PARTIE 2 Effets antioxydants et anticoagulants des glycosides phénylpropanoïdes isolés des orobanches (Orobanche Caryophyllacea, Phelipanche Arenaria et P. Ramosa)

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3. Résultats et discussion

Dix précédemment isolés par nousphénylpropanoïdeglycosides[8], dont le 2′-O-acétylactéoside, le 2′-O-acétylpoliumoside, le 3-O-méthyl côté podium,actéoside, arena inside, crenatoside, pheliposide, poliumoside, tubuloside A et wiedemannioside D, ainsi que trois extraits d'orobanche (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) et P. ramosa (PR)) ont été actuellement étudiés pour atténuer les effets oxydatifs stress et propriétés anticoagulantes dans un système de plasma humain. Structures chimiques de laphénylpropanoïdestestés sont présentés sur la Fig. 1, et, comme on peut le voir, ils sont tous construits selon un schéma similaire, avec les mêmes sous-unités/similaires : hydroxytyrosol, monosaccharides (glucose, rhamnose et/ou xylose) et hydroxycinnamique acide. La plupart des composés PPG examinés sont remplacés par de l'acide caféique, mais celui-ci peut être remplacé par de l'acide coumarique ou férulique. Outre les composés PPG individuels, trois extraits d'orobanche - OC, PA et PR, qui sont des mélanges de plusieurs PPG et servaient auparavant de matière première pour l'isolement des composés, ont également été inclus dans l'étude biologique. Une autre raison de la sélection de trois espèces différentes était la grande différence de profil phytochimique entre elles, comme on peut le voir sur la Fig. 2. Une comparaison plus détaillée des extraits OC, PA et PR, y compris les données quantitatives, est présentée dans le tableau 1.Actéosideétait le principal constituant de l'extrait d'O. Caryophyllaceae (690 mg/g), le téniposide et l'arène à l'intérieur dominaient chez P. Arenaria (ensemble 550 mg/g), tandis que le poliumoside et son dérivé acétylé étaient les métabolites les plus importants chez P. ramosa extrait (ensemble 640 mg/g). Les extraits examinés différaient également dans la teneur globale en phénylpropanoïdes, la quantité la plus élevée a été trouvée en OC (810 mg/g), un peu plus faible en PR (795 mg/g) et plus faible en PA (685 mg/g). De plus, il convient de noter que la présence de PPG avec des fragments autres que caféoyle, tels que le coumaroyle ou le féruloyle, n'a été détectée que dans l'extrait de P. ramosa, où ces composés constituaient environ un sixième du total des PPG (environ 120 mg/ g) (tableau 1). Des études antérieures de l'activité antiradicalaire des glycosides phénylpropanoïdes par Heilmann et al. [19] et Jedrejek et al. [8], dont environ 30 PPG différents tels queactéoside, isoacteoside et crénatoside, ont révélé sa forte relation avec la structure des groupements acyles (acide phénolique et tyrosol). En général, la modification ou la substitution de la fraction catéchol de l'unité acyle a entraîné une diminution significative de l'activité de piégeage contre les espèces réactives de l'oxygène (ROS) et le radical DPPH. Dans la présente étude, le potentiel antiradicalaire in vitro de trois extraits d'orobanche (OC, PA et PR) a été examiné avec des dosages ABTS et DPPH, et les résultats ont été comparés entre eux ainsi qu'avec l'activité de l'individu.phénylpropanoïdecomposants mesurés dans notre précédente étude [8]. Les résultats ont été exprimés en équivalents Trolox (TE) et en valeurs IC50 (tableau 2). En général, les trois extraits étaient de bons piégeurs des radicaux ABTS et DPPH, mais des différences ont également été observées parmi les échantillons testés (le TE estimé était de l'ordre de 0.5–0.7 ; 1,0 était l'équivalent de Trolox). L'activité de piégeage antiradicalaire des échantillons était dans l'ordre suivant : Trolox > OC > PA > PR. L'extrait d'Orobanche Caryophyllaceae (IC50=155–275 µg/mL) avait plus de 20 % d'activité en plus que l'extrait de Phelipanche ramosa (IC50=200–320 µg/mL). L'activité de piégeage des radicaux la plus élevée rapportée de l'extrait d'OC peut s'expliquer par la teneur la plus élevée en PPG dans cet échantillon, ainsi que par l'apport deactéoside, son ingrédient dominant, qui selon les recherches précédentes [8,19] est l'un des plus puissants piégeurs de radicaux libres parmi les métabolites de ce groupe (TEDPPH=0.87 ; [4]). Cependant, compte tenu de la relation mutuelle entre l'activité antiradicalaire et le contenu dephénylpropanoïdesdans les extraits OC, PA et PR, aucune corrélation simple n'a été trouvée entre ces deux facteurs (r < 0.5),="" indiquant="" un="" apport="" significatif="" de="" profil="" qualitatif.="" ceci="" est="" principalement="" lié="" à="">

L'extrait de P. ramosa, qui malgré le niveau élevé de PPG ({{0}}.8 g/g) était caractérisé par l'activité biologique la plus faible parmi les échantillons testés (TE ~ 0.5) . L'extrait de PR, comme mentionné ci-dessus, était le seul échantillon à posséder les phénylpropanoïdes avec des acides coumariques ou féruliques, des substances dépourvues de groupement catéchol à cycle B, qui auraient un potentiel antioxydant réduit. Quatre composés PPG ayant modifié l'acide caféique, y compris le 3-O-méthylpoliumoside, le ramoside A et le wiedemannioside D, testés par nous avaient précédemment le TEDPPH d'environ 0,3 [8]. Ainsi, les résultats actuels sont conformes et confirment les découvertes des précédentes expériences antiradicalaires in vitro sur les phénylpropanoïdes. Comme Chen et al. [20] décrit, il est associé à une plus grande capacité de donneur d'hydrogène ou de stabilisation du radical par divers groupes fonctionnels d'un mélange de composés. Plusieurs éléments structuraux ont été identifiés comme renforçant l'activité antioxydante directe des polyphénols, en particulier ceux associés au nombre et à la position des groupes hydroxyle. On pense que l'activité de piégeage des radicaux libres augmente avec le nombre croissant de groupes -OH. Cependant, la position de ces groupements, dans une molécule, a un impact encore plus important sur l'activité exercée. Les composés puissants relativement stables sont ceux qui possèdent une fraction 3,4-dihydroxy dans leurs structures, ainsi que ceux qui possèdent plus de deux groupes hydroxyle [21]. La structure chimique de la substance antioxydante permet de comprendre le mécanisme de la réaction antioxydante. Lopez-Munguia et al. [22], basés sur des calculs de la théorie fonctionnelle de la densité (DFT), ont déterminé que le mécanisme antioxydant des PPG procède par un transfert séquentiel d'électron unique par perte de protons (SPLET). Cependant, Li et al. [23] tentent d'explorer les mécanismes des antioxydants phénoliques phénylpropanoïdes, ont conclu que les PPG (actéoside, forsythoside B et poliumoside) peuvent être impliqués dans de multiples voies pour exercer l'action antioxydante, renforçant le rôle des résidus de sucre. Des études ont montré que les antioxydants d'origine végétale sont des modulateurs efficaces de l'hémostase dans les maladies cardiovasculaires [24-26]. Diverses plantes utilisées en médecine traditionnelle contiennent des niveaux importants de PPG [27,28]. De plus, les PPG sont connus pour avoir une gamme de

activités, y compris les propriétés anti-inflammatoires, anti-néphritiques et anti-hépatoxiques [29-33]. Dans leur récente étude, Jedrejek et al. [8] ont décrit l'isolement de PPG à partir de trois orobanches polonais et évalué leur activité antioxydante par le test DPPH. Sur cette base, la présente étude évalue si les dix PPG sélectionnés isolés de ces plantes pourraient réduire le stress oxydatif dans le plasma humain traité avec un oxydant biologique fort, à savoir le donneur de radicaux hydroxyle H2O2/Fe, et moduler les propriétés de coagulation du plasma in vitro. Les propriétés antioxydantes de dix

les PPG isolés ont été déterminés en fonction de paramètres sélectionnés du stress oxydatif : le niveau de TBARS en tant que marqueur de la peroxydation lipidique, ainsi que les niveaux de groupe carbonyle et de groupe thiol, en tant que marqueurs de dommages oxydatifs aux protéines. Les niveaux de peroxydation lipidique plasmatique et de carbonylation des protéines dans le plasma induits par H2O2/Fe ont été significativement réduits en présence de huit composés testés, à savoir. actéoside, crénatoside, 2′-O-acéty lactéoside, phéliposide, arena inside, tubuloside A, poliumoside et 3- O-méthylpolimuoside, à toutes les concentrations testées (1, 5 et 50 µg/mL) ; cependant, aucun effet n'a été observé pour deux des composés testés, à savoir. 2′ -O-acétylpoliumoside et wiedemannioside D, ou l'un des extraits testés à n'importe quelle concentration (1, 5 et 50 µg/mL). De plus, aucun des composés testés ou des extraits testés ne protégeait le plasma contre l'oxydation du groupe thiol induite par H2O2/Fe dans les protéines (Fig. 3–5). Cependant, les extraits testés peuvent être à l'origine de composés aux propriétés biologiques diverses. Pour la première fois, les résultats de la présente étude indiquent que huit des PPG testés démontrent un potentiel antioxydant dans le plasma humain en présence d'espèces réactives exogènes de l'oxygène en inhibant la peroxydation des lipides et la carbonylation des protéines dans le plasma traité avec H2O2/Fe. De plus, le 2'-O-acétylpoliumoside et le wiedemannioside D n'ont pas présenté un tel effet. En général, nos résultats sont cohérents avec les expériences in vitro précédentes sur les PPG. Heilman et al. [19] et Jedrejek et al. [8] rapportent une corrélation entre la structure chimique des PPG et leurs activités. Les propriétés antioxydantes des PPG semblent être principalement liées à la structure de leurs fractions acyle, c'est-à-dire l'acide phénolique etphénylpropanoïdel'unité, y compris la présence et/ou la modification de la fraction catéchol. Par exemple, le wiedemannioside D s'est avéré perdre son potentiel antioxydant vis-à-vis du plasma traité avec H2O2/Fe suite au remplacement de sa fraction caféoyle par une fraction féruloyle. Les modifications du processus de coagulation résultent souvent du stress oxydatif; ces changements peuvent moduler les fonctions du système cardiovasculaire et peuvent conduire au développement de maladies cardiovasculaires [1]. Sur les dix composés végétaux et trois extraits de plantes testés dans la présente étude, le tubuloside, le poliumoside et le 3-O-méthylpoliumoside et tous les extraits testés ont démontré qu'ils prolongent considérablement le temps de thrombine à toutes les concentrations testées, à savoir. 1, 5 et 50 µg/mL (Fig. 6B). Cependant, aucun de ces extraits, ni aucun des composés testés, n'a modifié le PT ou l'APTT (Fig. 6A et C). Le tableau 3 compare les effets des PPG (5 µg/mL) sur les biomarqueurs du stress oxydatif dans le plasma traité avec H2O2/Fe et leur influence sur la coagulation. Huit des PPG testés ont démontré un potentiel antioxydant uniquement dans le plasma humain traité ; cependant, trois PPG testés se sont révélés posséder à la fois des propriétés antioxydantes et un potentiel anticoagulant. Fait intéressant, les résultats du test DPPH ne coïncident pas avec ceux obtenus dans le modèle biologique utilisant du plasma humain traité avec H2O2/Fe : le potentiel antioxydant des extraits testés peut être bloqué par certains composés présents dans le plasma. En conclusion, nos résultats actuels jettent un nouvel éclairage sur le potentiel antioxydant et les propriétés anticoagulantes des PPG. Il apparaît que la structure des PPG, en particulier la présence de fractions acyle et catéchol, est principalement liée à leurs propriétés antioxydantes et anticoagulantes. Certains PPG pourraient bien avoir le potentiel pour le traitement des maladies cardiovasculaires associées au stress oxydatif. Cependant, d'autres expériences sont nécessaires pour déterminer les concentrations de ces composés nécessaires pour les modèles in vivo.

Déclaration de conflit d'intérêts

Les auteurs déclarent n'avoir aucun concurrent financier connu

des intérêts ou des relations personnelles qui auraient pu sembler influencer

les travaux rapportés dans cet article.

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