Glycosides phényléthanoïdes de Cistanche sur le modèle du syndrome de la ménopause chez la souris

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ShuoTian, ​​Mingsan Miao, MingBai, Zhenzhen Wei

Département de pharmacologie, Université de médecine chinoise du Henan, Zhengzhou 450008, Chine Disponible en ligne le 10 mai 2017.

Résumé

Cistanche est l'herbe chinoise traditionnelle et précieuse, avec deux mille ans d'histoire d'utilisation en Chine. Il a pour effet de tonifier les reins, de puissants suppléments pour le foie et les reins, et de reconstituer l'essence et le sang, connus sous le nom de "ginseng du désert". Ici, nous avons exploré le mécanisme deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanche(PGC) aux souris modèles desyndrome de la ménopause, ainsi que l'effet thérapeutique et les caractéristiques du PGC poursyndrome de la ménopause. Dans cette étude, des souris KM ont été reproduites par la résection complète des ovaires des deux côtés du dos pour établir les souris modèles dusyndrome de la ménopause(MPS), et ont reçu de l'eau distillée ou des médicaments, respectivement. Les souris modèles ont reçu de l'eau distillée. Les souris ont reçu 200 mg/(kg jour) de fortes doses deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanche(HPGC), 100 mg/(kg jour) doses moyennes deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanche(MPGC), et 50 mg/(kg jour) de faibles doses deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanche(LPGC). Après 21 jours, il a pu déterminer le nombre d'activités indépendantes et le nombre de positions debout, la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et le nombre d'électricité. Il a également calculé l'indice des viscères de l'utérus, du thymus, de la rate, mesuré les niveaux d'estradiol (E2), de testostérone (T), d'hormone lutéinisante (LH) et d'hormone folliculo-stimulante (FSH) dans le sérum. De plus, il a observé les changements pathologiques de l'utérus, du thymus, de la rate et de l'hypophyse des souris. Les résultats ont montré que les indicateurs comportementaux : par rapport au groupe modèle (MG), HPGC, MPGC, LPGC pouvaient augmenter les activités indépendantes (P < 0.01) ;="" hpgc,="" mpgc="" pourraient="" augmenter="" le="" nombre="" de="" positions="" debout,="" la="" période="" de="" latence="" de="" la="" première="" entrée="" dans="" la="" chambre="" noire="" et="" réduire="" le="" nombre="" électrique="" (p=""><0.01) ; lpgc="" pourrait="" augmenter="" le="" nombre="" de="" places="" debout="" (p="">< 0.05) ;="" indice="" des="" viscères :="" par="" rapport="" à="" la="" mg,="" l'hpgc,="" la="" mpgc="" pourrait="" augmenter="" l'indice="" des="" viscères="" de="" l'utérus,="" du="" thymus="" et="" de="" la="" rate=""><0.01) ; lpgc="" pourrait="" augmenter="" l'indice="" des="" viscères="" de="" l'utérus="" (p="">< 0,05) ;="" indice="" sérique :="" par="" rapport="" à="" la="" mg,="" tous="" les="" groupes="" ont="" pu="" diminuer="" les="" niveaux="" de="" lh="" dans="" le="" sérum="" (p="">< 0,01) ; hpgc,="" mpgc="" pourraient="" améliorer="" les="" niveaux="" de="" e2,="" t="" et="" diminuer="" les="" niveaux="" de="" lh,="" fsh="" dans="" le="" sérum="" (p="">< 0,01)="" ;="" le="" lpgc="" pourrait="" améliorer="" les="" niveaux="" d'e2="" et="" diminuer="" les="" niveaux="" de="" fsh="" dans="" le="" sérum="" (p="">< 0,05).="" pendant="" ce="" temps,="" il="" avait="" tendance="" à="" améliorer="" les="" niveaux="" de="" t="" dans="" le="" sérum.="" modifications="" pathologiques :="" par="" rapport="" à="" la="" mg,="" la="" hpgc="" pourrait="" améliorer="" de="" manière="" significative="" les="" modifications="" pathologiques="" de="" l'utérus,="" du="" thymus,="" de="" la="" rate="" et="" de="" l'hypophyse="" des="" souris ;="" d'autres="" groupes="" ont="" également="" un="" certain="" effet.="" les="" résultats="" ont="" indiqué="" que="" la="" pgc="" pourrait="" améliorer="" le="" trouble="" hormonal="" sexuel="" de="" la="" mps="" et="" restaurer="" la="" fonction="" de="" l'utérus,="" du="" thymus="" et="" de="" la="" rate,="" avec="" un="" meilleur="" effet="" thérapeutique="" sur="" la="">

Résumé graphique

Mots clés : PGC ;Syndrome de la ménopause; Souris

Abréviations

SPMsyndrome de la ménopauseCGPPolyéthylène Glycosides de CistancheHPGCfortes doses deGlycosides phényléthanoïdes de CistancheMPGCdoses moyennes de Phenylethanoid Glycosides de CistancheLPGCfaibles doses deGlycosides phényléthanoïdes de CistancheTtestostéroneE2EstradiolLHhormones lutéinisantes hormone folliculo-stimulante

Phényléthanoïdes Glycosides de Cistanche sur le syndrome de la ménopause

1. Introduction

Cistanche, les tiges charnues séchées aux feuilles écailleuses de Cistanche deserticola YC Ma et C. tubulosa (Schrenk) Wight (Chen et al., 2013), est un médicament célèbre et largement utilisé depuis des milliers d'années. Il est issu du "Shen Nong's Herbal Classic" (Liu et al., 2013), de saveur salée et de nature chaleureuse. Il a pour effet de tonifier les reins, de puissants suppléments pour le foie et les reins, de reconstituer l'essence et le sang, d'humidifier les intestins pour soulager la constipation et d'autres efficacités. Il est principalement utilisé pour traiter la déficience du yang du rein (conduisant à l'impuissance), la prospérité, le sperme froid et la stérilité due au froid dans l'utérus, la constipation, l'énurésie, la fréquence des mictions et une autre maladie. La recherche moderne montre qu'il peut améliorer l'immunité humaine, la mémoire et la capacité d'apprentissage avec des effets anti-âge, anti-inflammatoires, anti-fatigue et autres (Li et al., 2010, Rashid et al., 2017).

La MPS est un syndrome de dysfonctionnement du système nerveux autonome causé par un trouble de la sécrétion d'œstrogènes et accompagné de symptômes neuropsychiatriques. Il présente différents degrés de bouffées de chaleur, d'irritabilité, de vertiges, d'acouphènes, de palpitations, d'insomnie, etc., avec une ostéoporose visible, une perte de mémoire, des troubles cognitifs, des maladies cardiovasculaires et cérébrovasculaires à la fin de la période. La raison principale est le déclin progressif et la disparition de la fonction ovarienne (Ia, 2016). Actuellement, l'utilisation principale de l'hormonothérapie substitutive (HTS) pour le traitement de la MPS, des suppléments directs d'œstrogène, de l'HTS à long terme peut provoquer des saignements vaginaux, une sensibilité mammaire, un cancer de l'endomètre, un cancer du sein et d'autres effets indésirables. De plus, l'effet n'est pas encore satisfaisant - la dose d'œstrogène sur le système immunitaire a toujours un effet inhibé (Ma et al., 2016, Nawaz et al., 2017). Surtout la découverte récente montre qu'il peut augmenter le risque de maladies cardiovasculaires et cérébrovasculaires et d'autres effets secondaires graves limitant considérablement l'application clinique. Dans la demande urgente du marché, la médecine traditionnelle chinoise (MTC) accorde de plus en plus d'attention à la recherche du traitement des médicaments MPS (Halim et Phang, 2017, Mustafa et al., 2017). La MTC traite la MPS avec une longue histoire (Zhang et Miao, 2011), en régulant l'axe hypothalamo-hypophyso-ovarien (HPOA), la récupération de la fonction ovarienne et le retard du vieillissement ovarien. Il a été constaté que la majorité des médicaments du yang du rein ont un meilleur effet thérapeutique sur le MPS (Wei et Miao, 2013).

Cistancheest la fréquence la plus élevée de médicaments reconstituant le yang du rein pour les dynasties passées (Tu et al., 2011). Les principaux composants efficaces deCistanchesont des glycosides phényléthanoïdes, à effet androgène. C'est l'incarnation de la médecine moderne du rein yang (Zhao et Pan, 2013), avec les ingrédients actifs les plus élevés dans le Cistanche (Yan et al., 2012). C'est principalement à travers deux façons de fonctionner (Wumaierjiang et Yao, 2016). Premièrement, il a pour fonction de renforcer la fonction hypothalamo-hypophyso-surrénalienne et de favoriser la libération de neurotransmetteurs et d'hormones dans le corps; deuxièmement, il a la fonction d'anti-fatigue, améliorant la fonction corporelle. L'effet du reconstituant rénal de Cistanche est différent des médicaments rénaux généraux tels que Epimedium brevicornum Maxim, Morinda officinalis How.Cistanchene blesse pas le yin mais reconstitue le rein. Il n'apparaît pas avec équité, bouche sèche et autres symptômes pour une utilisation à long terme.

2. Matériel et méthodes

2.1. Matériel et réactifs

Cistanche(Lot n ° 20130501) a été acheté auprès d'Anhui, Dechang Pharmaceutical Pieces Co., Ltd. Les échantillons ont été identifiés par le professeur Chen Suiqing (Université de médecine chinoise du Henan, identification de la discipline pharmaceutique chinoise) comme les tiges charnues séchées avec des feuilles écailleuses deCistanchedeserticola Y. C. Ma, ainsi que les tiges charnues séchées avec des feuilles écailleuses de C. tubulosa (Schrenk) Wight, respectivement. GC (lot n° 120303) a été fourni par Shanxi star Pharmaceutical Co., Ltd. ; La substance de référence de l'échinacoside (lot n°111670-200503) a été fournie par l'Institut national de contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques ; La résine d'absorption macroporeuse AB-8 (lot n° 20130618) a été fournie par le Tianjin Guangfu de l'Institut de l'industrie chimique superfine ; Carboxyméthylcellulose sodique (lot n° 20120418, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Co., Ltd.), benzylpénicilline sodique pour injection (lot n° c1206807, North China Pharmaceutical Co., Ltd., spécification : 4 millions d'unités), 0,9 % de sodium Injection de chlorure (lot n° 1301265303, Chen Xin Pharmaceutical Co., Ltd ; spécifications : 250 ml), hydrate de chloral (lot n° 20120827, Tianjin Institute of Fine Chemical Industry), kit de dosage ELISA E2 (lot n° 20131001A, R&D Systems Chine), kit de test T ELISA (lot n° 20131001A, R&D Systems China), kit de test LH ELISA (lot n° 20131001A, R&D Systems China), kit de test FSH ELISA (lot n° 20131001A, R&D Systems China).

2.2. La préparation des échantillons

2.2.1. Méthodes de préparation

La procédure de préparation des échantillons était la suivante : selon les méthodes de la littérature (Gu et al., 2011), nous étions sous la direction de Feng Suxiang (discipline du cours d'analyse pharmaceutique, Université de médecine chinoise du Henan). LaCistanchebroyé au repas, par les méthodes d'extraction à reflux pour extraire 2 fois avec la quantité d'alcool éthylique (la teneur en alcool éthylique était de 70 pour cent). Le temps d'extraction au reflux était de 1,5 h pour une fois, puis on a combiné le liquide d'extraction à l'alcool 2 fois. Le liquide d'extraction a été décomprimé et enrichi sans l'arôme d'alcool, et l'eau distillée a été utilisée pour se disperser (la concentration est de 0,5 g/ml, comme solution d'échantillon. La solution d'échantillon a été installée dans la résine AB-8 avec débit (le rapport de la solution d'échantillon à la résine était de 1:10), après avoir reposé pendant 5 h jusqu'à ce que la solution d'échantillon soit complètement adsorbée. Et puis, d'abord avec 10 fois le volume de la colonne d'eau distillée pour laver l'AB{{12} } résine avec la solution d'échantillon, elle a été abandonnée à l'eau; Deuxièmement, avec 10 fois le volume de la colonne d'alcool éthylique (la teneur en alcool éthylique est de 10 pour cent), les impuretés ont été éliminées; Troisièmement, avec 7 fois de le volume de colonne de l'alcool éthylique (la teneur en alcool éthylique était de 60 pour cent) à l'élution, nous avons recueilli l'éluat et séché l'éluat, c'est-à-dire la poudre deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanche.

Phényléthanoïdes Glycosides de Cistanche sur le syndrome de la ménopause

2.2.2. Sélection de la longueur d'onde de détermination

Sélectionnez {{0}}.5 mL de solution de produit de contrôle et ajoutez 1 mL de solution de nitrite de sodium à 5 % au produit de contrôle. Puis secouez et placez au calme pendant 6 min. Après cela, ajoutez une solution de nitrate d'aluminium à 10% au mélange ci-dessus. Ensuite, secouez et placez au calme pendant 6 min. Ajouter 10 ml d'hydroxyde de sodium à 10 % au mélange ci-dessus, le volume du mélange a été fixé à 25 ml avec l'eau. Agiter et placer au calme pendant 18 min, comme solution de produit témoin. Choisissez 0,5 mlGlycosides phényléthanoïdes de Cistanchesolution, comme la configuration de méthode ci-dessus, comme solution de test. L'échantillon à blanc était la solution à blanc à l'exception de la solution de produit témoin et de la solution d'échantillon, comme la configuration de méthode ci-dessus. Dans le spectrophotomètre UV avec la gamme de longueurs d'onde de 200 à 800 nm, la longueur d'onde complète a été utilisée pour balayer les 3 solutions ci-dessus. La solution de produit témoin et la solution d'échantillon avaient le pic d'absorption maximal à 507 nm, de sorte que la longueur d'onde de 507 nm a été déterminée comme longueur d'onde d'absorption.

Après leGlycosides phényléthanoïdes de Cistanchesolution (1) et la substance de référence Echinacoside (2) (contraste de superposition), la couleur est apparue (Voir la figure suivante)

2.2.3. Méthode de détection de contenu

Peser précisément 1 ml en attendant la détermination de la solution, ajouter 1 ml de solution de nitrite de sodium à 5 % au produit témoin, agiter et placer au calme pendant 6 min. Et puis ajoutez une solution de nitrate d'aluminium à 10% au mélange ci-dessus. Secouez et placez tranquillement pendant 6 min. Ajouter 10 ml d'hydroxyde de sodium à 10 % au mélange ci-dessus et le volume du mélange a été fixé à 25 ml avec l'eau. Secouez et placez au calme pendant 18 min; la solution à blanc a été préparée par le même procédé avec l'échantillon à blanc sans solution d'échantillon. Avec la spectrophotométrie UV pour déterminer à la spectrophotométrie de 507 nm.

2.2.4. Examen méthodologique

2.2.4.1. Préparation de la solution de contrôle et de la solution échantillon

Préparation de la solution témoin : Peser précisément 3.06 mg d'échinacoside avec séchage à poids constant comme substance de référence, et le mettre dans le flacon doseur de 25 mL. Ensuite, utilisez une solution d'éthanol à 70 % diluée à l'échelle et agitez le mélange comme solution de contrôle. La teneur de la solution témoin était de 0,1224 mg/ml.

Préparation de la solution échantillon : Pesée précise 5 mgGlycosides phényléthanoïdes de Cistancheet le mettre dans le flacon doseur de 10 mL. Ensuite, utilisez une solution d'éthanol à 70 % diluée à l'échelle et secouez le mélange comme solution d'échantillon.

2.2.4.2. Préparation de la courbe standard

Dessinez avec précision la solution de contrôle de {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10 }}, 5.0 et 6,0 mL, conformément à la « Sélection de la longueur d'onde de détermination », et mesuré l'absorbance. L'équation de régression a été obtenue en utilisant la concentration à l'absorbance : Y=20.296X - 0,0015 (r=0.9994), et la plage linéaire était de 4,90 à 29,4 ug/ml.

2.2.4.3. Essai de précision

Parallèlement déterminé l'absorbance de la solution d'échantillon 6 fois selon l'élément de "Méthode de détection du contenu". Après avoir calculé l'écart type relatif de l'absorbance, l'absorbance était 0.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0 .297 et 0.297, et l'absorbance moyenne était de 0.298, avec RSD=0.330 % (n=6).

2.2.4.4. Essai de stabilité

Déterminer l'absorbance de la solution d'échantillon après que la solution a été entièrement colorée pendant {{0}}, 15, 30, 50 et 60 min selon l'item "Méthode de détection de contenu". Après avoir calculé l'écart type relatif de l'absorbance, l'absorbance était de 0 0,300, 0,296, 0,295 et 0,295, et l'absorbance moyenne était de 0,299, avec RSD=1 0,362 % (n {{17 }}).

Phényléthanoïdes Glycosides de Cistanche sur le syndrome de la ménopause

2.2.4.5. Tests répétitifs

Préparez 6 solutions d'échantillon selon l'item "Préparation de la solution d'échantillon", et calculez l'absorbance et le contenu selon l'item "Méthode de détection du contenu". Le contenu était de 65,2 %, 65,6 %, 66,7 %, 67,2 % et 66,5 %, respectivement, et le contenu moyen était de 66,2 %, avec RSD=1.142 % (n=6).

2.2.4.6. Test de taux de récupération d'échantillon

Précision peser 9 morceaux de la solution d'échantillon dont le contenu était connu, et chaque morceau était 0.5 mL. Ajouter respectivement 200, 250 et 300 ul de solution standard dans la solution d'échantillon. Calculer le taux de récupération et l'écart type relatif deGlycosides phényléthanoïdes de Cistancheet les taux de récupération étaient de 101,45 % , 99,26 % , 98,94 % , 101,83 % , 99,05 % , 99,47 % , 98,72 % , 99,17 % et 100,64 % . Le taux de récupération moyen était de 99,84 %, avec RSD=1,164 % (n=9).

2.2.5. Détermination du contenu de l'échantillon

Préparez 3 solutions d'échantillon conformément à la rubrique "Préparation de la solution d'échantillon". Ensuite, calculez l'absorbance selon l'item "Méthode de détection du contenu" à la spectrophotométrie de 507 nm, et calculez le contenu. Le tableau 1 montre les résultats.

Tableau 1. Résultat deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanchecontenu.

2.3. Animaux d'expérimentation

Des souris femelles KM (20 à 25 g) ont été achetées à l'Institut des produits biologiques de Wuhan. Numéro de permis animal : 42000400000611, le certificat de laboratoire n° SYXK (Henan) 2010-001.

2.4. Instrument expérimental

Centrifugeuse de table à grande vitesse, usine d'instruments scientifiques Shanghai Anting, modèle : TGL-168 ; Balance analytique électronique, Ohaus (Shanghai), modèle : AR1140/C ; Instrument de test des activités autonomes des souris, Chengdu Taming Science and Technology Limited Company, modèle : ZZ-6 ; Instrument sombre pour souris, Chengdu Taming Technology Co., Ltd., modèle : BA-200 ; Instrument de marquage enzymatique, USA BIO-RAD, Modèle : 680 ; Microscope électrique, société japonaise OLYMPUS, modèle : BX61.

2.5. Modèle animal expérimental

100 souris KM (23–25 g) ont été pesées et ont reçu une injection intrapéritonéale de 10 % d'hydrate d'aldéhyde de chlore (0,03 mL/10 g), fixation abdominale après anesthésie. 12 souris ont été sélectionnées au hasard comme groupe de contrôle à blanc (BC), avec l'opération fictive ; d'autres ont été menées avec le modèle MPS. Sous le dos de la dernière côte de la souris, cisaillez les cheveux de la souris à l'intersection de la ligne médio-axillaire et à la distance de la colonne vertébrale latérale d'environ 1 cm. Après avoir désinfecté, ouvert la peau et le muscle du dos d'environ 0,5 à 1 cm, nous avons trouvé une masse grasse blanche laiteuse dans le champ visuel de l'incision et l'ovaire était incrusté dans la graisse. Tirez doucement la graisse hors de l'incision avec la pince à épiler et séparez la graisse, on pourrait constater que le mince fil irrégulier de l'ovaire jaune-rouge. Tout d'abord, les ovaires étaient sous la trompe de Fallope (y compris la graisse) avec un fil fin ligaturé, puis retirer les ovaires. Après l'opération, l'utérus a été remis dans la cavité abdominale. Coudre les muscles et la peau, et les ovaires bilatéraux ont été retirés avec la même méthode. Alimentation prudente après la chirurgie, injection intramusculaire de pénicilline 200 000 U/kg, en cas d'infection, une fois par jour pendant 3 jours. Après 5 jours d'intervention chirurgicale, les frottis vaginaux des souris ont été testés, une fois par jour pendant 5 jours, afin de déterminer si les ovaires étaient complètement retirés.

2.6. Regroupement expérimental

Les souris ont eu la période oestrale par les frottis vaginaux ont été abandonnées, et 72 souris avec castration complète ont été divisées au hasard en cinq groupes (n=12 par groupe), à ​​savoir le groupe modèle (MG), GC, HPGC, MPGC et LPGC.

2.7. Méthode de distribution

{{0}}CMC à 5 % : carboxyméthylcellulose sodique 4 g, avec de l'eau distillée dans 800 ml. La dose de médicament de HPGC, MPGC et LPGC était de 200, 100 et 50 mg/kg, respectivement (volume de dosage : 0,1 ml/10 g). Peser le PGC de 2000 mg, 1000 mg et 500 mg, dissous avec une petite quantité de 0,5 % de CMC. Réglez ensuite le volume à 100 ml et mélangez la suspension. La dose de médicament de GC était de 675 mg/kg, avec 9 comprimés de GC dissous avec une petite quantité de CMC à 0,5 %. Réglez ensuite le volume à 40 ml et mélangez la suspension.

2.8. Administration de médicaments

Les animaux de chaque groupe ont reçu des médicaments correspondant aux médicaments le 10e jour après la chirurgie. Le groupe GC a reçu une suspension de GC à raison de 675 mg/kg, et les groupes HPGC, MPGC et LPGC ont reçu une suspension de HPGC, MPGC, LPGC à raison de 200 mg/kg, 100 mg/kg et 50 mg/kg. Les groupes BC et MG ont reçu le même volume de solution de CMC à 0,5 %, une fois par jour pendant 21 jours.

2.9. Détermination des activités indépendantes et du nombre de permanents

Les souris de chaque groupe administrées pendant 18 jours ont été placées dans l'instrument d'activité indépendant, adaptées à l'environnement pendant 1 min. Ensuite, déterminez le nombre d'activités indépendantes et debout dans les 5 min.

2.10. Détermination de la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et du numéro électrique

Les souris de chaque groupe ont été administrées pendant 19 jours, la queue des souris faisant face à la petite porte de la chambre noire dans la boîte de détermination. Après 24 h (administré pendant 20 jours), déterminer la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et le numéro électrique dans les 5 min.

2.11. Calcul de l'indice des viscères

Souris après la dernière administration de 2 h (à jeun depuis 12 h). Après prélèvement de sang, les souris ont été sacrifiées et disséquées. Retirer le thymus, la rate et l'utérus et peser le poids humide de l'organe. Calculez ensuite l'indice des viscères (Indice des viscères=Poids humide de l'organe mg/Poids corporel g).

2.12. Mesure de la teneur en E2, T, LH, FSH

Les souris, après la dernière administration de 2 h (à jeun depuis 12 h), ont été pesées puis prélevées du sang. Séparez le sérum et déterminez la teneur en E2, T, LH et FSH dans le sérum comme spécification.

2.13. Observation des changements morphologiques de l'utérus

Selon les changements des souris d'expérience de l'endomètre, des glandes et de la couche musculaire, les critères semi-quantitatifs ont été utilisés pour mesurer l'utérus. La morphologie de l'organisation pathologique pouvait être divisée en quatre niveaux : le niveau « - » signifiait que les cellules épithéliales, les glandes et la couche musculaire de l'endomètre étaient normales ; le niveau de " plus " la petite partie des cellules épithéliales de l'endomètre et des glandes étaient atrophiées, et la couche musculaire était normale ; le niveau de "plus plus" signifiait qu'une partie des cellules épithéliales et des glandes de l'endomètre était atrophiée et que la couche musculaire était légèrement atrophiée ; le niveau de « plus plus plus » signifiait que les cellules épithéliales et les glandes de l'endomètre étaient atrophiées de manière significative et que la couche musculaire était atrophiée.

2.14. Mesure de l'épaisseur du cortex thymique

L'épaisseur moyenne du cortex thymique a été mesurée au micromètre chez la souris.

2.15. Mesure de l'épaisseur du nodule splénique

L'épaisseur du nodule splénique des deux côtés a été mesurée par le micromètre avec l'artère centrale comme centre. Calculez ensuite la moyenne comme l'épaisseur du nodule splénique.

2.16. Calcul du nombre de cellules basophiles et de cellules hypophysaires antérieures

Calculez le nombre de cellules basophiles et de cellules hypophysaires antérieures dans une zone de 10, 000 μm2 de cadres rectangulaires carrés sous un champ de vision à haute puissance.

2.17. analyses statistiques

Toutes les données ont été analysées par le progiciel statistique SPSS 17.0 pour l'analyse statistique des données médicales. Les données de mesure ont été utilisées comme moyenne additionnée et soustraite de l'écart type. (^-x± s). Les groupes ont été comparés en utilisant une analyse de variance à un seul facteur (ANOVA), et l'homogénéité de la variance a été utilisée avec les méthodes d'analyse LSD, l'hétérogénéité de la variance a été utilisée avec Games-Howell et la date des données de note a été utilisée avec le test de Ridit. .

3. Résultats

3.1. L'effet des activités indépendantes et du nombre de positions debout chez la souris

Fig. 1, Fig. 2 montrent les données des activités indépendantes et le nombre de positions debout. Il démontre que les souris MG sont remarquablement réduites par rapport au BC (P <0.01), reflétant="" la="" curiosité="" pour="" l'environnement="" frais="" est="" réduite.="" les="" souris="" en="" gc,="" hpgc,="" mpgc="" et="" lpgc="" peuvent="" remarquablement="" améliorer="" les="" activités="" indépendantes="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><0.01) ; ceux="" en="" gc,="" hpgc="" et="" mpgc="" peuvent="" améliorer="" les="" activités="" indépendantes="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p="">< 0,01) ;="" ceux="" en="" lpgc="" peuvent="" améliorer="" un="" peu="" le="" nombre="" de="" debout="" par="" rapport="" au="" mg="" (p=""><>

Fig. 1. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur les activités indépendantes chez la souris. Les activités indépendantes sont enregistrées en tant que moyenne ± ET pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

Fig. 2. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur le nombre de repos chez les souris. Le nombre de positions debout est enregistré en tant que moyenne ± ET pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

3.2. Effet de la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et du numéro électrique

Comme le montrent les Fig. 3, Fig. 4, les données de la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et le nombre électrique ont démontré que les souris MG sont remarquablement réduites par rapport au BC (P <0.{{4 }}1),="" reflétant="" le="" déclin="" de="" la="" mémoire="" chez="" les="" souris="" mps.="" les="" souris="" en="" gc,="" hpgc="" et="" mpgc="" peuvent="" remarquablement="" augmenter="" la="" période="" de="" latence="" de="" la="" première="" entrée="" dans="" la="" chambre="" noire="" et="" réduire="" le="" nombre="" électrique="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p="">< 0,01),="" ainsi="" qu'améliorer="" la="" mémoire.3.2.="" effet="" de="" la="" période="" de="" latence="" de="" la="" première="" entrée="" dans="" la="" chambre="" noire="" et="" du="" numéro="">

Comme le montrent les Fig. 3, Fig. 4, les données de la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et le nombre électrique ont démontré que les souris MG sont remarquablement réduites par rapport au BC (P <0.{{4 }}1),="" reflétant="" le="" déclin="" de="" la="" mémoire="" chez="" les="" souris="" mps.="" les="" souris="" en="" gc,="" hpgc="" et="" mpgc="" peuvent="" remarquablement="" augmenter="" la="" période="" de="" latence="" de="" la="" première="" entrée="" dans="" la="" chambre="" noire="" et="" réduire="" le="" nombre="" électrique="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p="">< 0,01),="" ainsi="" qu'améliorer="" la="">

Fig. 3. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur la période de latence de la première entrée dans la chambre noire chez les souris. La période de latence de la première entrée dans la chambre noire est enregistrée comme moyenne ± SD pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

Fig. 4. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur le nombre électrique chez les souris. Le nombre électrique est rapporté comme moyenne ± SE Pour chaque groupe,^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01 par rapport au groupe modèle, en utilisant l'ANOVA avec l'analyse LSD.

3.3. Effet de l'indice des viscères

Comme le montre la figure 5, les données de l'indice des viscères de l'utérus, du thymus et de la rate démontrent que les souris MG sont remarquablement réduites par rapport au BC (P <0.01), reflétant="" l'utérus="" et="" l'organe="" immunitaire="" des="" souris="" mps="" est="" atrophié.="" les="" souris="" en="" gc,="" hpgc="" et="" mpgc="" peuvent="" remarquablement="" améliorer="" l'indice="" des="" viscères="" de="" l'utérus,="" du="" thymus="" et="" de="" la="" rate="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><0.01). les="" souris="" dans="" lpgc="" est="" un="" peu="" amélioré="" l'indice="" des="" viscères="" de="" l'utérus="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><>

Fig. 5. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur l'indice des viscères chez les souris. Les index des viscères sont enregistrés en tant que moyenne ± SD pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

3.4. Effet du contenu de E2, T, LH et FSH

Comme le montre la figure 6, les données du niveau d'E2 et de T démontrent que les souris MG sont remarquablement réduites, et les données du niveau de LH et de FSH démontrent que les souris MG sont remarquablement augmentées par rapport au BC (P < 0.01),="" cela="" reflétait="" que="" les="" niveaux="" d'hormones="" sexuelles="" dans="" le="" sérum="" étaient="" désordonnés="" chez="" les="" souris="" mps.="" tous="" les="" groupes="" de="" souris="" sont="" significativement="" diminués="" avec="" le="" niveau="" de="" lh="" dans="" le="" sérum="" par="" rapport="" au="" bc="" (p=""><0.01). les="" souris="" en="" gc,="" hpgc="" et="" mpgc="" peuvent="" remarquablement="" améliorer="" e2,="" t="" et="" diminuer="" le="" niveau="" de="" lh,="" fsh="" dans="" le="" sérum="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p="">< 0,01).="" les="" souris="" en="" lpgc="" peuvent="" améliorer="" un="" peu="" e2="" et="" diminuer="" le="" niveau="" de="" fsh="" dans="" le="" sérum="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><>

Fig. 6. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur E2, T, LH, FSH chez les souris. Les niveaux de E2, T, LH et FSH sont enregistrés en tant que moyenne ± SD pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

3.5. Observation des changements morphologiques pathologiques de l'utérus

Comme le montre la Fig. 7, Fig. 8, à l'échelle micrométrique, les changements morphologiques de l'utérus démontrent que les souris MG ont des changements pathologiques significatifs dans l'utérus par rapport au BC (P <0.0 1).="" les="" souris="" en="" gc,="" hpgc="" peuvent="" remarquablement="" améliorer="" les="" changements="" morphologiques="" pathologiques="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p="">< 0.01).="" les="" souris="" en="" mpgc="" peuvent="" améliorer="" les="" changements="" morphologiques="" pathologiques="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><>

Fig. 7. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur les modifications morphologiques pathologiques de l'utérus chez la souris. Les modifications de la morphologie pathologique sont rapportées sous forme de photos pour chaque groupe.

Fig. 8. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur les changements morphologiques pathologiques chez les souris. Les changements de la morphologie pathologique sont rapportés comme critères semi-quantitatifs pour mesurer l'utérus, et la morphologie de l'organisation pathologique peut être divisée en quatre niveaux pour chaque groupe et calculer le nombre de souris.

Les changements de la morphologie pathologique sont rapportés comme critères semi-quantitatifs pour mesurer l'utérus, et la morphologie de l'organisation pathologique peut être divisée en quatre niveaux pour chaque groupe et calculer le nombre de souris.

3.6. Mesure de l'épaisseur du cortex thymique

Comme le montre la Fig. 9, Fig. 10, à l'échelle micrométrique, la date de l'épaisseur du cortex thymique démontre que les souris MG sont significativement réduites par rapport au BC (P <0. 01),="" indiquant="" que="" le="" volume="" du="" thymus="" est="" diminué="" après="" l'établissement="" des="" souris="" modèles="" mps.="" les="" souris="" en="" hpgc="" peuvent="" remarquablement="" augmenter="" l'épaisseur="" du="" cortex="" thymique="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p="">< 0,01).="" les="" souris="" en="" mpgc="" peuvent="" augmenter="" l'épaisseur="" du="" cortex="" thymique="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><>

Fig. 9. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur les modifications morphologiques pathologiques du thymus chez la souris. Les modifications de la morphologie pathologique sont rapportées sous forme de photos pour chaque groupe.

Fig. 10. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur l'épaisseur du cortex thymique chez la souris. L'épaisseur du cortex thymique est enregistrée comme moyenne ± SD pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

3.7. Mesure de l'épaisseur du nodule splénique

Comme le montre la Fig. 11, Fig. 12, à l'échelle micrométrique, la date de l'épaisseur du nodule splénique démontre que les souris MG sont significativement réduites par rapport au BC (P <0.01 ),="" indiquant="" que="" le="" volume="" de="" la="" rate="" est="" diminué="" après="" l'établissement="" des="" souris="" modèles="" mps.="" les="" souris="" en="" hpgc="" peuvent="" remarquablement="" augmenter="" l'épaisseur="" du="" nodule="" splénique="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><0.01). les="" souris="" en="" mpgc="" peuvent="" augmenter="" l'épaisseur="" du="" nodule="" splénique="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><>

Fig. 11. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur les changements morphologiques pathologiques de la rate chez les souris. Les modifications de la morphologie pathologique sont rapportées sous forme de photos pour chaque groupe.

Fig. 12. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur l'épaisseur des nodules spléniques chez les souris. L'épaisseur du nodule splénique est enregistrée comme moyenne ± SD pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

3.8. Calcul du nombre de cellules basophiles et de cellules hypophysaires antérieures

Comme le montre la Fig. 13, Fig. 14, la date du nombre de la cellule basophile et de la cellule hypophysaire antérieure démontre que les souris MG sont significativement réduites par rapport au BC (P <0.0 1),="" indiquant="" que="" le="" nombre="" de="" la="" source="" cellulaire="" de="" gonadotrophine="" sécrétoire="" est="" diminué="" après="" l'établissement="" des="" souris="" modèles="" mps.="" tous="" les="" groupes="" de="" médicaments="" reçus="" peuvent="" remarquablement="" augmenter="" le="" nombre="" de="" cellules="" basophiles="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><0.01). les="" souris="" en="" gc,="" hpgc="" et="" mpgc="" peuvent="" remarquablement="" augmenter="" le="" nombre="" de="" cellules="" hypophysaires="" antérieures="" par="" rapport="" à="" la="" mg="" (p=""><>

Fig. 13. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur les changements morphologiques pathologiques de l'hypophyse chez la souris. Les modifications de la morphologie pathologique sont rapportées sous forme de photos pour chaque groupe.

Fig. 14. Effets de GC, HPGC, MPGC et LPGC sur le nombre de cellules basophiles et la cellule hypophysaire antérieure chez la souris. Le nombre de cellules basophiles et de la cellule hypophysaire antérieure est enregistré en tant que moyenne ± SD pour chaque groupe. Par rapport au groupe modèle^☆P < 0.05 et^☆☆P <0.01, a utilisé l'ANOVA avec les méthodes d'analyse LSD.

4. Discussion

Dossiers de lasyndrome de la ménopausedans les livres anciens sont principalement dispersés dans la description de la "maladie du lys", du syndrome du "zigzag", de la "mélancolie", des "menstruations anormales" et autres (Chen et al., 2015, Ma et Chen, 2015). Pour la femme de plus de quarante ans, le Yin Qi était réduit de moitié ; Tiangui s'est asséché ; le Qi du rein a été graduellement diminué ; le Yin Jing était déficient ; l'équilibre du Yin et du Yang a été perdu. Sa principale performance était l'apparition des troubles menstruels ou de la ménopause tels que la fièvre des marées et la transpiration, l'irritabilité émotionnelle, l'agitation, les palpitations et l'insomnie, les maux de dos, l'œdème du visage et des membres, les étourdissements, les acouphènes et la sensation de peau comme une maladie rampante. La forte baisse du Qi du rein est la raison intrinsèque de l'apparition ou de la coupure des menstruations. L'insuffisance rénale est à l'origine de lasyndrome de la ménopause(Tan et al., 2013), et le rein est à l'origine de la vie humaine, appelé le "fondement congénital". La montée et la chute de l'essence rénale dominent la croissance et la fonction de reproduction de la maturité et du déclin (Wang et Huang, 2011). Des études ont montré que le déclin de la fonction ovarienne est l'essence du syndrome d'insuffisance rénale, et le déséquilibre du Yin et du Yang du rein est étroitement lié au trouble de la sécrétion endocrinienne et au dysfonctionnement du système nerveux autonome. Le changement de E2, FSH et LH est une expression de l'insuffisance rénale et du déséquilibre rénal du Yin et du Yang (Shi et al., 2007). Les médicaments tonifiants du yang rénal sont utilisés pour réguler le niveau hormonal dans l'axe hypothalamo-hypophysaire des ovaires ou jouent un rôle direct dans la régulation de la fonction ovarienne. La médecine chinoise moderne considère que l'étiologie et la pathogenèse desyndrome de la ménopauseest une insuffisance rénale (Razali et Said, 2017).

L'étude a utilisé la résection complète des ovaires des deux côtés du dos pour reproduire le modèle de souris MPS. 90 % des œstrogènes des femelles ont été sécrétés par l'ovaire et l'ovaire a été retiré. Il a causé artificiellement le niveau d'oestrogène qui a été diminué d'un coup et ensuite simulé le MPS. Ce modèle était le modèle classique, avec un taux de réussite élevé, une stabilité et une fiabilité, etc. A travers les activités indépendantes et le nombre de debout, la période de latence de la première entrée dans la chambre noire et le nombre électrique, nous avons observé l'amélioration de la fonction d'apprentissage et de mémoire et la curiosité de l'environnement frais par la médecine. La fonction ovarienne a été diminuée avec la sécrétion d'hormones sexuelles diminuée. De plus, la gonadotrophine était augmentée chez les patients atteints de MPS. Les niveaux de E2, T dans le sérum étaient inférieurs à ceux de cette personne sans symptômes de MPS, tandis que les niveaux de LH, FSH étaient significativement plus élevés que ceux de cette personne sans symptômes de MPS. Par conséquent, grâce à la mesure des niveaux d'E2, de T, de FSH et de LH dans le sérum, il pourrait être utilisé les indicateurs visuels pour l'identification de la MPS, reflétant l'effet des médicaments sur la maladie MPS. L'étude a montré que le déclin de la fonction ovarienne était la connotation d'une insuffisance rénale et que le changement de E2, T, FSH et LH était une sorte d'expression de l'insuffisance rénale (Li et al., 2014, Cheng et Tian, ​​2012).Cistancheétait par l'effet de reconstituer le rein pour renforcer l'immunité (Zhang et al., 2009, Shareef et al., 2017).

Nous avons utilisé le médicament régénérateur pour traiter la MPS, ce qui était innovant. Les résultats ont également montré que la PGC pouvait améliorer le niveau d'hormones de trouble des souris MPS et augmenter les niveaux d'E2, de T, de LH et de FSH dans le sérum. Pendant ce temps, il pourrait améliorer les modifications pathologiques de l'utérus, du thymus, de la rate et de l'hypophyse des souris, conformément à la littérature selon laquelle l'insuffisance rénale est fondamentale dans la MPS.

5. Conclusion

Les résultats de notre étude ont indiqué que le PGC avait un bon effet thérapeutique pour la MPS - il pouvait augmenter les activités indépendantes et le nombre de stations debout, la période de latence de la première entrée dans la chambre noire, les viscères du thymus, de la rate et de l'utérus, E2, T comme ainsi que de réduire le nombre électrique, LH et FSH. Les glycosides phényléthanoïdes ont été sélectionnés dansCistanchepour la haute efficacité et la commodité de la recherche MPS pour améliorer le traitement de lasyndrome de la périménopause. Ses standards de qualité sont faciles à contrôler, propices à la recherche innovante et au développement de l'industrialisation des médicaments. Il offre une nouvelle façon de penser pour le traitement de la MPS.

Conflit d'intérêt

Les auteurs n'ont aucun conflit d'intérêt à signaler.

Remerciements

Cette recherche a été soutenue par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (81274154); Équipe d'innovation scientifique et technologique du Henan (2012IRTSTHN011); l'équipe d'innovation scientifique et technologique de la ville de Zhengzhou (131PCXTD612) ; le laboratoire médical clé pour la transformation de la médecine chinoise de la ville de Zhengzhou (121PYFZX1820).

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