Les régimes de vaccination contre la chlamydia trachomatis Prime-boost à plusieurs composants induisent des réponses d'anticorps et de lymphocytes T et accélèrent l'élimination de l'infection dans un modèle de primate non humain
Jul 10, 2023
La mise au point d'un vaccin contre les maladies sexuellement transmissibles est une priorité internationale.Infections à Chlamydia trachomatispour lutter contre la propagation mondiale continue de l'infection. Leimmunisation optimalestratégie reste encore à élucider. Le but de cette étude était d'évaluerstratégies de vaccinationdans un modèle de primate non humain (PNH). Des macaques cynomolgus (Macaqua fascicularis) ont été immunisés après différentesimmunisation primairehoraires et par la suite contesté avec C. trachomatis SvD dans le tractus génital inférieur. Les antigènes d'immunisation comprenaient l'antigène protéique recombinant CTH522 adjuvanté avec du CAF01 ou de l'hydroxyde d'aluminium, l'antigène ADN MOMP et les antigènes vecteurs MOMP (HuAd5 MOMP et MVA MOMP).
Toutes les constructions antigéniques étaient hautement immunogènes, suscitant des réponses IgG systémiques significatives spécifiques de C. trachomatis. En particulier, les groupes vaccinés avec la protéine CTH522 ont élevé une IgG spécifique rapide et forte dans le sérum. La cartographie des épitopes spécifiques des lymphocytes B au sein du MOMP a montré que tous les groupes vaccinés reconnaissaient des épitopes proches ou dans les domaines variables (VD) du MOMP, avec une réponse VD4 cohérente chez tous les animaux. De plus, le sérum de tous les groupes vaccinés pourrait in vitro neutraliser à la fois SvD, SvE et SvF. Les réponses d'anticorps se sont reflétées sur les muqueuses vaginale et oculaire, qui ont montré des niveaux détectables d'IgG. Les vaccins ont également induit des réponses à médiation cellulaire spécifiques à C. trachomatis, comme le montrent la stimulation in vitro et la coloration intracellulaire des cytokines des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC). En général, les groupes vaccinés avec la protéine (CTH522) ont établi une réponse cellulaire T CD4 multifonctionnelle, tandis que les groupes vaccinés avec l'ADN et le vecteur ont également établi une réponse cellulaire T CD8. Suite à une provocation vaginale avec C. trachomatis SvD, plusieurs des groupes vaccinés ont montréélimination accélérée de l'infection, mais surtout le groupe ADN, boosté avec CAF01 adjuvanté CTH522 pour obtenir unCD4/CD8 équilibréRéponse des lymphocytes T combinée à uneRéponse IgG, montréélimination accélérée de l'infection.
MOTS CLÉS vaccin, infection,immunologie, bactéries, lymphocytes CD4/CD8,Chlamydia trachomatis
Introduction
Les infections génitales à Chlamydia trachomatis provoquent chaque année environ 131 millions de nouveaux cas dans le monde (1) et constituent un problème de santé mondial majeur en induisant potentiellementcomplications gravescomme le bassinmaladie inflammatoire, grossesses extra-utérines, etinfertilité(2, 3). Les antibiotiques offrent toujours un traitement efficace des infections à C. trachomatis. Cependant, puisque l'infection est asymptomatique dans jusqu'à 75 pour cent des cas, lela majorité des infections ne sont pas traitées, et la transmission n'est pas interrompue (3). Il est généralement admis que l'arme la plus efficace contre la propagation continue des infections à Chlamydia est un vaccin prophylactique (4).
Malgré plusieurs années de recherche, aucun vaccin n'est encore sur le marché. Cela est dû en partie au mode de vie biphasique complexe de C. trachomatis. Le cycle de vie biphasique unique de C. trachomatis, avec à la fois un stade intracellulaire et extracellulaire, défie le système immunitaire. On pense que l'immunité protectrice devrait consister en des réponses immunitaires à médiation cellulaire (CMI), en plus d'anticorps spécifiques au sérotype (5-13). De plus, générer une immunité muqueuse dans le tractus génital pose un défi supplémentaire pour un vaccin.
Dans la présente étude, nous avons testé différentes stratégies vaccinales dans un modèle d'infection à chlamydia NHP. Les stratégies visaient à induire des anticorps, des lymphocytes T CD4 et/ou une réponse des lymphocytes T CD8. De plus, certains des vaccins visaient à générer une réponse muqueuse. Les antigènes choisis pour cette étude étaient basés sur la Major Outer Membrane Protein. Tout d'abord, un antigène MOMP consensus (Con E) basé sur environ 1500 séquences de sérovar E ompA a été généré pour fournir une couverture épitopique élevée contre les souches de C. trachomatis les plus répandues (14). Deuxièmement, une protéine de fusion synthétique, CTH522, a été utilisée. CTH522 est une version recombinante et modifiée du MOMP, comprenant des immunorépétions hétérologues de régions VD4 de quatre sérovars génitaux Ct (D, E, F et G) (11). La stratégie derrière la protéine de fusion recombinante consiste à induire des réponses amplifiées aux épitopes protecteurs et à induire une protection inter-sérovar (11).
Une autre caractéristique clé de l'expérience actuelle était une évaluation parallèle de CTH522 dans deux systèmes adjuvants nettement différents (AlOH et CAF01), combinés à un rappel intranasal. Cette combinaison a été testée chez des souris et des mini-cochons où elle s'est avérée hautement immunogène en induisant des titres élevés d'anticorps neutralisants, de lymphocytes T CD4 plus producteurs d'IFN-g et en accélérant la clairance d'une infection génitale à C. trachomatis (11–13 , 15). En outre, cette comparaison reflétait un récent essai clinique pour la première fois chez l'homme où les deux formulations se sont avérées immunogènes et où CAF01 était supérieur pour induire des anticorps sériques neutralisants et des réponses immunitaires à médiation cellulaire Th1 (16). Pour induire de fortes réponses immunitaires cellulaires, et plus particulièrement des réponses de lymphocytes T CD8 combinées à des réponses de lymphocytes T CD4, une partie des animaux a reçu un rappel avec l'immunogène CT522/CAF01 après amorçage avec un vecteur Adeno pAL1112 (HuAd5-MOMP), un vecteur MVA pox, ou un ADN plasmidique pcDNA3.1 délivrant l'antigène MOMP Con E (14, 17). Les trois vecteurs se sont avérés immunogènes dans les PSN, et il a été récemment démontré qu'une stratégie d'immunisation combinant ces trois vaccins et une vaccination de rappel finale avec des réponses immunitaires supérieures induites par un antigène protéique avec adjuvant et améliorait systématiquement la clairance de C. trachomatis intravaginal chez une souris C. modèle d'infection trachomatis (14).
Dans la présente étude, nous démontrons que différentes combinaisons de stratégies d'immunisation à plusieurs composants avec des vaccins protéiques, des vaccins à ADN et des vaccins à vecteur viral recombinant dans un modèle de primate non humain (PNH) entraînent des réponses immunitaires distinctes. De plus, nous observons qu'un régime utilisant un amorçage d'ADN et une protéine (CTH522/CAF01) a stimulé la clairance bactérienne accélérée suite à une provocation génitale avec Chlamydia trachomatis.
Résultats
Tous les régimes de vaccination se sont avérés sûrs et ont induit des réponses systémiques significatives en anticorps
Au total, 30 macaques cynomolgus ont été vaccinés à la suite de différents régimes de vaccination de rappel comprenant à la fois des vaccins à base de protéines, d'ADN et de vecteurs et différentes voies d'administration, comme le montrent la figure 1 et les figures supplémentaires 6-10). Tous les animaux sont restés en bonne santé pendant l'étude et n'ont pas développé d'effets indésirables mesurables aux immunisations. De plus, nous n'avons observé aucune fluctuation significative du poids ou de la température des animaux (Figures supplémentaires 1, 2).
A des moments fixes après les immunisations, le sérum a été collecté et les taux d'IgG spécifiques de CTH522 dans le sérum ont été évalués par ELISA. Les 5 groupes vaccinés ont tous établi une réponse significative d'IgG CTH522 sérique (Figure 2). Cependant, la cinétique était légèrement différente dans les 5 groupes vaccinés. Tous les animaux des groupes CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 et CTH522/CAF01 plus IN ont élevé un titre IgG significatif après seulement 1 immunisation intramusculaire (IM), et le titre IgG est resté significatif jusqu'au dernier point d'échantillonnage (Figures 2A- C). Les taux sériques d'IgG ont augmenté légèrement plus lentement dans les groupes ADN plus CTH522 et vecteurs plus CTH522, où tous les animaux ont été séroconvertis à la semaine 8 et à la semaine 4, respectivement (figures 2D, E).
Les groupes CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 plus IN et CTH522/CAF01 ont augmenté de manière significative les IgG sériques après le 3e vaccin de rappel IM au cours de la semaine 16 (figures 2A C). Les groupes ADN plus CTH522 et vecteurs plus CTH522 ont augmenté de manière significative les taux d'IgG sériques après le rappel protéine/CTH522/CAF01 IM au cours de la semaine 20 (figures 2D, E). Aucune différence significative n'a été observée dans les réponses d'anticorps sériques après trois vaccinations IM avec CTH522 formulé avec l'adjuvant CAF01 ou AlOH (figures 2A, B), et les immunisations de rappel intranasales (IN) sans adjuvant dans le CTH522/AlOH plus IN et Les groupes CTH522/CAF01 plus IN n'ont induit aucune augmentation significative des titres d'anticorps IgG sériques (figures 2A, B).
La cinétique de la réponse des IgG sériques reflétait la cinétique/les niveaux dans les sécrétions vaginales, indiquant que les anticorps détectés sur la surface vaginale étaient probablement dérivés de la circulation. De même, les niveaux d'IgG oculaires ont également suivi les niveaux d'IgG sériques et, comme observé dans le sérum, ont montré que le rappel IM dans les groupes ADN/vecteur augmentait le titre d'IgG oculaire (Figure 3 supplémentaire).
Les réponses anticorps sériques sont dirigées contre les domaines variables 1, 3 et 4 de la séquence MOMP
Une élucidation plus poussée de la reconnaissance de l'épitope spécifique par les anticorps sériques, suite aux différents régimes de vaccination, a ensuite été évaluée. Le sérum a été analysé à la semaine 24, soit après les rappels intranasaux dans les groupes 1 et 2, et après les rappels IM dans les groupes ADN et vecteur (groupes 4 et 5). Ces analyses ont été réalisées avec une matrice de peptides couvrant CTH522, constituée de peptides de 15 mers avec un chevauchement de 14 acides aminés
FIGURE 1 Conception de l'étude. La figure montre les groupes, les vaccins et les voies d'administration (intramusculaire, IM, ou intranasale, IN) utilisés
FIGURE 2 (A–F) Réponses sériques des anticorps IgG CTH522. Des macaques cynomolgus ont été immunisés selon différents régimes de rappel (n=5 par groupe) et du sérum a été prélevé toutes les deux semaines. Les anticorps spécifiques CTH522 IgG dans le sérum ont été évalués par ELISA et exprimés ici en titre sur une échelle log10. Les pointes de flèches grises indiquent les vaccinations. Chaque ligne représente un animal. La signification statistique est indiquée par des astérisques *p < 0.05 et **p < 0.01.
Généralement, les peptides reconnus étaient situés à proximité et dans les domaines variables (VD 1,3,4) du MOMP. Le groupe CTH522/AlOH a même montré une certaine reconnaissance de la région VD2. Tous les animaux ont établi une forte réponse contre la région VD4 qui contient l'épitope VD4 neutralisant conservé (11). Le groupe ADN a montré la reconnaissance la plus étroite au sein des VD (Figure 3), tandis que le groupe vecteur a montré un schéma de reconnaissance légèrement plus large. Les groupes CTH522/CAF01 et CTH522/AlOH ont montré la reconnaissance la plus large, en particulier contre SvF et SvG.
Les anticorps sériques ont pu neutraliser SvD, SvE, SvF in vitro
Pour évaluer la capacité des anticorps induits par le vaccin à inhiber l'infection par C. trachomatis de ses cellules cibles, un test de neutralisation in vitro a été réalisé. À l'aide de ce test, nous avons examiné la neutralisation de SvD, SvE et SvF. Le sérum de la semaine 24 a été utilisé pour le dosage, et le sérum du groupe naïf a été utilisé comme contrôle. Les cinq groupes vaccinés ont montré une capacité à neutraliser les trois sérovars (Figure 4). Contre SvD, le groupe CTH522/AlOH plus IN a montré le titre de neutralisation de 50 % le plus élevé, tandis que contre SvE, le groupe ADN/CTH522, suivi de près par le groupe CTH522/AlOH plus IN, a montré les titres de neutralisation les plus élevés. Même si tous les groupes ont pu neutraliser le SvF, les titres de neutralisation de 50 % étaient légèrement inférieurs pour tous les groupes contre ce sérovar, par rapport au SvD et au SvE. Le groupe vecteurs plus CTH522 a montré les titres de neutralisation de 50 % les plus bas de tous les groupes vaccinés.
Différents régimes de vaccination ont induit des profils distincts de lymphocytes T
Pour évaluer les réponses des lymphocytes T induites par la vaccination, des PBMC ont été prélevés pendant la période d'étude et cryoconservés. Les PBMC de la semaine 0/baseline et de la semaine 22 ont été restimulés avec des pools de peptides (MOMP) et évalués pour les cytokines intracellulaires par coloration intracellulaire des cytokines (ICS) et cytométrie complémentaire. Les PBMC ont été colorées pour les marqueurs cellulaires suivants : CD3, CD4, CD8, CD154, CD137 et cytokines : IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }UN. La stratégie de déclenchement est illustrée dans les figures supplémentaires 4, 5. La stimulation des PBMC avec le pool de peptides MOMP a induit une réponse significative. Le pourcentage de cellules CD154 spécifiques à l'antigène plus CD4 plus T exprimant des combinaisons d'IL2, IFN-g et TNF-a a augmenté 2 semaines après la dernière immunisation (S22) dans tous les groupes vaccinés (Figure 5). La majorité de ces cellules T étaient multifonctionnelles en ce sens qu'elles exprimaient plusieurs cytokines. Le pourcentage de lymphocytes T CD137 plus CD8 spécifiques à l'antigène produisant des cytokines n'a augmenté que dans le groupe ADN et vecteur (W22) (figure 6, montrant la multifonctionnalité des lymphocytes CD137 plus CD8 plus T). Dans
FIGURE 3 Cartographie des épitopes sériques à la semaine 24. Des macaques cynomolgus ont été immunisés selon différents régimes d'amorçage (n=5 par groupe) et le sérum a été prélevé à la semaine 24. Réponses IgG de la matrice peptidique au CTH522 15mer se chevauchant Les peptides sont présentés sous forme de signal médian pour chaque groupe avec les peptides VD1 (orange), VD2 (vert), VD3 (bleu) et VD4 de SvD, E, F et G (rouge) surlignés en couleurs.
FIGURE 4 Neutralisation sérique in vitro de C. trachomatis SvD, SvE et SvF. Des macaques cynomolgus ont été immunisés selon différents régimes de rappel (n=5 par groupe) et le sérum a été prélevé après la fin du programme de vaccination (semaine 24). C. trachomatis SvD, SvE et SvF ont été incubés avec du sérum de chaque animal et la capacité des anticorps sériques à inhiber l'infection a été évaluée en incubant le mélange anticorps-bactéries sur des cellules HaK et en colorant les inclusions. La ligne noire montre SvD, la ligne grise montre SvE et la ligne pointillée gris foncé montre SvF. La ligne rouge pointillée indique le titre de neutralisation réciproque de 50 % de chaque sérovar.
FIGURE 5 Réponses des lymphocytes T CD4. Analyses multifonctionnelles semaine 22. Production de cytokines par CD4 plus lymphocytes T dosée par ICS. Les réponses multifonctionnelles après stimulation avec des pools de peptides chevauchants de MOMP sont représentées. La taille de chaque tarte est proportionnelle au pourcentage de cellules CD154 plus CD4 plus T exprimant au moins une cytokine, y compris IFN-g, TNF-a et IL -2, et les proportions de cellules exprimant IFN-g et /ou les cytokines TNF-a et/ou IL-2 sont affichées dans chaque tarte.
Élimination accélérée induite par la vaccination d'une infection vaginale à C. trachomatis SvD
Pour évaluer l'efficacité protectrice des réponses immunitaires induites par le vaccin, les animaux ont été confrontés à une infection vaginale avec 5x107 IFU de C. trachomatis SvD. Après l'inoculation, la charge vaginale de chlamydia a été déterminée par détection par PCR de l'ADN de chlamydia dans des écouvillons vaginaux (figure 7). L'infection a été éliminée chez tous les animaux à la semaine 5 dans le groupe ADN plus CTH522/CAF01 et le groupe Vecteur plus CTH522, à la semaine 6 dans le groupe CAF01/CTH522 et à la semaine 8 dans le groupe CTH522/Alum plus Groupe IN (Figure 7). Dans le groupe témoin, à la semaine 8, 80 % des animaux avaient éliminé l'infection et 1 animal restait PCR positif à la semaine 9. Le rappel IN dans le groupe CTH522/CAF01 plus IN n'a pas augmenté la protection (Figure 7). Un test du Log-rank (Mantel-Cox), comparant tous les groupes a montré une valeur P de 0,0994, et en comparant chacun des groupes individuellement aux groupes témoins, seul le groupe ADN-CTH522 a montré une valeur P inférieure à 0,05 (P valeur=0.0257).
Discussion
La présente étude a été conçue pour induire une immunité cellulaire (CD4 et CD8) combinée à une immunité humorale et pour adapter le phénotype de l'immunité adaptative avec des vaccins contre la chlamydia à base de MOMP. Nous évaluons l'immunogénicité et l'efficacité protectrice des stratégies d'immunisation combinées à plusieurs composants avec à la fois des vaccins protéiques (CTH522, Con E), un vaccin à ADN et un vecteur viral recombinant (MVA MOMP) et des vaccins à base d'adénovecteurs, chez un primate non humain ( modèle PSN).
Les données ont montré que tous les régimes d'immunisation étaient immunogènes et induisaient à la fois une réponse cellulaire et humorale consistant en des anticorps neutralisants (Figures 2-4). Le vaccin protéique CTH522 formulé avec CAF01 ou AlOH a montré une induction rapide d'IgG spécifique de l'antigène systémique (Figure 2). Nous n'avons pas observé de différences significatives entre les réponses induites par les vaccins adjuvantés AlOH et CAF01, ce qui est en accord avec les réponses observées chez l'homme avec ces adjuvants (16). Les régimes de vaccination par ADN et vecteur ont également induit des titres significatifs d'anticorps systémiques spécifiques de l'antigène, qui ont nettement augmenté après l'immunisation de rappel protéique (Figure 2). En accord avec nos résultats, une étude antérieure chez la souris a également montré que les régimes de vaccination protéique induisaient des niveaux d'anticorps spécifiques à l'antigène plus élevés par rapport à l'ADN et aux antigènes vaccinaux vecteurs et augmentaient également efficacement les titres pour ces groupes (15).
MOMP contient quatre VD qui sont exposés à la surface de la forme infectieuse de Ct. Ces régions sont la cible principale de l'immunité dépendante des anticorps, à la fois par le biais d'anticorps neutralisants et de l'immunité médiée par le récepteur Fc (18). Des études antérieures ont montré que le transfert adoptif de sérum neutralisant induit par le vaccin réduisait considérablement l'excrétion bactérienne précoce après une infection à C. trachomatis (6, 11, 19-21). Ainsi, les anticorps semblent jouer un rôle dans la neutralisation/contrôle de l'inoculum initial, probablement en coopération avec l'immunité cellulaire. Par cartographie détaillée des épitopes des cellules B, nous avons trouvé la reconnaissance des régions VD 1, 3, 4 dans tous les groupes de vaccins. Les groupes ADN et vecteur ont également reconnu les régions VD1, 3 et 4. Cependant, ces groupes ont montré une reconnaissance légèrement plus étroite au sein de ces VD par rapport aux groupes CAF01 et AlOH, reflétant probablement que l'antigène Con E dans les groupes de vecteurs ne contient pas la région VD4 de SvF et G (Figure 3). La reconnaissance de la région VD4 était corrélée à la capacité de toutes les stratégies vaccinales à induire des anticorps neutralisants contre SvD, SvE et SvF.
L'immunisation parentérale avec CTH522 dans CAF01 et AlOH a induit des niveaux significatifs d'anticorps muqueux (IgG) dans le tractus génital et les yeux et des niveaux corrélés aux titres sériques (Figure supplémentaire 3, semaine 18). Les vaccins à ADN et à vecteur seuls n'ont pas induit d'IgG muqueuse, ce qui reflète les titres sériques inférieurs par rapport aux protéines seules. Cependant, suite au rappel IM CTH522/CAF01, ces groupes ont augmenté de manière significative les Ac sériques. niveaux et des IgG vaginales et oculaires, au même niveau que la protéine seule (Figure supplémentaire 3, semaine 18). L'évaluation parallèle de CTH522 dans les différents systèmes d'adjuvants d'amorçage (AlOH et CAF01) suivie de deux rappels intranasaux avec l'antigène n'a eu aucun effet de rappel sur les taux d'anticorps muqueux (Figure supplémentaire 3, semaine 22). Ainsi, les taux sériques globaux d'IgG se reflètent sur la muqueuse pour tous les groupes. Un récent essai de phase I sur l'homme a également évalué l'évaluation parallèle de CTH522 dans AlOH et CAF01, suivie d'un double rappel intranasal. Ici, les titres d'IgG muqueux étaient également bien corrélés avec les concentrations sériques d'IgG (16). Cependant, contrairement aux résultats du modèle NHP, l'essai sur l'homme a montré l'effet de la stimulation de l'IN dans le groupe CAF01, entraînant des niveaux élevés d'IgG et d'IgA. Malheureusement, l'évaluation des IgA n'a pas été possible dans l'étude actuelle, en raison du matériel limité et des faux signaux positifs résultant d'un anticorps secondaire à réaction croisée utilisé dans le test. Les deux études ont utilisé le dispositif VaxINator, qui est conçu pour atomiser les médicaments nasaux pour l'adsorption muqueuse. Cependant, la cavité nasale des humains est beaucoup plus spacieuse que celle des PSN et on pourrait supposer que cela pourrait influencer la distribution et l'absorption uniformes des antigènes.
Plusieurs études chez l'homme et chez le rongeur ont démontré l'importance de l'immunité des lymphocytes T Th1 et de la cytokine effectrice IFN-g (8, 22-27). En revanche, on en sait moins sur le rôle protecteur des lymphocytes T CD8 (28–33). Tous les groupes vaccinés ont induit des lymphocytes T CD4, mais seuls les groupes ADN et vecteur ont montré une réponse des lymphocytes T CD8 (figures 6 et 7). Sur la base des cytokines mesurées, les lymphocytes T CD8 étaient composés d'un nombre limité de sous-ensembles par rapport aux lymphocytes T CD4, qui pouvaient être divisés en 6 sous-ensembles ou plus, dont la plupart produisaient plusieurs cytokines (Figure 7). Les lymphocytes T CD4 présentaient plus de sous-ensembles exprimant l'IL-2- que les lymphocytes T CD8, qui ne comprenaient principalement qu'un seul sous-ensemble exprimant l'IL-2-, celui qui exprimait l'IL-2 avec l'IFN-g et le TNF- a (Figure 6). Les lymphocytes T CD8 étaient dominés par une grande population produisant uniquement de l'IFN-g, tandis que l'autre sous-ensemble de lymphocytes T CD8 dominants produisait à la fois de l'IFN-g et du TNF-a. Ce schéma de cytokines parmi les lymphocytes T CD4 et les lymphocytes T CD8 n'est pas sans rappeler ce qui a été observé chez la souris, lors des tests de stratégies vaccinales capables d'induire à la fois les lymphocytes T CD4 et CD8 (34).
Une stratégie similaire impliquant une vaccination par ADN suivie d'un rappel avec des complexes immunostimulants (ISCOM) de la protéine MOMP (35) a induit une forte protection contre l'infection pulmonaire à Chlamydia muridarum. Dans cette étude, l'ADN MOMP (ou MOMP/ISCOMS) a induit une protection significativement moindre (35). Une autre étude a montré que la vaccination de souris avec des plasmides ADN MOMP, sans vaccin sous-unitaire, n'a pas réussi à protéger contre une provocation génitale à C. trachomatis (36), indiquant que la stratégie ADN bénéficie d'être complétée par un vaccin sous-unitaire induisant des cellules T CD4 et des anticorps. . Il convient de noter que les vaccins à ADN ont montré des profils d'immunogénicité relativement faibles dans les essais cliniques humains, qui pourraient devoir être abordés dans de futures études (37).
Bien que la dose d'infection Ct utilisée dans cette étude soit supérieure à la dose subie par une infection naturelle chez l'homme, elle a été sélectionnée pour s'assurer que tous les animaux étaient infectés, ce qui est important compte tenu du petit nombre d'animaux dans chaque groupe. La dose est conforme à la dose utilisée dans les études précédentes, qui variait de 106 à 108 (38, 39). La réduction de la dose dans notre modèle a entraîné une variation accrue concernant la prise d'infection (données non présentées). Des doses plus faibles administrées à plusieurs reprises ont également été utilisées (40, 41). Cependant, ce n'est pas un protocole optimal lorsque l'objectif est de tester l'efficacité protectrice des vaccins, en particulier si l'immunité naturelle assure la protection avant la fin du protocole d'infection. On peut supposer que l'utilisation d'une dose élevée peut nécessiter une réponse immunitaire qui contient tous les bras du système immunitaire, tels que les lymphocytes T CD4 spécifiques à l'antigène, les lymphocytes T CD8 ainsi que des anticorps neutralisants, afin de pouvoir réduire la bactérie. les niveaux. Cela expliquerait également pourquoi les anticorps neutralisants induits dans tous les groupes n'ont pas conduit à une protection significative dans tous les groupes [bien que nous ayons remarqué une tendance à une protection précoce dans la plupart des groupes, où les anticorps sont censés jouer un rôle (Figure 7)] . Nous essayons actuellement de développer un modèle plus pertinent physiquement.
Ensemble, nos données ont montré que l'antigène CTH522 formulé dans l'adjuvant CAF01 ou AlOH peut induire à la fois des lymphocytes T multifonctionnels et des anticorps neutralisants dans les PSN. De plus, nos résultats suggèrent qu'une stratégie vaccinale hétérologue consistant en un vaccin à ADN et un vaccin sous-unitaire CTH522/CAF01 représente une stratégie vaccinale prometteuse pour l'induction d'une réponse immunitaire multiforme avec un niveau élevé d'Ac neutralisants combinés à de fortes réponses des lymphocytes T CD4 et CD8 qui peut considérablement accélérer la clairance d'une infection à C. trachomatis.
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