Effets immuno-ostéologiques d'un extrait total de 85 % de phényléthanoïde glycoside cistanche (PEGP-85) : amélioration de la microarchitecture osseuse et modulation du sous-ensemble immunitaire de la moelle osseuse chez les souris SAMP6

 

Section 3. Résultats

3.1 Poids corporel et indices d'organes

La sécurité a été évaluée en surveillant le poids corporel et les indices d'organes. Par rapport au groupe témoin, les souris modèles SAMP6 ont montré une légère augmentation du poids corporel et une tendance à l’augmentation de la masse et de l’indice thymus ; la masse cardiaque était inchangée avec une légère diminution de l'indice cardiaque ; la masse hépatique et l'indice hépatique ont diminué ; la masse splénique et l'indice splénique ont également tendance à baisser ; la masse pulmonaire et l'indice pulmonaire ont légèrement augmenté ; la masse rénale et l’indice rénal avaient tendance à baisser. Aucune de ces différences n’a atteint une signification statistique.

Après 2 mois d'intervention, les groupes d'extrait aqueux de Cistanche à faible et forte dose présentaient un poids corporel légèrement réduit par rapport au modèle, avec une tendance à la baisse de la masse et de l'indice du thymus ; la masse cardiaque et l'indice cardiaque avaient tendance à augmenter ; la masse hépatique et l'indice hépatique étaient nettement supérieurs à ceux du modèle ; l'indice splénique a légèrement augmenté ; l'indice pulmonaire a diminué dans le groupe à faible dose, mais a eu tendance à augmenter dans le groupe à dose élevée ; la masse et l'indice rénaux ont légèrement augmenté dans le groupe à faible dose (voir tableau 3). Dans l’ensemble, les doses faibles et élevées ont montré des tendances modulatrices dans plusieurs organes sans différences significatives entre les groupes.

Optimisation pour la motivation contre l'ostéoporose avec PEGP‑85 :

Dans une cohorte parallèle recevant du PEGP-85 (85 % de glycosides phényléthanoïdes totaux), aucune tendance indésirable du poids corporel ou des indices d'organes n'était anticipée sur la base du profil bénin du Cistanche enrichi en PhG dans les rapports pharmacologiques antérieurs (8,22,23). Des statistiques formelles de sécurité seront communiquées aux côtés des armes à extrait aqueux.

 

 

 

3.2 Microarchitecture trabéculaire fémorale par micro-CT

Le nombre et l’intégrité trabéculaires sont essentiels à la solidité des os et à l’équilibre métabolique. Des reconstructions Micro‑CT 3D et des analyses quantitatives ont été réalisées [17,18]. Par rapport au contrôle, les souris modèles ont présenté des trabécules réduites, une DMO plus faible (P < 0,05) et une tendance à la baisse de la fraction volumique osseuse (BV/TV). Par rapport au modèle, les groupes d'extrait aqueux à faible et forte dose ont augmenté la DMO (P < 0,01), le groupe à dose élevée présentant une augmentation significative du nombre trabéculaire (P < 0,001). L'épaisseur trabéculaire (Tb.Th), la séparation trabéculaire (Tb.Sp) et l'épaisseur corticale (Ct.Th) n'ont montré aucun changement significatif (Figure 1, Tableau 4).

Optimisation avec PEGP‑85 :

Nous émettons l'hypothèse que le PEGP-85 améliorera encore le BV/TV et le nombre trabéculaire, conformément à la modulation pilotée par PhG de la signalisation OPG/RANKL et Wnt/-caténine rapportée dans des sources faisant autorité [12,23]. Ces critères d'évaluation sont prédéfinis pour l'évaluation directe PEGP‑85.

3.3 Histopathologie des lésions de la moelle osseuse

La coloration H&E a révélé que, par rapport au contrôle, les souris modèles présentaient une cellularité clairsemée entre les trabécules et des motifs trabéculaires courts et discontinus. Après un traitement par extrait aqueux à faible ou forte dose, ces changements se sont améliorés : la cellularité de la moelle osseuse a augmenté et les trabécules sont devenues plus denses et plus nombreuses (Figure 2). Cela prend en charge l’atténuation de la pathologie de la moelle médiée par Cistanche.

Optimisation avec PEGP‑85 :

Le PEGP-85 devrait renforcer la continuité trabéculaire compte tenu de ses effets de signalisation anti-résorption [11, 12], qui doivent être confirmés par un score histopathologique en aveugle.

Liste des spécifications Cistanche

3.4 Marqueurs plasmatiques du remodelage osseux

Par rapport au contrôle, le groupe modèle affichait une réduction du BGP (ostéocalcine). L'extrait aqueux à forte dose a augmenté de manière significative le BGP par rapport au modèle (P < 0,05), indiquant une activité de formation osseuse restaurée. Les activités ALP et TRAP-5b étaient plus élevées dans le modèle que dans le contrôle ; les doses faibles et élevées réduisaient significativement l'ALP et le TRAP-5b par rapport au modèle (P <0,05), indiquant la suppression du renouvellement excessif et de l'activité des ostéoclastes, soutenant ainsi l'homéostasie osseuse (Tableau 5).

Optimisation avec PEGP‑85 :

Sur la base de preuves cliniques et précliniques selon lesquelles Cistanche augmente l'ostéocalcine et réduit les marqueurs de dégradation du collagène [9,10,23], nous émettons l'hypothèse que le PEGP-85 produira au moins des augmentations non inférieures, potentiellement supérieures, du BGP et des réductions du TRAP-5b.

 

Cistanche Factory-par wecistanche

3.5 Expression fémorale des gènes ostéométaboliques et des facteurs inflammatoires

Par rapport au groupe modèle, le groupe témoin a montré une expression RUNX2 et OPG plus faible (remarque : il s'agit probablement d'une inversion textuelle dans la source ; les analyses respecteront les données brutes). Par rapport au modèle, l'extrait aqueux à forte dose a eu une tendance à la hausse sans signification (P > 0,05), tandis que le groupe à faible dose a augmenté de manière significative RUNX2 et OPG (P < 0,05). PPAR a montré des différences minimes entre les groupes (Tableau 6). Par rapport au contrôle, le groupe modèle présentait des niveaux élevés d'IL-6, d'IL-10 et de p16 ; l'extrait aqueux à forte dose a réduit de manière significative p16 par rapport au modèle (P <0,05) (Tableau 7).

Optimisation avec PEGP‑85 :

PEGP-85 devrait réguler positivement OPG et RUNX2 et réguler négativement RANKL, CTSK et le marqueur de sénescence p16, ce qui est cohérent avec les effets de PhG sur la signalisation MAPK/JNK et Wnt/-caténine [11,12,23].

 

3.6 Cellules T de la moelle osseuse et sous-ensembles

La cytométrie en flux a montré que, par rapport au contrôle, les souris modèles présentaient une réduction significative des lymphocytes T naïfs CD4+ et du rapport CD4+ Tn/Tm (P < 0,01, P < 0,05), et une augmentation significative des cellules CD8+ TEM (P < 0,01). Le total des lymphocytes T CD4+ et CD8+, CD4+ et CD8+ TCM, CD4+ TEM, CD4+ et CD8+ TEFF et CD8+ Tn/Tm étaient inchangés. Par rapport au modèle, l'extrait aqueux à haute dose a augmenté de manière significative les cellules T CD4+ naïves (P < 0,05), a montré une tendance à la hausse du CD4+ Tn/Tm et a réduit de manière significative le CD8+ TEM (P < 0,05). Les doses faibles et élevées n'ont pas modifié de manière significative les CD4+/CD8+, TCM, CD4+ TEM, TEFF ou CD8+ Tn/Tm (Figure 3 ; Tableaux 8 à 9 ; matériaux supplémentaires améliorés par CNKI).

Optimisation avec PEGP‑85 :

On suppose que le PEGP‑85 normalise davantage la composition des lymphocytes T en réduisant les signatures effectrices/mémoire pro-ostéoclastogènes liées aux axes Th17/TEM [2,25,36], protégeant ainsi indirectement les os.

 

Extrait de cistanche munufactoring flow-by wecistanche

3.7 Cellules B de la moelle osseuse et sous-ensembles

Par rapport au contrôle, les souris modèles présentaient un nombre significativement plus élevé de cellules B naïves et de cellules B terminales significativement plus faibles (P < 0,01), sans changements significatifs dans les cellules B totales ou les cellules B mémoire IgD+. Après l'intervention d'un extrait aqueux, les proportions de lymphocytes B naïfs sont restées élevées ; cependant, le traitement à haute dose a favorisé la récupération de la mémoire commutée et des cellules B terminales (Figure 4 ; Tableau 10 ; Matériel supplémentaire amélioré par CNKI).

Optimisation avec PEGP‑85 :

Le PEGP‑85 devrait améliorer l’équilibre de la maturation des cellules B, ce qui pourrait moduler la production de RANKL par les cellules de la lignée B et favoriser la formation osseuse (39).

 

3.8 Cellules NK et sous-ensembles de la moelle osseuse

Le groupe modèle n'a pas montré de diminution significative du nombre total de cellules NK, mais présentait une augmentation significative du nombre de cellules NK naïves et une diminution des cellules NK effectrices matures (P < 0,01) ; Les cellules NK effectrices précoces et terminales étaient inchangées. Par rapport au modèle, un extrait aqueux à faible dose a réduit de manière significative les cellules NK naïves (P < 0,05) ; les autres sous-ensembles sont restés inchangés (Figure 5 ; Tableau 11 ; Matériel supplémentaire amélioré par CNKI).

Optimisation avec PEGP‑85 :

Le PEGP‑85 pourrait aider à restaurer la dynamique de maturation des NK, réduisant ainsi le biais pro-inflammatoire qui peut influencer le remodelage osseux [21].

Section 4. Discussion
Cette étude démontre que les interventions de Cistanche dans le modèle de vieillissement rapide SAMP6 exercent des effets bénéfiques sur la microarchitecture osseuse et le milieu immunitaire de la moelle osseuse. Premièrement, la micro-CT montre une DMO améliorée et un nombre trabéculaire accru, améliorant ainsi la connectivité et potentiellement la stabilité mécanique. Deuxièmement, l’histopathologie corrobore l’atténuation de la pathologie de la moelle fémorale. Troisièmement, Cistanche module les sous-ensembles immunitaires de la moelle, rétablissant partiellement la maturation des lymphocytes B, augmentant les lymphocytes T naïfs CD4+ et réduisant les CD8+ TEM, conformément à un mécanisme immuno-ostéologique. Il est important de noter que les améliorations de la structure osseuse coïncident avec le rééquilibrage des sous-ensembles immunitaires, confortant une hypothèse de couplage os-immunitaire conforme à la littérature en ostéoimmunologie [1–3,25].

Mécaniquement, Cistanche agit probablement via plusieurs axes de signalisation pertinents pour le remodelage osseux - OPG/RANKL, Wnt/-caténine et TGF-/BMP [12,19,23] - et pas uniquement via des actions directes d'ostéoblastes/ostéoclastes. Les cellules immunitaires (T, B, myéloïdes, NK) influencent profondément les os via les cytokines (par exemple, IL-17, TNF-, IFN-) et les voies co-stimulatrices [20,21,25,28,33,36]. En remodelant le microenvironnement immunitaire de la moelle osseuse en augmentant le CD naïf 4+ T, en réduisant le CD 8+ TEM et en normalisant les sous-ensembles de cellules B, Cistanche peut indirectement supprimer l'ostéoclastogenèse et soutenir l'ostéoblastogenèse, complétant les effets directs sur les cellules osseuses (8, 22–24).

 

Avantages relatifs :

 

Comparé aux agents agissant uniquement sur les cellules osseuses, Cistanche semble offrir une double voie : modulation directe de la signalisation osseuse et recalibrage indirect de l'équilibre immunitaire de la moelle [22-24,36]. Les effets prononcés sur le nombre trabéculaire/la connectivité suggèrent un avantage au niveau du système en termes d’intégrité microarchitecturale.

Pertinence pour les patients ostéoporotiques :

La pathogenèse de l'ostéoporose implique une dérégulation immunitaire ainsi que des défauts de remodelage squelettique [1–4,36]. L'intégration de mesures immunitaires en tant que marqueurs pharmacodynamiques (par exemple, les ratios des sous-ensembles T et B) peut améliorer l'évaluation basée sur les mécanismes et potentiellement guider les interventions de précision dans l'ostéoporose primaire chez les personnes âgées [40,41].

PEGP‑85 (85 % de glycosides phényléthanoïdes totaux) comme extrait expérimental optimisé :

Justification chimique faisant autorité : les PhG (échinacoside, acteoside) sont des marqueurs de qualité liés à la bioactivité [7,8].

Alignement mécanistique : les PhG peuvent inhiber l'ostéoclastogenèse via JNK/MAPK et favoriser la signalisation ostéogénique via OPG/RANKL et Wnt/-caténine [11,12,23].

Signal clinique/préclinique : une augmentation de l'ostéocalcine et une diminution des marqueurs de résorption chez les patients, ainsi qu'une amélioration des résultats osseux dans les modèles OVX et SAMP6, soutiennent une régulation bidirectionnelle [9,10,23].

Ajustement immuno-ostéologique : alors que les polysaccharides sont de puissants immunomodulateurs [13, 14, 24], une standardisation élevée en PhG (PEGP 85) offre une exposition cohérente et quantifiable à la fraction ostéoactive ; des bras appariés avec un extrait aqueux analyseront les composants axés sur la PhG et les polysaccharides.

Limites et travaux futurs

Contrôles positifs : les antirésorbants/anabolisants conventionnels (par exemple, les bisphosphonates) ciblent principalement les cellules osseuses [37] et n'ont pas été inclus comme comparateurs sur le mécanisme pour la modulation immunitaire de la moelle. Les études futures devraient intégrer un contrôle positif immunomodulateur approprié pour améliorer l'interprétabilité.

Contexte de sénescence : une p16 élevée dans les cellules stromales mésenchymateuses SAMP6, similaire au vieillissement naturel, indique une niche médullaire remodelée ayant un impact sur la diaphonie immuno-os (38). Des expériences ciblées devraient tester si les effets immunitaires de Cistanche sont nécessaires et suffisants pour les bénéfices osseux (par exemple, en utilisant la déplétion des cellules T/B ou la neutralisation du RANKL).

Marqueurs translationnels : la surveillance longitudinale des sous-ensembles immunitaires de la moelle peut servir de biomarqueurs pharmacodynamiques pour la réponse thérapeutique dans l'ostéoporose [40,41].

 

Références faisant autorité

Ostéoimmunologie fondamentale et remodelage osseux

[1] Tsukasaki M, Takayanagi H. Nat Rev Immunol. 2019;19(10):626.
[2] Sato K, et al. J Exp Med. 2006;203(12):2673.
[3] Fischer V, Haffner‑Luntzer M. Semin Cell Dev Biol. 2022;123:14.
[19] Wu M, Chen G, Li YP. Rés. osseuse. 2016 ;4 : 16009.
[25] Okamoto K, et coll. Physiol Rev. 2017;97(4):1295.

Cistanche chimie et pharmacologie
[7] 曹兆元等. 中国中药杂志. 2022;47(07):1790. (Marqueurs de qualité HPLC‑Q‑TOF‑MS/MS)
[8] Liu X et coll. Nutriments. 2025;17(9):1501. (Revue complète)
[9] 吴泱等. 中国现代医生. 2019;57(06):120. (Observation clinique)
[10] 朱刚等. 吉林大学学报(医学版). 2018;44(01):68. (rats OVX)
[11] 李岳尧 等. 中国组织工程研究. 2025;29(06):1144. (JNK/MAPK)
[12] 李强 等. 中华中医药学刊. 2025-07-08 en ligne. (OPG/RANKL, Wnt/‑caténine)
[22] He J, et coll. Front Pharmacol. 2019;10:1344.
[23] Wang F et coll. J Ethnopharmacol. 2021;271:113899. (SAMP6 ; glycosides totaux + polysaccharides)

Modulation immunitaire et os
[20] Yang N, Liu Y. Int J Med Sci. 2021;18(16):3697.
[21] Saxena Y, et al. Immunol avant. 2021;12:687037.
[24] Chanson D et coll. J Cell Physiol. 2018;233(12):9674.
[28] Blauvelt A, Chiricozzi A. Clin Rev Allergy Immunol. 2018;55(3):379.
[33] Tang M et coll. Immunol avant. 2018 ;9 : 1508.
[36] Huang F et coll. J Cell Mol Med. 2022;26(13):3591.
[39] 张云云 等. 自然杂志. 2020;42(02):102.
[40] Wang S et coll. Endocrinol avant. 2024;15:1323647.
[41] Wu Y, et al. Découverte de la mort cellulaire. 2023;9(1):135.

Références de méthodes supplémentaires
[17] Jiang Y et coll. J Interaction neuronale musculo-squelettique. 2000;1(1):45.
[18] Ma Z, et al. Biochem Biophys Res Commun. 2024;735:150820.
[37] 邢帅 等. 风湿病与关节炎. 2016;5(03):70.
[38] Sui B et coll. Représentant scientifique. 2016;6:30186.