.2 Détermination des colonnes

YMC-Inertsil ODS-SP(4,6 mm × 150 mm,5 μ m;YMC Co Ltd,Japon).

2.3 Préparation de la solution expérimentale

2.3.1 préparation de solutions étalons

Une quantité appropriée d’étalon d’echineoside a été pesée avec précision et enrichie en acide formique acétonitrile-méthanol-1% en phase mobile (10:15:75) pour obtenir 0,06 mg · ML - 1, 0,05 mg · ML - 1, 0,04 mg · ML - 1, 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1, et 0,005 mg · ML - 1 solutions d’échinacoside standard.

2.3.2 Préparation de la solution d’essai

Des quantités appropriées de Cistanche frais planté artificiellement (moins d’un an), de Cistanche artificiellement frais et de Cistanche frais sauvage ont été broyés en poudre à l’aide d’un mortier sous azote liquide; En outre, une quantité appropriée des 3 Cistanche ci-dessus a été coupée en blocs, séchée à l’air naturellement dans la ventilation à l’ombre et, après séchage, elle a été pulvérisée et broyée en poudre. La cistanche sèche artificielle et la cistanche sèche sauvage pendant trois ans ont été broyées directement dans la poudre. 0,5 g de poudre de Cistanche préparée ci-dessus a été prélevé et placé dans un tube de centrifugeuse, 25 ml de phase mobile ont été ajoutés, pesés et trempés pendant 30 min, soniqués pendant 40 min, refroidis puis pesés à nouveau pour compenser le poids manquant avec la phase mobile, secoués et centrifugés, et le surnageant a été pris pour une filtration membranaire microporeuse de 0,45 μ M.

2.4 diagrammes des courbes de régression pour l’échantillon standard d’échinacoside

Les échantillons étalons préparés d’echinéoside ont été injectés séparément dans l’appareil LC et la concentration du témoin (mg · L-1) a été utilisé comme abscisse, et les zones de pic correspondantes ont été coordonnées pour tracer la courbe standard, ce qui a donné l’équation de régression: y = 66 867 100x-46 360,83, R2 = 0,98637, ce qui a montré l’echineoside à 0,1 ~ 1,2 μg dans une bonne relation linéaire.

3 Discussions

L’échinacoside est l’un des principaux composants actifs de Cistanche, qui peut bien représenter la base chimique de l’effet pharmacologique de Cistanche, faisant correspondre l’évaluation de la qualité du matériel médicinal et son effet pharmacologique, et améliorant la pertinence de l’évaluation de la qualité Cistanche.

Les différentes conditions de traitement ont eu un effet clair sur la teneur en échinacoside, avec des niveaux généralement plus élevés d’échinacoside dans le Cistanche broyé sous azote liquide que dans ceux broyés dans des conditions naturelles séchées à l’air. Le séchage à l’air commun a diminué la quantité d’echineoside, qui aurait pu être consommée pendant le séchage à l’air ou convertie. Afin de prévenir la diminution de la teneur en ingrédients actifs et de garantir l’efficacité de Cistanche, un traitement approprié doit être sélectionné.

De manière constante, la plupart croyaient que l’environnement de culture artificielle de Cistanche ainsi que les habitudes de croissance étaient indiscernables de la nature sans différence de qualité, avaient tendance à mettre l’accent uniquement sur le rendement et n’analysaient pas la qualité. La présente étude a montré que la quantité d’échinacoside de Cistanche cultivé artificiellement était inférieure à celle de l’échinacoside de Cistanche sauvage. Le plus élevé était de 0,3360% de cistanche sauvage et le plus bas était de 0,007 0% de Cistanche artificielle. Par conséquent, il doit encore être étudié dans la technologie de culture pour améliorer la teneur en ingrédients actifs.

La qualité de Cistanche dépend de la quantité de son ingrédient actif, l’échinacoside, qui à son tour a une forte relation avec la saison, le moment et la méthode de récolte, de sorte que la récolte de Cistanche doit prendre en compte le statut d’accumulation de l’ingrédient actif et le stade de croissance et de développement. Tenez compte à la fois de la qualité et du rendement.

La méthode mentionnée dans cet article est simple, précise, reproductible et précise pour déterminer l’echineoside. Utile pour la détermination de Cistanche.