Glycosides monoterpéniques iridoïdes et acycliques, kankanosides L, M, N, O et P de Cistanche Tubulosa

Cistanche tubuleuse(SCHRENK) R. WDROIT(Orobanchaceae) est une plante parasite vivace poussant sur les racines deSalvadorouCalotropisespèce, distribuée en Afrique du Nord, en Arabie et dans les pays asiatiques.1) Les tiges de cette plante (Kanka-nikujuyou en japonais) sont traditionnellement utilisées pour letraitement de l'impuissance, de la stérilité, du lumbago et de la faiblesse corporelleainsi qu'un agent favorisant la circulation sanguine.1,2) Lors de nos études sur les constituants bioactifs issus des tiges deC. tubuleuse, 3-6) nous avons précédemment signalé vingt-quatre aminoglycosides phényléthanoïdes, dont les kankanosides H1, H2, I, J1, J2, K1, et K2, et deux oligosucres acylés issus de tiges fraîches deC. tubuleuse. 5,6) Par ailleurs, le directeurglycosides phényléthanoïdes, échinacoside, acteoside et isoacteoside, se sont révélés inhiber l'augmentation des taux sériques d'aspartate aminotransférase (AST) et d'alanine aminotransférase (sel) dans le foie lésé des souris induite parD-galactosamine (D-GalN)/ lipopolysaccharide aux doses de 25-100 mg/kgper os(p.o.). Les exigences structurelles des glycosides phényléthanoïdes pour l'activité hépatoprotectrice ont également été élucidées.5) Dans cette étude continue sur les constituants des tiges fraîches deC. tubuleuse, nous avons en outre isolé onze glycosides iridoïdes, dont les kankanosides L (1), M (2), et n (3), sept glycosides monoterpéniques acycliques dont les kankanosides O (4) et P (5), trois phénylpropanoïdes et quatre lignanes. Cet article traite de l'isolement et de l'élucidation de la structure de cinq nouveaux composés (1-5).

CISTANCHE TUBULOSA NATUREL POUR SOULAGER LE DYSFONCTIONNEMENT SEXUEL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Des tiges fraîches de C. tubulosa (cultivées à Urumqi, province du Xinjiang, Chine) ont été extraites avec du méthanol sous reflux pour donner un extrait méthanolique (8,36 % des tiges fraîches). À partir de l'extrait méthanolique, les fractions éluées par H2O et MeOH (5,63 % et 2,73 %, respectivement) ont été obtenues par chromatographie sur colonne Diaion HP-20 (H2O → MeOH) comme décrit précédemment.5) La fraction éluée par MeOH a été soumis à des chromatographies sur colonne SiO2 et ODS et enfin à une HPLC pour fournir des kankanosides L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001 %), N (3, 0.00{{60}}7 %), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%), et P (5, 0 .0002 %), 6-désoxycatalpol3,7) (6, 0,197 %), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), gluroside3,7) (8, 0,0443%), kankanoside A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), acide mussaénosidique3,7) ( 10, 0,0056%), 8- acide épiloganique3,8) (11, 0,0023%), 8-acide épidésoxyloganique3,7) (12, 0,0004%), acide géniposidique3,7) (13, 0,0040% ), kankanoside E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,6-diméthyl-2,6-acide octadiénoïque3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 %), (2E,6E)-3,7-diméthyl-8-hydroxyoctadien-1-yl-ObD-glucopyranoside10) (16, 0,0082%), 8-hydroxygéraniol 8-O-bD-glucopyranoside11) (17, 0,0044%), bétulalbuside A12) (18, 0,0004%), coniférine13) (19, 0,0002%), syringine13) ( 20, 0,0015%), aldéhyde sinapique 4-ObD-glucopyranoside14) (21, 0,0001%), ( )-pinorésinol ObD-glucopyranoside4,8,15) (22, 0,0010%), eucommin A16) (23, 0,0002 %), isoeucommin A17) (24, 0,0010 %) et ( )-syringaresinol ObD-glucopyranoside4,8,18) (25, 0,0044 %).

Structures des Kankanosides L (1), M (2) et N (3)

Le Kankanoside L (1) a été obtenu sous forme de poudre blanche à rotation optique négative ([a]D 26 - 45,7 dans MeOH). Son spectre IR a montré une forte bande d'absorption à 3433 et 1{{20}}80 cm- 1 suggérant un fragment glycoside. Le bombardement atomique rapide (FAB)-MS de 1 exécution dans les modes d'ions positifs et négatifs a montré des pics d'ions quasimoléculaires à m/z 371 [M Na] et 347 [M- H]-, respectivement, et la formule moléculaire était déterminé comme C15H24O9 par mesure FABMS à haute résolution. L'hydrolyse acide de 1 avec 1,0 M d'acide chlorhydrique (HCl) a libéré du D-glucose, qui a été identifié par analyse HPLC à l'aide d'un détecteur de rotation optique. 3-6) Les spectres RMN 1 H et 13C de 1 (CD3OD, tableaux 1, 2), qui ont été attribués par diverses expériences de RMN,19) ont montré des signaux attribuables à quatre méthylènes [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= environ 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= environ 8 , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2.4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

Californie. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H chacun, tous deux d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], deux méthines [d 2,15 (1H, dd, J=7.2, 8,9 Hz, 9-H) et 2,23 (1H, m, 5-H)], et un groupe acétal [d 4,81 (1H, d, J{{28 }},9 Hz, 1-H)] avec un fragment b-glucopyranosyl [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Comme le montre la figure 1, l'expérience de spectroscopie de corrélation 1 H – 1 H (1 H – 1 H COSY) sur 1 a indiqué la présence de structures partielles écrites en traits gras. Dans l'expérience de corrélation hétéronucléaire à liaisons multiples (HMBC) sur 1, des corrélations à longue portée ont été observées entre les protons et les carbones suivants (1-H et 3-C, 8-C ; {{ 49}}H et 1-C ; 7-H et 8-C, 10-C ; }}H2 et 7-C, 8-C ; 1 -H et 1-C) comme le montre la figure 1. Ensuite, la stéréostructure relative de 1 a été caractérisée par une sensibilité à la phase. Expérience de spectroscopie nucléaire d'amélioration Overhauser (NOESY sensible à la phase), qui a montré des corrélations NOE entre les paires de protons suivantes (1- H et 3aH ; 3a-H et 4a-H ; 3b-H et 4b-H ; 4b-H et 5-H, 9-H 5- H et 6b-H, 9-H et 7-H ; et 10- H2), comme le montre la Fig. 1. Les spectres RMN 1 H et 13C de 1 étaient superposables à ceux du constituant principal iridoïde 6- désoxycatalpol (6), à l'exception des signaux dus au fragment saturé d-lactol. Enfin, l'hydrogénation de 6 a donné 1, de sorte que la stéréostructure du kankanoside L a été élucidée comme étant 3,4- dihydro-6-désoxycatalpol (1).

CISTANCHE TUBULOSA NATUREL POUR SOULAGER LE TROUBLE D'ÉVEIL DU COURRIER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Le Kankanoside M (2) a été obtenu sous forme de poudre blanche à rotation optique négative ([a]D 26 - 18,7 dans MeOH). Le spectre IR de 2 a montré des bandes d'absorption à 3433, 1736, 1655 et 1076 cm- 1 attribuables aux fragments hydroxyle, d-lactone, oléfine et éther. Le spectre FAB-MS à ions positifs de 2 a montré un pic d'ions quasimoléculaires à m/z 353 [M Na] , et la formule moléculaire a été déterminée comme étant C15H22O8 par mesure FAB-MS à ions positifs à haute résolution. L'hydrolyse acide de 2 avec 1,0 M de HCl a libéré du D-glucose. Les spectres 1 H- et 13CNMR de 2 (CD3OD, tableaux 1, 2) ont montré des signaux attribuables à quatre méthylènes [d 1,66, 2,11 (1H chacun, les deux m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H chacun, les deux m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2.8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H chacun, les deux d, J{{61 }}.1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], deux méthines [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], une oléfine [d 5,94 (1H, m, 7-H)] et un groupe lactone saturé (d C 174,9) avec un fragment bD-glucopyranosyl [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Comme le montre la figure 1, l'expérience 1 H – 1 H COSY sur 2 a indiqué la présence de structures partielles écrites en traits gras et, dans l'expérience HMBC, des corrélations à longue portée ont été observées entre les paires de protons et de carbone suivantes ({{ 103}}H et 1-C ; 7-H et 9-C ; 9-H et 1-C, 8-C ; }}H2 et 7-C, 8-C, 9-C ; 1 -H et 10-C). La stéréostructure relative de 2 a été caractérisée par une expérience NOESY sensible à la phase, qui a montré des corrélations NOE entre les paires de protons suivantes (3a-H et 4a-H ; 3b-H et 4b-H ; 4b-H et 5- H; 5-H et 6b-H, 9-H) comme le montre la figure 1. Ainsi, la stéréostructure de 2 a été élucidée comme indiqué.

Le Kankanoside N (3) a été isolé sous forme de poudre blanche à rotation optique négative ([a]D 25 - 24,6 dans MeOH). Dans le FAB-MS à ions positifs de 3, un pic d'ions quasimoléculaires a été observé à m/z 371 [M Na] . La formule moléculaire C16H28O8 a été déterminée par mesure FAB-MS haute résolution. L'hydrolyse acide de 3 avec 1,0 M HCl a libéré du D-glucose. Les données RMN 1 H et 13C (CD3OD, tableaux 1, 2) ont montré des signaux attribuables à un méthyle [d 1.07 (3H, d, J= 7,2 Hz, {{ 28}}H3)], quatre méthylènes {d 1,37, 1,87 (1H chacun, les deux m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H chacun, les deux m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9.1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5.9, 9,8 Hz), 11-H2] et [3,70 (1H, dd, J= 3.3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, quatre méthines [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] et un groupe hémiacétal [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] avec un fragment bD-glucopyranosyl [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101 }}H)]. La structure iridoïde de 3 a été clarifiée par des expériences 1 H – 1 H COSY et HMBC et la stéréostructure relative a été caractérisée par une expérience NOESY sensible à la phase, comme le montre la figure 1. Par conséquent, la stéréostructure de 3 a été élucidée comme indiqué.

CISTANCHE TUBULOSA NATUREL POUR RÉSOUDRE LES PROBLÈMES SEXUELS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Structures des Kankanosides O (4) et P (5)

Les Kankanosides O (4) et P (5), C16H26O8, ont également été obtenus sous forme de poudres blanches avec des rotations optiques négatives (4 : [a]D 23 - 26.1 ; 5 : [a]D 21 - 32. 7 tous deux dans MeOH). Les spectres IR de 4 et 5 ont montré des bandes d'absorption à 3433, 1696, 1647 et 1076 cm- 1 pour 4 et 3434, 1701, 1647 et 1{ {95}}76 cm- 1 pour 5, attribuable aux fonctions glycosidiques, carboxyle et oléfinique. Leurs spectres UV ont montré un maximum d'absorption commun à 217 nm, indiquant la présence d'un fragment acide carboxylique a, b-insaturé dans les deux cas. L'hydrolyse acide de 4 et 5 a libéré du D-glucose, tandis que par l'hydrolyse enzymatique avec la glucosidase, 4 et 5 ont donné (2E, 6E)-8-hydroxy-2,6-diméthyl{{37} },6-acide octadiénoïque20) (4a) et (2E,6E)-8-hydroxy-3,7- diméthyl-2,{{ 47}}acide octadiénoïque21) (5a), respectivement. Les données RMN 1 H et 13C de 4 (CD3OD, tableaux 2, 3) ont montré des signaux attribuables à deux méthyles [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], trois méthylènes {d 2,19 (2H, br t, J= environ 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7.6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6.2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} et deux oléfines trisubstituées [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Hz, 3-H)] avec une partie b-Dglucopyranosyl [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Par la comparaison des signaux carbone dans le spectre 13C-RMN de 4

avec ceux de 4a, un décalage de glycosylation a été observé en position 8- (d C 4 : 65,5 ; 4a : 59,4). La position de la liaison glucoside a également été confirmée par des expériences HMBC, comme le montre la figure 2. Par conséquent, la stéréostructure de 4 a été clarifiée comme étant (2E, 6E)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,{{ 16}}diméthyl-2,6-acide octadiénoïque. D'autre part, les données RMN 1 H et 13C de 5 (CD3OD, tableaux 2, 3) ont indiqué la présence d'un (2E,6E)-8-hydroxy{{30}} ,7-diméthyl-2,6-fragment acide octadiénoïque [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H chacun, les deux br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] avec une partie bD-glucopyranosyl [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. La connectivité du fragment bD-glucopyranosyl en 5 a été élucidée sur la base d'expériences HMBC, comme le montre la figure 2. De plus, un décalage typique de glycosylation a été observé pour les signaux en position 8- (d C 5 : 75,6 ; 5a : 68.8). sur la base des preuves mentionnées ci-dessus, la stéréostructure de 5 a été déterminée comme étant (2E,6E)-8-bD-glucopyranosyloxy-3,7-diméthyl-2,{{103 }}acide octadiénoïque.

Effets des constituants sur la cytotoxicité induite par le facteur de nécrose tumorale-a (TNF-a) dans les cellules L929

Le TNF-a est connu pour médier diverses lésions d'organes grâce à son induction de l'apoptose cellulaire. Dans le cas du foie, les effets biologiques du TNF-a ont été impliqués dans des lésions hépatiques induites par des toxines hépatiques, l'ischémie/reperfusion, l'hépatite virale et l'alcool.22-24) Par conséquent, le TNF-a est considéré comme étant une cible importante pour découvrir des agents anti-inflammatoires et hépatoprotecteurs. Sur la base du concept mentionné ci-dessus, nous avons étudié les constituants protecteurs de produits naturels sur la mort cellulaire induite par le TNF-a dans les cellules L929, une lignée cellulaire sensible au TNF-a.25) Précédemment, nous avons rapporté

que plusieurs constituants de Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) et Sapindus rarak, 36-38) présentaient des effets inhibiteurs de la cytotoxicité induite par le TNF-a dans les cellules L929. Étant donné que les constituants phényléthanoïdes de C. tubulosa (par exempleéchinacoside, acteoside et isoacteoside, etc.) 5) ont également inhibé cette cytotoxicité, nous avons ensuite examiné les constituants iridoïdes, phénylpropanoïdes et lignanes comme indiqué dans le tableau 4. En conséquence, le kankanoside A (9, inhibition : 16,3 ± 2, 0 % à 1 00 mM), acide mussaénosidique (10, 44,7 ± 8,7 %), 8-acide épigamique (11, 10,7 ± 0,4 %), 8-hydroxy géraniol 8-ObD- le glucopyranoside (17, 21,3 ± 2,4 %) et le ( )-pinorésinol ObD-glucopyranoside (22, 22,3 ± 1,6 %) se sont révélés montrer une activité significative. Bien que leurs activités soient plus faibles que celles de l'échinacoside (IC50= 31,1 mM), de l'acteoside (17,8 mM) et de l'isoacétéoside (22,7 mM), les principaux constituants phényléthanoïdes.5)

CISTANCHE TUBULOSA NATUREL POUR AMÉLIORER LA FONCTION SEXUELLE PHGS75% ECH 30% ACT 12%