Étude sur les effets d'amélioration de l'extrait de glycosides phényléthanoïdes de Rouchongrong (Cistanche Deserticola) sur le métabolisme lipidique dans le foie des souris ApoE - / - avec un régime riche en graisses basé sur la régulation des expressions ACOX 1 - CPT2

RÉSUMÉ Objectif :Pour explorer leeffets de l'extrait de glycosides phényléthanoïdesdepuisCistanche désertique(PGCD) sur le métabolisme des lipides dans le foie de souris ApoE-/- induit par un régime riche en graisses. Méthodes : 70 souris mâles ApoE-/- nourries avec un régime riche en graisses ont été divisées en 5 groupes, le groupe modèle (MOD), les souris du groupe témoin positif ont reçu de l'atorvastatine [20 mg/(kg·j)] + Ezetimibe [20 mg/(kg ·d)](A + E), des groupes de doses faibles, moyennes et élevées de PGCD ont été administrésPCCD[250, 500, 1 000 mg / (kg·j)] ; 14 autres souris mâles C57BL/6J avec régime achow ont été définies comme groupe témoin normal (CON). Le 12ème week-end, la teneur en TG et les activités de l'ALT et de l'AST dans le sérum et les tissus hépatiques ont été détectées conformément aux instructions opératoires. Le tissu hépatique frais a été homogénéisé et le contenu en acide gras synthase (FAS), en acyl-CoA déshydrogénase à longue chaîne(LCAD) et en glutathion peroxydase (GSH - Px),superoxyde dismutase (SOD)Les activités ont été testées par la méthode ELISA, tandis que les teneurs en malondialdéhyde (MDA) et en peroxyde lipidique (LPO) ont été détectées avec la méthode Kid. Les expressions d'ARNm de l'acyl-coenzyme A oxydase 1 ( ACOX1 ) et de la carnitine palmitoyltransférase 2 (CPT2) ont été détectées par des expériences RT-PCR.

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Résultats:Contrairement au groupe modèle,les trois doses de PGCD ont toutes réduit les niveaux de TGdans le foie et le sérum de manière dose-dépendante, et a réduit les activités de l'ALT et de l'AST dans le sérum. Les trois doses de PGCD ont toutes réduit la teneur en FAS de manière dose-dépendante et ont augmenté de manière significative la teneur en LCAD dans le foie.Promotion du PGCDles activités du GSH - Px et de la SODand ont réduit de manière significative la teneur en MDA et LPO dans le foie. Les expériences RT-PCR ont montré que le PGCD augmentait les niveaux d'ARNm d'ACOX1 et de CPT2 dans les tissus hépatiques.

Conclusion:Le PGCD peut améliorer le métabolisme lipidique et la réponse au stress oxydatif, et réduire les dépôts lipidiques dans les tissus hépatiques en régulant les expressions d'ARNm d'ACOX1 et de CPT2.

Mots clés:Extrait de glycosides phényléthanoïdes de Cistanche deserticola ; ACOX1 ; CPT2 ;métabolisme lipidique;stress oxydatif; ApoE-/-souris

Stéatose hépatique non alcoolique(NAFLD) est l'une des maladies hépatiques les plus répandues au monde, avec une prévalence de près de 30 % dans la population générale. La stéatose hépatique en Chine connaît une croissance annuelle de 0,594 % [ 1]. L'apparition et le développement de la NAFLD sont étroitement liés à l'apport calorique excessif de l'organisme. Un régime riche en graisses entraîne une accumulation excessive de graisse dans le foie et induit une NAFLD[2], et la première étape de sa pathogenèse est le dépôt de triacylglycérol (TG) dans les cellules hépatiques[2] 3). À ce jour, il n’existe aucun médicament thérapeutique spécifique ciblant la pathogenèse de la NAFLD. Trouver des médicaments sûrs et efficaces dotés de mécanismes clairs pour la prévention et le traitement de la NAFLD est devenu une tâche importante pour les chercheurs. Cistanche deserticola YC Ma est une plante parasite du genre Cistanche de la famille des Orobanchaceae. Son composant principal, les glycosides phényléthanoïdes, a pour fonction de renforcer la fonction immunitaire du corps, d'anti-âge, d'anti-rayonnement, d'antioxydant et d'hépatoprotecteur, ainsi que d'autres effets [4-5]. Cette étude vise à mener une étude préliminaire sur le mécanisme deGlycosides phényléthanoïdes de Cistanche deserticola(PGCD) dans l’amélioration du métabolisme lipidique.

1 Matériel expérimental

1.1 Médicaments expérimentaux

Les tiges charnues de Cistanche deserticola (teneur en humidité 8, 5%) ont été achetées auprès de Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; les substances de référence des glycosides phényléthanoïdes (principaux composants verbascoside et échinacéaside) (pureté > 98 %) ont été achetées auprès de Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd. ; Atorvastatine : Pfizer Shanghai ; Ézétimibe : Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Animaux expérimentaux

Souris mâles C57BL/6J et souris ApoE-/- âgées de 6 à 8 semaines, poids corporel (20 ± 2) g, achetées auprès de Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., numéro de licence : SCXK (Su) 2016-0010 , cycle d'éclairage de 12 h/12 ​​h, température (22 ± 1) degrés, humidité 50 % ~ 60 %, prise gratuite de nourriture et d'eau. Avant l’expérience, les souris recevaient un régime alimentaire standard pendant 1 semaine pour s’adapter. Tous les soins et expériences sur les animaux sont conformes aux réglementations du comité d'éthique des animaux expérimentaux de la première université médicale du Shandong (numéro d'éthique : W202107080303).

1.3 Réexpérimentationagents

Aliment riche en graisses : Harlan Teklad ; Kits TG, ALT, AST : Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd. ; Kits FAS, LCAD : Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd. ; Kit GSH-Px : Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd. ; Kits SOD, MDA, LPO, BCA : Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. ; Kit Trizol : Invitrogen, Carlsbad, Californie ; Amorces ACOX1 et CPT2 : conçues par Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 Instruments expérimentaux Hei - Évaporateur rotatif VAP Expert : Allemagne

Heidolph ; Lecteur de microplaques multifonctionnel Varioskan LUX : ThermoFisher ; Lyophilisateur sous vide FD8508 : Ilshin, Corée du Sud ; Homogénéisateur F6/10 : Shanghai Fluoroco ; Chromatographie liquide haute performance Agilent1260, spectrophotomètre UV Cary 3500 : Agilent Technologies Ltd. ; Quant studio5RT - Instrument PCR : Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Masse corporelle et indice hépatique

A la fin de la 12ème semaine, les souris ont été mises à jeun et pesées. Les souris ont été anesthésiées avec du pentobarbital de sodium et sacrifiées. Les foies ont été récoltés pour calculer l'indice hépatique.

2.3.2 Détection de l'indicateur sérique

Prenez le sérum et détectez les activités sériques d'aspartate aminotransférase (AST) et d'alanine aminotransférase (ALT) en séquence selon le fonctionnement du kit ; BCA détermine la teneur en protéines du sérum et détecte la teneur en TG.

2.3.3 Détection de facteurs liés au métabolisme des lipides dans les tissus hépatiques

Dans des conditions de 4 degrés, peser une quantité appropriée de foie frais et l'homogénéiser dans du PBS, centrifuger (rayon de centrifugation 7,5 cm, 3 000 tr/min) l'homogénat pendant 1 min, prélever le surnageant et mesurer la teneur en protéines de tissu hépatique par BCA. Teneur en TG dans les tissus, méthode ELISA pour détecter la teneur en acide gras synthase (FAS) et en acyl-CoA déshydrogénase à longue chaîne (LCAD) dans les tissus hépatiques.

2.3.4 Détection des facteurs oxydatifs liés au tissu hépatique

Dans des conditions de 4 degrés, peser une quantité appropriée de foie frais et l'homogénéiser dans du PBS, centrifuger l'homogénat (rayon centrifuge de 7,5 cm, 3 000 tr/min) pendant 15 min, prélever le surnageant et mesurer la teneur en protéines de tissu hépatique avec BCA. Suivez les réactifs Les instructions de la boîte détectent les activités de superoxyde dismutase (SOD) et de glutathion peroxydase (GSH-Px), et détectent simultanément les niveaux de malondialdéhyde (MDA) et de peroxyde lipidique (LPO).

2. 3. 5 Détection RT-PCR

Expression de l'ARNm d'ACOX1/CPT2 dans le tissu hépatique : prélevez une quantité appropriée de tissu hépatique frais, utilisez un kit Trizol pour extraire l'ARNm total du tissu hépatique, utilisez la transcriptase inverse MuLV pour synthétiser l'ADNc et utilisez l'ADNc comme modèle pour effectuer une fluorescence quantitative en temps réel. Détection PCR (Qpcr). , les conditions de réaction étaient : pré-dénaturation à 95 degrés pendant 2 min ; dénaturation à 95 degrés pendant 10 s, recuit : 60 degrés pendant 30 s, extension à 72 degrés pendant 35 s, 34 cycles, et enfin extension à 72 degrés pendant 5 min, et quantification en temps réel par un analyseur automatique. Expression des ARNm d'ACOX1 et CPT2. Logiciel Rotor-gene Q. 1.7 (Qiagen) a été utilisé pour l'analyse des données et la méthode 2-△△Ct a été utilisée pour compter les niveaux relatifs d'ARNm et de GAPDH. Chaque groupe d'expériences a été réalisé en parallèle > 3 fois. Les séquences d'amorces sont les suivantes : GAPDH, en amont : 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', en aval : 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3' ; ACOX1, en amont : 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' en aval : 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3' ; CPT2, en amont : 5'- TCCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' en aval : TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Méthodes statistiques

Le logiciel statistique SPSS 20.0 a été utilisé pour analyser les données. Les données de mesure ont été exprimées sous la forme (x ± s). Une analyse de variance unidirectionnelle a été utilisée pour la comparaison entre les groupes. P <0,05 était considéré comme une différence statistiquement significative.