Détermination simultanée de l'échinacoside et du 2,3,5,4'-tétrahydroxy stilbène-2-Ο- -D-glucoside dans le liquide oral Congrong Tongbian par HPLC

Abstrait:L'objectif était de doser simultanément l'échinacoside et le 2,3,5,4'-tétrahydroxy stilbène-2-Ο- -D-glucoside dans le liquide oral digestif de Congrong par HPLC. La colonne Tech Mate C18-ST (4,6 mm × 250.0 mm, 5 μm) a été utilisée avec une élution par gradient par une solution d'acétonitrile-0,2 % d'acide formique ; la longueur d'onde de détection était de 330 nm ; le débit était de 1,0 ml/min. Les résultats ont montré que l'échinacoside et le 2,3,5,4'-tétrahydroxy stilbène-2-Ο- -D-glucoside dans l'échantillon présentaient une bonne résolution par rapport aux pics chromatographiques adjacents avec une bonne relation linéaire dans la plage de 0. .159 3-0.955 8 ug et 0.385 3-4.623 5 ug. La méthode établie est simple et précise et peut être utilisée pour déterminer l'échinacoside et le stilbène glycoside dans le liquide oral digestif de Congrong.

Mots clés:Liquide oral dégestif Congrong ;échinacoside; 2,3,5,4'-tétrahydroxystilbène-2-Ο- -D-glucoside ; HPLC

EXTRAIT DE CISTANCHE BIO AVEC 30% D'ÉCHINACOSIDE ET 12% D'ACTÉOSIDE

Les normes de qualité actuelles deCistanche RongLes liquides digestifs oraux présentent des problèmes tels que des éléments de test simples, une mauvaise opérabilité et des opérations lourdes et fastidieuses. En plus des éléments d'inspection généraux, la norme ne comporte que des éléments d'identification en couche mince pour Polygonum multiflorum et Citrus aurantium, ainsi que pour Polygonum multiflorum et Citrus aurantium. La méthode actuelle d’identification par chromatographie sur couche mince n’est pas assez rigoureuse et présente une opérabilité médiocre. L'élément de détermination du contenu utilise la spectrophotométrie ultraviolette pour détecter la 1,8-dihydroxyanthraquinone dans le liquide oral de Cistanche purpurea. Étant donné que cette méthode nécessite plusieurs extractions de reflux, l'opération est lourde et prend du temps, et la reproductibilité et la précision sont médiocres. La qualité des matières médicinales originales ne peut pas être contrôlée et le contrôle qualité de la drogue royale Cistanche deserticola fait défaut. Dans ce travail de recherche standard, la détermination deéchinacée à Cistanche deserticolaetglycoside de stilbène dans Polygonum multiflorumdans Cistanche deserticola Oral Liquid a été étudié. En fonction de la composition de la formule et des caractéristiques du procédé, une phase liquide performante a été établie. La méthode chromatographique a été utilisée pour déterminer les glycosides d'échinacoside et de stilbène dans le liquide oral digestif de Cistanche Rong, et ses limites de contenu ont été formulées pour améliorer encore les normes de contrôle de qualité. La méthode de détermination est simple et rapide, et les limites de contenu sont raisonnablement formulées. Après vérification méthodologique, l'exactitude, la précision, la linéarité, la durabilité et la précision de la portée sont bonnes et peuvent être utilisées pour déterminer le contenu du liquide oral Cistanche Rong Tongbang [1-5].

1 Instruments et réactifs

1.1 Instruments

Chromatographie liquide haute performance Waters (2695 et ARC) ; 1/100,000 balance électronique (MS205DU), 1/10,000 balance électronique (ME204E, Mettler-Toledo).

1.2 Médicaments et réactifs de test

Côté échinacée (numéro de lot 110670-201706, pureté 89,7 %) ; glycoside de stilbène (numéro de lot 110844-201915, pureté 90,7 %), tous fournis par l'Institut chinois de contrôle des aliments et des drogues ; Cistanche purpurea liquide oral (numéro de lot 20191204, 20191205, 20191206, 20200404, 20200405, 20200406, 20200407, 20200408, 20200409, 20200410), fourni par une société pharmaceutique du Gansu ; le méthanol, etc. sont chromatographiquement purs ; l'eau est de l'eau ultra pure ; les autres réactifs sont de qualité analytique.

2 Méthodes et résultats

2.1 Conditions chromatographiques

Utilisez Tech Mate C{{0}}ST (4,6 mm × 250.0 mm, 5 μm) comme colonne chromatographique, utilisez de l'acétonitrile comme phase mobile A et utilisez Solution d'acide formique à 0,2 % comme phase mobile B. Effectuer une élution par gradient conformément aux réglementations du tableau 1 ; température de la colonne La température est de 35Degrés ; la longueur d'onde de détection est de 330 nm ; le débit est de 1,0 ml/min ; le volume d'injection de l'échantillon d'essai et de la substance de référence est de 10 µL chacun ; le nombre de plaques théoriques ne doit pas être inférieur à 4 000 sur la base du pic d'échinacée.

2.2 Préparation de la solution

Préparation de la solution de référence : prenez des quantités appropriées de substance de référence d'échinacéaside et de substance de référence de glycoside de stilbène, pesez-les avec précision et ajoutez 7 0 % de méthanol pour préparer une solution mixte contenant 7 0 ug d'échinacéaside et 150 ug. de glycoside de stilbène pour 1 ml. , c'est ça. Préparation de la solution à tester : Bien agiter le produit, prélever environ 0,3 g, le peser avec précision, le mettre dans un flacon doseur marron de 25 mL, ajouter une quantité appropriée de méthanol à 70 %, soniquer pendant 30 minutes, laisser refroidir, ajouter 70 % de méthanol. % de méthanol à diluer jusqu'à l'échelle, bien agiter, filtrer et prélever le filtrat restant pour l'obtenir. Préparation de la solution d'échantillon négatif : Pesez précisément environ 0,3 g de l'échantillon négatif et préparez-le selon la méthode de préparation de la solution d'essai.

Figure 1 Chromatogrammes HPLC du liquide oral digestif Congrong

2.3 Revue méthodologique

2.3.1 Courbe de travail et plage linéaire

Dessinez avec précision la solution de référence mixte et ajoutez 70 % de méthanol pour préparer une série de solutions de référence mixtes. Prélevez avec précision 1{{20}} µL de chacune des séries de solutions de contrôle ci-dessus, injectez-le dans le chromatographe liquide et mesurez la valeur intégrée de la zone de pic. Prendre la concentration de la solution de référence (µg/mL) en ordonnée (x) et la valeur intégrée de la surface du pic en abscisse (y). Tracez un graphique pour obtenir une ligne droite passant par l’origine. L'équation de régression est y1=1.510 4×106x-1.177 2×105 (r=0.999 9), {{10} }.644 0×106x-6.3836×105 (r=0.999 9). Les résultats montrent que l'échinacéaside et le stilbène glycoside ont une bonne relation linéaire dans la plage de masse de 0,159 3 à 0,955 8 ug et de 0,385 3 à 4.623 5 euh.

Cistanche Tubuleuse

2.3.2 Test de précision

Prélevez avec précision 10 µL de la solution de référence mixte et répétez l’injection 6 fois dans les conditions chromatographiques « 2.1 ». La RSD des zones de pic de l'échinacoside et du stilbène glycoside a été mesurée à 0,66 % et 0,59 % respectivement, ce qui indique que la précision de l'instrument est bonne.

2.3.3 Essai de stabilité

Selon la méthode sous "2.1", prenez ce produit (numéro de lot 20191205) pour préparer une solution de test, injectez des échantillons pour mesure à 0 h, 4 h, 8 h, 12 h, 20 h et 24 h après la préparation et enregistrez la zone du pic. , l'écart type relatif est compris entre 2,37 % et 2,79 %. Les résultats montrent que la solution test est stable dans les 24 heures.

2.3.4 Test de répétabilité

Prélever 6 aliquotes du même lot d'échantillons de test (numéro de lot 20191205) et injecter des échantillons pour mesure selon les conditions chromatographiques sous « 2.1 ». Résultats L'écart type relatif de l'échinacéaside était de 1,48 %, avec une bonne répétabilité ; l'écart type relatif du stilbène glycoside était de 1,10 %, avec une bonne répétabilité.

Cistanche Tubuleuse

2.3.5 Détermination du taux de récupération

Adopter l'ajout et la récupération d'échantillons pour fournir 50 % de la quantité d'échantillon (0,3 g) de l'échantillon de test et le contenu d'échantillonnage de 1.0 :0 .5, 1.{{10}} :1.0, 1.0 :1,5, respectivement, et absorber avec précision la solution de réserve de substance de référence 1 (la teneur en glycoside d'échinacée est 0.431 5 mg/mL) 1,0 mL, 2,0 mL et 3,0 mL chacun, puis ajouter avec précision la solution mère de substance de référence 2 (glycoside de stilbène concentration massique 0,8678 mg/mL) 1,25 ml, 2,50 ml et 3,75 ml respectivement. Ajouter respectivement aux fioles jaugées de 25 ml, en utilisant

Séchez avec un souffleur d'azote. Pesez ensuite avec précision 9 échantillons du même lot dont le contenu est connu (numéro de lot 20191205, la teneur en échinacéaside est de 7,810 2 mg/g, la teneur en glycoside de stilbène est de 14,232 4 mg/ g), et la quantité d'échantillonnage de chaque échantillon est La quantité d'échantillon de l'échantillon de test est d'environ 0,15 g. Ajoutez-le respectivement à la fiole jaugée ci-dessus. Préparez-le selon la méthode sous la solution de test. Mesurez-le conformément à la loi. Calculez le taux de récupération. Le résultat est facile.

Les récupérations moyennes des glycosides de stilbène et des glycosides de stilbène étaient respectivement de 98,28 % et 98,43 %, et les RSD étaient de 1,56 % et 0,97 %, respectivement, ce qui indique une bonne précision de l'instrument.

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