Recherche sur les effets et mécanismes antidépresseurs des glycosides de cistanche phényléthanol chez la souris ⅱ

2 résultats et analyse

2.1 Les effets des CPHG sur SPT et 5- Ht et DA dans le sérum de souris du modèle de dépression sont présentés dans le tableau 1.

 

Par rapport au taux de préférence en eau de sucre de MOD, à la neurotransmetteur de neurotranseurs de tissus sérum et hippocampique 5- HT et DA, les teneurs étaient significativement plus élevées. Considérablement diminué (P<0.01 or P<0.05). It shows that Mod mice show depression-like behavior and the model is successfully established. Compared with Mod, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX significantly increased the sugar water preference rate, neurotransmitter 5-HT and DA contents in serum and hippocampal tissue of mice (P<0.01 or P< 0.05), among which the sugar water preference rates increased by 72.91%, 46.59%, 23.43% and 87.93% respectively; the serum 5-HT levels increased by 31.77%, 25.24%, 20.44% and 37.59% respectively; the serum DA levels increased by 47.07% respectively. , 35.57%, 27.77% and 52.93%; the 5-HT content in hippocampal tissue increased by 31.77%, 25.24%, 20.44% and 37.59% respectively, and the DA content in hippocampal tissue increased by 47.07%, 35.57%, 27.77% and 52.93% respectively. This shows that CPhGs has an alleviating effect on the anhedonia of CUMS mice. CPhGs may restore the anhedonic ability of mice by regulating neurotransmitter transmission in the central nervous system, especially pathways related to reward and emotion regulation such as 5-HT and DA.

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2.2 Effet des CPHG sur les souris du modèle de dépression OFT

Selon les caractéristiques physiologiques des rongeurs et certains comportements spéciaux dans des environnements inconnus, il peut être utilisé pour évaluer le comportement exploratoire et l'anxiété et l'état de dépression des souris dans de nouveaux environnements. L'expérience en plein champ examine principalement les activités autonomes de la souris, puis reflète dans son état dépressif, plus la distance totale de mouvement de la souris par unité de temps, plus le temps d'activité dans la zone centrale est longue, et plus la distance de mouvement dans la zone centrale est longue, plus le degré de dépression de la souris [11]. Les résultats expérimentaux sont illustrés à la figure 1. Par rapport à Con, les trois indicateurs ci-dessus du mod ont été significativement réduits (P<0.01); compared with Mod, the above three indicators of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX were significantly increased (P<0.01 or P<0.05), among which the total movement distance CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX increased by 46.63%, 29.86%, 23.92% and 52.65% respectively, and the central area activity time respectively The increases were 127.92%, 64.65%, 43.81% and 119.81%, and the exercise distance in the central area increased by 122.44%, 53.21%, 33.97% and 102.56% respectively. Experimental results show that CPhGs can regulate brain neural pathways and improve functions related to emotion regulation and behavioral drive, affecting the behavioral performance of OFT in depression model mice.

 

Fig. 1 Résultats de l'OFT dans chaque groupe de souris (x ± s, n=10)

 

2.3 Effets des CPHG sur TST et FST dans les souris du modèle de dépression

Les résultats de TST et FST sont illustrés à la figure 2. Par rapport à Con, le temps d'immobilité du test TST du MOD et le temps d'immobilité flottante du test FST étaient tous deux significativement plus longs (P<0.01); compared with Mod, CPhGs- The total immobility time and floating immobility time of H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX were significantly shortened (P<0.01 or P<0.05). Among them, the immobility time of forced swimming was reduced by 34.67%, 30.71%, 20.78% and 44.97% respectively, and the immobility time of tail suspension was reduced by 35.91%, 27.88%, 23.30% and 42.14% respectively. This suggests that CPhGs improves the function of the central nervous system and restores the normal activity of neuronal functions and neural circuits. In desperate stress environments, the negative emotions of mice are significantly reduced, and the desire to survive becomes positive, thus improving the TST of depressed mice. and behavioral manifestations of FST.

2.4 Effet des CPHG sur les facteurs inflammatoires chez les souris du modèle de dépression

Pour évaluer les effets anti-inflammatoires des CPHG, cette étude a mesuré les niveaux d'expression des facteurs inflammatoires clés dans l'hippocampe, y compris TNF, IL -1, il -18, il -6 et ifn- (voir figure 3). Par rapport à CON, les niveaux de TNF-, IL -1, IL -18, IL -6 et IFN- IN MOD ont été significativement augmentés de 132,92%, 107,32%, 69,13%, 62,32% et 76,55% (P.<0.01) . Compared with Mod, TNF-α in CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX mice decreased by 42.93%, 29.95%, 11.08% and 23.00% respectively (P<0.01 or P<0.05); IL-1β respectively decreased by 45.72%, 21.91%, 12.32% and 48.65% (P<0.01 or P<0.05); IL-18 decreased by 35.17%, 18.22%, 9.13% and 22.06% respectively (P<0.01 or P<0.05); IL- 6 were reduced by 34.67%, 11.47%, 9.06% and 19.47% respectively (P<0.01 or P<0.05); IFN-γ levels were reduced by 34.97%, 14.06%, 9.89% and 26.25% respectively (P<0.01 or P<0.05) .

 

Fig. 3 Changements dans les niveaux de facteurs inflammatoires dans le tissu hippocampique de chaque groupe de souris (x ± s, n=10)

 

2.5 Effet des CPHG sur les médiateurs inflammatoires chez les souris du modèle de dépression

Pour évaluer l'effet des CPHG sur les médiateurs inflammatoires, cette étude a mesuré les niveaux d'expression des médiateurs inflammatoires clés (INOS, Cox -2 et PGE2) dans l'hippocampe (voir figure 4). Comparé aux niveaux CON, INOS, COX -2 et PGE2 ont été significativement augmentés dans MOD de 278,34%, 147,45% et 124,03% (P<0.01). Compared with Mod, the iNOS levels of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGsL and FLX were reduced by 49.55%, 40.52%, 11.99% and 68.57% respectively (P<0.01 or P<0.05); the COX-2 levels were reduced by 39.58% respectively. , 26.87%, 17.96% and 48.39% (P<0.01 or P<0.05); PGE2 levels were reduced by 27.89%, 14.28%, 10.45% and 37.51% respectively (P<0.01 or P<0.05), among which the PGE2 of CPhGs-L The level is not statistically significant compared with Mod. The above results indicate that CUMS successfully induced the mouse depression model and caused significant inflammatory response and oxidative stress state. CPhGs can effectively reduce the levels of these inflammatory mediators after administration, showing good anti-inflammatory and antioxidant effects, and its effects are dose-dependent.

 

Fig. 4 Résultats de la teneur en médiateurs inflammatoires dans le tissu hippocampique de chaque groupe de souris (x ± s, n=10)

 

2.6 Effet des CPHG sur la structure des tissus hippocampiques chez les souris du modèle de dépression

La coloration a été utilisée pour analyser les changements pathologiques dans le tissu hippocampique de la souris (voir figure 5). Par rapport aux CON, les souris MOD ont montré des changements pathologiques évidents dans la région de gyrus denté de l'hippocampe, y compris la disposition des cellules désordonnées, la pyknose nucléaire et la vacuolation cytoplasmique, montrant des dommages neuronaux significatifs. Par rapport au MOD, CPHGS-L n'a aucun effet d'amélioration évident sur les phénomènes de dommages ci-dessus. CPHGSM et CPHGS-H ont considérablement amélioré ces changements pathologiques. L'effet de CPHGS-M était proche de FLX, et l'effet de CPHGS-H était encore meilleur que FLX. L'amélioration morphologique des neurones hippocampiques dépendait de la dose, ce qui suggère que les CPHG ont un effet protecteur sur l'hippocampe.

Neurones équins, améliorant les symptômes dépressifs. Ce résultat est cohérent avec les améliorations précédemment observées des marqueurs comportementaux et biochimiques et soutient en outre la valeur potentielle des CPHG dans le traitement de la dépression.
Les corps NISSL dans la coloration NISSL (voir figure 5) sont des structures cytoplasmiques uniques aux neurones et sont principalement responsables de la synthèse des protéines. Il est abondant dans les neurones sains et métaboliquement actifs mais est réduit ou démonté lorsqu'il est endommagé. Par conséquent, l'état des corps NISSL reflète directement la fonction et la santé des neurones et est un indicateur important pour évaluer l'activité des cellules nerveuses. Par rapport à la CON, la disposition neuronale dans la région de gyrus denté de l'hippocampe des souris MOD a été désordonnée et les corpuscules Nissl ont été significativement réduits, ce qui suggère une activité neuronale réduite. CPHGS-L, CPHGS-M et CPHGS-H ont tous augmenté le nombre de corps NISSL par rapport au MOD. Parmi eux, CPHGS-H a l'effet le plus significatif, la disposition des neurones tendant à être régulière et le nombre de corps NISSL approchant le niveau de con. FLX a également montré une amélioration significative dans une mesure comparable que CPHGS-H. Ces résultats indiquent que les CPHG peuvent améliorer dose des dommages neuronaux hippocampiques induits par les CUMS et augmenter la viabilité neuronale.

 

Fig. 5 Résultats de la coloration et de la coloration Nissl dans le tissu hippocampique de chaque groupe de souris

 

2.7 Effet des CPHG sur les cellules gliales dans l'hippocampe des souris du modèle de dépression

Les astrocytes sont le type de cellules gliales le plus abondant dans le cerveau et jouent un rôle crucial dans le maintien de la transmission des neurotransmetteurs et l'établissement de la barrière hémato-encéphalique [12]. Pour analyser la densité des astrocytes dans le tissu hippocampique de la souris, IHC a été utilisé pour détecter l'expression du marqueur d'astrocyte GFAP dans le tissu hippocampique (voir figure 6A et figure 7A). Par rapport à la CON, l'expression de GFAP dans l'hippocampe des souris MOD a été significativement réduite de 47,47% (P<0.01), showing significant astrocyte damage. Compared with Mod, CPhGs-L increased by 18.48%, but did not reach statistical significance; the GFAP expression of CPhGs-H, CPhGs-M and FLX significantly increased by 64.23%, 40.07% and 57.45% respectively (P< 0.01 or P<0.05), among which the effect of CPhGs-M is close to FLX, and the effect of CPhGs-H is even better than FLX. Changes in the number of astrocytes in the hippocampus of the CPhGs administration group
L'effet était dose-dépendante, ce qui suggère que les CPHG peuvent protéger les astrocytes et améliorer les symptômes dépressifs.
Les microglies sont les cellules immunitaires du système nerveux central, qui jouent un rôle important dans la surveillance immunitaire du cerveau, la neurogenèse, l'élagage synaptique et d'autres processus [13]. Des études cliniques ont montré que les microglies sont suractivées dans le cerveau des patients déprimés. Des études animales ont également montré que le stress chronique induit des comportements dépressifs chez les animaux et peut également provoquer des anomalies structurelles et fonctionnelles et un excès de microglie dans le cerveau (lobe préfrontal, hippocampe et autres zones cérébrales). Activer [14]. Pour analyser la densité des astrocytes dans le tissu hippocampique de la souris, IHC a été utilisé pour détecter l'expression du marqueur astrocyte IBA -1 dans le tissu hippocampique (voir figure 6B et figure 7B). L'expression d'Iba -1 a été significativement augmentée dans MOD de 72,34% par rapport à Con (P<0.01). Compared with Mod, Iba-1 expression of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L, and FLX was significantly reduced by 23.73%, 18.87%, 14.89%, and 29.67%, respectively (P<0.05 or P<0.01). Description CPhGs
Il peut réduire la libération de cytokines pro-inflammatoires et de médiateurs inflammatoires provoqués par l'activation microgliale, inflammatrice du système nerveux central induit par scomes.

 

2.8 Effet des CPHG sur la neuroinflammation dans les tissus hippocampiques des souris du modèle de dépression

La voie inflammasome NLRP3 joue un rôle clé dans la réponse inflammatoire dans le système nerveux central et est étroitement lié au processus pathologique de dépression. NLRP3 et Caspase -1, en tant que noyau de l'inflammasome, sont activés lorsqu'ils sont exposés à des stimuli externes, catalysant des facteurs inflammatoires précurseurs et déclenchant une série de réponses inflammatoires [15]. Afin d'analyser la gravité de la neuroinflammation dans le tissu hippocampique de la souris, IHC a été utilisé pour détecter l'expression des protéines clés inflammasomes NLRP3 NLRP3 et Caspase -1 dans le tissu hippocampique (voir figures 6C, 6D et figures 7c, 7d). Par rapport à Con, le niveau de MOD NLRP3 a été significativement augmenté de 121,62% (P<0.05), and the Caspase1 level was significantly increased by 172.65% (P<0.01). Compared with Mod, the NLRP3 levels of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX were reduced by 50.00%, 40.24%, 32.93% and 71.95% respectively (P<0.05), and the Caspase-1 levels were reduced by 57.65% and 37.99 respectively. %, 31.91% and 60.59% (P<0.05 or P<0.01). This shows that CPhGs can effectively inhibit the activation of NLRP3 inflammasome, thereby reducing neuroinflammatory response.

 

Fig. 6 Résultats IHC de GFAP, IBA -1, NLRP3 et Caspase -1 dans le tissu hippocampique de chaque groupe de souris (200

 

Fig. 7 Résultats de l'analyse quantitative de l'IHC pour GFAP, IBA -1, nlrp3 et caspase -1 dans le tissu hippocampique de souris de chaque groupe (x ± s, n=10)

 

2.9 Effet des CPHG sur l'expression de TLR4 et P-NFκB P65 dans l'hippocampe de souris

La signalisation TLR4 / NF-κB est un médiateur clé pour induire l'activation de l'inflammasome NLRP3 et initiant des réponses inflammatoires en aval. L'expression de NLRP3 est entraînée par l'activation de NF-κB et sa translocation nucléaire de la sous-unité p65, et toute la cascade de signalisation inflammatoire est entraînée par la médiation par la voie de signalisation TLR4 [16]. Afin d'analyser les changements dans l'expression des protéines en amont des inflammasomes NLRP3 dans le tissu hippocampique de la souris, une double coloration à l'immunofluorescence a été utilisée pour détecter l'expression de TLR4 et P-NF-κB p65 dans le tissu hippocampique (voir figures 8 et 9). Par rapport à Con, le niveau de mod TLR4 a été significativement augmenté de 111,17% (P<0.01), and the p-NF-κB p65 level was significantly increased by 184.51% (P<0.01).
Par rapport à MOD, les niveaux de TLR4 de CPHGS-H, CPHGS-M, CPHGS-L et FLX ont été réduits de 15,24%, 27,12%, 39,40% et 33,51% respectivement (P<0.01 or P<0.05), p-NF-κB p65 The levels were reduced by 19.46%, 33.61%, 48.82% and 41.54% respectively (P<0.01 or P<0.05). The above results, combined with pathological examination and inflammatory indicators, indicate that CPhGs can effectively inhibit the activation of the TLR4/NF-κB signaling pathway, thereby reducing the activation of the NLRP3 inflammasome and the resulting inflammatory response.

 

 

Fig. 8 Résultats de la coloration par immunofluorescence des TLR4 et P-NF-κB P65 dans le tissu hippocampique de chaque groupe de souris

 

La fluorescence verte représente les résultats de coloration P-NF-κB; La fluorescence rouge représente les résultats de coloration TLR4; La fluorescence bleue représente la coloration nucléaire DAPI.

Fig. 9 Intensité de fluorescence moyenne de TLR4 et P-NF-κB P65 dans le tissu hippocampique de chaque groupe de souris (x ± s, n=10)

 

3 Discussion et conclusion

Cette étude a systématiquement évalué les effets thérapeutiques et les mécanismes sous-jacents des CPHG sur le modèle de souris de dépression induite par CUMS.
Les résultats de la recherche montrent que les CPHG peuvent améliorer considérablement les comportements dépressifs induits par les CUMS, et cet effet d'amélioration est étroitement lié à la régulation des systèmes de neurotransmetteurs, à l'inhibition des réponses neuroinflammatoires et à affectation des voies liées aux inflammasomes NLRP3. Au niveau comportemental, les CPHG ont effectivement amélioré divers indicateurs comportementaux des souris modèles CUMS. Les CPHG ont considérablement augmenté le taux de préférence de l'eau de sucre, raccourci le temps d'immobilité dans les tests de natation et de suspension de queue forcés et réduit les comportements d'anxiété dans l'expérience en plein champ. Ces résultats confirment que les CPHG ont des effets antidépresseurs et anxiolytiques significatifs, et ses effets sont comparables au médicament témoin positif fluoxétine. Dans l'eau neurobiochimique en moyenne, les CPHG ont augmenté de manière significative les niveaux de 5- HT et DA dans le sérum des souris modèles. Il montre que les CPHG peuvent améliorer les symptômes dépressifs en protégeant les cellules nerveuses et en régulant les systèmes de neurotransmetteurs.

 

Les facteurs inflammatoires jouent un rôle important dans l'occurrence et le développement de la dépression, qui a été confirmé dans les modèles animaux de dépression et d'études cliniques [17]. Cette étude a révélé que les CUM ont augmenté de manière significative l'expression de plusieurs facteurs inflammatoires dans le tissu hippocampique de la souris, y compris TNF, IL -1, il -18, il -6, et ifn-. Le traitement CPHGS peut réduire considérablement les niveaux de ces facteurs inflammatoires, améliorant ainsi le comportement dépressif chez les souris CUMS. Des études ont montré que les niveaux de modèles moléculaires liés aux agents pathogènes tels que les iNOS et les modèles moléculaires liés au risque et le risque tels que IL -1 et IL -18 sont augmentés dans l'hippocampe des patients atteints de dépression. Une fois que ces molécules sont entrées dans le cytoplasme de la microglie, elles sont détectées par les récepteurs de reconnaissance de motifs. NLRP3 reconnaît et stimule les réponses immunitaires [18]. L'inflammasome NLRP3 est un complexe protéique clé qui régule la réponse inflammatoire immunitaire innée et comprend LRP3, ASC, et la caspase protéique effectrice -1. Lorsqu'il est activé, NLRP3 recrute ASC et Pro-Caspase -1 pour compléter l'assemblage de l'inflammasome nlrp3 inactif [19]. Dans le même temps, les pamps-pamps et les humides peuvent également provoquer des dommages mitochondriaux et une rupture de lysosomes, conduisant à la libération ou à l'exposition du contenu mitochondrial, à la libération de la cathepsine B à partir de lysosomes, à la promotion de la liaison de NEK7 à la NLRP3 inflammasome et à l'activation, et à induire IL -1 et à IL {23}} et à être libéré et à être libéré et 22. extracellulaire, induisant ainsi la neuroinflammation [20]. Les CPHG peuvent réduire les niveaux d'iNOS, COX -2 et PGE2, réduisent l'activation des inflammasomes NLRP3 en inhibant la production de PAMPS et DAMPS, réduisant ainsi la maturation et la libération de facteurs inflammatoires tels que il -1 et il y a-t-il à concevoir des comportements de la dépression dans le HIPPOCAP souris.

Des études ont montré que l'inflammasome NLRP3 est impliqué dans la pathogenèse de la dépression et de l'anxiété et est un médiateur clé reliant le stress chronique et les états dépressifs. L'activation de l'inflammasome NLRP3 est un processus complexe qui nécessite la réception des signaux d'initiation, tels que l'activation de la signalisation TLR4 / NF-κB. NF-κB activé régule à la hausse les niveaux de transcription d'ARNm de NLRP3 et Pro-IL -1, active les inflammasomes et initie des réponses inflammatoires en aval [21]. Les résultats de cette étude ont montré que la signalisation TLR4 / NF-κB et NLRP3 ont montré une expression élevée cohérente après une stimulation CUMS, ce qui est cohérent avec les résultats précédents dans les modèles de souris de dépression [22]. Le traitement CPHGS peut inverser significativement cet état d'expression élevé, suggérant que les CPHG peuvent affecter l'activation de l'inflammasome NLRP3 en régulant la signalisation TLR4 / NF-κB. En inhibant la voie de signalisation TLR4 / NF-κB, les CPHG bloquent le signal d'initiation de l'activation de l'inflammasome NLRP3, réduisant ainsi la production et la libération de facteurs inflammatoires en aval. La présente étude a également observé les effets régulateurs des CPHG sur les cellules gliales. Les CPHG ont considérablement augmenté le nombre d'astrocytes GFAP positifs tout en réduisant le nombre de microglies positives IBA -1-. Cette constatation peut être liée à l'inhibition de la voie de signalisation TLR4 / NF-κB. Des études ont montré que l'activation de la voie de signalisation TLR4 / NF-κB peut favoriser la formation d'astrocytes A1 neurotoxiques [23], et les CPHG peuvent aider à maintenir les astrocytes en inhibant cette voie. Fonctions normales et réduit la neuroinflammation et les dommages neuronaux.
En résumé, cette étude élucide systématiquement l'effet des CPHG dans les comportements dépressifs induits par les CUMS et ses mécanismes sous-jacents. Les CPHG présentent un potentiel en tant qu'antidépresseurs en modulant les systèmes de neurotransmetteurs, en inhibant les réponses neuroinflammatoires et en affectant les voies liées aux inflammasomes NLRP3.

 

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