Méthode d'identification des ingrédients actifs chimiques de Cistanche

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Identification des composants chimiques de Cistanche Deserticola à l'aide du système X500R QTOF

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Asia Pacific Application Support Center (Shanghai), Chine

Introduction

Cistanche désertiquea été enregistré pour la première fois dans le "Shen Nong Materia Medica"; il est également connu sous le nom de "Dayun", "Rousong Rong" et "Zong rong". En tant que plante médicinale traditionnelle, elle a les propriétés de nourrir le yang du rein, d'améliorer la circulation sanguine, d'agir comme laxatif, de stimuler le système immunitaire et d'autres effets[1]. En 1983, le chercheur japonais H. Kobayashi et d'autres ont commencé à étudier la composition chimique deCistanche Deserticola[2], et depuis lors, il est devenu un sujet populaire dans la recherche en médecine chinoise qui a suscité un grand intérêt tant au pays qu'à l'étranger au cours des 30 dernières années.Cistanche Deserticolaappartient à la classe des plantes contenant des composés phénoliquesglycosides, les iridoïdes et leursglycosides, et les lignanes et leursglycosides.

La spectrométrie de masse à temps de vol quadripolaire (QTOF) est un outil sensible et spécifique pour l'identification des composants de la médecine chinoise qui sont progressivement devenus indispensables à la recherche. Cette technologie a surmonté les défis techniques traditionnels avec des analyses rétrospectives d'injections uniques qui permettent l'extraction de données importantes et l'acquisition la plus complète d'informations sur les échantillons. L'utilisation de données de masse exacte et de haute résolution TOF-MS et TOF-MS/MS permet une analyse qualitative ciblée et non ciblée simultanée et hautement spécifique. Cependant, la complexité du fonctionnement de l'instrument et de l'utilisation du logiciel a considérablement limité la diffusion et le développement de cette technologie. Nous présentons ici un nouveau système QTOF qui utilise un nouveau chemin TOF révolutionnaire basé sur la géométrie de type N, un logiciel intuitif et des techniques de poids moléculaire précises qui sont plus faciles à utiliser dans l'identification des composants de la médecine chinoise.

Les avantages de cette méthode sont les suivants :

1. Le X500R utilise la conception durable et approuvée par l'industrie de la source d'ions Turbo VTM et de l'interface de gaz du rideau d'air, qui a une forte fonction anti-contamination;

2. Le logiciel SCIEX OS intègre des fonctions d'acquisition, de traitement et de création de rapports sur une plate-forme unique ; l'interface est intuitive, facile à maîtriser et dispose d'une correction d'ajustement automatique à une touche pour garantir que les analystes, quel que soit leur degré d'expertise, puissent obtenir des données fiables et de haute qualité ;

3. L'utilisation du logiciel SCIEX OS pour traiter les données afin d'identifier les composants de la médecine chinoise est simple et permet une extraction rapide des informations utiles, ainsi ;

4. Il dérive des résultats d'identification plus précis et plus fiables à partir des bibliothèques de médecine chinoise contenant des spectres MS/MS ;

5. Les bases de données de médecine chinoise MS/MS haute résolution sont basées sur les ingrédients actifs de la MTC de la partie 1 de la « pharmacopée chinoise » ; y compris les références de composants dans la pharmacopée et les ingrédients actifs dans les herbes, il existe près de 900 composés

cistanche deserticola améliorant l'efficacité

Processus expérimental

1. En utilisant le mode TOF-MS-IDA MS/MS, injectez un échantillon et obtenez simultanément les ions précurseurs primaires et les spectres secondaires correspondants ;

2. L'utilisation du dépistage ciblé du logiciel SCIEX OS, la confirmation des composés cibles et des spectres secondaires ainsi qu'un dépistage des normes de la médecine chinoise et des méthodes d'appariement peuvent augmenter la précision et la productivité du travail.

3. Le flux de travail d'identification non ciblée du logiciel SCIEX OS utilise des recherches dans la bibliothèque et des recherches complètes d'inconnus dans ChemSpider pour vérifier les résultats, garantissant ainsi l'identification d'un plus grand nombre de composants avec un flux de travail plus simple.

Échantillons et méthode de prétraitement

Source de l'échantillon :

Acheté dans les pharmacies de Shanghai sous forme de tranches

Méthode de prétraitement :

1. Les tranches ont été broyées pour former de la poudre ;

2. 0.9mg a été pesé et immergé dans 3mL de méthanol pendant 40min ;

3. L'échantillon de l'étape 2) a été passé aux ultrasons 1 h ;

4. La centrifugation et l'élimination du surnageant à utiliser comme échantillon ont été réalisées.

Conditions de chromatographie liquide (LC)

Colonne chromatographique : XSelect HSS T3, 2,1*150 mm, 3,5 µm ;

Phase mobile : l'élution par gradient a été utilisée

Phase mobile : A correspond à 00,1 % d'eau d'acide formique-2mM NH4FA

B est composé à 95 % d'acétonitrile-5 % d'eau-2mM NH4FA

Débit : 0.5mL/min

Température de la colonne : 40 °C

Quantité insérée : 5 µL

Méthode de spectrométrie de masse :

Méthode de numérisation : TOF MS-IDA-15 dépistage qualitatif MS/MS

Paramètres de la source d'ions ESI :

Gaz du rideau d'air CUR : 35 psi ; Tension SI : 5 500 V/-4500 V

Température source : 600 °C

Gaz d'atomisation GAS1 : 55 psi ; Gaz auxiliaire GAS2 : 60 psi

Recherche de mode d'instrumentation :

Une touche (sélectionnez MS Check en bas à droite), le mode de correction TOF-MS et TOF-MS/MS entièrement automatisé garantit que les analystes de tout niveau d'expertise peuvent obtenir des données précises, fiables et reproductibles.

BPC en mode ion positif et négatif :

Procédure d'identification des composés

1. Flux de travail d'identification de composants ciblés

1.1 : Recherche de formule moléculaire

Seuls le nom du composé chimique et la formule moléculaire sont requis ; ceux-ci peuvent être saisis directement ou importés à l'aide de la fonction copier-coller d'Excel pour créer une méthode de traitement

Une fois qu'un tableau de résultats est créé, les résultats quantitatifs et qualitatifs peuvent être visualisés dans la même fenêtre. Un système d'indicateurs rouge/vert est utilisé pour indiquer la précision de la masse, le temps de rétention, le type d'isotope et la confiance dans l'identification par correspondance de base de données.

Le logiciel SCIEX OS permet aux utilisateurs de filtrer les résultats et d'afficher uniquement les composés répondant aux critères d'acceptation et tombant dans les intervalles de confiance définis par l'utilisateur. Il peut trouver rapidement des résultats ciblés dans de grandes bases de données.

La base de données TCM des spectres MS/MS permet une correspondance secondaire et donne des résultats plus fiables (la couleur grise dans la base de données indique les données MS/MS)

La littérature contient des noms et des formules moléculaires de composés phénoliquesglycosideingrédients actifs. En utilisant le processus ci-dessus pour l'identification des composants cibles, il a été déterminé que l'échantillon contient 39 types de glycosides phénoliques :

Outre le phénoliqueglycosidecomposants actifs, Cistanche contient également un grand nombre de composés tels que des iridoïdes, des glycosides et des lignanes. Les résultats de l'identification sont les suivants :

La liste d'identification des iridoïdes, des glycosides et des lignanes :

1.2 : Recherche dans la base de données :

53 composés ont été obtenus à partir de l'identification correspondante dans la base de données TCM : 43 ions positifs, 22 ions négatifs et 12 répétitions, énumérés ci-dessous. En plus de l'actif phénoliqueglycosides, des iridoïdes, des glycosides et des lignanes, Cistanche contient également

2. Analyse des composants non ciblés

L'identification des composants non ciblés peut être effectuée avec la fonction de recherche intégrée de ChemSpider pour déterminer la classification et le type d'inconnus. Pour l'identification des composants non ciblés, choisissez simplement le mode "non ciblé" et la recherche de formule moléculaire développera une méthode de traitement. Le flux de travail est le suivant :

Pour les inconnus complets, les résultats de la recherche de formule moléculaire sont affichés dans une fenêtre de navigateur de pic dans la partie inférieure du spectre de masse TOF MS ; avec la recherche dans la base de données ChemSpider, les résultats sont classés par priorité et les informations structurelles obtenues dans ChemSpider sont automatiquement comparées au spectre MS/MS obtenu, fournissant une rétroaction secondaire pour une identification rapide.

Sommaire

1. Acquisition rapide de données à haute résolution ; une seule injection a donné des données TOF MS et MS/MS haute résolution, avec 39 composants actifs de glycosides phénoliques identifiables et 16 iridoïdes, lignanes et glycosides ;

2. Une base de données TCM de spectres secondaires fournit des informations de correspondance supplémentaires et le logiciel fournit automatiquement un score de correspondance de base de données. En utilisant le score, on peut facilement, rapidement et précisément identifier les composants de la médecine chinoise ;

3. L'appareil est simple et dispose d'une correction automatique à une touche pour garantir que les analystes, quel que soit leur degré d'expertise, puissent obtenir des données fiables et de haute qualité ;

4. La nouvelle version du logiciel SCIEX OS intègre l'acquisition de données, le traitement (quantitatif et qualitatif), l'affichage, la création de rapports et la gestion de la base de données. Il résout les difficultés auxquelles de nombreux utilisateurs sont confrontés avec une interface intuitive et facile à utiliser ;

5. Les flux de travail de dépistage ciblés et non ciblés sont simples et le guide de méthode intégré aide les utilisateurs à créer des méthodes avec précision et rapidité.

Références

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, pharmacopée de la RPC [S]. Pékin : Commission nationale de la pharmacopée, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei ; La recherche avance dans la composition chimique des plantes du genre Cistanche, "Chinese Herbal Medicine," Volume 34, No. 5, May 2003,473-476.