Nouveaux glycosides phényléthanoïdes de Cistanche Tubulosa (SCHRENK) HOOK. FI

HIROMI KOBAYASHI. HIROKO OGUCHI, NOBUO TAKIZAWA, TOSHIO MIYASE, AKIRA UENO, KHAN USMANGHANI et MANSOOR AHMAD

Laboratoires centraux de recherche, Yomeishu Seizo Co., Ltd., 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japon, Shizuoka College of Pharmacy,2-2-1 Oshika, Shizuoka- shi 422, Japon et Département de pharmacognosie, Faculté de pharmacie, Université de Karachi,c Karachi-32, Pakistan

Contact:joanna.jia@wecistanche.com

Résumé

Quatre nouveauxphényléthanoïdeglycosides, les tubulosides A (II), B (VI), C (VII) et D (VIII), ont été isolés deCistanchetubuleux(SCHRENK) CROCHET. F. (Orobanchaceae), ainsi que quatre connusphényléthanoïdeglycosides, échinacoside (I), actéoside (III), isomère d'actéoside (IV) et 2'-acétylactéoside (V). Les structures de II, VI, VII et VIII ont été établies sur la base de preuves chimiques et de données spectrales. Les composés VII et VIII possèdent un fragment triacétyl rhamnosyle en tant que sucre terminal.

Cistanchephényléthanoïde glycosideAvoir de nombreux avantages pour la santé

Mots clés:Cistanchetubuleux; Orobanchacées; plante parasite;phényléthanoïde glycoside; tubuloside A; tubuloside B; tubuloside C; tubuloside D

Dans notre série d'enquêtes sur les constituants chimiques de Cistanche spp. (Orobanchacées), laphényléthanoïdeglycosides 1-3) et iridoide4) de Cistanche salsa (CA MEY.) G. BECK a été signalé. Le présent article traite des glycosides phényléthanoïdes de Cistanche tubulosa (SCHRENK) HOOK. F. collectés au Pakistan. Cistanche tubulosa (SCHRENK) CROCHET. f.5) est une plante parasite qui pousse sur les racines de Salvadora et de Calotropis spp., et est largement répandue en Afrique du Nord, en Arabie, en Asie occidentale jusqu'au Pakistan et en Inde. La plante entière est utilisée en médecine au Pakistan comme remède contre la diarrhée et les plaies.6)

Nous souhaitons maintenant signaler l'isolement de quatre nouveauxphényléthanoïdeglycosides, nommés tubulosides A (II), B (VI), C (VII) et D (VIII), ainsi que quatre glycosides phényléthanoïdes connus, l'échinacoside (I), l'actéoside (III), l'isomère d'actéoside (IV) et 2' -acétylactéoside (V). Les structures de ces composés ont été déterminées sur la base de preuves chimiques et d'études spectroscopiques.

PhényléthanoïdeGlycosidesdanscistanchepeut anti-inflammatoire

L'extrait éthanolique de la plante entière a été mis en suspension dans l'eau. Cette suspension a été extraite avec de l'acétate d'éthyle puis avec du n-butanol saturé d'eau. La fraction soluble dans le n-butanol a été chromatographiée sur des colonnes de polyamide et de gel de silice et soumise à une chromatographie liquide à haute performance (HPLC) successivement, pour donner huitphényléthanoïdeglycosides(I-VIII).

Les composés I, III, IV et V ont été isolés sous forme de poudres amorphes, montrant des spectres similaires à ceux de l'échinacoside,1) l'actéoside,1) l'isomère de l'actéoside7) et le 2'-acétylactéoside,2) respectivement, et ont été identifiés par comparaison directe avec des échantillons [chromatographie sur couche mince (TLC), infrarouge (IR), résonance magnétique nucléaire du proton (RMN-1H) et spectres de résonance magnétique nucléaire du carbone-13 (RMN-13C)].

Le tubuloside A (II) a été isolé sous forme de poudre amorphe, [ƒ¿]D{{0}}.7•‹ (MeOH), C37H48O21.3/2 H2O. Le spectre IR suggère la présence de groupes hydroxyle (3 440 cm-1), d'un ester conjugué (1 705 cm-1), d'une double liaison (1 634 cm-1) et de cycles aromatiques (1 608, 1522 cm-1), et le spectre ultraviolet (UV) a montré des maxima d'absorption à 220, 250 sh, 292 sh et 334 nm. Le spectre 1H-RMN de II a montré des signaux d'un groupe méthyle de rhamnose [6 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], un signal méthyle d'un groupe acétoxyle [{{27} }.98 (3H, s)], protons de méthylène benzylique [6 2.70 (2H, t, J= 7 Hz)], deux protons anomériques de glucose [6 4.32, 4,54 (1H chacun, d, J= 8 Hz)], un proton anomérique rhamnose [6 5.11 (1H, br s)], deux protons trans oléfiniques [6 6.25 , 7,64 (1H chacun, d, J= 16 Hz)] et les protons aromatiques [6 6.5 7 .2 (6H)]. Lors de l'acétylation, II a donné le sous-acétate (IIa), qui était identique à l'acétate de dodéca de l'échinacoside (I). Le spectre 13C-RMN de II était presque identique à celui de I, à l'exception des signaux dus au glucose lié directement à l'aglycone et au groupe acétoxyle [6 20.9 (CH3), 171,5 (C {{62 }})], suggérant que le groupe acétoxyle est attaché au fragment glucose. Dans le spectre 13C-RMN de II, l'acylation se déplace81 [-2.3 (C-1),-0.9 (C-2) et-1 .0 (C-3)] ont été observés à C-1, C-2 et C-3 du glucose interne par comparaison détaillée avec le spectre de I, indiquant que le groupe acétoxyle est lié au groupe hydroxyle C-2 du fragment glucose dans II. Lors de la méthanolyse de II avec du chlorure d'acétyle dans du méthanol, du caféate de méthyle et de l'alcool 3,4-dihydroxyphénéthylique ont été détectés par TLC et HPLC. L'hydrolyse acide de II avec 10% d'acide sulfurique a donné du glucose et du rhamnose dans un rapport de 2 à 1.

Sur la base des preuves mentionnées ci-dessus, la structure du tubuloside A a été déterminée comme étant 2-(3,4-dihydroxy phényl)éthyl 0-aL-rhamnopyranosyl-(1•¨3)- [ƒÀ-D-glucopyranosyl-(1-6)]-(4-O-caffeoy1)-2-O-acétyl-fl-D-glucopyranoside (II).

Le tubuloside B (VI) a été isolé sous forme de poudre amorphe, [a]D,{{0}}.0•‹ (MeOH), C31 H38016, dont le spectre 1H-RMN a montré la présence d'un groupe acétoxyle aliphatique [6 1.98 (3H, s)]. Le spectre 13C-RMN de VI était très similaire à celui de l'isomère d'actéoside (IV) mais différait légèrement dans les signaux en raison de la fraction glucose et de la présence du groupe acétoxyle [6 20.9 (CH3), 171,6 ( C =0)]. L'emplacement du groupe acétoxyle dans le fragment glucose de VI a été déterminé à partir de son spectre 13C-RMN par comparaison détaillée avec celui de IV.

Les signaux de C{{0}}, C-2 et C-3 de la fraction glucose ont montré des changements d'acylation (-2.5 (C-1 ),－0 .6 (C-2) ​​et-1.4 (C-3)], comme dans le cas de II, indiquant que le groupe acétoxy est lié au C{ {12}} groupe hydroxyle de la fraction glucose dans VI. Lors de l'acétylation, VI a donné l'octacétate (VIa) qui était identique au nonacétate de IV. Lors de la méthanolyse de VI avec du chlorure d'acétyle dans du méthanol, du caféate de méthyle et 3,{{ 14}}l'alcool dihydroxyphénéthylique ont été détectés par CCM et HPLC. L'hydrolyse acide de VI avec 10 % d'acide sulfurique a donné du glucose et du rhamnose dans un rapport de 1 à 1. Ces résultats nous ont amenés à conclure que la structure du tubuloside B est {{18} }(3,4-dihydroxy phényl)éthyl 0-aL-rhamnopyranosyl-(1-3)-(6-0-caffeoy1)- 2-0-acéty143-D -glucopyranoside (VI).

L'ingrédient actif deCistanchea unanticancéreuxeffet

Le tubuloside C (VII) a été isolé sous forme de poudre amorphe, [a],-104.8•‹ (MeOH), C43H54024 H20, dont le spectre 1H-RMN a montré la présence de quatre groupes acétoxyles aliphatiques [{{7} }.80, 1.92, 1.95 et 2.08 (3H chacun, s)]. Le spectre "C-NMR de VII était presque identique à celui du tubuloside A (II), qui possède un groupe acétoxyle aliphatique dans le glucose interne, à l'exception des signaux dus au fragment rhamnose. De plus, dans le spectre 13C RMN de VII , décalages d'acylation') ont été observés dans les signaux dus à C-2, C-3 et C-4 de la fraction rhamnose par comparaison détaillée avec les données de II. Par conséquent, les emplacements des quatre groupes acétoxyle ont été déterminés comme étant C-2 du glucose interne et C-2, C-3, C-4 de la fraction rhamnose dans VII. Lors de l'acétylation, VII a donné l'octaacétate qui était identique au tubuloside A sous acétate (IIa). Lors de la méthanolyse de VII avec du chlorure d'acétyle dans du méthanol, du caféate de méthyle et de l'alcool 3,4-dihydroxyphénéthylique ont été détectés par CCM et HPLC. Hydrolyse acide de VII avec 10 pour cent d'acide sulfurique a donné du glucose et du rhamnose dans un rapport de 2 à 1.

D'après les résultats ci-dessus, la structure du tubuloside C a été déterminée comme étant 2-(3,4- dihydroxy phényl)éthyl 2,3,4-tri-O-acétyl-aL-thamnopyranosyl- (1 - plus 3)-[/9-D-glucopyranosyl-(1 - plus 6)]-(4-0-caffeoy1)-2-0-acétyl-fl-D -glucopyranoside (VII).

Le tubuloside D (VIII) a été isolé sous forme de poudre amorphe, [oc], -91.4 degré (MeOH), C43H54023. H2O, dont le spectre 1H-RMN a montré la présence de quatre groupes acétoxyles aliphatiques [6 1.81, 1.93, 1.96 et 2.09 (3H chacun, s)]. Lors de l'acétylation, VIII a donné l'heptaacétate (VIIa), dont le spectre 1H-RMN a montré huit aliphatiques [6 1.87, 1.94, 1.96, 1.99, 2.10 (3H chacun, s) et 2.02 (9H, s)] et trois signaux aromatiques [6 2.27, 2.30 et 2.32 (3H chacun, s)] acétoxyl méthyle. Le spectre 13C-RMN de VIII était presque identique à celui du tubuloside C (VII), à l'exception des signaux dus à la fraction acide p-coumarique. Lors de la méthanolyse de VIII avec du chlorure d'acétyle dans du méthanol, du p-coumarate de méthyle et de l'alcool 3,4-dihydroxyphénéthylique ont été détectés par TLC et HPLC. L'hydrolyse acide de VIII avec 10% d'acide sulfurique a donné du glucose et du rhamnose dans un rapport de 2 à 1.

Sur la base de ces résultats, la structure du tubuloside D a été déterminée comme étant 2-(3,4- dihydroxy phényl)éthyl 2,3,4-tri-O-acétyl-a-Lrhamnopyranosyl- (1•¨3)-[ƒÀ-D-glucopyranosy-](1→6)} (4-0-p-coumary1)-2-0-acétyl-fl-D-glucopyranoside (VIII).

De nombreuxphényléthanoïdeglycosidescomme le forsythoside A, degré ) leucosceptoside A, 7 isomar tynosidell) et ainsi de suite, ayant un fragment rhamnose comme sucre terminal a été rapporté. Dans ces cas, la fraction rhamnose n'est pas acétylée. Les tubulosides C (VII) et D (VIII) contiennent un fragment rhamnose acétylé et sont les premiers composés naturels ayant un fragment triacétyl rhamnose à être signalés.

L'ingrédient actif deCistancheaneuroprotecteureffet

Expérimental

Les points de fusion ont été déterminés sur un appareil à micropoint de fusion Mitamura et ne sont pas corrigés. Les rotations optiques ont été mesurées avec un polarimètre numérique JASCO DIP-140. Les spectres IR ont été enregistrés avec le spectrophotomètre infrarouge Hitachi 270-30 et les spectres UV avec un spectromètre Hitachi 200-20. Les spectres H-NMR et "CN MR ont été enregistrés avec une machine JEOL FX-90Q (89,55 et 22,5 MHz, respectivement). Les déplacements chimiques sont donnés sur l'échelle de 6 (ppm) avec le tétraméthylsilane (TMS) comme agent interne. standard (s, singulet ; d, doublet ; t, triplet ; br, large). La chromatographie gaz-liquide (GC) a été exécutée sur un appareil Shimadzu GC-4CM avec un détecteur à ionisation de flamme. La CLHP a été effectuée sur un Machine Hitachi 655A-11. Du gel de silice (Wako gel C-300, Wako Pure Chemical) a été utilisé pour la chromatographie sur colonne. Des plaques pré-enduites Kieselgel 60 F254 (Merck) ont été utilisées pour la CCM et la détection a été effectuée par pulvérisation 10 pour cent H2SO4 suivi d'un chauffage.

Isolation

Des plantes entières fraîches de C. tubulosa (22 kg), récoltées en décembre 1984, à Karachi, Pakistan, ont été extraites à l'EtOH. L'extrait éthanolique a été mis en suspension dans H2O et extrait avec EtOAc puis avec n-BuOH saturé avec H20. L'extrait de n-BuOH (99,1 g) a été absorbé sur une colonne Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) et la résine a été éluée avec Me0H après avoir été lavée avec H20 . L'éluat Me0H (15,4 g) a été chromatographié sur une colonne de polyamide C-200 (Wako Pure Chemical) en utilisant H20 puis Me0H. La fraction éluée avec Me{{50}}H a été concentrée pour donner un résidu (glycosides bruts phénoliques) (8,0 g). Après chromatographie répétée du résidu sur gel de silice avec CHC13-Me0H-H20 (70 : 30 : 5) et HPLC avec un système solvant H2O-CH3CN ou H2O-MeOH, huit glycosides (I---VIII) ont été isolés. moi, 230 mg; II, 200 mg; III, 240 mg; IV, 60 mg; V, 210 mg; VI, 100 mg; VII, 60 mg;VIII, 65 mg. Conditions pour HPLC : colonne, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm) ; solvant, I, II (17 % CH3CN), III, IV (20 % CH3CN), V (22 % CH3CN), VI (25 % CH3CN), VII (53 % Me0H), VIII (55 % Me0H) ; détecteur (UV), 220 nm ; débit, 6,9 ml/min.

Échinacoside (I)

Poudre amorphe. IR 0,;,Eas,r, cm-1 : 3400, 1690, 1625, 1600, 1518. 11-I-RMN (méthanol-d4) 6 : 1,09 (3H, d , J=6 Hz, CH3 de rhamnose), 2,79 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,29, 4,37 (1H chacun, d, J{{ 28}} Hz, H-1 de glucose), 5,16 (1H, d, J=1 Hz, H-1 de rhamnose), 6,26 (1H, d, J{{38} } Hz, Ar-CH=CH-), 6.4-7.1 (6H, H aromatique), 7.59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH{{ 51}}CH-). 13C-RMN : Tableau I.

Tubuloside A (H)

Poudre amorphe, [a]{{0}}.7 (c=1.08, Me0H). Anal. Calculé pour C371-14021 3/2 H20 : C, 51,93 ; H, 6.01. Trouvé : C, 51,80 ; H, 5,81. IR vrtr, cm' : 3440, 1732, 1705, 1634, 1608, 1522. UV An?nm (log e) : 220 (4,14), 250 sh (3,85), 292 sh (3,95), 334 (4,13). RMN 1H (méthanol-d4) : voir texte RMN 13C : Tableau I.

Actéoside (III)

Poudre amorphe. IR v cm-1 : 3 420, 1 696, 1 634, 1 606, 1 520. RMN 1H (méthanol-d4) 5 : 1,10 (3H, d, J=6 Hz, CH3 du rhamnose), 2,78 ( 2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,36 (1H, d, J= 8 Hz, H-1 de glucose), 5,17 (1H, d, J=1 Hz, H-1 de rhamnose), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{{ 40}}.1 (6H, H aromatique), 7,58 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-RMN : Tableau I.

Isomère d'actéoside (IV)

Poudre amorphe. IR v cm-1 : 3280, 1686, 1624, 1602, 1512. 11-I-NMR (méthanol-d4) 6 : 1,26 (3H, d, J=6 Hz, CH3 de rhamnose), 2,77 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-Cl.2-I.2 4.33 (3H, d, J=8 Hz, H{ {26}} de glucose), 5,18 (1H, br s, H-1 de rhamnose), 6,28 (1H, d, 1=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.4-7.1 (6H, H aromatique), 7.54 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-) 13C-RMN : Tableau I.

2'-acétylactéoside (V)

Poudre amorphe. IR vT cm-1 : 3 450, 1 735, 1 705, 1 640, 1 610, 1 535. RMN 1H (méthanol-d4) 6 : 1,07 (3H, d, 1= 6 Hz, CH3 du rhamnose), 1,99 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,50 (1H, d, J=8 Hz, H{{30 }} de glucose), 5,16 (1H, br s, H-1 de rhamnose), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6 .5-7.2 (6H, H aromatique), 7,59 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-RMN : Tableau I.

Tubuloside B (VI)

Poudre amorphe, [{{0}}.0 degré (c= 1.05, Me0H). Anal. Calculé pour Cm H38016 : C, 55,85 ; H, 5,75. Trouvé : C, 55,91 ; H, 6.00. IR v : 111 cm-1 : 3 420, 1 734, 1 696, 1 634, 1 608, 1 522. UV 4 oreilles nm (log e) : 220 (4,32), 246 sh (4,09), 292 sh (4,21), 340 (4.31). 1H-RMN (méthanol-d4) 6 : 1,24 (3H, d, J=6 Hz, CH3 du rhamnose), 1,98 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,48 (1H, d, J=8 Hz, H-1 de glucose), 6,32 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH - CH-), 6.5-7.2 (6H, H aromatique), 7.61 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-RMN : Tableau I.

Tubuloside C (VII)

Poudre amorphe, [a] - iO4.8© (c=1.86, Me0H). Anal. Calculé pour C43H54024 ' H20 : C, 53,08 ; H, 5,80. Trouvé : C, 53,28 ; H, 5,68. IR v cm' : 3440, 1748, 1634, 1608, 1522. UV 2" nm (log c) : 220 sh (4,06), 250 sh (3,7), 292 sh (3,88), 333 (4,04). 1H-RMN (méthanol-d4) 6 : 1,02 (3H, d, J=6 Hz, CH3 du rhamnose), 1,80, 1,92, 1,95, 2,08 (3H chacun, s, OAc), 2,70 (2H, t, J{ {57}} Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,56 (1H chacun, d, J=8 Hz, H-1 de glucose), 5,02 (1H, br s, H-1 de rhamnose), 6,30 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.5-7.2 (6H, H aromatique ), 7,66 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-RMN : Tableau I.

Tubuloside D (VIII)

Poudre amorphe, [a]P{{0}}.4 degré (c= 1.85, Me0H). Anal. Calculé pour C43H54023 ' H20 : C, 54.00 ; H, 5,90. Trouvé : C, 54,10 ; H, 5,75. IR v : 111 cm-1 : 3 440, 1 750, 1 634, 1 608, 1 518. UV 2,', 1,2" nm (log a) : 228 (4,16), 292 sh (4,21), 302 sh (4,26), 318 (4,35).11-I-RMN (méthanol-d4) 6 : 1.00 (3H, d, J=6 Hz, CH3 du rhamnose), 1,81 , 1,93, 1,96, 2,09 (3H chacun, s, OAc), 2,70 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,53 (1H chacun, d, J{ {68}} Hz, H-1 de glucose), 5,03 (1H, br s, H-1 de rhamnose), 6,38 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.52-6.75 (3H, H aromatique), 6.84 (2H, d, J= 9 Hz, H-3, H{{90 }} d'acide p-coumarique), 7,54 (2H, d, J=9 Hz, H-2, H-6 d'acide p-coumarique), 7,74 (1H, d, J =16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-RMN : tableau I.

Acétylation de II et VII

Le traitement de II ou VII (30 mg) avec Ac20 (1 ml) et de la pyridine (1 ml) à température ambiante pendant une nuit, suivi du traitement habituel, a donné un acétate brut, qui a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec du benzène-acétone (5 : 1) pour donner le sous-acétate (IIa) (25 mg) de II ou l'octaacétate (22 mg) de VII, sous forme d'aiguilles incolores de Me0H, mp 130-131 C. IR v cm ' : 1775, 1660, 1523, 1450. 1H-RMN (CDC13) 6 : 1,05 (3H, d, J= 6 Hz, CH3 de rhamnose), 1,89, 1,96, 1,97, 2,01, 2,11 (3H chacun, s, OAc), 2,03 (9H, s, OAc x 3), 2,29 (3H, s, Ar-OAc), 2,31 (9H, s, Ar-OAc x 3), 2,88 (2H, t, J{{52 }} Hz, Ar-CH2-), 6,35 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH=CH-), 7.0-7.4 ( 6H, H aromatique), 7,66 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). Ces produits se sont révélés identiques au dodécaacétate d'échinacoside (I) par comparaison directe (CCM, mp mixte, IR et 1H-RMN).

Acétylation de VI

Le composé VI (40 mg) a été acétylé de la même manière que décrit pour II et le produit de la réaction a été purifié par chromatographie sur gel de silice avec du benzène-acétone (9:1) pour donner l'octaacétate (VIa) (30 mg) sous forme amorphe. poudre. IR v cm' : 1742, 1630, 1498. RMN 1H (CDC13) 6 : 1,14 (3H, d, J=6 Hz, CH3 du rhamnose), 1,95, 2,03, 2,05, 2,09, 2,13 (3H chacun , s, OAc), 2,27, 2,31 (6H chacun, s, Ar-OAc x 2), 2,87 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 6,42 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6.9-7.5 (6H, H aromatique), 7.64 (1H, d, J= 16 Hz, Ar CH=CH-). VIa s'est avéré identique au nonacétate de l'isomère d'actéoside (IV) par comparaison directe (TLC, IR et 11-1- RMN.

Acétylation du VIII

Le composé VIII (35 mg) a été acétylé de la même manière que décrit pour II pour donner l'heptaacétate (VIIIa) (30 mg) sous la forme d'une poudre amorphe. IR v cm' : 1760, 1638, 1604, 1510. RMN 1H (CDC13) 6 : 1,03 (3H ; d, J= 6 Hz, CH3 du rhamnose), 1,87, 1,94, 1,96, 1,99, 2,10 ( 3H chacun, s, OAc), 2,02 (9H, s, OAc x 3), 2,27, 2,30, 2,32 (3H chacun, s, Ar-OAc), 2,88 (2H, t, J=7 Hz, Ar -CH2-), 6,36 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 7.0-7.2(3H, H aromatique) , 7,25 (2H, d, J=9 Hz, H-3, H-5 de l'acide p-coumarique), 7,57 (2H, d, J=9 Hz, H -2, H-6 de l'acide p-coumarique), 7,72 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-).

Méthanolyse de II, VI, VII et VIII

Le composé II, VI, VII ou VIII (environ 1 mg) a été chauffé au reflux avec du CH3COCl méthanolique à 5 % (2 ml) pendant 3 0 min, puis les réactifs ont été évaporés. La présence de caféate de méthyle et d'alcool 3,4- dihydroxyphénéthyle dans le résidu de II, VI et VII, et de p-coumarate de méthyle et d'alcool 3,4-dihydroxyphénéthyle dans celui de VIII, a été démontrée par CCM [CHC13-MeOH (20 : 1)] et HPLC [colonne, TSK GEL LS-410AK (4 x 300 mm) ; solvant, H20-Me0H (4 : 6) ; détecteur (UV), 250 nm ; débit, 1,0 ml/min]. Caféate de méthyle [R•¬ 0,20, tR (min) 10,8], p-coumarate de méthyle [R•¬ 0,40, tR (min) 15,6], 3.4-alcool dihydroxyphénéthylique [R•¬ 0,06, tR (min ) 2.8].

Hydrolyse acide de II, VI, VII et VIII

Une solution de glycoside (environ 2 mg) dans 10 pour cent de H2SO4 (1 ml) a été chauffée dans un bain d'eau bouillante pendant 30 min. La solution a été passée à travers une colonne Amberlite IR -45 et l'éluat a été concentré pour donner un résidu, qui a été réduit avec du borohydrure de sodium (environ 3 mg) pendant 1 h. Le mélange réactionnel a été passé à travers une colonne Amberlite IR -120 et concentré à sec. L'acide borique a été éliminé par distillation avec MeOH et le résidu a été acétylé avec Ac2O (1 goutte) et pyridine (1 goutte) à 100•Ž pendant 1 h. Les réactifs ont été évaporés. L'acétate de glucitol et l'acétate de rhamnitol ont été détectés dans un rapport de 2 à 1 à partir de II, VII et VIII, et de 1 à 1 à partir de VI par GC. tR (min) : 2,0 (acétate de rhamnitol), 5,5 (acétate de glucitol). Conditions pour GC : colonne, 1,5 % OV-17 (3 mm x 1,5 m) ; température de la colonne, 180•Ž ; gaz porteur, N2 (30 ml/min).

Reconnaissance

Nous sommes reconnaissants au Prof. Dr. SI Ali, Département de Botanique, Université de Karachi, pour son identification de la plante.

Références et notes

1) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase et S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3009 (1984).

2) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase et S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3880 (1984).

3) a) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase et S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 33, 1452 (1985); b) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase et S. Fukushima, Yakugaku Zasshi, 106, 562 (1986); c) Idem, ibid., 106, 721 (1986).

4) a) H. Kobayashi et J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase et S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 1729 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985).

5) E. Nasir et SI Ali, "Flora of West Pakistan," Vol. 98, Shamin Printing Press, Karachi, 1976, p. 4.

6) SR Baquar et M. Tasnif, "Plantes médicinales du sud-ouest du Pakistan", Vol. 3, Bulletin/monographie du Conseil pakistanais de la recherche scientifique et industrielle, Karachi, 1967, p. 56.

7) T. Miyase, A. Koizumi, A. Ueno, T. Noro, M. Kuroyanagi, S. Fukushima, Y. Akiyama et T. Takemoto, Chem. Pharm. Bull., 30, 2732 (1982).

8) K. Yoshimoto, Y. Itatani et Y. Tsuda, Chem. Pharm. Bull., 28, 2065 (1980).

9) I. Kitagawa, HK Wang, M. Saito, A. Takagi et M. Yoshikawa, Chem. Pharm. Bull., 31, 698 (1983).

10) K. Endo, K. Takahashi, T. Abe et H. Hikino, Heterocycles, 16, 1311 (1981). 11) I. Calis, MF Lahloub, E. Rogenmoser et O. Sticher, Phytochemistry, 23, 2313 (1984).