Étude sur les effets œstrogéniques de l’échinacoside et de l’actéoside de Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Université de médecine traditionnelle chinoise de Tianjin, 300193 de Tianjin, Chine
Abstrait: Dans cette étude, les effets œstrogéniques deéchinacosideetacteosidede Herba Cistanche ont fait l’objet d’une enquête. Une loi plasmidique rapporteur de luciférase a été utilisée pour détecter les effets œstrogéniques deéchinacosideetacteoside. Les expériences de liaison à la compétition des récepteurs d’œstrogènes ont été utilisées pour détecter leur effet compétitif avec les œstrogènes. Les résultats ont montré queéchinacosideetacteosidepeut augmenter l’activité d’ERE. Quandéchinacosideouacteosideest ajouté dans les actes d’œstrogènes, l’activité du gène rapporteur EREdriven peut être stimulée en tant qu’agoniste des œstrogènes. Par conséquent, il a été conclu que :échinacosideetacteosideavaient une activité des phytoestrogènes en stimulant l’activité du gène rapporteur de l’augmentation de l’ERE.Echinacosideetacteosideétaient des SERM potentiels.
Mots-clés : échinacoside ; actéoside ; phytoestrogènes ;
Herba Cistanche est une plante du genre Cistanche (Oroban- chaceae) du genre Cistanche (Cistanche). C’est une tige charnue sèche avec des feuilles écailleuses. Il a pour fonctions de nourrir le yang rénal, de nourrir l’essence et le sang, et d’humidifier l’intestin. Il est utilisé pour la carence en yang rénal, la carence en essence et en sang, l’impuissance et l’infertilité, la douleur à la taille et aux genoux, la faiblesse des muscles et des os, les intestins secs et la constipation ̈. 2J. À l’heure actuelle, les principaux composants chimiques isolés et identifiés à partir de Cistanche sont les glycosides de phényle, les iridoïdes, les lignanes, les flavonoïdes, les polysaccharides, les oligosaccharides, le galactitol, les composants volatils, les alcaloïdes, etc. Parmi eux, les glycosides d’alcool phénéthylique sont les principaux ingrédients actifs de Cistanche cistanche, et sont également les principaux indicateurs de détection pour le contrôle de la qualité de Cistanche, et sont représentés paréchinacoside et verbascoside. Des études pharmacologiques modernes ont montré que Cistanche a les fonctions de régulation immunitaire, anti-oxydation, anti-âge, anti-fatigue, neuroprotection et protection du foie. Certaines études pharmacologiques montrent également que Cistanche peut favoriser la régénération osseuse-l"J, inhiber la formation d’ostéoporose et de phytoestrogènes chez les femmes ménopausées"]. Dans cette expérience, nous avons sélectionné l’échinacoside et le verbascoside, qui sont les principaux indicateurs de contrôle de la qualité à Cistanche, et testé l’œstrogéniqueeffets de l’échinacosideet verbascoside par la méthode plasmidique rapporteur de la luciférase et l’expérience de liaison compétitive des récepteurs d’œstrogènes. Explorez le mécanisme de l’échinacoside et de l’œstrogène verbascoside
1 Matériel et méthodes
1.1 Cellules Hela matérielles (cellules cancéreuses du col de l’utérus humain), achetées à l’Institut de biologie cellulaire de Shanghai;échinacosidea été séparé et purifié de Cistanche deserticola par notre laboratoire et a été testé par HPLC-ELSD. Leéchinacosidela substance de référence (Institut national chinois pour le contrôle des produits pharmaceutiques et biologiques, numéro de lot : 111670) a été utilisée comme témoin, et la pureté mesurée était de 95,1 %. Leacteosidea été séparé et purifié du désert de Cistanche par notre laboratoire et a été obtenu par HPLC. Test ELSD, avec la substance de référence du glycoside Verbascum (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, numéro de lot: 111530) comme témoin, la pureté mesurée était de 96,4%; plasmides ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (extraits par notre laboratoire) ; Estradiol (E), Sigma Company; Sérum fœtal bovin (FBS), PAA Company; Sérum fœtal bovin traité au charbon actif (CS-FBS), PAA Company; DMEM sans phénol sans rouge, Sigma Company; Diméthylsulfoxyde (DMSO), Amresco Company; LB medium, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; Tampon PassiveLysis5X, société Promega; Lipofectamine2000, Promega Company; Kit d’extraction de plasmides, société TIANGEN; Le kit de détection du gène luciferase reporter est un produit de Promega Company.
1.2 Culture cellulaire Les cellules Hela ont été cultivées dans un milieu de culture DMEM contenant 10 % de sérum bovin fœtal. Au moins une génération avant l’expérience a été remplacée par un milieu de culture DMEM contenant 1% de sérum fœtal bovin traité au charbon actif.
1.3 Transfection et détermination de l’activité de la luciférase Les cellules Hella ont été ensemencées dans une plaque de 24 puits à une densité de 70% à 80%. Une fois que les cellules ont adhéré à la paroi et que la densité cellulaire a atteint 90%, suivez les instructions en lipo. Feetamine2000 instructions de réactif de transfection transfect ERa, ER[3 plasmides d’expression et ERE, Renila reporter plasmides, changer le milieu après 8 heures et ajouter des médicaments d’essai de différentes concentrations. Après l’incubation pendant la nuit, utilisez un lecteur de plaque multifonction pour détecter la réponse des œstrogènes. Composante ERE activité de la luciférase, calculer l’influence relative des médicaments sur l’activité de la luciférase.
1.4 Traitement des données et analyse statistique
À l’aide du logiciel statistique SPSS18.0, les données sont exprimées sous forme d’écart moyen±normal (x±S). L’analyse unidirectionnelle de la variance (ANOVA) et le test t de comparaison multiple de Dunnett ont été utilisés pour analyser les données entre les groupes. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Actéroside
2 Résultats expérimentaux
2.1 L’effet du verbascoside sur l’activité de l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase Les résultats montrent que, par rapport au groupe témoin lorsqu’il est médié par ERa et ER[3, E (10nmol) peut réguler à la hausse significativement l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase L’activité du verbascoside peut réguler à la hausse l’activité de l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase à 10, 100, 1, 10 et 50 txmol. Lorsque la concentration atteint 50 I ~ mol, la régulation à la hausse de l’activité de la luciférase ERE est équivalente à celle de l’œstradiol. Il est dose-dépendant, mais la sélectivité des récepteurs d’œstrogènes ERa et EP~ n’est pas évidente (Figure 2).
2 Effets des différentes concentrations deacteosidesur l’activité luciférase de l’ERE
Note : Par rapport au groupe témoin, P
2.2 L’effet deéchinacosidesur l’activité de l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase Les résultats montrent que, par rapport au groupe témoin lorsqu’il est médié par ERa et ER[3, E(10nmol) peut réguler de manière significative l’élément de réponse oestrogène Fluorescence ERE Echinacoside peut réguler à la hausse l’activité de l’élément de réponse oestrogène ERE luciferase à 10, 100, 1, 10 et 50 Ixmol. Lorsque la concentration atteint 50 Ixmol, la régulation à la hausse de l’activité de la luciférase ERE est légèrement inférieure à celle de l’œstrogène. Le diol est également dépendant du mètre, mais présente une légère différence de sélectivité pour les récepteurs d’œstrogènes ERa et E (Figure 3).
2.3 Effet de liaison compétitif des glycosides de Verbascum et de l’œstradiol sur les récepteurs d’œstrogènes Les résultats montrent que les glycosides de Verbascum peuvent se lier de manière compétitive aux récepteurs d’œstrogènes avec l’œstradiol et contrarier l’activité de l’œstradiol sur l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase. L’effet de régulation à la hausse. Par rapport au groupe E (10nmo1), les verbascosides peuvent réguler à la baisse l’activité luciférase de l’œstradiol sur l’élément de réponse œstrogène ERE à des degrés divers à 1, 10 et 50p, mol, et les verbascosides montrent une dose-dépendance. , Lorsque la concentration atteint 50 Ixmol, l’effet antagoniste sur l’œstradiol est le plus évident (Figure 4).
2.4 L’effet contraignant concurrentiel deéchinacosideet l’œstradiol sur les récepteurs des œstrogènes. Les résultats montrent queéchinacosidepeut également se lier de manière compétitive aux récepteurs d’œstrogènes avec l’œstradiol et antagoniser la réponse de l’œstradiol à l’œstrogène. Régulation à la hausse de l’activité de la luciférase ERE. Comparé au groupe E (10 nmol), le verbascoside peut réguler à la baisse l’activité de la luciférase de l’œstradiol sur l’élément de réponse œstrogène ERE à des degrés divers à 1, 10 et 50 mol, etéchinacosideprésente une dose paresseuse. Sexe, lorsque la concentration atteint 50lxmol, l’effet antagoniste sur l’œstradiol est le plus évident (Figure 5)
3 Discussion
Cette expérience a montré pour la première fois que des données claires montraient queéchinacosideet le verbascoside, les principaux ingrédients actifs de Cistanche, peuvent se lier aux récepteurs d’œstrogènes ERa et EP ~, réguler à la hausse l’activité de la luciférase de l’ERE et exercer des effets œstrogéniques, montrant l’activité des SERM. L’analyse des données expérimentales ci-dessus montre que dans le système ERa, la régulation à la hausse du verbascoside sur l’activité de la luciférase de l’élément de réponse œstrogène ERE à 50 lxmol équivaut à 0,977 fois celle de E2 (10 nmol), ce qui équivaut à celle du système ERI3. 0,970 fois; de même, dans le système ERa, l’effet de régulation à la hausse de l’échinacoside sur l’activité de l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase à 50 lxmol est équivalent à celui de E (10nmol), ce qui équivaut à 0 dans le système ERI3. 937 fois, la régulation à la hausse du verbascoside sur l’activité de l’élément de réponse œstrogène ERE luciférase est légèrement supérieure à celle deéchinacoside, et la sélectivité des récepteurs d’œstrogènes ERa et ER[3 n’est pas évidente, tandis que les glycosides d’échinacée ont de faibles différences de sélectivité pour les récepteurs d’œstrogènes ERa et ERI3. Ces différences peuvent être liées aux différents groupes liés à la position R4 du verbascoside et de l’échinacoside. L’œstrogène agit principalement à travers le récepteur des œstrogènes. Il existe deux sous-types principaux de récepteurs d’œstrogènes, ERa et ER [3, les substances à effet d’œstrogène et d’œstrogène se combinent avec le récepteur d’œstrogène pour former un dimère, puis dimérisent Le corps se combine avec l’élément de réponse aux œstrogènes ERE, puis exerce un effet d’œstrogène [2l,. Les phytoestrogènes et les œstrogènes ont des structures et des fonctions similaires. Des études ont montré que les phytoestrogènes peuvent réguler le métabolisme osseux et jouer un rôle extrêmement important dans le maintien de l’équilibre entre la résorption osseuse et la formation osseuse. Il est efficace pour l’ostéoporose chez les patients atteints d’hypofonction sénile. A un certain effet de prévention clinique et de traitement ̈. Par conséquent, il est spéculé que l’effet de Cistanche dans la promotion de la régénération osseuse et l’inhibition de la formation de l’ostéoporose chez les femmes ménopausées est à travers ses phytoestrogènes. Cette expérience montre également que l’échinacoside et le verbascoside peuvent se lier de manière compétitive aux récepteurs des œstrogènes avec l’œstradiol et contrarier la régulation à la hausse de l’œstradiol sur l’activité de la luciférase ERE. Le mécanisme de cette action est connu du resvératrol. L’effet des phytoestrogènes est similaire à celui de J. Il est en outre expliqué que l’échinacoside et le verbascoside exercent des effets œstrogéniques en se liant aux récepteurs d’œstrogènes ERa et ER3. Les études ci-dessus sur l’activité phytoestrogène de Cistanche et le mécanisme de son effet œstrogène indiquent que Cistanche peut retarder la formation de l’ostéoporose postménopausique chez les femmes en améliorant le niveau d’œstrogène dans le corps, ou en traitant le traitement causé par la baisse du niveau d’œstrogène dans le corps. L’ostéoporose met en avant la possibilité et fournit une base théorique pour élargir la portée de l’utilisation médicinale clinique de Cistanche.
Référence
1 Commission de pharmacopée chinoise((国家药典委员)). Pharmacopée de la République populaire de Chine. Beijing: Chemical Industry Press, 2010. Vol 1:126.
2 Li SZ(李时珍).Compendium de Materia Medica. Beijing: People * s Medical Publishing House (人民卫生出版社), 1977.727.
3 Zeng LQ(曾群力),Zheng YF(郑一凡),Lv ZL(吕志良). L’activité immunobiologique et son mécanisme d’action des polysaccharides de cistanches. J Zhejiang Univ,Med Ed (浙江 大学学报,医学版),2002,31:284-287.
