Propriétés et constituants liés à la peau de l'extrait de parties aériennes de Persicaria Senticosa
Mar 19, 2022
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Yun-Hyeok Choi, 1 Jae Yeon Lee, 2 Ji Eun Lee, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Young-Rak Cho, 2 et Chun Whan Choi 1
1. Introduction
Persicaria senticosaest une plante annuelle de la famille des Polygonacées, qui est distribuée dans toute la Corée. Depuis les premiers temps, cette plante a été utilisée comme médecine populaire avec des effets bénéfiques pour le traitement de diverses maladies telles que l'élimination des parties enflées de la plaie ou des anthrax et de la cellulite et la circulation sanguine, et l'élimination de la stagnation du sang. Des études récentes ont montré quePersicaria senticosaavait des effets anti-inflammatoires [1] ; cependant, cette plante n'a pas été signalée comme ingrédient cosmétique bioactif. Et des études phytochimiques antérieures sur les fleurs, la tige et les racines du genre Polygonum ont révélé divers flavonoïdes et composés phénoliques tels que l'acide hydroxybenzoïque, la rutine, la quercétine-3-O-glucuronide, la quercétine-3-O-glucoside et la lutéoline-7-O-rutinoside était considérée comme le principal composant actif [2, 3]. Ces composés actifs présentent divers effets pharmacologiques, tels que des effets anti-inflammatoires, antiulcéreux, antihypertenseurs et anticancéreux [4]. Lors du criblage d'ingrédients cosmétiques en mesurant l'effet de piégeage des radicaux sur le 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyl(DPPH), le piégeage des radicaux ABTS, l'inhibition de l'élastase,tyrosinaseinhibition et dosage de l'oxyde nitrique, plusieurs extraits de Polygonum ont montré une activité puissante.
Cliquez pourCistanche utilise pour réduire l'activité de la tyrosinase.
2. Matériels et méthodes
2.1. Matériaux végétaux et procédures générales des produits naturels.
Persicaria senticosaa été recueilli à Seo-myeon, Chuncheon-si, Gangwon-do, Corée, en 2016 (GPS : N 37 degrés 55′30,1″, E 127 degrés 37′ 57,0″, altitude : 434 m). Les spécimens justificatifs (G071) ont été authentifiés par le Dr Chun Whan Choi.Persicaria senticosaont été déposés à l'herbier du Biocenter, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, Corée du Sud (Fig. S3). L'extrait de méthanol à 99,9 % de trente-quatre polygones a été obtenu auprès de la Korea Plant Extract Bank de l'Institut coréen de recherche sur les biosciences et la biotechnologie (Daejeon, Corée). Des expériences de RMN 1H et 13C ont été réalisées sur un spectromètre Bruker Ascend 700 MHz avec du tétraméthylsilane (TMS). LC-ESI-MS a été obtenu sur un instrument Triple TOF 5600 plus (AB SCIX, USA) et HRESI-MS sur un instrument LTQ Orbitrap XL (Thermo, USA). La chromatographie en couche mince (CCM) a été réalisée sur des plaques de gel de silice 60F254 (Merck, Allemagne) et de gel de silice 60 RP-18 F254S (Merck, Allemagne). La chromatographie sur colonne (CC) a été réalisée à l'aide de gel de silice 60 (70 ~ 230 mesh, Merck, Allemagne), ODS-A (12 nm S -7 μm, YMC GEL, Japon) et la HPLC préparative a été réalisée sur LC {{ 23}}A (Shimadzu, Japon).
2.2. AUCUN essai.
Les cellules RAW 264.7 ont été ensemencées dans des plaques 96-puits (5 × 104 cellules/puits) et ont été traitées avec un échantillon pendant 1 h avant la stimulation par le LPS (1 ug/mL) pendant 24 h. Le contrôle négatif a été traité avec un milieu sans sérum. La quantité de nitrite, métabolite astable du NO, a été mesurée en utilisant le réactif de Griess (1 % de sulfanilamide et 0,1 % de dichlorhydrate de naphtyléthylènediamine dans 2,5 % d'acide phosphorique). L'absorbance a ensuite été mesurée à 540 nm à l'aide d'un lecteur ELISA. La quantité de nitrate a été déterminée à partir d'une courbe standard pour le nitrite de sodium [5–7].
2.3. Test de cytotoxicité cellulaire.
Les cellules RAW 264.7 ont été étalées à une densité de 5 × 104 cellules/puits dans des plaques 96-puits. Les cellules ont été traitées avec des échantillons pendant 1 h avant la stimulation par le LPS (1 ug/mL) pendant 24 h. Du MTT (5 mg/ml dans du PBS) a été ajouté à chaque puits et incubé pendant 2 heures. Le milieu a été retiré des puits par aspiration, du DMSO a été ajouté à chaque puits et la plaque a été secouée. L'absorbance de chaque puits a été mesurée à une longueur d'onde de 540 nm à l'aide d'un lecteur ELISA. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart type de trois répétitions.
2.4. Essai d'activité de piégeage des radicaux DPPH.
L'activité de piégeage des radicaux DPPH a été mesurée en utilisant la méthode décrite par Blois [8] et Ozgen et al. [9]. Une solution de DPPH dissoute dans du méthanol a été ajoutée à l'échantillon, qui a été dilué à la concentration requise, et la réaction a été effectuée à température ambiante pendant 30 min. L'absorbance a été mesurée à 517 nm en utilisant un lecteur ELISA. L'hydroxyanisole butylé antioxydant (BHA) a été utilisé comme témoin positif et la valeur IC50 de l'échantillon a été déterminée.
2.5. Activité de piégeage des radicaux ABTS.
L'activité de piégeage des radicaux ABTS a été mesurée en utilisant une méthode décrite précédemment [10, 11]. ABTS plus a été formé en mélangeant une solution ABTS 7 mM et une solution de persulfate de potassium 2,45 mM (K2S2O8) avec ABTS: K2S2O8 (rapport 2: 1) pendant 12 à 16 h pour former un cation (ABTS plus). L'absorbance a été mesurée à 734 nm à l'aide d'un lecteur ELISA. Le BHA, un antioxydant, a été utilisé comme témoin positif.
2.6. Test d'inhibition de la tyrosinase.
Tyrosinasel'activité inhibitrice a été mesurée en utilisant la méthode décrite par Yagiet al. [12]. La réaction a été effectuée dans un tampon phosphate de potassium 0.1M (pH 6,5) contenant 1,5 mM de L-tyrosine et 1250 unités/mL de tyrosinase de champignon. Le mélange réactionnel a été incubé à 37 degrés pendant 20 minutes. Les échantillons de test ont été testés pour l'inhibition de la tyrosinase en mesurant son effet surtyrosinaseactivité en utilisant SpectraMax 190PC microplate ELISAreader à 490 nm. L'arbutine et l'acide kojique ont été utilisés comme contrôle positif et la valeur IC50 de l'échantillon a été déterminée.
2.7. Essai d'inhibition de l'élastase.
La réaction a été effectuée dans un tampon {{0}}.5 mM Tris (pH 8,5) contenant 1 mg/mL de N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide et 0,6 unité/mL d'élastase . Le mélange réactionnel a été incubé à 25 degrés pendant 10 min. Les échantillons de test ont été testés pour l'inhibition de l'élastase en mesurant son activité effecton élastase en utilisant un lecteur ELISA à 405 nm. L'acide ursolique a été utilisé comme témoin positif et la valeur IC50 de l'échantillon a été déterminée [13].
2.8. Analyses statistiques.
L'analyse statistique des données a été réalisée par le logiciel PRIZM5 (GraphPad, CA, USA), et les données sont présentées sous forme de moyenne ± SD. Le test t de Student unilatéral a été utilisé pour analyser la signification de la différence entre les groupes, et P < 0 :="" 05="" a="" été="" considéré="" comme="" statistiquement="">
3. Résultats et discussion
3.1. Propriétés cutanées des extraits de plantes de la famille Polygonaceae.
Effet de piégeage des radicaux sur DPPH, piégeage des radicaux ABTS, inhibition de l'élastase,tyrosinasel'inhibition et le dosage de l'oxyde nitrique sur plusieurs extraits de Polygonum se sont avérés montrer une activité puissante. Les résultats ont montré que le Persicariajaponica et le Rumex longifolius ont le test NO (IC{{0}}.3 et inférieur à 25,0 ug/mL). Pour le DPPH, la CI50 de l'extrait méthanolique de Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum et Persicaria Chinensis était de 36,9, 15,4 et 19,2 ug/mL, respectivement. et 5,3 ug/mL, respectivement. Danstyrosinaseactivité inhibitrice, l'IC50 de l'extrait méthanolique de Polygonum sachalinensroot et Polygonum cuspidata était de 289,0 et 483,9 ug/mL, respectivement. Dans le test d'inhibition de l'élastase, la CI50 de l'extrait méthanolique de Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinum, Persicarialongiseta, Persicaria Chinensis, Persicaria japonica, Persicariaviscera, Persicaria conspicua, Rheum palmatum et Persicaria lapathifolia étaient inférieures à 100 ug/mL (tableau 1).
3.2. Propriétés liées à la peau des fractions de Persicaria senticosa.
Effet de piégeage des radicaux sur le 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyl(DPPH), piégeage des radicaux ABTS, inhibition de l'élastase et dosage de l'oxyde nitrique sur plusieursPersicaria senticosafractions ont montré une activité puissante. Les résultats ont montré que les fractions CH2Cl2 et EtOAc ont le dosage du NO (moins de 25 et 44,64 ug/mL, respectivement). Les activités de piégeage des radicaux DPPH et ABTS des fractions EtOAc étaient de 13,7 et 5,0 ug/mL. Dans le test d'inhibition de l'élastase, la CI50 des fractions de n-hexane et de CH2Cl2 était inférieure à 100 ug/mL (tableau 2).
3.3. Isolement et détermination des composés de l'extrait de Persicaria senticosa.
Persicaria senticosales parties aériennes (1,4 kg), séchées à l'ombre et réduites en poudre, ont été ajoutées à 4{{10}} L d'éthanol à 70 % (qualité HPLC) et deux fois à température ambiante (chaque fois pendant 2 jours) et ont été concentrés sous vide à 4 0 degrés pour donner 180,4 g d'extraits. Les extraits ont été mis en suspension dans de l'eau distillée, puis partagés avec du n-hexane (4 : 0 L × 3), du CH2Cl2 (4 : 0 L × 3), de l'EtOAc (4 : 0 L × 3) et du n-butanol (4 : 0 L × 3). pour donner du n-hexane (11,7 g), du CH2C12 (7,4 g), de l'EtOAc (21,7 g), du butanol (22,5 g) et des fractions solubles dans l'eau (110,1 g), (schéma 1). La fraction d'EtOAc (21,7 g) a été séparée par MPLC qui utilisait des mélanges de gradients comme éluants (F001-003). Les composés 1 (3,2 mg) et 5 (3,9 mg) ont été isolés de F002 qui ont été utilisés par prep-HPLC. La fraction F001 a été séparée par MPLC qui a utilisé des mélanges de gradient comme éluants (F011-F018). Le composé 6 (1,5 mg) a été isolé de F016 qui a été utilisé par HPLC préparative. Le composé 7 (2,7 mg) a été isolé à partir de F017 qui a été utilisé par HPLC préparative. F012 a été séparé en utilisant MPLC qui utilisait des mélanges de gradients comme éluants (F121-F124). Le composé 4 (10,8 mg) a été isolé à partir de F124 qui a été utilisé par HPLC préparative. De plus, F014 a été séparé par HPLC préparative en utilisant des mélanges de gradient comme éluants (F141-F143). Le composé 3 (2,3 mg) a été isolé à partir de F141 en utilisant une HPLC préparative. Le composé 2 (4,8 mg) a été isolé à partir de F142 en utilisant une HPLC semi-préparative. La purification de la couche soluble d'EtOAc a été effectuée par séparation par chromatographie sur colonne et analyse MPLC pour les composés 1-7. Il a été identifié comme loliolide (1) [14], quercétine-3-O-glucoside (2) [15], querce étain-3-O-glucuronide (3) [16], 4-méthoxy acide caftrarique (4) [17], kaempférol-3-(6-méthylglucuronide) (5) [18], quercétine-3-(6-méthylglucuronide) (6) [19, 20], et la quercétine (7) [21]. La structure a été élucidée par une combinaison de spectrométrie RMN et MS 1D et 2D ainsi que par une comparaison avec la littérature rapportée (Figure 1).
3.4. Propriétés liées à la peau des composés de Persicariasenticosa.
Effet anti-radicalaire sur le DPPH,tyrosinaseinhibition, et dosage du monoxyde d'azote sur plusieurs composés dePersicaria senticosas'est avéré montrer une activité puissante (Fig.S4–7). Les résultats ont montré que le composé 7 a le dosage NO (IC50 29.7 ug/mL). Pour le DPPH, l'IC50 des composés 2, 3, 5 et 7 était de 39,6, 31,2, 37,0 et 22,7 ug/mL, respectivement. Dans l'activité inhibitrice de la tyrosinase, la CI50 du composé 7 était de 14,3 ug/ml (tableau 3).
4. Conclusions
Persicaria senticosaest une plante annuelle de la famille des Polygonaceae qui est distribuée dans toute la Corée. Depuis les temps anciens, cette plante a été utilisée comme médecine populaire avec des effets bénéfiques pour le traitement de diverses maladies. Cette étude a évalué les propriétés et les constituants liés à la peau de l'extrait de partie aérienne de Persicaria senticosa et de trente-quatre plantes Polygonasee. Au cours du criblage d'ingrédients cosmétiques en mesurant l'effet de piégeage des radicaux sur le DPPH, le piégeage des radicaux ABTS, l'antirides a été évalué en utilisant l'inhibition de l'élastase, le blanchiment a été étudié partyrosinaseinhibition, et anti-inflammatoire a été testé sur le dosage de l'oxyde nitrique. Plusieurs extraits de Polygonum ont montré une activité puissante. Les résultats ont montré que l'extrait de Persicaria senticosaméthanolique possède les activités anti-radicalaires DPPH et ABTS (IC50 61.0 et 17,5 ug/mL). Dans le test d'inhibition de l'élastase et le test d'oxyde nitrique, la CI50 de l'extrait méthanolique de Persicaria senticosa était de 241,5 ug/mL et de 71,8 ug/mL, respectivement. L'extrait éthanolique à 70 % de Persicaria senticosa a été partagé avec du n-hexane, du CH2Cl2, de l'EtOAc, du n-BuOH et des fractions aqueuses.
La fraction soluble d'EtOAc a montré une puissante activité liée à la peau (Figure 2 et Tableau 3). Ces résultats suggèrent que les composants actifs dansPersicaria senticosaresponsables de l'activité liée à la peau étaient concentrées dans la fraction soluble EtOAc de Persicaria senticosa (Schéma 1). D'autre part, la fraction soluble dans le n-hexane, le dichlorométhane et la fraction soluble dans le BuOH dérivée de l'extrait de Persicaria senticosa ont montré une activité équipotente sur le dosage de l'oxyde nitrique, le DPPH et l'activité de piégeage des radicaux ABTS, tandis que la fraction d'eau restante a montré de faibles effets inhibiteurs (tableau 2 ).
Ainsi, la purification guidée par bioessai de trois fractions actives, c'est-à-dire la fraction soluble d'EtOAc dePersicaria senticosaa été menée pour purifier les principes actifs responsables de l'activité liée à la peau suivie par le procédé décrit dans le schéma 1, respectivement.
La purification de la couche soluble d'EtOAc à partir dePersicaria senticosaL'extrait éthanolique à 70 % a été réalisé par séparation par chromatographie sur colonne et analyse MPLC pour les composés 1-7. Il a été identifié comme loliolide (1), quercétine3-O-glucoside (2), quercétine-3-O-glucuronide (3), 4-acide méthoxy caftrarique (4), kaempférol{{ 11}}(6-méthylglucuronide) (5), quercétine-3-(6-méthylglucuronide) (6) et quercétine (7). La structure a été élucidée par une combinaison de spectrométrie RMN et MS 1D et 2D, ainsi que par comparaison avec la littérature rapportée (Fig. S2). Effet de piégeage des radicaux sur 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyl(DPPH),tyrosinasel'inhibition, et le dosage de l'oxyde nitrique sur plusieurs composés de Persicaria senticosa s'est avéré montrer une activité puissante. Les résultats ont montré que le composé 7 possède le test NO (IC5029,7 μM). Pour le DPPH, la CI50 des composés 2, 3, 5 et 7 était de 39,4, 32,1, 37,0 et 22,7 μM, respectivement. Danstyrosinaseactivité inhibitrice, l'IC50 du composé 7 était de 14,3 μM. Comme le montre la figure 3, les composés 2 et 5 sont les principaux composés de la fraction soluble EtOAc de Persicaria senticosa (-Fig. S1). Et les composés 2 et 5 ont montré une excellente activité antioxydante (Figure 4), ce qui est cohérent avec les études précédentes [18, 22].
Cette présente étude a démontré quePersicaria senticosaet les polygonases contiennent des composés chimiques ayant des activités liées à la peau et pourraient être intéressantes en tant que nouvelle source d'agents bioactifs pour les industries cosmétiques.
