Étude sur les effets thérapeutiques et les mécanismes des monomères de médecine traditionnelle chinoise sur un modèle de rat d'hypogonadisme tardif

 

Abstrait

Objectif
Évaluer les effets thérapeutiques et les mécanismes de trois monomères de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) :icariine, verbascoside, etginsénoside Rg1-surhypogonadisme tardif (LOH)dans un modèle de rat, et d'explorer leur potentiel en tant queinterventions naturelles pour le déclin de la testostérone lié à l'âgechez les hommes d'âge moyen.

Méthodes
Un modèle d'hypogonadisme à apparition tardive (LOH) a été établi chez des hommes âgés.Rats Sprague-Dawleypar injection intrapéritonéale decyclophosphamide, simulant une carence en androgènes. Trois monomères TCM-icariine, verbascoside, etginsénoside Rg1-ont été administrés par voie orale pendant 60 jours.

A la fin du traitement, le poids corporel et le poids des organes reproducteurs (testicules, épididyme, vésicules séminales, etc.) ont été mesurés.Modifications histopathologiquesdans le tissu testiculaire ont été évalués à l'aideColoration à l'hématoxyline-éosine (H&E). Niveaux sériques deFSH, LH, ettestostéroneont été testés viaELISA. L'expression derécepteur aux androgènes (AR)la protéine et l'ARNm ont été évalués en utilisantWestern blotetPCR quantitative en temps réel (qRT-PCR).

 

 

 

Résultats

Ginsénoside Rg1a montré l’amélioration la plus significative depoids corporeletpoids des organes reproducteurs(P < 0,01).

Icarina considérablement augmenté le poids dutesticules, épididyme, etvésicules séminales(P < 0,01).

Verbascosidepoids des vésicules séminales modérément amélioré (P < 0,05).

Les trois monomères TCM sont efficacesdégénérescence testiculaire inverséechez les rats LOH, restaurant la structure des tubules séminifères et augmentant le nombre decellules spermatogènesetsperme mature.

Tous les groupes de monomères ont démontré la capacité detaux sériques inférieurs de FSH et de LHalors queaugmenter la testostérone sérique. Legroupe icariineont montré les améliorations endocriniennes les plus significatives (P <0,01).

Niveaux d'expression derécepteur aux androgènes (AR)les protéines et l'ARNm étaient significativement régulés positivement dans tous les groupes traités. L'effet deicariineétaitplus prononcé que le propionate de testostérone, indiquant unfort effet régulateur sur la signalisation AR.

 

Conclusion

Cette étude suggère queginsénoside Rg1est le plus efficace pour améliorerpoids du corps et des organeschez les rats LOH, tandis queicariinemontre l’effet le plus fort dansstimuler la production de testostéroneetaméliorer l'expression de la réalité augmentée. Les trois monomères-icariine, verbascoside, etginsénoside Rg1-démontréeffets protecteurs contre la dégénérescence testiculaireetsoutenir la fonction endocrinienne reproductive masculine, proposant des alternatives naturelles prometteuses pour la gestion deshypogonadisme lié à l'âge.

 

Mots-clés

Hypogonadisme d'apparition tardive (LOH) ; Icarin; Verbascoside; Ginsénoside Rg1; Médecine traditionnelle chinoise ; Booster naturel de testostérone ; Syndrome masculin vieillissant ; Expression des récepteurs androgènes ; Thérapie à base de plantes pour la santé masculine

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Arrière-plan

Hypogonadisme tardif (LOH)chez les hommes d'âge moyen et âgés est étroitement associée àbaisse des niveaux d'androgènes liée à l'âge, en particulier la testostérone. Une étude épidémiologique basée sur la population menée en 2021 dans six provinces représentatives de Chine, impliquant6 296 hommes âgés de 40 à 79 ans, a révélé les taux de prévalence suivants de LOH :

3.2%chez les hommes dans la cinquantaine

11.2%dans la soixantaine

24.0%dans les 70 ans [1]

LOH est caractérisé partestostérone sérique réduiteavec une constellation desymptômes de carence en androgènestel que:

Faible libido

Dysfonction érectile

Dépression et irritabilité

Déclin cognitif et perte de mémoire

Ces symptômes peuventnuire considérablement au bien-être physique et mental, ainsi quequalité de vie [2–3].

Actuellement,thérapie de remplacement de la testostérone (TRT)est le traitement principal de la LOH et peut atténuer temporairement les symptômes. Cependant, des inquiétudes concernantrisque cardiovasculaire, santé de la prostate, etsécurité à long termerestent [4]. Il existe donc un intérêt croissant pour l’explorationdes alternatives naturelles et plus sûres, surtout deMédecine Traditionnelle Chinoise (MTC).

Cette étude vise à évaluer laeffets et mécanismes thérapeutiquesde trois monomères TCM-icariine, verbascoside, etginsénoside Rg1-en utilisant unmodèle de rat de LOH.

 

1. Matériels et méthodes

1.1 Animaux expérimentaux

SoixanteRats Sprague-Dawley (SD) mâles de 15 mois(700 à 800 g) ont été obtenus en janvier 2022 auprès du Centre expérimental sur les animaux de l'Université chinoise des Trois Gorges. Numéros de licence :

Certificat animal : non. 42010200007997

Licence de production : SCXK (E) 2022-0012

Les rats ont été hébergés dans un environnement contrôlé (température : 19 à 23 degrés, humidité relative : 55 à 65 %), avec un cycle lumière-obscurité naturelle et un libre accès à la nourriture et à l'eau. Après1 semaine d'acclimatation, les expériences ont commencé.

1.2 Réactifs et instruments

Cyclophosphamide(Nankin Jiancheng)

Icarin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsénoside Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhun Biotechnologie)

Anticorps AR(Santa Cruz, États-Unis)

-anticorps d'actine(Sigma, États-Unis)

Kits de coloration H&E(Shanghai Yiji industriel)

Kits ELISA pour sérum FSH, LH, testostérone(Shanghai Meilian)

Réactifs qRT-PCR (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotechnologie)

Instruments: Lecteur de thermomicroplaques, microscope optique Olympus, système d'imagerie LI-COR Odyssey, machine ABI qRT-PCR

 

1.3 Regroupement d’animaux et induction du modèle LOH

Les rats ont été assignés au hasard à6 groupes (n=10 par groupe):

Groupe témoin:

Injection intrapéritonéale (ip) de solution saline à 0,9 % pendant 5 jours

Solution saline orale (1 mL/100 g) pendant 60 jours

Groupe modèle:

ip cyclophosphamide 20 mg/kg/jour pendant 5 jours

Suivi d'une solution saline orale pendant 60 jours

Propionate de testostérone (témoin positif):

ip cyclophosphamide (identique à ci-dessus)

Injection sous-cutanée de propionate de testostérone 5 mg/kg/jour pendant 7 jours

Groupe Icarin:

ip cyclophosphamide (idem)

Icariine orale 200 mg/kg/jour pendant 60 jours

Groupe Verbascoside:

ip cyclophosphamide (idem)

Verascoside oral 200 mg/kg/jour pendant 60 jours

Groupe Ginsénoside Rg1:

ip cyclophosphamide (idem)

Ginsénoside oral Rg1 200 mg/kg/jour pendant 60 jours

Tous les traitements ont été administrés entre8h00-11h30. Des évaluations ont été effectuées24 heures après la dernière dose.

 

1.4 Poids corporel et indice des organes reproducteurs

Après pesée, les rats ont été euthanasiés par luxation cervicale. Letesticules, épididyme et vésicules séminalesont été disséqués et pesés.

Untesticule de chaque rata été réparé dans4% de paraformaldéhydependant 72 heures, déshydraté avec de l'alcool calibré, inclus en paraffine, sectionné (5 μm) et coloré avecHématoxyline-éosine (H&E). Des changements morphologiques ont été observés en microscopie optique.

 

1.5 Dosages des hormones sériques

Les rats ont été anesthésiés avec3 % de pentobarbital sodique, et le sang a été collecté viaponction cardiaque. Le sérum a été séparé parcentrifugation à 3000 tr/min pendant 10 min à 4 degrés. Des kits ELISA ont été utilisés pour mesurerFSH, LH et testostéroneniveaux selon les protocoles du fabricant.

 

1.6 Expression de la protéine AR (Western Blot)

Le tissu testiculaire a été lysé et la concentration en protéines mesurée. Des quantités égales de protéines ont été résolues par10 % PAGE FDS, transféré sur des membranes PVDF et incubé avec des anticorps primaires contreRAet-actine (1:1000)du jour au lendemain. L'incubation secondaire des anticorps a été suivie d'une détection chimioluminescente.ImageJa été utilisé pour l’analyse.

 

1.7 Expression de l'ARNm AR (qRT-PCR)

L'ARN total a été extrait du tissu testiculaire. L'ADNc a été synthétisé par transcription inverse. La qRT-PCR a été réalisée à l'aide de la méthode SYBR Green.

Amorces AR:

Avant : 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Inverse : 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-amorces d'actine (contrôle interne):

Avant : 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Inverse : 5′-CGGACTCATCGGTACTCCTGC-3′

Cycle thermique : 95 degrés pendant 15 min (pré-dénaturation), suivi de 40 cycles de 95 degrés pendant 15 s et 60 degrés pendant 1 min. Les données ont été analysées à l'aide du2^-ΔΔCtméthode.

 

1.8 Analyse statistique

Les données ont été analysées à l'aideSPSS26.0.

Les résultats sont présentés commemoyenne ± écart type (x̄ ± s)

test ta été utilisé pour des comparaisons à deux groupes

ANOVA unidirectionnellea été utilisé pour des comparaisons de groupes multiples

P < 0,05a été considéré comme statistiquement significatif