Valeur pronostique de la kinase B1 du foie (LKB1) dans l'immunité du microenvironnement tumoral associé au cancer gastrique

Abstrait:

La kinase B1 du foie (LKB1) est un gène suppresseur de tumeur dont l'inactivation se produit fréquemment dans différents types de tumeurs. Cependant, on ne sait pas si LKB1 est associé aux caractéristiques cliniques du cancer gastrique (GC) et à la régulation de l’immunité tumorale. Dans cette étude, nous avons montré que LKB1 est fortement exprimé dans le sérum d'individus sains (n = 176) par rapport aux patients GC (n = 416) et est également associé à des résultats cliniques et à de bons taux de survie chez les patients GC. De plus, les gènes associés aux points de contrôle immunitaires et à l'activation des lymphocytes T, tels que la maladie de Parkinson−1, −Il a été démontré que L1, CD8A, CD8B, CD28 et GZMM sont fortement exprimés dans les sous-groupes GC avec une expression élevée de LKB1. Comparativement aux tissus cancéreux gastriques frais, LKB1 était fortement exprimé dans les cellules T CD3+CD8+ et CD3+CD8+CD28+ dans des cellules T fraîches adjacentes non- tissus cancéreux. Les lymphocytes T CD3+CD8+ ont produit un IFN−anti−réponse immunitaire contre le cancer. De plus, la proportion de lymphocytes T CD3+CD8+ exprimant LKB présentait une corrélation positive avec l'IFN.−expression. De plus, les patients GC présentant une faible expression de LKB1 présentaient un faible taux de réponse objective, ainsi qu'une survie sans progression et une survie globale pires lorsqu'ils étaient traités par pembrolizumab. En conclusion, LKB1 pourrait constituer un point de contrôle immunitaire potentiel chez les patients GC.

Avantages de la cistanche tubulosa-Antitumorale

Mots clés:

LKB1 ; cancer de l'estomac; résultats cliniques; point de contrôle immunitaire ; Cellules T CD3+CD8+

1. Introduction

Dans le monde, le cancer gastrique (GC) est un problème de santé publique et constitue la cinquième tumeur maligne la plus fréquemment diagnostiquée [1,2]. Bien que les approches thérapeutiques courantes pour les GC, telles que la résection gastrique, la chimiothérapie, la radiothérapie et les thérapies ciblées, soient largement utilisées en pratique clinique [3], les 5−Le taux de survie par an des GC avancées est <20 %. Grâce aux progrès de la thérapie GC [4,5], l'immunothérapie est considérée comme une approche innovante [6] qui a élucidé le traitement de cette maladie [7]. A l’ère de l’immunothérapie, la mort cellulaire programmée 1 (PD−1)/DP−ligand 1 (PD−L1) s’est avéré être un biomarqueur pour le diagnostic du cancer et la prédiction de la réponse à l’immunothérapie, mais il n’est pas suffisamment sensible. Il est donc important d’identifier de nouveaux biomarqueurs prédictifs en immunothérapie pour la GC.

La kinase B1 du foie (LKB1), également connue sous le nom de STK11, est une sérine/thréonine kinase largement présente dans de nombreux tissus [8]. De plus en plus de preuves ont montré que LKB1 est un suppresseur de tumeur clé dans plusieurs types de cancers, tels que le cancer du pancréas [9], le mélanome [10,11],−cancer du poumon à petites cellules [12,13] et cancer du col de l'utérus [14]. De plus, LKB1 est connu pour être impliqué dans la régulation des fonctions des cellules immunitaires [10]. Le déficit en LKB1 dans les lymphocytes T favorise le développement de polypose gastro-intestinale [15] et implique également l'IL−11−Voie JAK/STAT3 conduisant à la tumorigenèse gastro-intestinale [16]. De plus, LKB1 joue un rôle essentiel dans la fonction des macrophages en participant à des processus tels que la croissance cellulaire, le métabolisme et la polarisation (17). Des études récentes ont montré que la perte de LKB1 pourrait être impliquée dans la modulation du microenvironnement immunitaire tumoral [18]. Plus précisément, le déficit en LKB1 supprime T−activité cellulaire en favorisant la production de cytokines proinflammatoires et le recrutement de neutrophiles dans le microenvironnement tumoral des patients atteints d'un cancer du poumon [19]. Un nombre limité d'études ont clarifié l'association entre l'expression de LKB1, les résultats cliniques, la contexte immunitaire et la réactivité thérapeutique en GC. Dans cette étude, nous avons démontré une association entre l'expression de LKB1 et les résultats cliniques chez les patients GC. De plus, nous avons démontré qu'une faible expression de LKB1 favorise un microenvironnement immunosuppresseur et pourrait entraîner un mauvais pronostic chez les patients GC. De plus, les patients GC présentant une expression élevée de LKB1 ont bénéficié davantage du traitement par pembrolizumab. La valeur pronostique et le rôle potentiel de LKB1 dans l'immunologie tumorale sont discutés ici et peuvent contribuer à la compréhension d'un mécanisme possible sous-jacent à la GC.

cistanche tubulosa-améliorer le système immunitaire

2. Matériels et méthodes

2.1. Patients et échantillons de sang

Cette étude rétrospective a été approuvée par le comité d'éthique local de l'hôpital du cancer du Zhejiang (IRB−2021−154). Nous avons collecté des échantillons de sang auprès de 176 adultes en bonne santé et de 416 patients GC entre janvier 2015 et août 2022 et avons collecté 26 paires de tissus cancéreux frais et de tissus non cancéreux adjacents auprès de 26 patients GC. Les patients ayant des antécédents d'autres tumeurs malignes ont été exclus.

2.2. Expression de CEA, CA19−9, AFP et LKB1

Un kit de test ELISA commercial (RX106671H ; Ruixinbio, Quanzhou, Fujian, Chine) a été utilisé pour évaluer le niveau d'expression de LKB1 dans les échantillons de plasma selon un protocole standardisé. En bref, les échantillons de plasma correspondants (50 µL) et les protéines modèles standard (50 µL) ont été ajoutés à des plaques à 96 puits. Ensuite, 100 µL d'un anticorps marqué à la HRP ont été ajoutés et les plaques à 96 puits ont été incubées pendant 1 h à 37 °C. Ensuite, les plaques ont été lavées trois fois avec un tampon de lavage. Le mélange de substrats (100 µL) a été ajouté et les plaques ont été analysées dans un lecteur de microplaques à une DO de 450. La chimiluminescence a été utilisée pour déterminer le CEA (CFDA 20163402679, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Chine), CA19−9 (CFDA 20173401781, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Chine) et expression AFP (CFDA 20173400053, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Chine). Le logiciel SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA) a été utilisé pour déterminer l'aire sous les courbes des caractéristiques de fonctionnement du récepteur (ROC) du CEA, du CA19−9, de l'AFP et du LKB1. Sur la base du stade pathologique TNM, du stade FIGO et de l'expression de HER2, 416 patients GC ont été divisés en différents sous-groupes. Un test t apparié a été utilisé pour analyser l'expression de LKB1 dans différents sous-groupes de patients GC.

2.3. Analyse de l'expression de LKB1 dans les cellules immunitaires et association avec les points de contrôle immunitaires

Comprehensive Analysis on Multi−Omics of Immunotherapy in Pan−cancer [CAMOIP] (http://www.camoip.net/) (consulté le 1er janvier 2{{10}}23) est un outil d'analyse données d'expression et de mutation provenant des projets traités par l'analyse du génome du cancer (TCGA) et par l'inhibiteur de point de contrôle immunitaire (ICI). Un pipeline de traitement standard a été utilisé pour analyser l’immunogénicité et l’enrichissement des voies chez les patients GC. CAMOIP a également été utilisé pour analyser différentes expressions de cellules immunitaires en fonction de l'expression de LKB1 chez les patients GC. La base de données UCSC Xena (https://xena.ucsc.edu/public) (consultée le 1er janvier 2023) est une plateforme d'analyse de données génomiques du cancer qui prend en charge la visualisation et l'analyse des données histologiques de plusieurs échantillons de cancer. La base de données UCSC Xena fournit LKB1, les gènes de point de contrôle immunitaire des lymphocytes T, l'activation des lymphocytes T et la présentation antigénique de l'expression de l'ARNm. Une carte thermique complexe a été réalisée à l'aide du langage R (4.2.1). Le logiciel SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA) a été utilisé pour analyser l'expression de LKB1 en fonction des quartiles. Nous avons divisé les patients GC en groupes d'expression élevée et faible de LKB1 en fonction de la valeur médiane de l'expression de LKB1. Un test t a été utilisé pour analyser les gènes de point de contrôle immunitaire des lymphocytes T, l'activation des lymphocytes T et la présentation de l'antigène de l'expression de l'ARNm chez les patients GC dans des sous-groupes de patients GC LKB1 à expression élevée et faible. Les valeurs p <0,001 ont été considérées comme statistiquement significatives.

Avantages de la cistanche tubulosa-Antitumorale

2.4. Cytométrie en flux

Les tissus frais cancéreux (n {{0}}) et frais adjacents non cancéreux (n=26) obtenus en peropératoire ont été broyés dans une solution de broyage de tissus dans les 30 minutes. La solution de broyage et les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) (1 × 106 cellules/mL) ont été collectées dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) (50 µL, CR20012 ; Zhejiang Crenry, Zhejiang, Chine) additionnée de 0,5 % d'albumine sérique bovine (BSA) (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) et incubé avec des anticorps monoclonaux anti-humains pendant 15 min. Les anticorps monoclonaux anti-humains ont été utilisés, comme le montrent le tableau 1, le tableau supplémentaire S1 et la figure supplémentaire S1 : anti-LKB1 (PTG, Wuhan, Hubei, Chine) ; anti-CD68 (Biolegend, San Diego, Californie, États-Unis) ; anti-CD209 (Biolegend, San Diego, Californie, États-Unis) ; anti-CD28 (Biolegend, San Diego, Californie, États-Unis) ; anti-CD45/CD56/CD19 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA) ; anti-CD45/CD4/CD8/CD3 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA) ; anti-CD4, CD3 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA) ; anti-CD45RO (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA) ; anti-CD8 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA) ; anti-CD38 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); et anti-CD45RA (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA). Un kit de détection CD3/CD4/CD8/CD28/PD−1 a été acheté auprès de Raise Care (Hangzhou, Chine). Un logiciel d'analyse CXP et un cytomètre en flux Beckman Coulter FC 500 ont été utilisés pour analyser les résultats [20,21]. Un kit de détection de cytokines (Seager, Dalian, Chine) a été utilisé pour la détection de cytokines dans des échantillons de plasma provenant de patients GC conformément aux instructions du fabricant.

Tableau 1. Comparaison entre les patients GC et les individus sains avec des paramètres cliniques.

2.5. Proportions de cellules immunitaires dans les tissus frais

Un test t a été utilisé pour analyser les proportions de cellules immunitaires dans les tissus frais cancéreux (n=26) et frais adjacents non cancéreux (n=26). La différence entre les proportions de cellules immunitaires LKB1+ et PD1+LKB1+ dans les tissus frais cancéreux et non cancéreux adjacents frais a été analysée à l'aide d'un test t apparié. Le logiciel SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA) a été utilisé pour déterminer la corrélation entre les proportions de cellules immunitaires et les cytokines dans les tissus frais cancéreux et non cancéreux adjacents.

2.6. Immunohistochimie tissulaire (IHC)

La biobanque de l'hôpital du cancer du Zhejiang a fourni des tissus frais cancéreux (n=26) et frais adjacents non cancéreux (n=26) utilisés dans cette étude. Un kit IHC (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd., Pékin, Chine) a été utilisé pour réaliser l'IHC conformément aux instructions du fabricant. En bref, les coupes en paraffine ont été successivement déparaffinées, réhydratées et bouillies pour la récupération de l'antigène. L'anticorps primaire LKB1 (IPB0924 [rapport de dilution, 1:100] ; Baijia, Taizhou, Jiangsu, Chine) et l'anticorps interféron gamma (IFN−) (IPB0703 [rapport de dilution, 1:100] ; Baijia, Taizhou, Jiangsu, Chine) ont été incubées pendant 2 heures à température ambiante. Les coupes ont été lavées trois fois avec du PBS. Un amplificateur polymère histochimique (400 µL) a été ajouté aux coupes en paraffine pendant 20 min, suivi de 3 lavages avec du PBS. Ensuite, des anticorps secondaires ont été ajoutés aux coupes en paraffine et incubés pendant 20 minutes, suivis d'un lavage, d'une coloration DAB, d'une contre-coloration et d'un montage.

2.7. Réponse au traitement des patients GC au pembrolizumab basée sur l'expression de LKB1

La réponse au traitement au pembrolizumab et les données cliniques des patients GC subissant un blocage du point de contrôle immunitaire (ICB) ont été obtenues à partir d'un rapport précédent (22). Le logiciel SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA) a été utilisé pour analyser l'expression de LKB1 en fonction des quartiles. Nous avons divisé les patients GC en groupes d'expression élevée et faible de LKB1 en fonction de la valeur médiane de l'expression de LKB1. Le langage R (4.2.1) a été utilisé pour déterminer la réponse au traitement par pembrolizumab des patients GC en fonction de l'expression de LKB1. L'expression de PD−L1 a été analysée par le logiciel SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA) basé sur des quartiles. Les patients GC ont été divisés en groupes d'expression élevée et faible PD−L1 en fonction de la valeur médiane. Sur la base de l'expression de LKB1 et PD−L1, les patients GC ont été stratifiés en LKB1 élevé et faible au sein des sous-groupes d'expression élevée et faible PD−L1, et Python a été utilisé pour refléter la réponse au traitement par pembrolizumab dans les sous-groupes. La survie globale et la survie sans progression des patients GC traités par pembrolizumab ont été analysées à l'aide de la méthode de Kaplan-Meier avec un test du log-rank.

2.8. Analyses statistiques

Les analyses statistiques ont été effectuées à l'aide du logiciel SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA). La survie des patients a été confirmée par téléphone et analysée selon la méthode de Kaplan-Meier avec un test du log-rank. Les valeurs p < 0 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives. De plus, Kaplan−Meier Plotter (//www.kmplot.com) (consulté le 1er janvier 2023) a été utilisé pour confirmer l'effet de LKB1 (expression élevée ou faible) sur la survie des patients GC. Python a été utilisé pour refléter les caractéristiques et paramètres cliniques des patients GC.

3. Résultats

3.1. Association entre l'expression de LKB1 et les caractéristiques cliniques chez les patients GC

Dans cette étude, 416 patients GC (268 hommes et 148 femmes) et 176 individus en bonne santé (87 hommes et 89 femmes) ont été inclus. Les caractéristiques des individus en bonne santé et des patients GC sont résumées dans la figure 1A et le tableau 1. Les résultats cliniques des patients GC sont résumés, notamment l'expression du CEA, du CA19−9, de l'AFP et de HER2, de qualité pathologique, de l'Union internationale pour la lutte contre le cancer (UICC). ) stade tumoral, atteinte des ganglions lymphatiques et métastases à distance (Figure 1B, Tableaux 1 et 2). Comme le montre la figure 1C, le CEA, le CA19−9 et l'AFP étaient fortement exprimés dans le sérum des patients GC, tandis que LKB1 était fortement exprimé chez les individus en bonne santé. Comparé au CEA, au CA19−9 et à l'AFP, LKB1 présentait la meilleure spécificité et sensibilité (AUC=0,727 ; Figure 1D). Parmi les paramètres cliniques, LKB1 était remarquablement plus faible aux stades T3−4, N2−3, M1 et III−IV selon les critères de classification UICC (p < {{30}}.0 5, p < 0,05, p < 0,001 et p < 0,01, respectivement ; figure 1E et tableau 2). De plus, LKB1 était numériquement fortement exprimé chez les patients GC HER2-négatifs (Figure 1F). Ainsi, ces résultats suggèrent que LKB1 est potentiellement impliqué dans la progression de la GC.

Figure 1. Les relations entre l'expression de LKB1 et les caractéristiques cliniques. (A, B), les caractéristiques cliniques chez les individus en bonne santé (n=176) et les patients GC (n=416) ont été cartographiées à l'aide de Python. (C), l'expression de CEA, CA19−9 et AFP a été mesurée dans le sérum de patients GC et d'individus en bonne santé. (D), Comparé au CEA, au CA19−9 et à l'AFP, LKB1 avait une sensibilité et une spécificité plus élevées. (E), l’expression de LKB1 était plus faible chez les patients GC de stade N2−3, M1 et III−IV. (F), LKB1 était numériquement fortement exprimé chez les patients GC HER2-négatifs. HER2-~+ : patients GC HER2 négatifs. HER2++~+++ : sauf pour les patients GC HER2 négatifs. Test t non apparié, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001.

Tableau 2. Caractéristiques de base des patients GC.

3.2. LKB1 favorise un microenvironnement immunosuppresseur chez les patients GC

Selon les bases de données TCGA, le complexe récepteur des lymphocytes T était significativement différent entre les patients GC présentant une expression élevée et faible de LKB1 (Figure 2A). Nous avons en outre montré que l'expression des lymphocytes T différait chez les patients GC dans les sous-groupes d'expression élevée et faible de LKB1, y compris les lymphocytes T CD8+, les lymphocytes T régulateurs, les neutrophiles et les éosinophiles (Figure 2B). De plus, de fortes corrélations ont été observées entre l'expression de LKB1 et la régulation positive des gènes impliqués dans les points de contrôle immunitaire des lymphocytes T, l'activation des lymphocytes T et la présentation de l'antigène (Figure 2C). Nous avons en outre stratifié les patients GC en fonction de l'expression de l'ARNm PD−1, PD−L1, CD8A, CD8B, CD28 et GZMM au sein des sous-groupes d'expression élevée et faible de LKB1. Il est intéressant de noter que les gènes étaient tous fortement exprimés dans le sous-groupe LKB1 à expression élevée (Figure 2D). L'expression de LKB1, PD−1 et PD−L1 a montré des différences limitées entre les types mucineux et diffus (Figure supplémentaire S2). Ces données suggèrent que LKB1 pourrait être associé au phénotype d'activation des lymphocytes T et au point de contrôle immunitaire des lymphocytes T chez les patients GC.

3.3. LKB1 est exprimé sélectivement dans les infiltrations de cellules T (CD3+CD8+) dans GC

Pour déterminer l'expression de LKB1 dans le microenvironnement immunitaire, nous avons mesuré l'expression de six cellules immunitaires infiltrantes dans le sang périphérique (B), les tissus cancéreux frais (T) et non cancéreux adjacents (N), ainsi que 12 types d'expression de cytokines chez les patients GC ( Figure 3A). Nous avons également démontré l'expression de LKB1 sur la base de l'abondance des six cellules d'infiltration immunitaire, notamment les cellules B, les cellules T, les neutrophiles, les macrophages et les cellules dendritiques (Figure 3A et Figure supplémentaire S3). Nous avons constaté que la proportion de cellules T (CD3+CD8+) était plus élevée dans les tissus non cancéreux adjacents (N), tandis que la proportion de cellules T (CD3+CD{{ 9}}) était plus élevée dans les tissus cancéreux frais (T), et les autres cellules T présentaient des différences limitées entre les tissus cancéreux frais (T) et les tissus non cancéreux adjacents (N ; Figure 3B). De plus, les cellules T (CD3+CD8+LKB1+, CD3+CD8+CD28+LKB1+, CD 3+CD8+CD28+PD−1+LKB1+) avaient des ratios significativement plus élevés dans les tissus non cancéreux adjacents frais (N ; Figure 3C). L'expression de LKB1 dans d'autres cellules immunitaires était similaire entre les tissus cancéreux frais (T) et les tissus non cancéreux adjacents (N), à l'exception des neutrophiles (Figure supplémentaire S3). Ensemble, ces résultats ont démontré que LKB1 pourrait être spécifiquement associé au microenvironnement d'infiltration de cellules T (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD28+). chez les patients GC.

Figure 2. LKB1 est associé au gène d'activation des lymphocytes T et aux points de contrôle immunitaires. (A) Le complexe récepteur des lymphocytes T a montré la plus grande différence dans les sous-groupes d’expression élevée et faible de LKB1. (B) Analyse de la base de données CAMOIP de l’expression différentielle des cellules immunitaires entre les sous-groupes LKB1 à expression élevée et faible. (C) La carte thermique montre les valeurs log-cpm normalisées du score z pour les ensembles de gènes immunitaires de signature basés sur l'expression de LKB1 (n=407). (D) PD−1, PD−L1, CD8A, CD8B, CD28 et GZMM étaient fortement exprimés dans le sous-groupe de patients LKB1−high GC. Test t non apparié, ns : aucune différence significative, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001 , **** p < 0,0001.

Figure 3. LKB1 est associé à une infiltration de lymphocytes T chez les patients GC. (A) La carte thermique montre la proportion de cellules immunitaires dans le sang périphérique (B), les tissus cancéreux frais (T) et les tissus non cancéreux adjacents (N) ainsi que l’expression des cytokines. (B) Les ratios de différents types de cellules T dans les tissus frais cancéreux (T) et non cancéreux adjacents (N). (C) Proportions différentielles de cellules T exprimant LKB1 dans les tissus frais cancéreux (T) et non cancéreux adjacents (N). Test t apparié, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001.

3.4. LKB1 est potentiellement corrélé à l’expression d’IFN−

Nous avons supposé que LKB1 exprimé dans les cellules immunitaires était en corrélation avec la fonction des cellules immunitaires. Sur la base des résultats, nous avons analysé l'association entre la proportion de cellules d'infiltration immunitaire (LKB1+) et l'expression des cytokines (Figure 4A). Une étude précédente a montré que l'IFN− produit par les lymphocytes T (CD3+CD8+) est un indicateur efficace pour prédire l'efficacité clinique et la survie avec le blocage des anti−PD−1 chez les patients GC [23,24] . Nous avons constaté que seules les proportions de lymphocytes T (CD3+LKB1+) et (CD3+CD8+LKB1+) présentaient une légère corrélation positive avec l'IFN−. expression dans les tissus frais cancéreux (T) et non cancéreux adjacents (N; Figure 4B). Ensuite, nous avons déterminé l’expression de LKB1 et d’IFN− dans les tissus frais cancéreux (T) et non cancéreux adjacents (N) mentionnés ci-dessus et avons constaté que l’expression de LKB1 était significativement plus faible dans les tissus cancéreux que l’expression d’IFN− (Figure 4C). Ces résultats suggèrent que LKB1 pourrait avoir une association positive avec l'expression d'IFN− anti-tumorale sécrétée par les cellules T (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD{{ 23}}).

Figure 4. LKB1 est positivement corrélé à l’expression de l’IFN−. (A) Analyse de l’association entre la proportion d’infiltrat de cellules immunitaires (LKB1+) et l’expression des cytokines. (B) Corrélation des proportions de lymphocytes T (CD3+LKB1+) et (CD3+CD8+LKB1+) avec l'expression de l'IFN− dans des cancers frais (T) et les tissus non cancéreux adjacents (N). (C) Analyses immunohistochimiques de l’expression de LKB1 et IFN− dans les tissus frais cancéreux (T) et non cancéreux adjacents (N).

3.5. LKB1 prédit une bonne réactivité au pembrolizumab en GC

Sur la base des résultats, LKB1 pourrait être un point de contrôle immunitaire potentiel. Comme l'indique la figure 5A, une faible expression de LKB1 était liée à une survie globale significativement plus courte basée sur la survie des patients GC de 2015 à 2019. Conformément à cette découverte, la base de données Kaplan-Meier (//kmplot.com/) ( consulté le 1er janvier 2023) a également indiqué que l'expression de LKB1 affectait de manière significative le pronostic des patients GC, avec une survie globale significativement inférieure chez les patients présentant une faible expression de LKB1 (Figure 5B). Ensuite, pour évaluer la valeur prédictive de LKB1 pour l'immunothérapie, la cohorte ICB composée de patients GC traités par pembrolizumab a été analysée (Tableau 3). Comparé aux patients GC présentant une expression élevée de LKB1, le sous-groupe à faible expression de LKB1 présentait un taux de réponse objective diminué (ORR ; Figure 5C). De plus, les patients GC présentant une faible expression de LKB1 ont démontré une SSP et une SG pires (Figure 5D). Une étude précédente a montré que l'expression de l'ARNm PD−L1 était associée à l'efficacité du traitement par pembrolizumab (6). De plus, sur la base de l'expression de LKB1 et PD−L1, les patients GC ont été stratifiés en LKB1 haute et basse au sein des sous-groupes d'expression haute et basse PD−L1. Comme le montre la figure 5E, les patients GC présentant une expression élevée de LKB1 et PD−L1 présentaient l'ORR le plus élevé. La corrélation entre l'expression de PD−L1/LKB1 et les paramètres moléculaires chez les patients GC a été résumée dans le tableau 4. Pris ensemble, LKB1 pourrait constituer un point de contrôle immunitaire potentiel pour prédire la réactivité au pembrolizumab chez les patients GC.

Tableau 3. Réponse objective des patients atteints d'un cancer gastrique au pembrolizumab.

Tableau 4. Association entre l'expression de LKB1/PD−L1 et les paramètres moléculaires.

figure 5. L'expression de LKB1 prédit la réactivité au pembrolizumab chez les patients GC. (A) Des niveaux élevés d’expression de LKB1 ont été associés à une survie prolongée chez les patients GC de 2015 à 2019. (B) Le traceur Kaplan-Meier a montré que des niveaux élevés de LKB1 prolongeaient la survie des patients GC. (C) Les tracés à barres empilées et en cascade montrent la réactivité au pembrolizumab dans la cohorte ICB (n=43) sur la base de l'expression de LKB1. (Test χ2 de Pearson). (D) Courbes Kaplan-Meier de survie sans progression (SSP) et de survie globale (OS) dans la cohorte ICB (n=43) basées sur l'expression de LKB1. (E) Sur la base de l'expression de l'ARNm de LKB1 dans les sous-groupes de patients GC présentant une expression élevée et faible de PD−L1, la carte thermique a démontré une réactivité au pembrolizumab et aux paramètres moléculaires dans la cohorte ICB (n=43). GS, génomiquement stable ; MSI−H, instabilité microsatellite−élevée ; EBV, EBV positif ; cellule en anneau à chevalière : carcinome gastrique à cellules en anneau en chevalière ; ORR, taux de réponse objective ; SD, maladie stable ; PR, réponse partielle ; MP, maladie évolutive ; CR, réponse complète ; Adénocarcinome M/D, modérément différencié ; AdénoP/D, adénocarcinome peu différencié ; Adénocarcinome W/D, bien différencié ; Adénocarcinome mixte (W/D et P/D), bien différencié et adénocarcinome peu différencié.

4. Discussion

La GC est une maladie maligne courante et se classe au troisième rang des causes de décès par cancer dans le monde [17,18]. Au cours des dernières décennies, les stratégies thérapeutiques et diagnostiques des GC se sont considérablement améliorées (19). Cependant, en raison du manque de marqueurs diagnostiques efficaces, les patients sont souvent diagnostiqués initialement à un stade avancé, avec un taux de survie à 5 ans de<20% [25,26]. Therefore, there is an urgent need to explore tumor markers with favorable specificity and sensitivity for GC diagnosis. In this study, we first showed that LKB1 expression was decreased in GC serum. Compared with GC diagnostic biomarkers mainly used in clinical practice, including CEA, CA19−9, and a−1−fetoprotein (AFP), LKB1 showed the best specificity and sensitivity. Furthermore, LKB1 was associated with clinical features of GC patients, such as grade, invasion depth, TNM stage, UICC stage, and vital status. These results suggested that LKB1 serves as a tumor suppressor gene and suppresses GC progression.

cistanche plante augmentant le système immunitaire

Cliquez ici pour voir les produits Cistanche Enhance Immunity

【Demandez plus】 E-mail :cindy.xue@wecistanche.com / Whats App : 0086 18599088692 / Wechat : 18599088692

LKB1 a été initialement identifié en 1997 et est également connu sous le nom de STK11 (27). LKB1 est un gène suppresseur de tumeur humaine important, et chez les patients atteints d'un cancer du poumon non à petites cellules (NSCLC), les mutations de LKB1 ou la perte génomique coexistent fréquemment avec des altérations de KRAS. Cette combinaison entraîne un phénotype très agressif et un taux de survie réduit [28-30]. La plupart des rapports impliquant LKB1 se sont principalement concentrés sur le cancer du poumon, avec des rapports limités sur le rôle de LKB1 dans la GC. Une étude précédente a montré que l'expression de LKB1 pourrait être associée à un mauvais pronostic chez les patients GC [31] ; cependant, la question de savoir si LKB1 sert de marqueur diagnostique potentiel et de cible immunothérapeutique n'a pas été établie. Notre étude a montré, pour la première fois, qu'une faible expression de LKB1 entraînait une réactivité thérapeutique inférieure au pembrolizumab chez les patients atteints de GC, ce qui suggère que LKB1 pourrait être une cible immunothérapeutique potentielle.

cistanche tubulosa-améliorer le système immunitaire

Récemment, l'immunothérapie a montré de grands avantages dans le traitement clinique des GC [32,33]. Le blocage de PD−1/PD−L1 est apparu comme une stratégie thérapeutique nouvelle et prometteuse [34], soulignant l'importance de l'immunité anti-tumorale et normalisant le dysfonctionnement des lymphocytes T cytotoxiques (CTL, CD8+) dans les cancers [35] . Dans de nombreux cancers, l’infiltration de CTL régule la régression tumorale et est considérée comme un indicateur pronostique positif [36]. Cependant, des études ont indiqué que le dysfonctionnement des CTL lors de l'infiltration conduit à une évasion immunitaire et finalement à un échec dans l'attaque des cellules cancéreuses (37). Il a été démontré que le blocage de PD−1/PD−L1 éliminait les tumeurs établies via un dysfonctionnement des CTL revigorant l’immunité anti−tumorale (38). Nous avons montré que PD−1/PD−L1 était fortement exprimé dans les sous-groupes de patients GC à expression élevée de LKB1, ce qui suggère que LKB1 pourrait être associé à des points de contrôle immunitaires des lymphocytes T. De plus, l'IFN− est une cytokine qui inhibe la réplication virale et améliore la présentation d'antigènes spécifiques libérés par les lymphocytes T CD8+ (39). De plus, nous avons constaté que les gènes d'activation des lymphocytes T et de présentation de l'antigène étaient également fortement exprimés dans les sous-groupes de patients GC, avec une expression élevée de LKB1 et T (CD3+CD8+LKB1+, Les cellules CD3+CD8+CD28+LKB1+) présentaient une corrélation positive avec l'expression de l'IFN− dans les tissus frais des patients GC. Ainsi, nous avons déduit que LKB1 pourrait entraver la sécrétion des lymphocytes T (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD28+) et est positivement associée à l'anti −expression de l'IFN− tumoral. Le mécanisme sous-jacent par lequel LKB1 est associé à l’activation des lymphocytes T cytotoxiques mérite des recherches plus approfondies.

Les références

1. Lübeck, EG ; Curtius, K. ; Jeon, J. ; Hazelton, WD Impact de la progression tumorale sur les courbes d'incidence du cancer. Cancer Rés. 2013, 73, 1086-1096. [Référence croisée] [PubMed]

2. Li, Y. ; Lui, X. ; Fan, L. ; Zhang, X. ; Xu, Y. ; Xu, X. Identification d'un nouveau modèle de pronostic immunitaire dans le cancer gastrique. Clin. Trad. Oncol. 2021, 23, 846-855. [Référence croisée] [PubMed]

3. Lutz, député; Zalcberg, JR; Ducreux, M. ; Ajani, JA; Allum, W. ; Aust, D. ; Bang, YJ ; Cascinu, S. ; Holscher, A. ; Jankowski, J. ; et coll. Faits saillants du consensus international d'experts de l'EORTC Saint-Gall sur le traitement primaire du cancer gastrique, gastro-œsophagien et œsophagien - Stratégies de traitement différentiel pour les sous-types de cancer gastro-œsophagien précoce. EUR. J. Cancer 2012, 48, 2941-2953. [Référence croisée] [PubMed]

4. Thomassen, I. ; van Gestel, YR; van Ramshorst, B. ; Luyer, MD; Bosscha, K. ; Nienhuijs, SW; Lemmens, VE; de Hingh, IH Carcinose péritonéale d'origine gastrique : une étude basée sur la population sur l'incidence, la survie et les facteurs de risque. Int. J. Cancer 2014, 134, 622-628. [Référence croisée]

5. Kahraman, S. ; Yalcin, S. Progrès récents dans les traitements systémiques du cancer gastrique avancé HER-2 positif. OncoTargets Ther. 2021, 14, 4149-4162. [Référence croisée]

6. Kono, K. ; Nakajima, S. ; Mimura, K. État actuel des inhibiteurs de points de contrôle immunitaires pour le cancer gastrique. Cancer gastrique 2020, 23, 565-578. [Référence croisée]

7. Lordick, F. ; Shitara, K. ; Janjigian, YY Nouveaux agents à l'horizon dans le cancer gastrique. Anne. Oncol. 2017, 28, 1767-1775. [Référence croisée]

8. Zhang, Y. ; Meng, Q. ; Soleil, Q. ; Xu, ZX; Zhou, H. ; Wang, Y. Reprogrammation métabolique induite par un déficit en LKB1 dans la tumorigenèse et les maladies non néoplasiques. Mol. Métab. 2021, 44, 101131. [Réf. croisée]

9. Kottakis, F. ; Nicolay, BN; Roumane, A. ; Karnik, R. ; Gu, H. ; Nagle, JM; Boukhali, M. ; Hayward, MC; Li, AA ; Chen, T. ; et coll. La perte de LKB1 relie le métabolisme de la sérine à la méthylation de l'ADN et à la tumorigenèse. Nature 2016, 539, 390-395. [Référence croisée]

10. Su, KH ; Dai, S. ; Tang, Z. ; Xu, M. ; Dai, C. Heat Shock Factor 1 est un antagoniste direct de la protéine kinase activée par l'AMP. Mol. Cellule 2019, 76, 546-561.e8. [Référence croisée]

11. Olvédy, M. ; Tisserand, JC; Luciani, F. ; Boeckx, B. ; Wouters, J. ; López, S. ; Rambow, F. ; Aibar, S. ; Thienpont, B. ; Barra, J. ; et coll. L'oncogénomique comparative identifie la tyrosine kinase FES comme suppresseur de tumeur dans le mélanome. J. Clin. Enquête. 2017, 127, 2310-2325. [Référence croisée]

12. Hollstein, Î.-P.-É. ; Eichner, LJ; Brun, SN ; Kamireddy, A. ; Svensson, Russie ; Véra, LI ; Ross, DS ; Rymoff, TJ ; Hutchins, A. ; Galvez, HM; et coll. Les kinases SIK1 et SIK3 liées à l'AMPK médient les effets suppresseurs de tumeurs clés de LKB1 dans le CPNPC. Découverte du cancer. 2019, 9, 1606-1627. [Référence croisée]

13. Svensson, Russie ; Parker, SJ ; Eichner, LJ; Kolar, MJ; Wallace, M. ; Brun, SN ; Lombardo, PS ; Van Nostrand, JL; Hutchins, A. ; Véra, L. ; et coll. L'inhibition de l'acétyl-CoA carboxylase supprime la synthèse des acides gras et la croissance tumorale du cancer du poumon non à petites cellules dans les modèles précliniques. Nat. Méd. 2016, 22, 1108-1119. [Référence croisée]

14. Zeng, Q. ; Chen, J. ; Li, Y. ; Werle, KD; Zhao, RX ; Quan, CS ; Wang, YS ; Zhai, YX; Wang, JW; Youssef, M. ; et coll. LKB1 inhibe la progression du cancer associé au VPH en ciblant le métabolisme cellulaire. Oncogène 2017, 36, 1245-1255. [Référence croisée]

15. Poffenberger, MC; Metcalfe-Roach, A. ; Aguilar, E. ; Chen, J. ; Hsu, ÊTRE ; Wong, AH ; Johnson, RM; Flynn, B. ; Samborska, B. ; Maman, hein ; et coll. Le déficit en LKB1 dans les cellules T favorise le développement de la polypose gastro-intestinale. Sciences 2018, 361, 406-411. [Référence croisée]

16. Ollila, S. ; Domenech-Moreno, E. ; Laajanen, K. ; Wong, PI ; Tripathi, S. ; Pentinmikko, N. ; Gao, Y. ; Yan, Y. ; Niemela, EH ; Wang, TC ; et coll. Le déficit stromal en Lkb1 conduit à une tumorigenèse gastro-intestinale impliquant la voie IL-11-JAK/STAT3. J. Clin. Enquête. 2018, 128, 402-414. [Référence croisée]

17. Chanté, H. ; Ferlay, J. ; Siegel, RL; Laversanne, M. ; Soerjomataram, I. ; Jemal, A. ; Bray, F. Statistiques mondiales sur le cancer 2020 : Estimations GLOBOCAN de l'incidence et de la mortalité dans le monde pour 36 cancers dans 185 pays. CA Cancer J. Clin. 2021, 71, 209-249. [Référence croisée]

18. Pons-Tostivint, E. ; Lugat, A. ; Fontana, JF; Denis, MG; Bennouna, J. STK11/LKB1 Modulation de la réponse immunitaire dans le cancer du poumon : de la biologie à l'impact thérapeutique. Cellules 2021, 10, 3129. [CrossRef]

19. Koyama, S. ; Akbaï, EA ; Li, AA ; Sont loin; Skoulidis, F. ; Herter-Sprie, GS ; Buczkowski, KA; Liu, Y. ; Awad, MM; Denning, WL ; et coll. Le déficit en STK11/LKB1 favorise le recrutement de neutrophiles et la production de cytokines proinflammatoires pour supprimer l'activité des lymphocytes T dans le microenvironnement de la tumeur pulmonaire. Cancer Rés. 2016, 76, 999-1008. [Référence croisée]

20. Janjigian, YY; Maron, SB ; Chatila, WK ; Millang, B. ; Chavan, SS; Alterman, C. ; Chou, JF; Segal, MF; Simmons, Maryland ; Momtaz, P. ; et coll. Pembrolizumab et trastuzumab de première intention dans le cancer de la jonction œsophagienne, gastrique ou gastro-œsophagienne HER2-positif : un essai ouvert de phase 2 à un seul bras. Lancette Oncol. 2020, 21, 821-831. [Référence croisée]

21. Picard, E. ; Verschoor, CP; Maman, GW ; Pawelec, G. Relations entre les paysages immunitaires, les sous-types génétiques et les réponses à l'immunothérapie dans le cancer colorectal. Devant. Immunol. 2020, 11, 369. [CrossRef] [PubMed]

22. Kim, ST; Cristescu, R. ; Basse, AJ ; Kim, KM; Odegaard, JI; Kim, K. ; Liu, XQ ; Sher, X. ; Jung, H. ; Lee, M. ; et coll. Caractérisation moléculaire complète des réponses cliniques à l'inhibition de la PD-1 dans le cancer gastrique métastatique. Nat. Méd. 2018, 24, 1449-1458. [Référence croisée] [PubMed]

23. Savas, P. ; Virassamy, B. ; Oui, C. ; Salim, A. ; Mintoff, CP ; Caramia, F. ; Salgado, R. ; Byrne, DJ ; Téo, ZL ; Dushyanthen, S. ; et coll. Le profilage unicellulaire des cellules T du cancer du sein révèle un sous-ensemble de mémoire résidant dans les tissus associé à un pronostic amélioré. Nat. Méd. 2018, 24, 986-993. [Référence croisée] [PubMed]

24. Brewitz, A. ; Eickhoff, S. ; Dahling, S. ; Quast, T. ; Bedoui, S. ; Kroczek, RA; Kurts, C. ; Garbi, N. ; Barchet, W. ; Iannacone, M. ; et coll. Les cellules T CD8(+) orchestrent la coopérativité spatiale et fonctionnelle des cellules dendritiques pDC-XCR1(+) pour optimiser l’amorçage. Immunité 2017, 46, 205-219. [Référence croisée]

25. Kinoshita, J. ; Yamaguchi, T. ; Moriyama, H. ; Fushida, S. État actuel de la chirurgie de conversion pour le cancer gastrique de stade IV. Surg. Aujourd'hui 2021, 51, 1736-1754. [Référence croisée]

26. Du, Y. ; Wei, Y. Potentiel thérapeutique des cellules tueuses naturelles dans le cancer gastrique. Devant. Immunol. 2018, 9, 3095. [Réf. croisée]

27. Zhao, RX ; Xu, ZX Ciblant le suppresseur de tumeur LKB1. Curr. Cibles en matière de drogues 2014, 15, 32-52. [Référence croisée]

28. Skoulidis, F. ; Goldberg, MOI ; Greenawalt, DM; Hellmann, MD; Awad, MM; Gainor, JF; Schrock, Alberta; Hartmaier, RJ; Trabucco, SE ; Gay, L. ; et coll. Mutations STK11/LKB1 et résistance aux inhibiteurs PD−1 dans l'adénocarcinome pulmonaire mutant KRAS. Découverte du cancer. 2018, 8, 822-835. [Référence croisée]

29. Kim, J. ; Lee, HM ; Cai, F. ; Ko, B. ; Yang, C. ; Lieu, EL; Muhammad, N. ; Rhyne, S. ; Li, K. ; Haloul, M. ; et coll. La voie de biosynthèse de l'hexosamine constitue un risque pouvant être ciblé dans le cancer du poumon mutant KRAS/LKB1. Nat. Métab. 2020, 2, 1401-1412. [Référence croisée]

30. Kitajima, S. ; Tani, T. ; Springer, B.F. ; Campisi, M. ; Osaki, T. ; Haratani, K. ; Chen, M. ; Knelson, EH ; Mahadevan, NR ; Ritter, J. ; et coll. L'inhibition de MPS1 renforce l'immunogénicité du cancer du poumon mutant KRAS-LKB1. Cellule cancéreuse 2022, 40, 1128-1144e1128. [Référence croisée]

31. Hu, M. ; Zhao, T. ; Liu, J. ; Zou, Z. ; Xu, Q. ; Gong, P. ; Guo, H. Une diminution de l'expression de LKB1 est associée à une transition épithéliale-mésenchymateuse et conduit à un pronostic défavorable du cancer gastrique. Hum. Pathol. 2019, 83, 133-139. [Référence croisée]

32. Hogner, A. ; Moehler, M. Immunothérapie dans le cancer gastrique. Curr. Oncol. 2022, 29, 1559-1574. [Référence croisée]

33. Kole, C. ; Charalampakis, N. ; Tsakatikas, S. ; Kouris, NI ; Papaxoinis, G. ; Karamouzis, MV; Koumarianou, A. ; Schizas, D. Immunothérapie pour le cancer gastrique : une mise à jour 2021. Immunothérapie 2022, 14, 41–64. [Référence croisée]

34. Oliva, S. ; Troia, R. ; D'Agostino, M. ; Boccadoro, M. ; Gay, F. Promesses et pièges de l'utilisation des inhibiteurs PD-1/PD-L1 dans le myélome multiple. Devant. Immunol. 2018, 9, 2749. [Réf. croisée]

35. Farhood, B. ; Najafi, M. ; Mortezaee, K. Lymphocytes T cytotoxiques CD8 (+) dans l'immunothérapie du cancer : une revue. J. Cell. Physiol. 2019, 234, 8509-8521. [Référence croisée]

36. Kalathil, SG; Thanavala, Y. Cellules tueuses naturelles et cellules T dans le carcinome hépatocellulaire et l'hépatite virale : état actuel et perspectives pour les futures approches immunothérapeutiques. Cellules 2021, 10, 1332. [CrossRef]

37. Zhang, H. ; Jiang, R. ; Zhou, J. ; Wang, J. ; Xu, Y. ; Zhang, H. ; Gars.; Fu, F. ; Shen, Y. ; Zhang, G. ; et coll. Atténuation des CTL régulée par PS1 dans les fibroblastes associés au cancer. Devant. Immunol. 2020, 11, 999. [Réf. croisée]

38. Xiao, M. ; Xie, L. ; Cao, G. ; Lei, S. ; Wang, P. ; Wei, Z. ; Luo, Y. ; Croc, J. ; Yang, X. ; Huang, Q. ; et coll. La vaccination hétérologue prime-boost basée sur l'épitope T−CD4(+) potentialise l'immunité antitumorale et l'immunothérapie PD-1/PD-L1. J. Immunautre. Cancer 2022, 10, e004022. [Référence croisée]

39. Wang, W. ; Vert, M. ; Choi, JE; Gijón, M. ; Kennedy, PD ; Johnson, JK ; Liao, P. ; Lang, X. ; Kryczek, I. ; Vendre, A. ; et coll. Les lymphocytes T CD8+ régulent la ferroptose tumorale pendant l'immunothérapie anticancéreuse. Nature 2019, 569, 270-274. [Référence croisée]