Sarmentosamide, un composé anti-âge d'un Streptomyces d'origine marine Sp. APmarine042

Mots clés:cistanche; Streptomycessp. APmarine042 ;anti-âge; MMP-1 ; UVB; TNF-

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1. Introduction

Vieillissement cutanéest induite par deux processus principaux, qui résultent de facteurs intrinsèques et extrinsèques.Vieillissement extrinsèqueest principalement causée par l'exposition à des facteurs environnementaux tels que la pollution de l'air [1] et le rayonnement ultraviolet (UV) [2]. La lumière UV est composée d'UVA (315–400 nm), d'UVB (280–315 nm),et UVC (200-280 nm), dont les rayons UVB sont connus pour pénétrer l'épiderme et contribuer à la peauphotovieillissement [3]. Le photovieillissement cutané induit par les UVB endommage l'ADN [4] et espèces réactives de l'oxygène(ROS) génération [5] et perturbe la matrice extracellulaire [6]. Le vieillissement intrinsèque est causé par la natureconséquences des changements physiologiques, tels que les facteurs génétiques, les hormones et les processus métaboliques [7]. De plus, les cytokines inflammatoires, telles que le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF ), interleukine 1 alpha/bêta(IL-1 / ), et l'interleukine 6 (IL-6), sont chroniquement augmentées avec l'âge. En particulier, la nécrose tumoralefacteur- (TNF ) est connu pour accélérer la dégradation des composants de la matrice extracellulaire (ECM) viaréguler à la hausse l'expression et l'activité des métalloprotéinases matricielles (MMP) dans la peau âgée [8]. MMP-1 estprincipalement libéré par les fibroblastes dans le derme, et la MMP-1 sécrétée est responsable de la dégradationde collagène dermique, qui soutient la structure et la fonction de la peau. Par conséquent, la modulation de MMP-1l'expression dans les fibroblastes dermiques pourrait être une cible prometteuse pour le développement d'anti-vieillissementingrédients cosmétiques.

Des études antérieures ont rapporté que le rayonnement UVB induit des ROS (production d'espèces réactives de l'oxygène et conduit à l'activation des voies de signalisation intracellulaires et des facteurs de transcription (par exemple, AP-1, NF-kB) [9. Ces facteurs de transcription sont régulés par les mitogènes -Activated protein kinasesMAPKs), qui induisent des MMP-1 et des cytokines pro-inflammatoires. Il existe trois MAPKamilies distinctes impliquées dans les stimuli UVB/ROS : les kinases extracellulaires régulées par le signal (ERK), c-Jun N-terminal

kinase (NK) et p38.Notre étude a identifié un Streptomyces sp. Extrait d'APmarine042 qui a montré un puissant effet inhibiteur sur l'expression de MMP-1. Par la suite, un composé inhibiteur de MMP-1 a été identifié dans ce Streptomyces sp. L'extrait d'APmarine042 et sa structure chimique ont été identifiés via l'assistance à l'analyse RMN (1), un composé avec une fraction hexadiénamide 101. Nous avons ensuite étudié plus avant si ce composé inhibait l'expression de MMP -1 dans le derme humain irradié par les UVB et induit par le TNFa fibroblastes ainsi que son rôle dans la régulation des voies de signalisation sous-jacentes. De plus, nous avons examiné ee activité antioxydante du cistanche(1) via un 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl(DPPHI)essai de piégeage des radicaux.

2. Résultats et discussion

2.1. cistanche (1) Isolement et Identification

cistanche (1) a été isolé par une combinaison de HPLC-UV et d'isolement guidé par la bioactivité. Sur la base de la comparaison entre les données RMN (matériaux supplémentaires) du composé identifié dans cette étude (ci-après dénommé composé 1") à celles des composés précédemment rapportés, le composé 1 a été identifié comme cistanche. La valeur de rotation optique du composé 1 était également conforme aux rapports précédents, qui soutenaient davantage cette assistance du composé 1 (Figure 1).

2.2. Effets cytotoxiques du cistanche (1) sur les fibroblastes dermiques humains

Pour étudier les effets cytotoxiques du cistanche, des fibroblastes dermiques humains normaux (NHDPour des cellules de fibroblastes de prépuce humain (Hs68) ont été traités avec du cistanche à différentes concentrations (6, 12, 25, 50, 100 ug/mL) pendant 24 h, après quoi la cellule Le kit de comptage-8 (CCK-8) ​​a été effectué pour quantifier la viabilité cellulaire. Le sel de tétrazolium soluble dans l'eau (WST-8) dans la solution CCK-8 a été réduit par les activités de déshydrogénase dans cellules pour donner un colorant formazan de couleur jaune, dont la quantité était proportionnelle au nombre de cellules vivantes Comme le montre la figure 2, le cistanche n'a pas provoqué d'effets cytotoxiques observables dans les cellules NHDF ou Hs68 à des concentrations allant de {{15} } µg/ml

Figure 2. Test de viabilité cellulaire du cistanche sur fibroblastes. (ab) La viabilité cellulaire detraité cistancheles fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF) (a) et les cellules de fibroblastes de prépuce humain (Hs68) (b) à 24 h ont été mesurés par le test CCK (kit de comptage de cellules). * p < 0.05, ** p < 0,01vs. groupe non traité).

2.3. cistanche (1) inhibe l'expression et la sécrétion de MMP-1 dans les cellules NHDF irradiées aux UVB

Ensuite, les NHDF en l'absence et en présence de rayonnement UVB (25 mJ/cm2) ont été traités avec du cistanche (2,5 ug/mL) pendant de courtes périodes, et les niveaux d'expression relatifs de l'ARNm de MMP-1 ont été quantifiés via des mesures quantitatives en temps réel. Analyse PCR. cistanche s'est avéré réguler à la baisse les niveaux d'ARNm de MMP-1 jusqu'à 16 % et 17 % en l'absence (Figure 3a) et en présence (Figure 3bd'UVB, respectivement. Le rayonnement UVB, un facteur de risque extrinsèque majeur du vieillissement cutané, peut pénètrent dans l'épiderme et atteignent le derme supérieur, entraînant la génération d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) production de MMP et la régulation à la baisse de la synthèse du collagène Par conséquent, notre étude a cherché à déterminer si la sécrétion de MMP -1 inhibée par les cistanches dans les UVB irradiés Cellules NHDF. Les niveaux de sécrétion de MMP-1 dans les milieux de culture cellulaire ont été mesurés par ELISA, et les quantités relatives de sécrétion de MMP-1 ont été normalisées par rapport à la protéine totale dans les lysats de cellules entières, qui ont été mesurées via un bicinchoninic test de quantification des protéines acides (BCA). L'irradiation UVB (25 mJ/cm2) a remarquablement augmenté la sécrétion de MMP -1 (8,3- fois) par rapport au groupe non irradié aux UVB (Figure 3c) et cistanche -inhibe la sécrétion de MMP-1 dans les cellules NHDF irradiées aux UVB de manière dose-dépendante.

Figure 3. Effet du cistanche sur l'expression de la métalloprotéinase-1 (MMP-1) dans les NHDF irradiés aux UVB. ( a, b ) Les niveaux relatifs d'ARNm de MMP -1 dans les cellules NHDF irradiées aux UVB (25 mJ/cm2) ou traitées avec cistanche (2,5 ug/mL) pendant 16 h. Le gène RPLPO a été utilisé comme contrôle interne. * p < {{10}}.05.*** p < 0.001 (C) Après irradiation UVB (25 mJ/cm2) , le cistanche dans un milieu sans sérum a été traité pendant 48 h, puis les niveaux de sécrétion relatifs de MMP-1 dans le milieu de culture cellulaire ont été analysés par ELISA### p <0,001 (vs. groupe témoin non UVB) ; **p < 0,01 ; *** p < 0,001 (groupe témoin irradié aux UVB).

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