Étude sur la fonction neuroendocrinienne immunitaire de Cistanche Deserticola et de ses produits de cuisson à la vapeur de vin de riz dans un modèle de rat induit par les glucocorticoïdes

Contact : Audrey Hu Whatsapp/hp : 0086 13880143964 E-mail :audrey.hu@wecistanche.com

Bonan Liu, Ji Shi, Zhe Li, Chao Zhang, Pengpeng Liu, Wei Yao et Tianzhu Jia

1 École de pharmacie, Université de médecine traditionnelle chinoise du Liaoning, Dalian 116600, Chine

2 Le deuxième hôpital de l'Université médicale de Dalian, Dalian 116600, Chine

Résumé

L'habitation du désertCistanche herbea été enregistrée pour la première fois dans le "Shen Nong Herbal Classic" et est répertoriée comme la meilleure phytothérapie dans cette publication. /e La pharmacopée chinoise enregistre que des morceaux de Cistanche désertique(CD) et vin de riz cuit à la vapeurCistanche désertique(WCD) peuvent être utilisés en clinique comme principaux types de décoctions. Après avoir été cuit à la vapeur avec de l'alcool de riz, les effets rein-yang anti-âge et tonifiants sont renforcés. Dans cette étude, nous avons détecté le contenu chimique de Cistanche Deserticola et de WCD et le mécanisme pharmacologique de la carence vivifiante en rein-yang chez des rats modèles. Objectif. /e but de cette étude était d'examiner les effets de Cistanche Deseticola et WCD sur le système neuroendocrinien-fonction immunitairede déficience rénale-yang chez des rats modèles surdosés en glucocorticoïdes. Matériaux et méthodes. Des rats Sprague Dawley (SD) ont été sélectionnés. /e rats ont reçu une injection sous-cutanée d'une suspension aqueuse de corticostérone pour les rats modèles surdosés en glucocorticoïdes. /e des rats témoins positifs ont été gavés avec des pilules Jinkuishenqi et des doses élevées, moyennes et faiblesCistanche Deserticola/ suspensions WCD (1,646 g/(kg jour), 5,48 g/(kg jour), 2,74 g/(kg jour) et 1,37 g/(kg jour), respectivement); les groupes contrôle blanc (BC) et contrôle modèle (MC) ont reçu le même volume d'eau distillée que ceux du groupe médicament pendant 40 jours consécutifs à une dose de 1 mL/100 g. Après la dernière administration, le sang a été prélevé de l'aorte abdominale et les taux sériques de T, CRH, ACTH, CORT, cortisol, IL-10, IL-6, IL-2, TNF - et IFN-c ont été mesurés. Les indices d'organes du thymus et de la rate ont été calculés. /e expression de Bax, Bcl-2, caspase-3, Fas et FasL dans la glande surrénale a été mesurée par immunohistochimie. /e des changements pathologiques dans le thymus et la glande surrénale ont été observés par coloration HE (×200). Des sous-ensembles de lymphocytes T dans le sang périphérique ont été détectés par cytométrie complémentaire, et l'expression de l'ARNm de CaM dans les tissus de l'hypothalamus et de l'hypophyse a également été mesurée par RT-PCR. Résultats. Par rapport au groupe MC, les groupes Cistanche Deserticola et WCD ont présenté des augmentations d'activité, de l'indice organique du thymus et de la rate, des taux sériques de T, CRH, ACTH, CORT, cortisol, IL-2 et IL -10, le rapport CD4 plus /CD8 plus et l'expression de Bcl-2, caspase-3, Fas, FasL et CaM dans le tissu hypophysaire. /eCistanche Deserticolaet les groupes WCD ont également présenté des réductions des taux d'IL-6, de TNF- et d'IFN-c dans le sérum et de l'expression de l'ARNm de CaM dans l'hypothalamus. Conclusions. Chaque dose de Cistanche Deseticola et de WCD pourrait contrecarrer l'hormone sexuelle dérégulée et les facteurs immunitaires chez les rats modèles surdosés en glucocorticoïdes, améliorant et restaurant l'efficacité des cellules nerveuses hypothalamiques et améliorantfonction immunitaire.

Introduction

Cistanche désertique, appelé « ginseng du désert », est une médecine traditionnelle chinoise utilisée depuis des siècles comme herbe tonique yang pour revigorer les reins et renforcer le yang [1]. Huit espèces et une variante de Cistanches Herba ont été enregistrées en Chine et seules Cistanche deserticola YC Ma et Cistanche tubulosa (Schenk) Wight sont répertoriées dans la pharmacopée chinoise [2]. Des études pharmacologiques ont démontré que Cistanches Herba présentait des propriétés neuroprotectrices [3], immunomodulatrices [4], cardioprotectrices [5], antifatigue [6], anti-inflammatoires [7], hépatoprotectrices [8], antioxydantes [9], antibactériennes [10], laxatives [11], et des effets antitumoraux [12]. Le large spectre des activités biologiques signalées de ce genre a été attribué à la composition phytochimique complexe et variée. Cistanche deserticola contient des glycosides phényléthanoïdes, des iridoïdes, des polysaccharides [13], etc. La teneur en glycosides phényléthanoïdes est la plus élevée dans les matières médicinales d'origine [14]. Le traitement de la matière médicale chinoise (CMM) est une technique pharmaceutique traditionnelle pour répondre aux différentes exigences pour le traitement, la distribution et la fabrication de préparations selon la théorie de la médecine traditionnelle chinoise. Ces produits transformés sont appelés morceaux de décoction, qui sont utilisés dans les cliniques. Les objectifs du traitement sont d'améliorer l'efficacité et/ou de réduire la toxicité des médicaments bruts. La pharmacopée chinoise de 2015 a enregistré que les tranches épaisses de Cistanche (CD) et le Cistanche cuit à la vapeur de vin de riz (WCD) pouvaient être utilisés comme morceaux de décoction en clinique. Notre groupe de recherche a montré que l'effet laxatif était atténué et que les effets anti-âge et revigorants du yang des reins étaient renforcés après la cuisson à la vapeur de Cistanche avec du vin de riz [15].

La fonction de l'axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien-thymus (HPAT) est perturbée dans le syndrome de déficience rénale-yang [16]. Les patients atteints d'insuffisance rénale-yang ont également un dysfonctionnement immunitaire étendu. Le dysfonctionnement de l'axe HPA est étroitement lié à l'immunodéficience. La théorie du réseau neuroendocrinien-immunitaire (NEI) montre que les systèmes immunitaire et neuroendocrinien partagent de nombreux ligands et récepteurs [17], et l'hypothalamus est considéré comme le pivot pour relier le système neuroendocrinien au système immunitaire.

Dans cette étude, nous avons reproduit la déficience rénale-yang chez des rats modèles avec injection de corticostéroïdes exogènes et exploré le mécanisme de la déficience rénale-yang en réponse à différents produits transformés de Cistanche deserticola du point de vue endocrinien-fonction immunitaire.

Matériaux et méthodes

Matériaux et réactifs.

Cistanche désertiquea été collecté à Alashan Neimenggu en 2019.5 et identifié comme les tiges charnues séchées de Cistanche deserticola YC Ma par le professeur Yanjun Zhai (École de pharmacie, Université de médecine traditionnelle chinoise du Liaoning, Chine). Les spécimens de référence ont été conservés au Liaoning Processing Engineering Technology Center.

Les composés standard d'un jugol ont été achetés auprès de Chengdu Pure Chem-Standard Co., Ltd. (Chengdu, Chine); le cistanoside F, l'échinacoside, le cistanoside A et l'iso-actéoside ont été achetés auprès de Must Company (Sichuan Chine); l'actéoside a été acheté auprès de Dalian Meilun Bio. Co., Ltd. (Dalian, Chine). L'acétonitrile et le méthanol de qualité MS ont été achetés chez Merck KGaA (Darmstadt, Allemagne). L'acide formique de qualité HPLC a été acheté chez Merck KGaA (Darmstadt, Allemagne). Le vin de riz a été acheté auprès de Zhejiang Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Zhejiang, Chine).

Corticostérone (CAS : 50-22-6, pureté > 98 %, TCI Shanghai Development Ltd. Co.), pilules chinkuei shin chewan (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd.), rat ACTH, CRH, T, IL{{ 2}}, les kits de détection ELISA IFN-c, TNF-, IL-2 et IL-10 ont été achetés auprès de Nanjing Jian cheng Co., Ltd. /e rat cortisol ELISA kit a été fourni par BOSK Co ., anticorps CD4 de rat, anticorps CD8a (nos. 561833 et 559976), lysat RBC (Solarbio, R1010), solution tampon PBS (Solarbio, P1020-500), TRIzol (MAN0001271), CaM et -actine en amont et les amorces en aval ont été fournies par le kit de transcription inverse Guangzhou Invitrogen Co. (n° RR037A) et le kit de synthèse d'ADNc (n° 10000068167) ont été fournis par Bole Life Medicine Products (Shanghai) Co., Ltd. Chloroforme, isopropanol, 75 % d'éthanol, et la solution d'uréthane étaient toutes analytiquement pures et produites par Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. L'eau ultrapure a été produite par le système Milli-Q (18,2 MΩ, Millipore, MA, USA).

Instruments expérimentaux

Un marqueur enzymatique (Thermo, modèle 3530911931), un laveur de plaques automatique (modèle HBS- 4009), un compteur de force push-pull à affichage numérique (modèle VICTOR- 50N), une centrifugeuse de congélation à grande vitesse (modèle Sigma 3k15 ), ultra microspectrophotomètre (modèle B-50Q), amplificateur de gène (modèle L96G), PCR quantitative de fluorescence en temps réel (modèle StepOne), cytomètre en flux (modèle AC66051710132), microtome à paraffine (modèle Laika), microscope (Olympus , modèle BS-53) et un instrument à eau pure (modèle F7JA36507) ont été utilisés.

Préparation d'échantillons pour UPLC-Q-TOF-MS et expériences pharmacologiques.

WCD a été traité à partir du même lot de Cistanche deserticola dans notre laboratoire. Pour la préparation de WCD, des morceaux de CD secs (5 mm d'épaisseur) (100 g) ont été infusés avec du vin de riz (30 ml), cuits à la vapeur à haute pression (1,25 kPa) pendant 4 h, puis séchés à 55 degrés.

Les poudres grossières de CD et de WCD ont été trempées dans 10 fois de l'éthanol à 95 % pendant 0,5 h, extraites au reflux 3 fois à chaque fois pendant 1 h et filtrées, et les filtrats de 3 fois ont été combinés. /e éthanol a été récupéré sous pression réduite, et l'extrait a été obtenu pour l'administration. /e extrait (1 ml) a été ajouté à 50 pour cent de méthanol, portant le volume total à 20 ml, et stocké à 4 degrés pour l'analyse du contenu.

Conditions UPLC-QqQ-MS pour l'analyse des extraits CD et WCD

Le système UPLC-MS/MS avec le logiciel MassLynx 4.1 Analyst a été utilisé pour effectuer l'acquisition et le traitement des données. /e colonne analytique était une Acquity UPLC BEH C18 (1{{10}}0 mm × 2,1 mm, 1,7 μm) à une température de 40 degré C. /e la phase mobile était constituée de 0, solution aqueuse d'acide formique à 1 % (A) et d'acétonitrile contenant 0,1 % d'acide formique (B). /e gradient d'élution était de 0.00–1.00 min avec 3 % de B, 1.01–2.00 min avec 3 % -11.5 % de B, 2.01–3.{{ 29}} min avec 12 % B, 3,01–4.00 min avec 15 % B, 4,01–5.00 min avec 20 % B, 5,01–6.00 min avec 22 % B, 6,01–8.00 min avec 25 % B et 8,01–9.00 min avec 10 % B. /e le débit était de 0,3 ml/min et le volume d'injection était 1,0 μL.

Le spectromètre de masse triple quadruple Waters (Xevo TQD, Waters Corp., Milford, MA, USA) équipé d'une source d'ionisation par électrospray (ESI) a été utilisé en mode ions négatifs. /e gaz de désolvatation était de l'azote avec un débit de 500 L/h à une température de 250 degrés. Tous les composés détectés ont été mesurés en mode de surveillance de réactions multiples (MRM) ; Le tableau 1 montre les paramètres d'énergie, et le tableau 2 montre les courbes d'étalonnage pour les composants analysés.

Préparation des substances de référence

Tubuloside A (3,02 mg), échinacoside (3,00 mg), 2′-acétylactéoside (2,34 mg), actéoside (2,45 mg), isoactéoside (0,61 mg), cis tanoside F (2,14 mg), du salidroside (3,39 mg), de l'acide géniposidique (2,84 mg), de l'ajugol (1,58 mg) et du catalpol (2,39 mg) ont été dissous dans du méthanol pour préparer une solution mère. /e solution mère a été diluée avec du méthanol pour obtenir les concentrations appropriées pour les solutions étalons de travail. Toutes les solutions préparées ont été stockées à 4 degrés avant utilisation.

Préparation et regroupement de modèles animaux

Des rats mâles SD (180–220 g) ont été achetés auprès de Liaoning Chang sheng Biotechnological Co., numéro de permis animal : SCXK (Liao) 2015–0001. Tous les rats ont été maintenus avec un accès libre à la nourriture et à l'eau à 25 degrés et une humidité relative de 30 à 50 %. Les animaux ont été hébergés pendant 7 jours avant les expériences.

Cent rats ont été divisés au hasard en 1{{30}} groupes : groupe témoin blanc (BC), groupe témoin modèle (MC), groupe témoin positif (PC), groupe témoin vin de riz (WC), CD groupe à dose élevée (CD-HD), groupe à dose moyenne CD (CD-MD), groupe à faible dose CD (CD-LD), groupe à dose élevée WCD (WCD-HD), groupe à dose moyenne WCD (WCD-MD ) et le groupe WCD à faible dose (WCD-LD). /e les doses de CD-HD/WCD-HD, CD-MD/ WCD-MD et CD-LD/WCD-LD étaient de 5,48 g/(kg ∙ j), 2,74 g/ (kg ∙ j) et 1,37 g /(kg ∙ d), respectivement. /e dose pour le groupe PC était de 1,646 g/(kg ∙ j) et pour le groupe WC, 1 mL/100 g pendant 40 jours. /e 6e jour après l'administration, les rats ont reçu une injection sous-cutanée de la suspension aqueuse de corticostérone (corticostérone plus 0.1 % de diméthylsulfoxyde plus 0.1 % de Tween-80 plus 0,9 % de sodium chlorure) sauf pour le groupe BC [18]. /e la concentration de corticostérone était de 5 g/L et la dose était de 0,1 mL/100 g. /e les rats du groupe BC ont reçu une solution saline normale plus 0,1 % de diméthylsulfoxyde plus 0,1 % de Tween - 80 plus 0,9 % de chlorure de sodium par injection à la même dose.

Détermination des fonctions d'axe HPA

Test de poids, de température et de puissance de maintien :Un test de poids a été effectué tous les 3 jours et la température a été prise tous les 6 jours. pendant l'expérience. Au 39ème jour, la force maximale du membre postérieur a été mesurée par un compteur de préhension. /e rats ont été placés sur des plates-formes lisses, leur membre postérieur saisissant le poteau. Les rats saisiront instinctivement n'importe quel objet pour éviter de reculer lorsque la queue est tirée jusqu'à ce que la force de traction dépasse la prise. Lorsque le rat perdait sa prise, le préamplificateur pouvait enregistrer automatiquement la force de préhension maximale.

Détermination du taux de T, CRH, ACTH, CORT et Cortisol dans le sérum : Une heure après la dernière administration, les rats ont été anesthésiés par injection intrapéritonéale d'une solution d'uréthane (20 g/100 mL). /en, les échantillons de sang ont été prélevés, centrifugés à 3500 r pendant 15 min pour obtenir le sérum, et conservés à -20 degré . Les concentrations de T, CRH, ACTH, CORT et cortisol ont été mesurées avec des kits ELISA pour rats conformément aux instructions du fabricant.

Observations au microscope : La structure morphologique du tissu de la glande surrénale a été observée par coloration HE. Le tissu surrénalien a été fixé dans du paraformaldéhyde à 10 %, déshydraté dans de l'éthanol, rendu transparent par une solution de xylène, incorporé par des méthodes conventionnelles, coupé en tranches de 4 μm d'épaisseur, déparaffiné avec une solution de xylène, hydraté avec le gradient d'éthanol, puis coloré avec de l'hématoxyline et de l'éosine. solution de coloration. Après avoir été rendue transparente avec du xylène, la plaque a été scellée avec de la gomme neutre et observée au microscope.

Coloration immunohistochimique de l'expression des protéines Bax, Bcl-2, Caspase-3, Fas et FasL dans la glande surrénale

Des sections de surrénales de rat fixées au formol et incluses en paraffine ont été déparaffinées et réhydratées après avoir été coupées à une épaisseur de 4 μm. Pour le blocage de l'activité peroxydase endogène, les coupes ont été préincubées dans un bloc de peroxyde d'hydrogène pendant 10 min. Les coupes ont été plongées dans du citrate 0.01 M (pH 6,0) et chauffées jusqu'à ébullition. /e processus a été répété après 5 à 10 min. Après refroidissement, les coupes ont été lavées avec du PBS (pH 7,2–7,6) 1 à 2 fois, laissées à température ambiante pendant environ 5 min et lavées avec du PBS (pH 7,2–7,6) 2–3 fois. /e Une solution de blocage de BSA à 5 % a été ajoutée à température ambiante et l'excès de liquide sur la section a été secoué 20 minutes plus tard. Des anticorps primaires dilués spécifiques de Fas/FasL, Bcl-2/Bax et caspase-3 (dilué au 1/100 avec du PBS) ont été ajoutés et incubés à 37 degrés pendant 1 h ou 4 degrés pendant la nuit. / e sections ont été lavées 2 à 3 fois avec du PBS (pH 7, 2 à 7, 6). /en, de l'IgG anti-souris de chèvre biotinylée a été ajoutée et les coupes ont été séchées à 20–37 degrés pendant 20 min et lavées avec du PBS (pH 7,2–7,6) 4 fois pendant 5 min. Après un lavage soigneux dans du PBS, les coupes ont été incubées avec un mélange de réactifs A et B pendant 30 min, incubées avec du PBS pendant 45 min, et enfin développées avec du substrat DAB (DAKO) pendant 30 min avant d'être légèrement contre-colorées avec de l'hématoxyline, déshydratées, et monté.

Détermination des fonctions immunitaires

Calcul de l'indice d'organe immunitaire :Une heure après la dernière administration, les rats ont été anesthésiés par injection intrapéritonéale d'une solution d'uréthane (20 g/100 mL), puis la rate et le thymus ont été prélevés et pesés immédiatement dans une hotte stérile. Les coefficients de poids de la rate ou du thymus (pourcentage) poids de la rate ou du thymus (mg)/poids corporel (g).

Résultats expérimentaux

Analyse UPLC-QqQ-MS :Pour obtenir la meilleure séparation, la forme du pic et un temps d'analyse court, les conditions chromatographiques, y compris la colonne, la phase mobile et le programme de gradient, ont été étudiées dans notre expérience préliminaire. /e chromatogrammes typiques avec le mode MRM sont présentés dans la figure.D'après le tableau 4, nous avons pu voir que la teneur en glycosides de phényléthanol dans le WCD a augmenté par rapport à celle du CD, en particulier pour l'échinacoside et l'actéoside, tandis que la teneur en iridoïdes a diminué dans le WCD.

Régulation de la fonction de l'axe HPA : Les rats du groupe MC et des groupes expérimentaux ont présenté progressivement des symptômes de déficience rénale-yang après avoir reçu de la corticostérone. Les symptômes, tels que la perte de poids, l'hypothermie, la perte de brillance des cheveux, l'affaissement de l'esprit, le retard de réponse, la diminution significative de la consommation d'eau et de l'activité, se sont grandement améliorés dans les groupes CD et WCD. La figure 2(a) montre les changements de poids. Le poids de chacun des groupes de médicaments a augmenté, en particulier dans les groupes CD-HD et WCD-HD. Le gain de poids dans le groupe MC était le plus faible. La figure 2 (b) montre les changements de température, qui étaient les plus bas dans le groupe MC, et la température a augmenté dans les groupes WCD-HD, WCD-MD et WCD-LD.

Niveaux de T, CRH, ACTH, CORT et Cortisol : La figure 3 montre que par rapport à ceux du groupe BC, le niveau de T, CRH, ACTH et CORT dans le sérum de rat a diminué (P <0. 01)="" et="" le="" niveau="" de="" cortisol="" a="" diminué="" (p="">< 0.05)="" dans="" le="" groupe="" mc.="" par="" rapport="" à="" ceux="" du="" groupe="" mc,="" le="" niveau="" de="" t="" dans="" les="" groupes="" wcd-hd="" et="" wcd-md="" a="" augmenté="" (p="">< 0.01),="" le="" niveau="" de="" crh="" dans="" le="" wcd-ld,="" les="" groupes="" wcd-md="" et="" wc="" se="" sont="" améliorés="" (p="">< 0.01),="" le="" contenu="" d'acth="" a="" augmenté="" dans="" les="" groupes="" cd-hd,="" wcd-md="" et="" wcd-hd="" (p="">< 0,01),="" le="" niveau="" de="" cort="" a="" été="" amélioré="" dans="" les="" groupes="" cd-md,="" wcd-md="" et="" wcd-hd="" (p="">< 0,01)="" et="" amélioré="" dans="" les="" groupes="" cd="" hd="" et="" wcd-ld="" (p="">< 0,05),="" et="" le="" niveau="" de="" cortisol="" a="" augmenté="" dans="" chacun="" des="" groupes="" de="">

Résultats de l'observation au microscope : Le tissu de la glande surrénale peut être divisé en couche corticale et en couche médullaire. Les couches corticales comprennent des couches globulaires, groupées et réticulaires. Les cellules contiennent plus de lipides et la couche médullaire se compose principalement de cellules de phéochromocytome et d'une petite quantité de tissu fibreux. Comme le montre la figure 4, nous avons constaté que tout était normal dans le groupe BC, tandis que dans le groupe MC, le cortex surrénalien présentait une hyperplasie évidente, une atrophie cellulaire et une densité croissante. La bande bulbeuse s'est épaissie et la zone fasciculaire translucide, la zone réticulaire étroite et les cellules plus petites ont montré une coloration inégale et une congestion capillaire. Dans le groupe PC, les limites corticales et médullaires étaient visibles. Les cellules des bandes globulaires et groupées étaient disposées uniformément et la structure morphologique avait été restaurée. La même meilleure restauration a été observée dans les groupes WCD, et les effets dans le groupe WCD-MD étaient meilleurs que ceux des groupes WCD-HD et WCD-LD. La morphologie de la glande surrénale dans les groupes CD n'était pas aussi bonne que celle des groupes WCD.

Immunohistochimie : L'apoptose neuronale est contrôlée par de nombreux gènes apoptotiques et anti-apoptotique, principalement le gène promoteur de l'apoptose Bax et les gènes anti-apoptotique de la famille des gènes Bcl-2. Bcl-2 est localisé dans les organites réactifs producteurs d'oxygène tels que les mitochondries, le réticulum endoplasmique et les membranes nucléaires. Bcl-2 a peu d'impact sur les radicaux libres d'oxygène mais peut prévenir les dommages oxydatifs dans les cellules. Bax transporte du cytoplasme à la membrane mitochondriale, modifie la structure de la membrane mitochondriale et favorise la libération de cytochrome c et l'induction de l'apoptose.

Il y avait une expression dans le cytoplasme surrénalien des protéines Bax et Bcl{{0}}. /e la coloration a montré toutes les particules jaunes. Par rapport à celle du groupe BC, la densité optique moyenne de la protéine Bax dans le groupe MC a augmenté de manière significative (P <0.01). par="" rapport="" à="" celle="" du="" groupe="" mc,="" la="" densité="" optique="" moyenne="" dans="" les="" groupes="" cd-ld="" et="" wcd-ld="" a="" diminué="" de="" manière="" significative="" (p="">< 0,01)="" (figure="" 5="">Les résultats ont démontré que CD et WCD pouvaient induire l'apoptose dans les cellules inflammatoires et réduire les dommages surrénaliens en favorisant l'expression de la protéine FasL et en se liant à la protéine Fas, en activant la protéine caspase-3 et en déclenchant une cascade de caspases. L'effet du groupe WCD-HD était le meilleur.

Détermination de la fonction immunitaire

Index des organes immunitaires

Comparativement à ceux du groupe BC, le coefficient thymique et l'indice splénique du groupe MC ont diminué significativement (P < {{0}}.01).="" comparé="" au="" groupe="" mc,="" le="" groupe="" wcd-md="" avait="" la="" plus="" grande="" différence="" (p="">< 0,05).="" coefficient="" de="" thymus="" était="" presque="" revenu="" au="" niveau="" normal.="" pour="" l'index="" de="" la="" rate,="" les="" groupes="" wcd="" md,="" wcd-ld="" et="" cd-md="" ont="" montré="" des="" différences="" significatives="" par="" rapport="" à="" celui="" du="" groupe="" mc="" (p="">< 0,01)="" (voir="" figure="" 6).="" par="" conséquent,="" le="" traitement="" wcd="" et="" cd="" pourrait="" protéger="" les="" organes="" immunitaires="" et="" les="" effets="" du="" wcd="" étaient="">

Détection de sous-ensembles de lymphocytes T dans le sang périphérique

Le pourcentage de cellules CD4 plus dans le quadrant supérieur gauche et de cellules CD8 plus dans le quadrant inférieur droit du BC et de chaque groupe médicamenteux était supérieur à celui du groupe MC. Comparé à celui du groupe BC, le rapport CD4 plus /CD8 plus a diminué significativement dans le groupe MC (P < 0.01).="" par="" rapport="" à="" celui="" du="" groupe="" mc,="" le="" rapport="" cd4="" plus="" d8="" plus="" a="" augmenté="" significativement="" dans="" le="" groupe="" pc,="" le="" groupe="" wcd="" et="" le="" groupe="" cd-hd="" (p="">< 0,01)="" (figure="" 7).="" détermination="" du="" niveau="" d'il{="" {12}},="" il-6,="" il-2,="" tnf-="" et="" ifn-c="" dans="" le="">

La figure 8 montre que par rapport à celui du groupe BC, le niveau d'IL-6, de TNF- et d'IFN-c a augmenté de manière significative (P <0.01). niveau="" de="" il-10="" et="" il-2="" a="" diminué="" dans="" le="" groupe="" mc.="" comparé="" à="" celui="" du="" groupe="" mc,="" le="" niveau="" d'il-6,="" de="" tnf-="" et="" d'ifn-c="" a="" diminué="" et="" l'il-10="" et="" l'il-2="" ont="" augmenté="" dans="" le="" sérum="" dans="" chacun="" des="" groupes="" de="" médicaments.="" l'effet="" de="" wcd="" était="" meilleur="" que="" l'effet="" de="" cd,="" en="" particulier="" dans="" le="" groupe="" wcd-md,="" dans="" lequel="" l'effet="" était="" proche="" de="" celui="" du="" groupe="">

Résultats de l'expérience d'observation au microscope des tissus du thymus

La figure 9 montre que dans le groupe BC, un grand nombre de lymphocytes étaient présents. Les lymphocytes et les réticulocytes étaient disposés de manière lâche au centre avec des thymocytes ronds ou ovales dispersés. Il n'y avait pas de nécrose, pas d'infiltration de cellules inflammatoires et pas de changements anormaux.

Le groupe MC a montré une grande quantité de tissu de nécrose lymphoïde, avec une disposition désordonnée des lymphocytes et des réticulocytes au centre. Les thymocytes ronds ou ovales ont disparu, une dégénérescence cellulaire massive ou une nécrose était évidente et il y avait une infiltration cellulaire inflammatoire avec des changements pathologiques anormaux.

Dans les groupes CD, les caractéristiques morphologiques des lymphocytes étaient revenues à la normale, et la disposition des lymphocytes centraux et des réticulocytes était presque normale. Les thymocytes ronds ou ovales avaient récupéré, mais il restait un petit nombre de lymphocytes dégénératifs ou nécrotiques et de cellules inflammatoires infiltrantes.

Dans les groupes WCD et le groupe PC, les caractéristiques morphologiques des lymphocytes étaient mieux réparées. /e lymphocytes et réticulocytes au centre étaient bien alignés, les thymocytes ronds ou ovales étaient presque normaux, mais il subsistait un petit nombre de lymphocytes infiltrants et dégénératifs.

Expression du gène de la protéine CaM

La valeur QR (ARNm CaM/ARNm -actine) a été considérée pour examiner l'expression de l'ARNm CaM. Le QR du groupe BC était de 1. L'expression de l'ARNm CaM dans l'hypothalamus dans le groupe MC a augmenté de manière significative (P <0.01), tandis="" que="" la="" valeur="" a="" diminué="" dans="" le="" wcd-hd,="" groupes="" wcd-md,="" wcd="" ld="" et="" cd-hd="" (p="">< {{10}}.05)="" (figure="" 10).="" l'expression="" de="" l'arnm="" cam="" dans="" l'hypophyse="" du="" groupe="" mc="" était="" inférieure="" à="" celle="" du="" groupe="" bc="" (p="">< 0,01).="" l'expression="" de="" dans="" les="" groupes="" wcd-hd,="" wcd-md,="" wcd-ld,="" cd-hd="" et="" cd-ld="" a="" augmenté="" (p="">< 0,05)="" et="" l'effet="" dans="" les="" groupes="" wcd="" était="" meilleur="" que="" l'effet="" dans="" les="" groupes="">

Discussion

La pharmacopée chinoise [2] rapporte que le CD et le WCD peuvent être utilisés en clinique comme principaux types de pièces de décoction. Après avoir été cuit à la vapeur avec de l'alcool de riz, les effets rein-yang anti-âge et tonifiants ont été renforcés. Grâce à UPLC-QqQ-MS, nous avons détecté les changements quantitatifs dans la base du matériau chimique au cours du processus de cuisson à la vapeur du vin de riz. Les glycosides iridoïdes étaient instables et la teneur de ces glycosides a diminué, devenant même indétectable. La teneur en glycosides de phényléthanol a également changé, ce qui pourrait induire des modifications de la pharmacodynamique et de l'effet clinique.

Le modèle classique de déficience rénale-yang a été reproduit par injection sous-cutanée de corticostérone [19]. Un surdosage de corticostérone pourrait inhiber le secret de la CRH dans l'hypothalamus. Pendant ce temps, le secret de l'ACTH a également été inhibé. /e niveau d'hormone du cortex surrénalien a diminué, et ainsi, la fonction de l'axe HPA a été réduite. L'hypofonctionnement de l'axe HPA est une caractéristique commune du déficit rein-yang [20]. Ensuite, les rats présentent des phénomènes de "déplétion", et les symptômes sont en accord avec ceux de la déficience rénale-yang en clinique.

Dans le groupe MC, le niveau de CRH, ACTH, T et CORT dans le sérum de rat a diminué de manière significative (P <0.01). après="" avoir="" été="" traité="" par="" cd="" et="" wcd,="" le="" contenu="" de="" crh,="" acth,="" t,="" cort="" et="" cortisol="" a="" tous="" augmenté="" dans="" une="" certaine="" mesure,="" et="" l'effet="" de="" wcd-md="" était="" le="" meilleur,="" presque="" égal="" à="" celui="" du="" groupe="" pc.="" ces="" résultats="" ont="" indiqué="" que="" l'équilibre="" hormonal="" relatif="" dans="" l'axe="" hpa="" avait="" été="" détruit="" dans="" le="" groupe="" mc,="" cd="" et="" wcd="" pourraient="" améliorer="" la="" récupération="" fonctionnelle="" des="" niveaux="" anormaux="" d'hormones="" de="" l'axe="" surrénalien,="" mais="" l'effet="" de="" wcd="" était="">

La modulation de la proportion de membres de la famille Bcl{{0}} est l'un des principaux mécanismes par lesquels Fas/FasL intervient dans la voie des récepteurs de la mort, et la famille Bcl-2 régule la voie mitochondriale [21]. Le facteur inhibiteur de l'apoptose Bcl-2 et les facteurs induisant l'apoptose, comme Bax, appartiennent tous à la famille Bcl-2 [22]. L'apoptose cellulaire peut être déterminée par le rapport relatif des facteurs inhibant l'apoptose et des facteurs induisant l'apoptose [23]. Les mitochondries avaient la fonction de points de contrôle centraux pour de nombreuses formes d'apoptose [24]. La présente étude a montré que les CD-MD et les WCD pouvaient déduire l'expression de Bax et augmenter Bcl-2 pour améliorer le déficit rein-yang. Fas est le principal récepteur de mort qui induit l'apoptose par ligation avec le ligand Fas (FasL) [25]. L'expression de Fas et FasL dans le groupe MC a augmenté, tandis que cette expression a augmenté de manière significative dans le groupe WCD-MD (P <0.01) par="" rapport="" au="" groupe="" mc.="" les="" systèmes="" fas/fasl="" et="" bax/bcl-2="" transduisent="" les="" signaux="" apoptotiques="" vers="" la="" famille="" des="" caspases="" [26].="" la="" caspase-3="" est="" l'une="" des="" protéinases="" essentielles="" qui="" initient="" l'apoptose="" cellulaire.="" l'activation="" de="" la="" caspase-3="" indique="" que="" l'apoptose="" entre="" dans="" une="" phase="" irréversible="" [27].="" l'expression="" de="" la="" caspase-3="" dans="" le="" groupe="" mc="" a="" augmenté="" et="" augmenté="" de="" manière="" significative="" dans="" les="" groupes="" wcd-hd="" et="" wcd-md="" (p=""><>

Déficit defonction immunitaireest l'une des manifestations importantes du déficit rein-yang [28]. Dans cette étude, nous avons constaté que l'indice de la rate et du thymus du groupe WCD-MD s'est rétabli de manière significative (P < 0.01,="" p="">< 0.{{3{="" {32}}}}5).="" réponse="" immunitaire="" du="" système="" immunitaire="" est="" régulée="" principalement="" par="" les="" sous-groupes="" [29].="" l'il-2="" est="" le="" facteur="" de="" croissance="" des="" lymphocytes="" t,="" sécrété="" par="" les="" lymphocytes="" t="" et="" les="" macrophages,="" participe="" à="" la="" régulation="" inflammatoire,="" régule="" l'immunité="" et="" augmente="" la="" résistance="" aux="" infections="" [30].="" niveau="" d'il-2="" dans="" le="" groupe="" mc="" a="" diminué="" (p="">< 0,01), et="" après="" traitement="" avec="" cd="" et="" wcd,="" le="" niveau="" d'il-2="" a="" récupéré.="" il-6="" et="" tnf-="" sont="" des="" cytokines="" pro-inflammatoires.="" des="" niveaux="" accrus="" de="" cytokines="" il-6="" et="" tnf="" provoquent="" des="" déséquilibres="" des="" cytokines="" et="" exacerbent="" l'inflammation.="" les="" niveaux="" d'il-6="" et="" de="" tnf-="" ont="" augmenté="" dans="" le="" groupe="" mc,="" tandis="" qu'après="" le="" traitement,="" les="" niveaux="" d'il-6="" et="" de="" tnf-="" ont="" diminué.="" les="" cellules="" t="" sont="" divisées="" en="" cellules="" cd4="" et="" cellules="" cd8,="" et="" le="" rapport="" cd4="" plus="" cd8="" plus="" peut="" être="" utilisé="" comme="" un="" indice="" important="" de="" la="" régulation="" immunitaire="" [31].="" les="" cd4="" plus/cd8="" plus="" dans="" le="" groupe="" mc="" ont="" évidemment="" diminué="" (p="">< 0,01),="" tandis="" que="" dans="" les="" groupes="" wcd="" et="" cd="" hd="" ont="" augmenté="" (p=""><>

L'axe HPA est le système de régulation le plus important car il régule la sécrétion de glucocorticoïdes et le système endocrinien pour maintenir la fonction sécrétoire du cortex surrénalien [32]. La surexpression de l'ARNm de CaM dans le tissu de l'hypothalamus était liée à une déficience du yang du rein. CD et WCD pourraient bloquer les canaux calciques, inhiber l'expression de l'ARNm CaM dans l'hypothalamus et diminuer l'afflux de calcium, diminuant ainsi l'activité du complexe Ca2 plus ·CaM.

La formation d'une déficience rénale-yang a un processus de développement de maladie chronique. Le rein n'est plus un concept purement anatomique, et c'est un terme général pour l'immunité neuroendocrinienne et le système génito-urinaire. Le réseau neuroendocrinien-immunitaire (NEI) est un important système de régulation intégré [33]. Le CD et le WCD peuvent réguler la fonction de l'axe HPAT et améliorer la récupération du déficit rein-yang. Ce résultat fournit la base expérimentale pour la prévention clinique et le traitement de l'insuffisance rénale-yang.

Références

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