Inhibition de la prolifération des cellules rénales félines de Crandell-Rees par la sénescence induite par les rayons X
Mar 29, 2022
Contact : Audrey Hu Whatsapp/hp : 0086 13880143964 E-mail :audrey.hu@wecistanche.com
Manabu KOIKE1,2)*, Yasutomo YUTOKU1)et Aki KOIKE1)
ABSTRAIT.Une radiorésistance et une radiotoxicité ont été rapportées suite à des traitements anticancéreux chez les félins. L'optimisation des doses de rayonnement pour induire des effets cytotoxiques uniquement sur les cellules cancéreuses et non sur les cellules normales est essentielle pour obtenir une radiothérapie efficace ; Cependant, les mécanismes de résistance aux radiations, de radiotoxicité et de réponse aux dommages de l'ADN (DDR) dans les cellules félines n'ont pas encore été élucidés. Une cassure double brin de l'ADN (ORD) est le type le plus toxique deADNdommages induits par les rayons X et les faisceaux d'ions lourds utilisés dans le traitement des cancers. Félin Crandell-ReesUn rein(CRFK) sont l'une des cellules de chat les plus utilisées dans la recherche en sciences de la vie. Ici, nous rapportons queORD-la sénescence déclenchée par les rayons X est importante pour inhiber la prolifération desCRFKcellules. Nous avons démontré par un test de prolifération cellulaire que les rayons X aux doses 2 Gy et 10 Gy sont toxiques pourCRFKcellules que l'irradiation des cellules CRFK inhibe leur prolifération. Dans les cellules CRFK irradiées aux X, une augmentation dose-dépendante de la sénescence déclenchée par le DSB a été détectée en fonction des changements morphologiques et à l'aide d'un test de coloration à la galactosidase associée à la sénescence. De plus, nos données indiquent qu'enCRFKcellules, la principale voie DDR, qui implique la phosphorylation deH2AXà Ser139, était normalement activé par les kinases ATM. Nos découvertes sont utiles pour comprendre la sénescence cellulaire induite par les rayons X et pour élucider les effets biologiques du rayonnement, par exemple la toxicité, dans les cellules félines. En outre, nos résultats suggèrent que la lignée cellulaire CRFK est une excellente matrice pour élucider la radiorésistance et la radiotoxicité dans les cellules de chat.
MOTS CLÉS:chat, animal de compagnie, cassure double brin de l'ADN, irradiation, sénescence
Extrait de Cistanche deserticola : améliore le système immunitaire
Les animaux de compagnie jouent un rôle de plus en plus important dans la société humaine. En raison de l'allongement de la durée de vie des animaux de compagnie, le nombre de chiens et de chats âgés a augmenté et de nombreux chiens et chats reçoivent chaque année un nouveau diagnostic de cancer [26, 27]. La radiothérapie, qui est l'un des trois traitements majeurs du cancer, est de plus en plus utilisée dans les hôpitaux vétérinaires comme alternative pour le traitement du cancer chez les chiens et les chats [24, 26]. Pour obtenir la radiothérapie la plus efficace, il est important d'équilibrer la toxicité entre les cellules normales et les cellules cancéreuses. Pendant ce temps, bien que la radiorésistance soit observée chez les chats et les tumeurs du chat suite à une radiothérapie anticancéreuse, le mécanisme de cette résistance n'a pas encore été élucidé [24].
De nombreuses études sur les effets des rayonnements sur les cellules issues d'humains et de rongeurs ont été menées [6, 10, 23, 28]. L'ADN génomique est la principale cible biologique des thérapies utilisant des rayonnements tels que les rayons X et les faisceaux d'ions lourds. La rupture double brin (DSB) est le type le plus critique de dommages à l'ADN induits par les radiations. Diverses voies de réponse aux dommages à l'ADN (DDR), y compris la détection des dommages à l'ADN, la signalisation DDR et la réparation de l'ADN, sont activées lorsqu'un DSB se produit. En conséquence, les cellules se remettent des lésions causées par les radiations et l'ADN affecté est réparé avec précision et efficacité [8, 25]. Dans les cellules de chien et de chat, les DSB peuvent principalement être réparés par un mécanisme de réparation par jonction d'extrémité non homologue (NHEJ), qui induit la liaison des extrémités DSB de l'hétérodimère Ku, composé de Ku70 et Ku80 [14–17] ; cependant, d'autres études sont nécessaires pour clarifier cela. De plus, au stade précoce de la réparation, des kinases, telles que les kinases DNA-PK et ATM, sont activées et celles-ci phosphorylent Ser139 de l'histone H2AX près des sites DSB [5, 6]. Il est probable que les DSB activent des mécanismes de mort cellulaire programmée, y compris l'apoptose et la sénescence, lorsque les cellules ne peuvent pas être réparées [9, 32]. Les mécanismes moléculaires de divers DDR, tels que la réparation de l'ADN, dans les cellules de chat, ont été peu étudiés.
Le félin Crandell-Rees immortaliséUn rein(CRFK) est l'une des lignées cellulaires de chat les plus utilisées. La lignée cellulaire CRFK a été établie pour la première fois en 1964 à partir de laun reincortex d'un chaton femelle de 12-semaine [3]. Crandel et al. [3] ont décrit que la lignée cellulaire CRFK est utile dans la recherche sur les virus félins et la médecine diagnostique et est devenue particulièrement intéressante dans la recherche sur le cancer. Actuellement, la lignée cellulaire CRFK est indispensable dans la recherche en sciences de la vie, y compris la recherche sur le cancer et les virus. Ainsi, il est important de comprendre la radiosensibilité des cellules CRFK, dont les différentes voies moléculaires ont été analysées, pour obtenir des informations de recherche primaires pour élucider les mécanismes moléculaires des effets biologiques des rayonnements chez les chats. Cependant, il n'existe actuellement aucun rapport sur les effets et les mécanismes des rayonnements sur la prolifération des cellules CRFK.
Dans cette étude, nous avons étudié les effets biologiques des rayons X sur la prolifération des cellules CRFK. Nos résultats indiquent que les rayons X ont nettement supprimé la prolifération des cellules CRFK. De plus, nos résultats suggèrent que la suppression de la prolifération était due à une sénescence cellulaire accrue déclenchée par les DSB. De plus, nous avons confirmé dans les cellules CRFK que la voie principale DDR est normalement activée par les kinases ATM.
extrait de cistanche tubolosa : traitement des maladies rénales
MATÉRIAUX ET MÉTHODES
Cultures cellulaires, produits chimiques et rayons X
Les cellules CRFK (HSRRB, Osaka, Japon) ont été cultivées dans le milieu Eagle modifié de Dulbecco additionné de 10 pour cent de sérum bovin fœtal, comme décrit précédemment [17]. Les cellules adhérentes ont été irradiées avec des rayons X à 1, 2 ou 10 Gy et à un débit de dose de 0.71–0.77 Gy/min (200 kV/20 mA avec des filtres Al de 0,5-mm et Cu de 0,5-mm) en utilisant Pantak HF320S (Shimadzu, Kyoto, Japon) à température ambiante, comme décrit dans des études précédentes [17]. KU-55933, un inhibiteur de kinase ATM, a été acheté auprès de Wako Pure Chemical (Osaka, Japon). Le KU-55933 a été dilué dans du DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) et dilué dans un milieu de culture immédiatement avant utilisation.
Détermination du nombre de cellules viables
Le test d'exclusion au bleu trypan a été utilisé pour déterminer le nombre de cellules viables. Les cellules ont été ensemencées à une densité de 2,2 × 104 cellules par boîte dans des boîtes de 60-mm. Le lendemain, les cellules ont été irradiées aux rayons X et incubées pendant 5 jours après irradiation. Par la suite, les cellules ont été lavées avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), mises en suspension dans une solution de trypsine-EDTA (T3924, Sigma-Aldrich), collectées, centrifugées, colorées avec 0.4 % p/v de solution de bleu Trypan ( Wako Pure Chemical) ou 0,4 % de bleu Trypan (Bio-Rad, Hercules, Californie, États-Unis), et compté à l'aide du compteur de cellules automatisé TC10™ (Bio-Rad). Toutes les irradiations ont été réalisées en triple.
Immunoblot
L'extraction totale des protéines et l'analyse par Western blot ont été effectuées selon nos méthodes décrites précédemment [11, 17] avec les modifications suivantes. Les protéines totales ont été soumises à une électrophorèse sur Extra PAGE One Precast Gel 5–20 % (Nacalai Tesque, Kyoto, Japon) ou Super Sep ACE Gel 5–20 % (Wako Pure Chemical). Les produits fractionnés ont été transférés par électrophorèse sur des membranes Hybond-P (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, USA). Ensuite, les membranes ont été bloquées dans du Blocking One (Nacalai Tesque) pendant 60 min à température ambiante et incubées avec l'anticorps monoclonal anti-H2AX de souris (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc., Charlottesville, VA, USA) ou l'anticorps monoclonal d'actine de souris ( Sigma-Aldrich). Après lavage, les membranes ont été incubées avec l'Ac entier anti-souris IgG HRP-Linked (de mouton) (NA931) (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) pendant 60 min à température ambiante. L'immunotransfert a été réalisé à l'aide du système de détection Select Western Blotting (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.). Les bandes de protéines ont été visualisées à l'aide du système ChemiDoc XRS (Bio-Rad).
Immunocytochimie
L'immunomarquage a été réalisé comme décrit précédemment [12, 17] avec les modifications suivantes. En bref, les cellules cultivées ont été fixées dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant 3 0 min, perméabilisées avec du 0 0,5 % de Triton X-100 dans du PBS pendant 5 min, bloquées à l'aide d'une solution de blocage et incubées. avec l'anticorps monoclonal de souris anti-H2AX (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc.) pendant 60 min à température ambiante. Après avoir lavé les cellules avec du PBS, la détection a été effectuée à l'aide d'un anticorps secondaire conjugué Alexa Fluor 568- (Molecular Probes, Eugene, OR, USA) ou d'un anticorps secondaire conjugué à l'isothiocyanate de fluorescéine (Cappel Laboratories, Durham, NC, USA ). Ensuite, les noyaux ont été colorés avec 0,025 µg/ml de colorant fluorescent 4,6-diamino-2-phénylindole (DAPI) (Boehringer Mannheim, Mannheim, Allemagne). Les images des cellules ont été obtenues à l'aide du microscope à fluorescence Olympus BX51 (Olympus, Tokyo, Japon) équipé d'un appareil photo numérique (Olympus DP50, Olympus).
Test de coloration de la galactosidase associée à la sénescence (SA- -gal)
Pour ce test, des cellules (5 × 103) ont été étalées dans des plaques de 35- mm et colorées à l'aide du kit de coloration Senescence -Galactosidase (Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, USA) 5 jours après irradiation selon les instructions du fabricant avec les modifications suivantes. Les noyaux ont été colorés avec 0,025 µg/ml de colorant fluorescent DAPI. Des images des cellules colorées après 18 heures ont été obtenues à l'aide du microscope Olympus CKX41 équipé d'un appareil photo numérique (Olympus DP12, Olympus) ou à l'aide du microscope à fluorescence Olympus BX51 équipé d'un appareil photo numérique (Olympus DP50). Le pourcentage de cellules colorées positivement a été déterminé en analysant trois champs aléatoires d'au moins 100 cellules chacun à l'aide du logiciel Image J. La taille du noyau cellulaire a été déterminée en analysant trois champs aléatoires de 10 cellules chacun à l'aide du logiciel Image J. Toutes les irradiations ont été réalisées en triple.
Test d'apoptose annexine V/iodure de propidium (PI)
Les cellules (2, 2 × 104) ont été étalées sur des plaques de 60- mm et irradiées aux rayons X le lendemain. Cinq jours après l'irradiation, les cellules ont été récoltées et colorées avec une solution d'Annexine V Alexa Fluor 488-PI (Tali™ Apoptosis Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) conformément aux instructions du fabricant. Une dilution de 200- fois de la solution de coloration PI a été utilisée pour la coloration. De plus, des cellules apoptotiques marquées à l'annexine V ont été détectées à l'aide du cytomètre basé sur l'image Tali (Invitrogen). Toutes les irradiations ont été réalisées en triple.
analyses statistiques
Les résultats statistiques sont présentés sous forme de moyennes ± écarts-types (n{{0}}). L'analyse statistique excluant la taille nucléaire a été réalisée à l'aide de l'ANOVA et des tests de comparaison multiple de Ryan (ANOVA4 sur le WEB, https://www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/). La taille nucléaire a été évaluée par le test t de Student. Une valeur P inférieure à 0,05 était considérée comme statistiquement significative.
cistanche vivant dans le désert
RÉSULTATS
Inhibition de la prolifération des cellules CRFK par les rayons X
Pour étudier l'effet des rayons X sur la prolifération des cellules CRFK, une irradiation a été réalisée à 2 et 10 Gy. Comme le montre la figure 1, la prolifération cellulaire a été significativement inhibée de manière dose-dépendante (P<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">
Induction de DSB dans les cellules CRFK par rayons X
La phosphorylation de H2AX au niveau de Ser139 est l'une des principales et précoces DDR cellulaires des DSB [8, 20, 28]. H2AX est un biomarqueur de référence pour les DSB [8, 20, 28]. Auparavant, en utilisant le Western Blot, nous avons déterminé le changement d'expression de H2AX dans les cellules CRFK entre 1 h et 24 h après l'irradiation avec des rayons X à une dose unique de 10 Gy [17]. En conséquence, le niveau d'expression de H2AX était le plus élevé après 1 heure [17]. Pour examiner si la phosphorylation de H2AX a été induite de manière dose-dépendante dans les extraits totaux de cellules CRFK 1 h après l'irradiation, une analyse Western blot a été réalisée avec l'anticorps anti-H2AX. Comme le montre la figure 2A, l'analyse par Western blot a indiqué que l'expression de H2AX augmentait en fonction de la dose de rayons X. Ensuite, nous avons examiné si le foyer H2AX était détecté dans les cellules irradiées par un test d'immunocoloration utilisant l'anticorps anti-H2AX. Nos résultats ont indiqué que des foyers H2AX ont été formés dans les noyaux des cellules CRFK à 1 h post-irradiation (Fig. 2B).
Phosphorylation dépendante de l'ATMkinase de H2AXat Ser139 dans les rayons secondaires des cellules CRFK
L'un des rôles importants de l'ATGM kinase ou de l'ADN-PK dans la DDR déclenchée par les rayons X est de phosphoryler H2AX entourant les sites DSB dans diverses cellules humaines et de rongeurs [18, 29] ; cependant, un tel rôle n'a pas encore été étudié dans les cellules de chat, y compris les cellules CRFK. Pour confirmer si l'ATM kinase est responsable de la phosphorylation de H2AX induite par les rayons X au niveau de Ser139 dans les cellules CRFK, les cellules ont été incubées dans un milieu contenant l'inhibiteur de l'ATM kinase KU-55933 (10 µM) ou un solvant (DMSO) pendant 1 h avant l'irradiation (10 Gy). Comme le montre la figure 3, la formation de foyers H2AX a été inhibée dans les cellules irradiées en présence de KU- 55933. Ces résultats suggèrent que l'ATM est la principale kinase pour la phosphorylation de H2AX à Ser139 induite par l'irradiation dans les cellules CRFK.
Induction de la sénescence dans les cellules CRFK par rayons X
Pour déterminer si l'inhibition de la prolifération des cellules CRFK en réponse à l'irradiation est liée à la sénescence et à l'apoptose, les cellules ont été irradiées avec des rayons X à 2 et 10 Gy. Tout d'abord, 5 jours après l'irradiation, les cellules ont été analysées à l'aide de la coloration SA- -gal, un test de référence pour la sénescence. Nous avons observé des morphologies spécifiques à la sénescence telles qu'une forme cellulaire grande et plate (Fig. 4A) et des noyaux anormaux, y compris des noyaux élargis ou multinucléés (Fig. 4B), dans les cellules irradiées. De plus, dans les cellules CRFK irradiées, les cellules SA- -gal-positives ont nettement augmenté de manière dose-dépendante (Fig. 4A – C). Nous avons également analysé quantitativement l'agrandissement de la taille du noyau cellulaire, qui est un autre marqueur des cellules sénescentes. Comme le montre la figure 4D, la taille du noyau cellulaire était significativement plus grande dans les cellules CRFK irradiées (P<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">
Bienfaits pour la santé du cistanche : anti-cancer
DISCUSSION
Comprendre l'effet biologique du rayonnement sur les cellules de chat est important pour élucider la radiotoxicité et développer de nouveaux protocoles thérapeutiques pour le traitement du cancer. Dans la présente étude, nous avons constaté que la prolifération du chatun reinla lignée cellulaire CRFK a été significativement supprimée par les rayons X à des doses de 2 et 10 Gy. Ces résultats révèlent que les rayons X sont toxiques pour la croissance des cellules CRFK dans les conditions utilisées dans cette étude. De plus, les cellules sénescentes ont nettement augmenté dans les cellules CRFK irradiées. Pendant ce temps, nos découvertes ont révélé dans les cellules CRFK que la kinase ATM induit la phosphorylation de H2AX au niveau de Ser139, qui est l'un des principaux DDR aux DSB produits par les rayons X. Les DSB radio-induits pourraient induire la sénescence et l'apoptose dans les cellules humaines et de rongeurs [4, 22]. Nos résultats suggèrent que le mécanisme de sénescence activé par les DSB a contribué à supprimer la prolifération des cellules CRFK par les rayons X.
Le mécanisme sous-jacent à la différence de radiosensibilité entre les humains, les chiens et les chats et le mécanisme de réparation des cellules de chat n'ont pas encore été élucidés. Comme mentionné ci-dessus, nos données ont indiqué que le DDR dépendant de la kinase ATM est activé par les rayons X dans les cellules CRFK. De plus, cette étude et des études antérieures démontrent que les DSB induites par les rayons X dans les cellules CRFK peuvent être détectées par analyse Western blot et immunocytochimie en utilisant l'anticorps anti-H2AX disponible dans le commerce [17]. Ces résultats suggèrent que les cellules CRFK sont utiles pour clarifier les mécanismes moléculaires de la DDR dans les cellules de chat. Moor [24] a décrit que la radiothérapie pour les chats est différente de celle pour les chiens en termes de réponses tumorales et de toxicité tissulaire normale. Fujii et al. [7] ont montré que les fibroblastes des chats sont plus radiorésistants que ceux des humains dans une analyse de formation de colonies et que les foyers H2AX radio-induits peuvent être réparés plus rapidement et plus efficacement dans les fibroblastes félins. De plus, ils ont suggéré la possibilité que les dommages à l'ADN et aux chromosomes induits par les rayons X soient réparés plus efficacement dans les lymphocytes félins que dans les lymphocytes humains ou canins. Ces résultats suggèrent que les différences de radiorésistance chez les humains, les chiens et les chats pourraient être liées à la différence de réparabilité de l'ADN. Récemment, nous avons démontré à l'aide de cellules CRFK que les protéines de réparation NHEJ centrales, c'est-à-dire cat Ku70, Ku80 et XLF, s'accumulent aux sites DSB induits par le microlaser 405-nm [17]. Nous avons également mis en évidence que le recrutement de XLF chat, XLF humain ou XLF chien est dépendant de la présence de Ku [13, 14, 17] ; ces résultats confirment fortement que la régulation spatio-temporelle des principaux facteurs NHEJ, y compris Ku70, Ku80 et XLF, est importante dans la régulation de la réparation NHE [10, 19]. Collectivement, les cellules CRFK peuvent être utiles pour découvrir les mécanismes moléculaires qui sous-tendent non seulement les différences de radiorésistance entre les cellules de chat, de chien et humaines, mais également les DDR, y compris la réparation NHEJ dépendante de Ku qui y est conservée.
La transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT) est un mécanisme important pour la transformation maligne, par exemple, la modification de la résistance des cellules cancéreuses aux rayonnements et aux médicaments anticancéreux. Récemment, il a été rapporté que les cellules CRFK avaient les caractéristiques des fibroblastes, en particulier en ce qui concerne la morphologie, la biochimie et la biologie moléculaire, bien que les cellules CRFK aient été établies en tant que lignée cellulaire épithéliale [21]. De plus, van Beusekom et al. [31] ont rapporté que le TGF- 1 changeait la morphologie des cellules CRFK d'un phénotype épithélial à un phénotype fibroblastique et qu'il induisait de manière significative l'expression de certains gènes marqueurs EMT dans les cellules CRFK, suggérant que les cellules CRFK peuvent subir une EMT. Dans la présente étude, la sénescence est apparue plus importante que l'apoptose pour la suppression de la croissance dans les cellules CRFK irradiées. Dans l'ensemble, la lignée cellulaire CRFK peut être une excellente modalité non seulement pour élucider l'interrelation entre ou parmi la sénescence induite par les rayons X, la radiorésistance et/ou la radiotoxicité chez le chat.un reincellules épithéliales mais aussi pour élucider les effets de l'EMT contre les radiations et la chimiothérapie.
La thérapie pro-sénescence est une nouvelle stratégie anticancéreuse basée sur l'induction de la sénescence des cellules cancéreuses. Afin d'appliquer cette stratégie au traitement des chats, il est nécessaire d'élucider le mécanisme moléculaire de l'induction de la sénescence dans les cellules félines. En revanche, Li et al. [22] ont décrit que les agents sénolytiques, une classe de petites molécules capables de tuer sélectivement les cellules sénescentes, ont un grand potentiel pour réduire considérablement les effets secondaires causés par la radiothérapie tout en évitant raisonnablement la cancérogenèse. Récemment, il a été montré qu'un agent sénolytique ABT-737 élimine les cellules sénescentes induites par les rayonnements ionisants des poumons de souris irradiées [35]. Comme mentionné ci-dessus, nos données ont montré que les cellules sénescentes augmentaient nettement dans les cellules CRFK irradiées. Nos découvertes et d'autres études utilisant des cellules CRFK peuvent être disponibles pour la recherche fondamentale pour le développement non seulement d'une thérapie contre la prosénescence féline, mais aussi d'agents sénolytiques afin de réduire les effets secondaires causés par la radiothérapie.
CRFKest l'une des lignées cellulaires de mammifères les plus importantes et est largement utilisée dans des expériences, y compris celles sur des virus, tels que le coronavirus du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV) ou SARS-CoV-2 ; réparation de l'ADN et recherche sur le cancer chez les chats;chroniqueun rein maladie; et la production de vaccins [1, 2, 17, 30, 33, 34]. Les cellules CRFK peuvent être infectées par divers virus, y compris les oncovirus [1–3, 34]. Sur cette base, nous supposons que la lignée cellulaire CRFK pourrait convenir à la recherche fondamentale sur les changements de radiosensibilité induits par une infection virale et sur l'effet de la radiothérapie sur les tumeurs induites par une infection virale.CRFKpeuvent être utilisées pour élucider les mécanismes sous-jacents à la radiorésistance et à la radiotoxicité dans les cellules épithéliales rénales de chat et l'effet de l'infection virale sur la radiosensibilité. En conclusion, les cellules CRFK peuvent être d'excellentes lignées cellulaires pour mener des recherches sur la radiotoxicité chez les chats et des recherches fondamentales pour développer de nouvelles méthodes de traitement du cancer.
bienfaits pour la santé de la cistanche tubolosa
CONFLIT D'INTÉRÊT.Les auteurs ne déclarent aucun conflit d'intérêt.
REMERCIEMENTS.Ce travail a été réalisé avec le soutien des National Institutes for Quantum and Radiological Science and Technology, et du Department of Regulatory Biology, Faculty of Science, Saitama University.
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