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Cistanche a un très bon effet neuroprotecteur

Gabriel Gonzalez 1,2 , Jiˇrí Grz 1, Cosimo Walter D’Acunto 1, Petr Ka ˇnovsk2 et Miroslav Strnad1,2,*

1. Laboratoire des régulateurs de croissance, Institut de botanique expérimentale de l’Académie tchèque des sciences,

et Faculté des sciences, Université Palacký, Šlechtitel °u 27, CZ-78371 Olomouc, République tchèque;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (G.G.); jiri.gruz@upol.cz (J.G.); waldacun@gmail.com (C.W.D.)

2. Département de neurologie, Hôpital universitaire d’Olomouc et Faculté de médecine et de dentisterie,

Palacký University Olomouc, CZ-775 20 Olomouc, République tchèque; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Correspondance : miroslav.strnad@upol.cz; Tél.: +420-585-634-850

Abstrait:Cytokininessont des phytohormones à base d’adénine qui régulent les processus clés chez les plantes, tels que la division et la différenciation cellulaires, la croissance des racines et des pousses, la dominance apicale, la ramification et la germination des graines. Dans des études préliminaires, ils ont également montré des activités protectrices contre les maladies neurodégénératives humaines. Pour étendre la connaissance de la protection (activité protectrice) qu’ils offrent, nous avons étudié les activités decytokininescontre la toxicité induite par le salsolinol (SAL) (aMaladie de Parkinsonmodèle) et la mort induite par le glutamate (Glu) deneurone-comme les cellules dopaminergiques SH-SY5Y. Nous avons constaté que la kinétine-3-glucoside, le riboside de cis-zéatine et la N6-isopentenyl adénosine étaient actifs dans le modèle de MP induite par SAL. De plus, la trans-, la cis-zéatine et la kinétine ainsi que le chélateur de fer déféroxamine (DFO) et l’inhibiteur de la nécroptose nécrostatine 1 (NEC-1) ont considérablement réduit les taux de mort cellulaire dans le modèle induit par Glu. Les essais de lactate déshydrogénase ont révélé que lecytokininesfourni plus basneuroprotecteurque le MPO et le CEN-1. De plus, ils ont réduit les activités de caspase 3/7 apoptotique moins fortement que le MPO. Toutefois, l'cytokininesavaient des effets très semblables à ceux du MPO et du NEC-1 sur la production de radicaux superoxydes. Dans l’ensemble, ils ont montré une activité protectrice dans le modèle induit par sal deparkinsonienneuronalla mort cellulaire et le modèle induit par Glu des dommages oxydatifs principalement par réduction du stress oxydatif.

Mots-clés: cytokinine; phytohormone; neuroprotection; cellules SH-SY5Y de type neurone; cytotoxicité; salsolinol; glutamate; stress oxydatif; Maladie de Parkinson

usine de cistanchesur les effets surNeuroprotection

1. Introduction

Maladie de Parkinson() est la deuxième maladie neurodégénérative liée à la motricité la plus courante, et le nombre de cas diagnostiqués dans le monde devrait passer de 6 millions en 2015 à plus de 12 millions d’ici 2040 [1]. Elle se caractérise par des symptômes moteurs liés à une dégénérescence spécifique et à une perte d’environ 30 à 70% de dopaminergique (DA)Neuronesdans la substantia nigra pars compacta et leurs projections au striatum [2,3]. Certaines des nombreuses caractéristiques moléculaires connues de la MP comprennent l’amélioration du stress oxydatif et nitrosatif, le dysfonctionnement mitochondrial [4-7], l’excitotoxicité [8], le dysfonctionnement du système ubiquitine / protéasomal [9] et la neuroinflammation [10]. Les traitements actuels ont divers effets secondaires indésirables et n’offrent qu’un soulagement symptomatique [11], de sorte qu’il y a des efforts intenses pour développer des médicaments ayant des effets curatifs efficaces sur la DA dégénérativeNeurones. Les ressources qui peuvent aider ces efforts comprennent les composés naturels qui ont tendance à avoir moins d’effets secondaires. Entre autres, les substances du Ginkgo biloba (ginkécérine, ginkgolide, bilobalide), du ginseng (ginsénosides) et des flavonoïdes (baicaléine, kaempférol, rutine et lutéoline) ont démontré une large activité protectrice dans plusieurs modèles in vitro (y compris la lignée cellulaire de neuroblastome humain SH-SY5Y) et des modèles in vivo de induits par le dichlorure de 1,1'-diméthyl-4,4'-bipyridinium (paraquat), le 1-méthyl-4-phényl-1,2,3,6-tétrahydropyridine (MPTP), le 1-méthyl-4-phénylpyridinium (MPP+), et la 6-hydroxydopamine (6-OHDA) [12].

L’étude présentée ici s’est concentrée sur les effets d’une classe de phytohormones naturelles appeléescytokinines(CK), et leurs métabolites, qui sont des régulateurs bien connus de la division cellulaire, de la croissance, de la différenciation et de la sénescence des feuilles chez les plantes [13]. Structurellement, les CK sont des dérivés de l’adénine substitués à la position N6 par une chaîne latérale prénylique (isopentényle) ou aromatique. Les formes naturelles comprennent la 6-(E)-4-hydroxy-3-méthyl but-2-énylaminopurine (trans-zéatine, tZ), son isomère 6-(Z)-(cis-zéatine, cZ), la N6-isopentényle adénine (iP), la 6-benzyl amino purine (BAP), la 6-furfurylaminopurine (kinétine, K) et les dérivés ortho-, méta-et para-hydroxylés ou méthoxylés du BAP, appelés topolines (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT). Divers 9-ribosides, 9-nucléotides, ainsi que 7-, 9 et O-glucosides de ces formes sont également couramment présents, comme le montre le tableau 1. En plus de leur rôle indigène chez les plantes, les CK ont montré une puissante activité anti-oxydante envers les espèces réactives de l’oxygène (ROS) qui fournit une protection dans plusieurs modèles de stress in vitro de troubles associés au vieillissement [14].

Tableau 1. Structures decytokinineset les agents témoins positifs.

En particulier, les CK auraient une activité cytoprotectrice dans des modèles tels que la mort cellulaire induite par H2O2 des fibroblastes humains [15] et le stress glycoxidatif induit par le D-galactose dans les astrocytes de rat [16]. Plus important encore, dans ce contexte, ils ont montréneuroprotecteureffets dans des modèles liés à des maladies neurodégénératives telles que la MP familiale, l’inhibiteur du protéasome MG 132 induit ou la toxicité induite par H2O2 dans les cellules SH-SY5Y [17], les dommages oxydatifs induits par Glu de l’hippocampe de souris HT22neuronalcellules [18], et le modèle cellulaire PC12 de la maladie de Huntington [19]. D’autres études indiquent que les activités protectrices des CK impliquent à la fois une modulation directe [20,21] et indirecte [15,16,22] des systèmes redox cellulaires. En plus des activités antioxydantes caractéristiques des CK, ils auraient des effets régulateurs dans les mitochondries qui améliorentneuronalviabilité [17]. De plus, K peut stabiliser le potentiel de la membrane mitochondriale et augmenter la production d’ATP, atténuant ainsi la mort induite par Glu des cellules HT22 [18]. Cependant, malgré les résultats concernant leurs effets dans plusieurs modèles, il existe une connaissance limitée de l’activité protectrice des CK dans la forme la plus courante (sporadique) de LAP.

Pour combler le manque de connaissances décrit ci-dessus, nous avons systématiquement évalué les effets des CK naturels et de leurs métabolites dans deux modèles in vitro : un modèle induit par le salsolinol (SAL) de la MP et le modèle de dommages oxydatifs induit par le glutamate (Glu) dansneurone-comme les cellules SH-SY5Y. Cette lignée a été utilisée en raison de son phénotype dopaminergique, de sa sensibilité aux toxines dopaminergiques telles que le SAL et de la formation pratique de populations relativement stables deneuronalcellules ayant des taux de prolifération réduits après 48 h d’exposition à 10 uM d’acide rétinoïque tout trans (ATRA) [23–25].

Neurone-des cellules similaires ont été exposées à l’endo/exotoxine SAL pour imiter la pathologie de la MP via un dysfonctionnement du système redox cellulaire : épuisement du glutathion (GSH) et inhibition des activités des enzymes anti-oxydantes (superoxyde dismutase et catalase) et des complexes mitochondriaux (I et II), conduisant à l’apoptose et à la nécrose [26]. Dans l’autre modèle, Glu induit des dommages oxydatifs potentiellement mortels par perturbation du système redox. Les deux modèles de la lignée cellulaire SH-SY5Y ont déjà été utilisés dans des études de neuroprotection [26,27].

Les activités cytoprotectrices et / ou antioxydantes liées aux troubles dégénératifs de K, iP, BAP, iPR, tZR et leurs bases libres ont été testées, et (comme indiqué ci-dessus) certains CK se sont avérés avoir des activités protectrices dansneuronalCellules. Cependant, aucune étude publiée précédemment n’a examiné la structure-neuroprotecteurrelation d’activité (DAS) des CK naturels (tableau 1). Par conséquent, cette étude a été entreprise pour examinerneuroprotecteur(anti-parkinsonien) de presque tous les CK naturels connus dans les modèles de neurodégénérescence induits par sal et glu sélectionnés. Tout d’abord, nous avons évalué la capacité d’absorption des radicaux oxygénés (ORAC) et (dans les tests de sécurité) la cytotoxicité de chacun des CK versneurone-comme les cellules SH-SY5Y. Ensuite, nous avons évalué les effets neuroprotecteurs des composés et leur influence sur les niveaux de stress oxydatif en mesurant la production de superoxyde (O2.) (dihy-droethidium, DHE assay) et les activités apoptotiques de caspase-3,7. Les résultats fournissent les premières indications systématiques rapportées des relations entre les structures naturelles des CD etneuroprotecteurActivités.

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2. Résultats et discussion

2.1. Capacité d’absorption des radicaux oxygénés des cytokinines (ORAC)

Comme les maladies neurodégénératives sont associées à un stress oxydatif élevé, l’activité antioxydante joue un rôle clé dans les défenses deneuronalCellules. Pour évaluer le potentiel biologique des CK à cet égard, la capacité antioxydante a été déterminée par l’ORAC, qui est couramment utilisé pour déterminer la capacité antioxydante des substances [28]. La capacité antioxydante a été exprimée en équivalents Trolox (TE), ce qui détermine l’efficacité (inférieure à supérieure) des composés que Trolox sur une base équimolaire. Les résultats, présentés dans le tableau 1, montrent que les topolines (oT, mT et pT) et leurs ribosides (oTR, mTR, pTR) ont des activités antioxydantes élevées, qui sont probablement étroitement liées au système riche en électrons de leur substituant aminé C6-hydroxybenzyle. Malgré leurs valeurs ORAC élevées, les topolins n’avaient pas deneuroprotecteuractivité. Cependant, plusieurs CK hétéroaromatiques, y compris K (N6-furfurylaminopurine) et cis-zéatine-O-glucoside non aromatique (cZOG), qui a un substituant 4-hydroxy-3-méthylbut-2-en-1-yl)amino, ont également montré une capacité antioxydante élevée (tableau 2). Autres métabolites de la CK, y compris la kinétine-3-glucoside (K3G), la kinétine riboside 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

Avantages de la tige de cistanchesuranti-maladie d’Alzheimer

2.2. Différenciation des cellules SH-SY5Y

Pour étudier les CKneuroprotecteur, les cellules de neuroblastome SH-SY5Y (choisies pour des raisons déjà décrites [23]) ont été différenciées par l’exposition à 10 uM ATRA pendant 48 h comme décrit précédemment [23,24]. Ils ont ensuite été colorés à l’aide d’un kit de coloration membranaire pour examiner les différences morphologiques entre les cellules indifférenciées et différenciées. Comme le montre la figure 1A, leneurone-comme les cellules différenciées se sont développées de manière moins dense, ont été plus prolongées et ont produit plus de neurites (indiquées par des flèches jaunes dans la figure) que les cellules indifférenciées. Ces changements morphologiques associés à la différenciation ont déjà été observés, même après une exposition plus courte (24 h) à l’ATRA [24,30]. Plus important encore, le nombre de neurites augmente considérablement à un niveau où ils peuvent créer un réseau de neurites. Pour cette raison, la viabilité cellulaire a été mesurée pour comparer le taux de prolifération des cellules SH-SY5Y indifférenciées et différenciées. La viabilité du SH-SY5Y indifférencié a été considérée comme le taux maximal de prolifération. Les résultats présentés dans

La figure 1B montre que le taux de prolifération (évalué par le test de viabilité calcéine AM) de SH-SY5Y a été réduit de 23 % après 48 h de traitement par ATRA.

Graphique 1. (A) Micrographies fluorescentes de cellules SH-SY5Y avec des membranes colorées à l’aide d’un kit d’excroissance Neurite (Invitro- gen™): Cellules témoins, indifférenciées (exposées à une solution de traitement simulée:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p=""><>

Tableau 2. Capacité d’absorption des radicaux oxygénés (ORAC) de l’essaicytokinines(CK) exprimés en équivalents Trolox (TE) sur une base équimolaire. Les noms, abréviations et structures des CK sont présentés à la figure 1.

2.3. Cytotoxicité des cytokinines envers les cellules SH-SY5Y de type neurone

Dans les tests de cytotoxicité potentielle des CK avec le test de viabilité Calcein AM [31], la plupart ont montré une faible toxicité pour leneurone-comme les cellules SH-SY5Y. La diminution de la viabilité en dessous de 90 % a été considérée comme un seuil pour l’effet neurotoxique. Les deux seules exceptions étaient KR (11,9 %) et pTR (10,5 %), conformément aux constatations antérieures selon lesquelles certainscytokinineles métabolites, en particulier les ribosides, peuvent avoir des effets cytotoxiques [32]. D’autres ribosides, tels que cZR, iPR, oTR, mTR, n’ont causé aucune réduction apparente de laneurone-comme la viabilité des cellules SH-SY5Y (tableau 3). Le MPO [33,34] et le NEC-1 [35,36] utilisés comme témoins positifs dans notre modèle in vitro ont également été prouvés par d’autres études sur les cellules SH-SY5Y comme non toxiques. En conclusion, principalement les dérivés KR et pTR ont montré une viabilité inférieure à 90% et ont donc été considérés comme moins intéressants pour une évaluation plus approfondie dans les deux modèles in vitro de neurodégénérescence.

Tableau 3. Viabilité cellulaire deneurone-comme les cellules SH-SY5Y après exposition àcytokininespendant 24 h. La viabilité est exprimée en pourcentage du contrôle du DMSO.

2.4. Identification des cytokinines neuroprotectrices dans le modèle de MP induit par sal

Pour ces tests,neuronalLes cellules SH-SY5Y ont été différenciées pendant 48 h puis co-traitées avec 500 uM SAL et chaque CK à trois concentrations (0,1, 1, 10 uM). Comme le montre la ligne pointillée de la figure 2A, l’application de la neurotoxine SAL à 500 uM a réduit la viabilité des cellules SH-SY5Y différenciées, selon le test Calcein AM, de 30%. La N-acétylcystéine (NAC) a été utilisée comme témoin positif dans ces tests en raison de son effet neuroprotecteur précédemment rapporté dans le même modèle in vitro à base de cellules SH-SY5Y [37]. Des concentrations de 10, 100 et 1000 uM NAC ont été utilisées pour induire une récupération partielle ou presque complète dans le modèle SAL. Le NAC a été en mesure d’augmenter la viabilité cellulaire à une concentration de 100 uM et 1 mM, ce qui correspond à 83,39 ± 1,74 % et 89,21 ± 2,89 %, respectivement. L’activité protectrice de NAC à 100 uM (indiquée par la ligne pointillée de la figure 2A) a été utilisée comme seuil de puissance pour sélectionner les CK pour d’autres tests. Selon cette configuration, les activités neuroprotectrices biologiquement significatives ont été observées avec K3G à 10 uM (81,84 ± 2,36%), cZR à 0,1 uM (81,14 ± 2,30%) et 1 uM (81,53 ± 2,24%) et iPR à 1 uM (82,43 ± 2,51%). Ainsi, l’iPR et la cZR étaient des neuroprotecteurs efficaces à des concentrations micro ou submicromolaires inférieures à celles du NAC. Lecytokininele dépistage a également révélé que de nombreux autres métabolites peuvent augmenter modérément la viabilité des cellules SH-SY5Y différenciées exposées au SAL. Cependant, certains CK testés (y compris tZR, tZMP, mT, mTR, pT et pTR) ont eu un très faible effet protecteur.

Graphique 2. (A)Neuroprotecteuractivité decytokinineset la N-acétylcystéine (NAC) dans le modèle de MP induit par sal surneurone-comme les cellules SH-SY5Y. La ligne pointillée indique le seuil d’effet NAC auquelcytokininesont été sélectionnés pour d’autres tests; la ligne pointillée compte ensuite le nombre de cellules vivantes dans le test Calcein AM après avoir traité les cellules avec 500 uM SAL; cellules témoins saines (CTR, DMSO< 0.1%).="" triplicates="" in="" at="" least="" three="" separated="" days.="" (b)="" normalized="" sh-sy5y="" cell="" death="" after="" propidium="" iodide="" staining.="" triplicates="" in="" at="" least="" five="" independent="" days.="" *="" p="" compared="" with="" the="" vehicle="" with="" 500="" um="" sal,="" #="" p="" compared="" with="" the="" vehicle="" without="" 500="" um="">

Pour confirmer les activités anti-des CK naturels les plus actifs, les taux globaux de mortalité cellulaire ont été quantifiés par coloration à l’iodure de propidium (IP), qui (contrairement aux tests de viabilité basés sur le métabolisme cellulaire) n’étiquette que les cellules dont l’intégrité membranaire est altérée, les cellules mourantes et les cellules déjà mortes [38]. Les résultats ont été normalisés en ce qui concerne le taux de mortalité cellulaire après un traitement par SAL seul (fixé à 100 %). Comme le montre la figure 2B, la substance témoin positive NAC a considérablement réduit les taux de mortalité cellulaire à 100 et 1000 uM (à 77,3 ± 2,21 % et 77,5 ± 4,44 %, respectivement). Dans l’ensemble, le CNA s’est avéré être unneuroprotecteurayant des activités comparables à celles enregistrées dans d’autres études de manière dose-dépendante (dans la gamme 50-500 uM) pour les cellules SH-SY5Y [37]. Le test PI a également montré que les CK cZR, K3G et iPR ont des activités protectrices, en particulier cZR, qui a réduit le taux de mort cellulaire à 71,6 ± 5,08% à 0,1 uM. Contrairement à la CZR, K3G avait inversé les effets dose-dépendants, avec une activité maximale à 10 uM (réduisant le taux de mort cellulaire à 75,0 ± 3,69%) et l’activité de NPR a culminé à 1 uM (réduisant le taux à 73,9 ± 4,99%). Pris ensemble, comme le montre la figure 2, les CD ont fourni uneneuroprotecteuractivité à 100 uM NAC selon les tests de viabilité et de cytotoxicité. De plus, les concentrations efficaces de CK tels que cZR et iPR étaient beaucoup plus faibles que celles de NAC, dans les gammes submicromolaires et micromolaires. Des observations antérieures obtenues après une double coloration avec PI et annexine V/PI indiquent que K peut réduire l’apoptose [39], nous avons donc également étudié les effets des CK et du NAC sur le stress oxydatif et l’activation de la caspase-3,7 (un marqueur d’apoptose bien connu).

2.5. Les cytokinines diminuent la formation de radicaux superoxydes induite par le SAL

Le stress oxydatif (SG) est un contributeur pathologique clé à plusieurs maladies neurodégénératives, et les SAL (à > 100 uM) et les tétrahydroisoquinoles sont de puissants inducteurs de LA SG [26,40]. Ainsi, nous avons également mesuré la formation de superoxyde (un ROS et un marqueur OS important) en présence de SAL avec et sans CK ou NAC sélectionnés. Pour s’assurer que le SAL a causé suffisamment de dommages au SYSTÈME D’exploitation dans les cellules SH-SY5Y pour détecter les réponses, les cellules ont été exposées à un SAL de 500 uM pendant 24 h, comme dans les travaux précédents [37] et conformément aux résultats présentés ci-dessus. Les cellules ont ensuite été colorées par le dihydroéthidium (DHE) pour détecter la formation de radicaux superoxydes [41,42]. Comme on peut le voir à la figure 3A, les cellules ont été observées visuellement après marquage avec DHE (qui fournit des signaux de fluorescence rouge après réaction avec le superoxyde). Sal a induit une nette augmentation de la fluorescence DHE, par rapport aux niveaux dans les cellules témoins et traitées NAC. De plus, trois CK (cZR, K3G et iPR) avaient des effets visuels similaires à ceux de NAC (100 uM) sur la fluorescence DHE. De plus, la quantification spectrophotométrique par rapport aux niveaux détectés dans les cellules traitées par SAL seul (fixée à 100 %), était conforme à l’observation microscopique. Comme le montre la figure 3B, le taux normalisé de superoxyde dans les cellules témoins saines (CTR) était inférieur à 39 %, et la substance témoin positive NAC a fourni une réduction modérée à complète de la production de ROS induite par les SAL à 100 et 1000 uM (à 76,3 ± 4,33 et 44,3 ± 5,12 %), ce qui suggère que l’épuisement du glutathion (GSH) joue un rôle clé dans le modèle [26]. Fait intéressant, le SAL a induit des réductions spectaculaires de la teneur en GSH des cellules SH-SY5Y accompagnées d’une élévation de la SG, à des niveaux similaires à ceux précédemment observés dans une étude qui a également enregistré des effets médiés par la NAC sur la viabilité cellulaire, la mort cellulaire et la teneur en glutathion [43]. Les résultats présentés ici montrent que la NAC a également réduit la formation de radicaux superoxydes à des niveaux basaux (c.-à-d. des niveaux chez les témoins traités au DMSO). Les ribosides CK ont été testés à des concentrations actives (0,1 à 1 uM) avec K3G et ont réduit de manière significative la teneur en radicaux superoxydes des cellules aux niveaux suivants (par rapport à ceux des cellules traitées avec SAL seul): cZR 80,34 ± 5,99% à 0,1 uM; K3G 77,1 ± 4,89% à 10 uM; iPR 79,2 ± 5,91% à 1 uM, comparable aux effets de 100 uM NAC. Collectivement, les démonstrations orthogonales indiquent fortement qu’une puissante activité anti-OS joue un rôle clé dans les effets protecteurs de la NAC et des CK dans le modèle induit par sal. Une corrélation entre l’amélioration de la SG et la neuroprotection a également été notée par d’autres auteurs [29], et plusieurs études ont montré que K et BAP peuvent directement améliorer les activités de la SG [44] par la formation de complexes avec des ions Cu2+, entraînant une activité de type superoxyde dismutase [45,46]. Cependant, les CK ont également été décrits comme des antioxydants indirects dont les effets sont médiés par l’induction de la voie de réponse antioxydante (IPR) du facteur érythroïde 2 érythroïde 2 (NRF2) [22] ou par la restauration partielle des activités de la glutathion peroxydase et de la SOD (K) [16]. En outre, K auraitneuroprotecteuractivités contre les lésions de la SG induites par H2O2 dans les cellules SH-SY5Y [17]. Les deux types d’activité anti-ROS rapportés des CK pourraient potentiellement expliquer les effets de la CZR, du K3G et de l’iPR dans la réduction des radicaux superoxydes dans le modèle SH-SY5Y de cellulaire induit par sal [47-50].

Graphique 3. (A) Microphotographies montrant le stress oxydatif induit par les SAL et les activités de réduction du stress oxydatif decytokinineschez l’homme différenciéneurone-comme les cellules SH-SY5Y visualisées par microscopie à fluorescence suivant marquage au dihydroéthidium (DHE). Barres = 50 um. Les images montrent des cellules traitées avec une solution de DMSO (témoins), 500 uM salsolinol (SAL) seul, et des combinaisons de 500 uM SAL et 1000 uM NAC (+NAC), 0,1 uM cZR (+cZR); 10 uM K3G (+K3G), 1uM iPR (+iPR) pendant 24 h avant la coloration avec DHE. B) formation de radicaux superoxydes induite par les SAL etcytokinineou activité protectrice de la N-acétylcystéine (NAC). Le graphique montre la quantification des cellules colorées DHE à l’aide du lecteur de microplaques Infinite M200 Pro (Tecan, Autriche). Triple en au moins cinq jours indépendants. * P par rapport au véhicule avec 500 uM SAL, # P par rapport au véhicule sans 500 uM SAL.