PARTIE 1 Des extraits aqueux d'Herba Cistanche ont favorisé la motilité intestinale chez des rats à constipation induite par le lopéramide en améliorant les cellules interstitielles de Cajal

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 et Hai-hua Qian3

1 Hôpital de SuzhouMédecine Chinoise Traditionnelle,Suzhou, Jiangsu 215009, Chine

2Université de NankinMédecine Chinoise Traditionnelle, Nankin, Jiangsu 210023, Chine

3Département de chirurgie anorectale, Hôpital provincial de JiangsuMédecine Chinoise Traditionnelle, Nankin, Jiangsu 210029, Chine

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

Reçu le 24 mai 2017 ; Révisé le 5 octobre 2017 ; Accepté le 25 octobre 2017 ; Publié le 28 décembre 2017

Éditeur académique : Samra Bashir

Copyright © 2017 Shuai Yan et al. Il s'agit d'un article en libre accès distribué sous la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation, une distribution et une reproduction sans restriction sur n'importe quel support, à condition que l'œuvre originale soit correctement citée.

Médecine Chinoise Traditionnellea été signalé comme ayant de bons effets dans le traitement de la constipation fonctionnelle. Ce travail a tenté de prouver les effets des extraits aqueux d'Herba Cistanche (AEHC) sur le traitement STC et de déterminer les mécanismes possibles par un modèle de constipation à transit lent induit par le lopéramide (STC). HPLC a été réalisée pour l'identification et la confirmation des composants bioactifs dans l'AEHC. Il a été constaté que l'AEHC atténuait les réponses STC en fonction de l'augmentation de la quantité fécale, de la teneur en humidité et du taux de transit intestinal, ainsi que des taux sériques de GAS, MTL, SS et CGRP. Les niveaux de protéines et d'ARNm de c-kit, marquage des cellules interstitielles de Cajal (ICC), ont également augmenté. Pendant ce temps, seul le niveau de protéines de SCF, un ligand ofc-kit, a augmenté. L'analyse de nos données a suggéré que l'AEHC pourrait évidemment améliorer la fonction de l'ICC via une voie de signalisation impliquant PI3K, SCF et c-kit et améliorer les indices de motilité colique tels que GAS, MTL, SS et CGRP. Il est intéressant de noter que l'AEHC semble être efficace sur la constipation, d'autres expériences sont donc nécessaires pour clarifier les mécanismes exacts impliqués.

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1. Introduction

La constipation est une maladie gastro-intestinale fonctionnelle courante et un problème de santé publique, caractérisé par une défécation continuellement difficile, peu fréquente ou incomplète [1]. La prévalence de la constipation varie de 0,7 % à 81 % dans le monde, en particulier chez les personnes âgées [2, 3]. Constipation à transit lent (SC) est une affection gastro-intestinale courante chez 13 à 37 % des patients souffrant de constipation chronique résistante au traitement [4, 5]. Les données épidémiologiques indiquent une incidence plus élevée deSCchez les jeunes femmes que chez les hommes [6].SCprovoque une constipation réfractaire, montrant peu de réponse au traitement conservateur et une tendance aux troubles neurodégénératifs. Pas aussi simple qu'une maladie fonctionnelle, elle appelle un traitement invasif et agressif [7].

Un certain nombre de médicaments chimiques actuels tels que les laxatifs osmotiques ou sécrétoires et les agents gonflants sont universellement utilisés pour

traiter la constipation [8], bien que leurs applications soient limitées en raison de dépenses élevées et d'effets secondaires abdominaux tels que douleurs, crampes et ballonnements [9]. À l'heure actuelle, la régulation du tractus gastro-intestinal est l'objectif principal des thérapies contre la constipation. Le cisapride a d'abord été généré comme agent de promotion de la motilité pour le traitement des maladies gastriques, mais a ensuite été retiré en raison du risque d'arythmies cardiaques [10].

Le tégasérod est un antagoniste sélectif des récepteurs 5-hydroxytryptamine qui peut stimuler le péristaltisme et la sécrétion intestinale [11, 12]. Le prucalopride est un nouveau dérivé du dihydro benzofurane carboxamide et un agoniste des récepteurs 5-HT avec une sélectivité et une spécificité élevées, qui peut améliorer la motilité gastrique, de l'intestin grêle et du côlon et agit plus rapidement en dynamique [13–15]. En tant que dérivé de la prostaglandine E1, la lubiprostone peut activer sélectivement le canal CIC pour favoriser la sécrétion gastro-intestinale et augmenter les effets de la transmission intestinale [16].

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La motilité dans la constipation est un problème répandu, mais son étiologie n'est pas encore claire. Néanmoins, des preuves convaincantes ont démontré la contribution des cellules interstitielles de Cajal (ICC) à la pathogenèse de la constipation [17]. L'ICC se trouve entre les terminaisons nerveuses et les cellules musculaires lisses du tractus gastro-intestinal. Les ICC sont généralement reconnues comme des cellules de stimulateur cardiaque pour l'activité gastro-intestinale et comme des médiateurs de la transmission neuro-musculaire [18]. Des études ont indiqué que la densité des ICC dans le côlon des patients souffrant de constipation à transit lent est remarquablement inférieure à celle des patients normaux [19]. En conséquence, un nombre décroissant d'ICC peut entraîner une pénurie d'activité des ondes lentes, affectant ainsi la réponse contractile et induisant un transit retardé chez les patients constipés à transit lent. Pour ce point, l'amélioration de l'ICC à l'aide de produits pharmaceutiques peut être cruciale pour guérir la constipation à transit lent.

Divers médicaments à base de plantes et formules chinoises traditionnelles ont récemment attiré l'attention en tant que thérapies de pointe pour le traitement de la constipation chronique en raison de l'amélioration de la production de selles [20, 21]. Herba Cistanche est une plante médicinale traditionnelle utilisée dans le traitement des maladies rénales chroniques, de l'infertilité féminine, des ménorragies abondantes et de l'impuissance [22, 23]. Herba Cistanche prévient l'apoptose des neurones cérébraux en exprimant des facteurs liés à l'apoptose et des facteurs neurotrophiques dans les cellules MES23.5 [24]. Herba Cistanche a également démontré un potentiel pharmaceutique dans le traitement du syndrome de déficience du Yang-Qi rein-Yang. Une étude récente a démontré que Herba Cistanche augmente la respiration mitochondriale et le statut antioxydant du glutathion dans les cardiomyocytes H9c2 [25].

TCM croit que la constipation a une relation étroite avec les reins. S'ouvrant au niveau des organes génitaux externes et de l'anus, le rein régit la miction et la défécation. Le transport des déchets repose sur la promotion du qi du rein et l'alimentation du yin du rein. Si le yang du rein est déficient ou si le feu de la porte de la vie s'éteint, la congestion froide du gros intestin entraînera la stagnation des déchets. La constipation est également causée par des selles sèches, car une carence en essence rénale ne génère pas suffisamment de liquide [26].

HerbeCistancheest une herbe unificatrice commune, qui a une saveur sucrée et salée et une nature chaude. Attribuable au gros intestin et aux méridiens des reins, il peut tonifier le yang des reins et humidifier l'intestin pour soulager la constipation. Cette seule herbe et sesChinoisles préparations pharmaceutiques ont été largement utilisées pour traiter la constipation avec une efficacité remarquable [27].

En Chine, les effets d'HerbaCistancheles racines sur la constipation ont été enregistrées [28, 29] et mentionnées dans la Materia Medica chinoise de Shen Nong comme les "tiges succulentes séchées de l'espèce Cistanche" [30]; cependant, la preuve scientifique de l'effet des racines d'Herba Cistanche sur la constipation n'existe pas jusqu'à présent, la dose cliniquement efficace est de 20 g par jour enPharmacopée chinoise, et l'effet clinique n'augmente plus avec la posologie.

Étant donné que Herba Cistanche est si rare [31], normaliser sa posologie clinique pour le traitement deSCpar une étude expérimentale prévient non seulement l'échec du traitement en raison d'un dosage inadéquat, mais éloigne également les patients des pertes économiques et même des mésaventures médicamenteuses dues à une surutilisation. Nous esperons

les résultats pourraient jeter les bases scientifiques de nouveaux médicaments contre la constipation. Par conséquent, il est important d'étudier la fonction aqueuse de Herba Cistanche de promotion intestinale et son action sur l'ICC dans la présente étude.

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2. Matériels et méthodes

2.1. Préparation d'extrait aqueux d'Herba Cistanche.

Tous les Herba Cistanche ont été achetés auprès de Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Chine), qui ont été récoltés, collectés et transformés selon les pratiques ethnobotaniques standard des plantations de la région de Sinkiang en Chine. L'identité de la plante a été déterminée morphologiquement par le professeur Tu Lin Lu de l'Université de médecine chinoise de Nanjing, Nanjing, Chine. Un spécimen de référence (NUCMCHS-2015628) a été déposé au Collège des sciences de la santé, Université de médecine chinoise de Nanjing, Nanjing, Chine.

Des tranches d'Herba Cistanche, pesant 500 g, ont été pulvérisées à l'aide d'un mélangeur électrique et extraites dans 5000 ml d'eau distillée, après quoi l'extrait aqueux a été purifié à 100 C pendant 2 h à l'aide d'un équipement d'extraction à circulation

pore de la membrane (Millipore, Billerica, MA, USA) et le résidu obtenu à partir des extraits a été dissous dans 4000 ml d'eau. Après extraction au reflux, les extraits ont été recueillis et évaporés pour obtenir le produit échantillon final. Les extraits aqueux ont été concentrés en pastilles sèches (1 g/ml) à l'aide d'un

pour une utilisation ultérieure. Des échantillons solides ont été reconstitués dans de l'eau distillée pour donner les doses requises de 10, 20 et 40 mg/kg de poids corporel pour l'expérience.

2.2. Animaux.

Le protocole expérimental utilisé dans cette étude a été revu et approuvé sur la base de procédures éthiques et de soins scientifiques par l'hôpital de Suzhou deMédecine Chinoise Traditionnelle-Comité institutionnel de protection et d'utilisation des animaux, Suzhou, Chine (SHTCM-IACUC ; numéro d'approbation : PNU- 2016-0003). Tous les rats mâles (souche Sprague Dawley) avec ag ​​ont été achetés au Shanghai Laboratory Animal Research Center conformément aux directives des National Institutes of Health. Les animaux avaient libre accès à une alimentation standard (AIN-93 M) et à de l'eau du robinet à volonté et étaient logés individuellement dans une humidité relative en acier inoxydable et exposés à 12 h de lumière naturelle et 12 h d'obscurité par jour.

2.3 Conception expérimentale.

Le lopéramide a été utilisé pour induire la constipation chez le rat conformément à des études antérieures [32, 33]. Un total de 60 rats ont été répartis au hasard en 5 groupes (par groupe) : A : groupe normal (NG), B : groupe modèle (groupe traité avec Lop plus véhicule), C : un groupe de rats constipés traités avec un faible extrait aqueux de Herba Cistanche (groupe traité avec Lop plus LAEHC), D : un groupe de rats constipés traités avec un extrait aqueux moyen d'Herba Cistanche (groupe traité avec Lop plus MAEHC), et E : un groupe de rats constipés traités avec un extrait aqueux élevé d'Herba Cistanche (groupe traité avec Lop plus HAEHC). Le groupe A a été traité avec une solution saline normale (10 ml/kg); Le groupe B a été traité avec du lopéramide

(4 mg/kg); Le groupe C a été traité avec du lopéramide (4 mg/kg) et un faible extrait aqueux d'Herba Cistanche (1 g/kg) ; Le groupe D a été traité avec du lopéramide (4 mg/kg) et un extrait aqueux moyen d'Herba Cistanche (2 g/kg), et le groupe E a été traité avec du lopéramide (4 mg/kg) et un extrait aqueux élevé d'Herba Cistanche (4 g/kg). kg). Tous les rats du groupe normal ont reçu une injection de chlorure de sodium 0.9 %, tandis que les autres ont reçu une injection de lopéramide dans du chlorure de sodium 0.9 % deux fois par jour pendant 3 jours consécutifs pour induire la constipation. L'extrait aqueux d'Herba Cistanche a été mis en suspension dans de l'eau et a été administré par voie orale une fois par jour du jour 4 au jour 18 dans le groupe C, le groupe D et le groupe E, tandis que les groupes A et B ont reçu un volume constant d'eau par gavage.

2.4. Condition chromatographique.

Le profilage HPLC a été réalisé dans le système de chromatographie liquide Shimadzu (Tokyo, Japon), composé d'une pompe LC-20AT et d'un

ont été contrôlés à 330 nm à 30 C. La phase mobile isocratique était constituée de méthanol à 0,1 % d'acide formique (80 : 20, v/v) et fonctionnait à un débit de 1,0 ml/min . La séparation chromatographique a été

taille des particules 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Beijing, Chine).

2.5. Analyse de l'exercice, de l'apport alimentaire, de l'apport d'eau, du corps

La gomme arabique (une suspension aqueuse de 20 pour cent de charbon de bois et 10 pour cent de gomme arabique) a été administrée par voie orale à un volume de 25 ml/kg de chaque animal. Après 30 min, les animaux ont été sacrifiés sans cruauté par dislocation cervicale et disséqués. Les intestins grêles du pylore au caecum ont été parcourus et la distance parcourue par la farine de charbon de bois et la longueur totale de l'intestin grêle ont été mesurées. Pour un rat individuel, le pourcentage de transit intestinal a été calculé comme le pourcentage de distance parcourue par le repas de charbon de bois par rapport à la longueur totale de l'intestin grêle. L'équation suivante calcule le taux de transit intestinal (pourcentage) : distance parcourue par le charbon/distance du pylore au caecum 100 pourcent .

2.6. Échantillon de sang et prélèvement de tissus. À la fin de la période expérimentale, les rats ont été soumis à un jeûne de 12 h mais ont été autorisés à accéder librement à l'eau. Tous les rats ont ensuite été anesthésiés 30 min plus tard par injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique (50 mg/kg) et placés sur une table thermorégulée. Des échantillons de sang ont été prélevés et centrifugés à 3500 tr/min pendant 15 min pour obtenir du sérum. Le côlon a été divisé immédiatement et rincé avec une solution saline normale à 4 °C, puis divisé en deux morceaux. Un fragment a été fixé dans du formol à 10% et traité dans de la paraffine fractionnée pour une analyse immunohistochimique (IHC) ultérieure, tandis que l'autre était le poids et les cheveux. Modifications de l'exercice, de l'apport alimentaire, de l'eau

conservés à 80 C jusqu'à leur dosage. l'apport, le poids corporel et les cheveux ont été observés et enregistrés quotidiennement tout au long de la période expérimentale. Nous avons observé des "altérations dans l'exercice" suivant les étapes spécifiques : la boîte fabriquée par nos soins (60 cm de haut, 50 cm de long et 80 cm de large avec une paroi périphérique sombre) est utilisée pour le test en plein champ ; le fond blanc était divisé en losanges (12 cm) par la ligne noire dans une pièce sombre et calme ; une ampoule de 100 W accrochée à 1 m au-dessus du centre du caisson ; les rats ont été placés au centre de la boîte aux 4ème, 6ème, 12ème et 18ème jours de modelage. Le nombre de carrés que les rats ont traversés en 5 minutes a été utilisé comme score de mouvement horizontal et le temps debout des rats en 5 minutes a été utilisé comme score de mouvement vertical. Les scores horizontaux et de mouvement plus les scores de mouvement vertical indiquent la quantité d'exercice des rats. Chaque rat a été mesuré une fois [34, 35].

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2.7. Mesure des paramètres fécaux.

Le dernier jour de l'administration orale, des pastilles de selles fraîches de chaque rat SD ont été recueillies dans des tubes bouchés à fond rond pendant 6 h, et les poids totaux de chaque groupe ont été enregistrés. Pour déterminer la teneur en humidité fécale, nous avons utilisé une balance électrique pour sécher les boulettes de selles jusqu'à ce qu'un poids constant soit atteint et mesuré le poids sec. La teneur en humidité

2.8. Évaluation de GAS, MTL, SS et CGRP.

Les concentrations de gastrine (GAS), de motiline (MTL), de somatostatine (SS) et de peptide lié au gène de la calcitonine (CGRP) dans le sérum ont été estimées par ELISA à l'aide de kits disponibles dans le commerce.

2.9. Analyse histologique.

Les côlons transverses prélevés sur des rats SD ont été fixés avec du formol à 10 % pendant 12 h, intégrés

m tranches épaisses qui ont été colorées avec de l'hématoxyline et de l'éosine (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Les caractéristiques morphologiques de ces coupes ont été observées au microscope optique, après quoi la longueur des villosités, l'épaisseur des cryptes et l'épaisseur des muscles ont été mesurées à l'aide de Leica Application Suite (Leica Microsystems, Suisse).

2.10. Analyse immunohistochimique.

Nous avons suivi les méthodes de Zhu et al. (2016) [36] ; des sections de 5 m non colorées ont été

coloré avec lapin anti-c-kit (1: 100) à 4 C pendant la nuit. La méthode de l'anticorps secondaire et du complexe avidine-biotine-peroxydase a été utilisée selon les instructions du fabricant. Un témoin immunoglobuline négatif a été utilisé pour éliminer la liaison non spécifique. Niveaux d'expression de c-kit

2.11. Analyse du taux de transit intestinal.

Le rapport de transit intestinal a été réalisé selon les protocoles précédemment rapportés [36] ; brièvement, après 14 jours de traitement, tous les rats SD ont été soumis à un jeûne de 12 h mais ont été autorisés à accéder librement à l'eau.

Réaction en chaîne par polymérase en temps réel. Les niveaux d'expression génique des ARNm c-kit, SCF et PI3K dans le côlon ont été déterminés à l'aide d'un kit d'extraction d'ARN total (TIANGEN Biotech,

Pékin, Chine) selon les protocoles du fabricant. La PCR en temps réel a été réalisée avec le système de PCR en temps réel ABI StepOnePlus (ABI). SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japon) a été utilisé pour détecter les produits de PCR. Les réactions ont été réalisées en trois exemplaires. Par la suite, du tissu frais de côlon de rat pesant 0,5 g a été homologue.

l) a été extrait selon les instructions du fabricant en utilisant le réactif TRIzol (Invitrogen, USA). Un kit de transcription inverse-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) a été utilisé pour synthétiser le premier brin d'ADNc conformément au protocole du fabricant. Tous les paramètres ciblés sont présentés dans le tableau 1. Le protocole de cycle était dans les conditions suivantes : 95 C pendant 5 min (dénaturation de l'ADN), suivi de 40 cycles de 95 C pendant 15 s, 60 C pendant 20 s et 72 C pendant 40 s. Une analyse de la courbe de fusion a été effectuée à la fin des cycles d'amplification.

2.12. Analyse Western Blot.

La teneur en protéines de c-kit et de SCF dans les homogénats d'échantillons de côlon a été évaluée par Western blot. En bref, les protéines totales des homogénats ont été déterminées à l'aide d'un dosage à l'acide bicinchoninique (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Un gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide (SDS-PAGE) a été utilisé pour séparer les protéines dans le système d'électrophorèse BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA). Les protéines ont ensuite été transférées sur des membranes de difluorure de polyvinylidène (PVDF). Après 2 h de traitement avec un tampon de blocage dans du TBS contenant 5 % de lait écrémé à température ambiante, les membranes PVDF ont été incubées pendant une nuit avec 1 : 1000 anti-c-kit dilué (Santa Cruz, CA, USA), 1 : 500 anti-c-kit dilué. SCF (Sigma, MO,

USA), et 1 : 8000 anticorps anti-actine dilués (Kangchen, Shanghai, Chine), respectivement. La liaison de l'anticorps primaire a été détectée à l'aide de l'anticorps secondaire conjugué à la HRP correspondant (Beyotime, Jiangsu, Chine). Un kit de chimioluminescence amélioré (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) et le système d'imagerie infrarouge Odyssey (Gene Company Ltd., Hong Kong) ont été utilisés pour la détection de la chimiluminescence. La prolactine de ménage a été utilisée comme contrôle de charge. La quantité d'expression protéique est présentée par rapport aux niveaux d'actine.

2.13. Analyses statistiques.

Les données de mesure ont été rapportées sous forme d'erreur standard moyenne de la moyenne (SEM) et analysées par SPSS

16.0 logiciel (SPSS, Chicago, Illinois, États-Unis). Une analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA) suivie de tests à plages multiples de Duncan a été utilisée pour déterminer les différences significatives dans tous les paramètres. Les valeurs ont été considérées comme statistiquement significatives à

Cistanchela décoction est un bon médicament pour traiterconstipation

3. Résultats

3.1. Composition et composants fonctionnels de Herba Cistanche.

Comme le montre la figure 1, les racines d'Herba Cistanche contiennent des concentrations élevées de plusieurs composants bioactifs liés aux effets laxatifs. Les concentrations d'échinacoside total et de verbascoside total étaient respectivement de 0,64 mg/g et de 0,16 mg/g. Deux pics indiquant des niveaux élevés d'échinacoside et de verbascoside ont été détectés dans le LP à un temps de rétention approprié par chromatographie liquide à haute performance (HPLC).

3.2. Observation générale.

Les rats SP ne sont pas morts tout au long de l'expérience, ce qui indique une meilleure sécurité et opérabilité du modèle animal. Comparativement au groupe A, les rats du groupe modèle présentaient une fourrure duveteuse, de la lassitude, des selles sèches et

s'est aggravée avec l'allongement du temps de modélisation.

3.3. Effet de l'AEHC sur le nombre de selles et la teneur en humidité chez les rats souffrant de constipation induite par le lopéramide.

Par rapport aux matières fécales normales, les matières fécales des groupes B, C, D et E étaient sèches, petites et dures et n'avaient pas bruni avant le traitement.

après tout, les rats ont reçu une injection de lopéramide (traités avec des médicaments ont atténué les symptômes du corps et 3(b)).

le poids ne différait pas significativement entre tous les groupes expérimentaux, bien que le groupe E ait montré un poids corporel légèrement inférieur à celui des autres groupes (figure 2 (a)). De plus, les rats SD souffrant de constipation mangeaient significativement moins de nourriture que le groupe A ( ), tandis que les différences entre les groupes B, C, D et E (figure 2 (b)) n'étaient pas significatives. La consommation d'eau n'a pas non plus changé entre le groupe A et le groupe B. De plus, aucune augmentation significative de la consommation d'eau n'a été détectée dans

que le traitement par l'AEHC n'a induit aucune altération. Bien que le taux de transit intestinal dans les groupes C, D et était également significativement plus élevéLes groupes C, D et E avaient des ratios significativement inférieurs à ceux du groupe A.

3.4. Effet de l'AEHC sur le taux de transit de l'intestin grêle chez les rats souffrant de constipation induite par le lopéramide.

Comme le montre la figure 4, aucune différence n'a été détectée dans le temps de transit de l'intestin grêle de base entre les cinq groupes. Le groupe B a un rapport de propulsion de poudre de charbon de bois nettement inférieur à celui du groupe A (𝑃 < 0.01).="" bien="" que="" le="" taux="" de="" transit="" intestinal="" des="" groupes="" c,="" d="" et="" e="" soit="" également="" significativement="" plus="" élevé="" que="" celui="" du="" groupe="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" les="" groupes="" c,="" d="" et="" e="" avaient="" des="" ratios="" significativement="" inférieurs="" à="" ceux="" du="" groupe="">

3.5. L'intervention avec l'AEHC améliore partiellement la fonction d'index de motilité colique.

Les taux sériques de GAS et de MTL obtenus chez les rats du groupe B ont significativement diminué par rapport à ceux du groupe A (𝑃 < {{0}}.01,="" resp.).="" d'autre="" part,="" les="" groupes="" c,="" d="" et="" e="" (𝑃=""><0.05, resp.)="" ont="" des="" niveaux="" effectivement="" plus="" élevés="" de="" gas="" et="" de="" mtl="" provenant="" de="" l'administration="" d'extraits="" d'herba="" cistanche="" par="" rapport="" au="" groupe="" b="" les="" valeurs="" de="" ss="" chez="" les="" rats="" du="" groupe="" b="" étaient="" plus="" élevées="" par="" rapport="" au="" groupe="" a="" (𝑃="">< 0.01) ;="" les="" groupes="" c,="" d="" et="" e="" ont="" des="" niveaux="" atténués="" de="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (figure="" 5).="" comparativement="" aux="" rats="" constipés,="" les="" niveaux="" de="" cgrp="" chez="" les="" rats="" normaux="" du="" groupe="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" et="" dans="" les="" groupes="" c,="" d="" et="" e="" ayant="" reçu="" herba="" cistanche="" étaient="" constants="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Altération histologique du côlon.

Pour déterminer si le traitement à l'AEHC peut induire une altération structurelle du tissu du côlon, la longueur des villosités, l'épaisseur de la couche de crypte et l'épaisseur des muscles ont été mesurées dans le côlon transverse des rats des cinq groupes après coloration H&E. En comparant la pathologie du côlon des rats de chaque groupe, la muqueuse colique était lisse et contient de petites artères et de petites veines dans la sous-muqueuse et un grand nombre de cellules adipeuses. De plus, la couche musculaire était constituée de cellules musculaires lisses et la sous-séreuse était complète. La longueur moyenne des villosités était significativement plus courte dans le groupe B que dans le groupe A (𝑃 < {{0}}.01).="" cependant,="" la="" longueur="" moyenne="" des="" villosités="" dans="" le="" groupe="" c="" a="" considérablement="" augmenté="" de="" plus="" de="" 30="" %="" par="" rapport="" au="" groupe="" b="" (figures="" 6="" et="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" pendant="" ce="" temps,="" la="" longueur="" moyenne="" des="" villosités="" augmente="" considérablement="" dans="" les="" groupes="" d="" et="" e="" par="" rapport="" au="" groupe="" b="" (figures="" 6(a)="" et="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" de="" plus,="" l'altération="" de="" l'épaisseur="" musculaire="" était="" très="" similaire="" à="" la="" longueur="" des="" villosités.="" dans="" le="" groupe="" b,="" l'épaisseur="">

était considérablement plus mince par rapport au groupe A. Cependant, les niveaux d'épaisseur musculaire dans les groupes C, D et E ont augmenté de 30 à 35 % par rapport à ceux du groupe B (figures 6 et 7). Dans l'ensemble, ces résultats indiquent que l'AEHC peut augmenter la longueur des villosités et l'épaisseur des muscles dans le côlon des rats constipés.

3.7. L'administration du traitement AHEC a augmenté l'expression protéique de c-Kit et de SCF.

L'immunoréactivité de celui-ci a été détectée dans le côlon car les cellules de tous les groupes ont été testées positives pour c-kit. Comme le montre la figure 8, le niveau d'expression de c-kit dans le groupe B était inférieur à celui du groupe A (𝑃 < 0.05).="" le="" niveau="" d'expression="" de="" c-kit="" dans="" le="" groupe="" c="" était="" supérieur="" à="" celui="" du="" groupe="" b="" (𝑃=""><0.{{20}}5), tandis="" que="" plus="" de="" c-kit="" était="" présent="" dans="" les="" groupes="" d="" et="" e="" que="" dans="" le="" groupe="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" après="" traitement="" avec="" différentes="" concentrations="" d'extrait="" aqueux="" d'herba="" cistanche="" pendant="" 2="" semaines,="" les="" niveaux="" d'expression="" protéique="" de="" c-kit="" et="" scf="" ont="" été="" détectés="" par="" analyse="" western="" blot.="" l'analyse="" par="" western="" blot="" a="" montré="" que="" les="" niveaux="" d'expression="" de="" c-kit="" et="" de="" scf="" étaient="" remarquablement="" inférieurs="" après="" traitement="" au="" lopéramide="" dans="" le="" côlon="" de="" rats="" (figure="" 9).="" la="" figure="" 8(e)="" montre="" que="" la="" diminution="" de="" c-kit="" chez="" les="" rats="" constipés="" a="" augmenté="" de="" manière="" significative="" de="" 31,2="" %="" après="" avoir="" traité="" les="" rats="" avec="" 500="" 𝜇g/ml="" d'aehc="" (𝑃="">< 0,05).="" de="" plus,="" le="" traitement="" avec="" 100="" et="" 200="" g/ml="" d'aehc="" a="" élevé="" les="" niveaux="" d'expression="" de="" la="" protéine="" c-kit.="" l'expression="" de="" la="" protéine="" scf="" a="" augmenté="" de="" manière="" significative="" de="" 20,1,="" 24,7="" et="" 8,4="" %="" lors="" du="" traitement="" avec="" 100,="" 200="" et="" 500="" 𝜇g/ml="" d'aehc,="" respectivement="" (figure="" 9).="" 3.8.="" effet="" de="" l'aehc="" sur="" l'expression="" de="" l'arnm="" de="" c-kit,="" scf="" et="" pi3k.="" pour="" déterminer="" si="" le="" traitement="" par="" aehc="" peut="" affecter="" la="" régulation="" de="" l'arnm="" lié="" à="" la="" contraction="" musculaire,="" des="" altérations="" des="" niveaux="" d'expression="" de="" c-kit,="" scf="" et="" pi3k="" ont="" été="" observées="" dans="" le="" côlon="" de="" rats="" constipés="" à="" l'aide="" d'amorces="" spécifiques.="" les="" résultats="" ont="" montré="" que="" les="" niveaux="" d'arnm="" de="" c-kit="" dans="" le="" groupe="" b="" étaient="" significativement="" inférieurs="" à="" ceux="" du="" groupe="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" tandis="" que="" les="" niveaux="" d'arnm="" dans="" les="" groupes="" c,="" d="" et="" e="" étaient="" plus="" élevés="" que="" dans="" le="" groupe="" b="" (𝑃="">< 0,05)="" (figure="" 10).="" nous="" avons="" également="" examiné="">

expression de SCF, un ligand de kit. L'expression de l'ARNm du SCF chez les rats du groupe B était significativement plus faible que dans le groupe A, alors que le traitement avec l'AEHC dans les groupes C, D et E augmentait l'expression de l'ARNm du SCF (Figure 10). De plus, nous avons examiné l'effet de l'AEHC sur l'expression du gène PI3K. Au jour 14, le niveau d'expression du gène PI3K était significativement plus élevé dans les groupes C, D et E que dans le groupe B (𝑃 <>