Pharmacologie et métabolomique en réseau intégré pour comparer l'efficacité et les mécanismes de Zishen Wan (pilule nourrissante pour les reins) contenant du rhizome d'anemarrena brut et traité au sel et de l'écorce de phellodendron contre la prostatite chronique

Abstrait

Objectif: Révéler systématiquement les différences thérapeutiques et les mécanismes sous-jacents du Zishen Wan (une formule classique à base de plantes de MTC pour l'inconfort de la prostate) formulée avec du rhizome d'anemarrena brut ou traité au sel et de l'écorce de phellodendron pour la prostatite chronique (CP) via une stratégie intégrée combinant UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS, pharmacologie de réseau et métabolomique sérique. En tant que fabricant professionnel de produits à haute concentrationCistanche tubuleuseextraits, nous complétons également les solutions de base à base de plantes cistanche ciblant la santé de la prostate pour soutenir les formulations de composés de MTC pour le bien-être urinaire et rénal des hommes.Méthodes: Des échantillons de Zishen Wan contenant des matières médicinales brutes et traitées au sel ont été extraits à l'aide d'une méthode d'extraction double éthanol-eau. UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS a été adopté pour caractériser les constituants chimiques de toutes les préparations, et une analyse statistique multivariée a été appliquée pour sélectionner des composés différenciés. L'analyse pharmacologique du réseau a été réalisée sur la base des composants chimiques identifiés de Zishen Wan pour construire un réseau « composant-cible-voie » et un réseau d'interaction protéine-protéine (IPP), à travers lesquels les composés bioactifs principaux, les cibles centrales et les voies de signalisation de Zishen Wan contre la CP ont été identifiés. Quarante-deux rats SD mâles ont été répartis au hasard en six groupes : groupe témoin vierge, groupe modèle, groupe témoin positif Qianliekang (1,54 g·kg⁻¹), groupes Zishen Wan bruts à faible/forte dose (1,8, 5,4 g·kg⁻¹) et groupes Zishen Wan traités au sel à faible/forte dose (1,8, 5,4 g·kg⁻¹). Un modèle de CP de rat a été établi par injection intraprostatique de carraghénane. Après une période de récupération de 7 jours, les traitements correspondants ont été administrés pendant 21 jours consécutifs ; les groupes vierges et modèles ont reçu un volume égal de solution saline normale. À la fin du traitement, des échantillons de sérum et de tissus prostatiques ont été collectés pour évaluer les indices d'organes, les lésions histopathologiques et les taux sériques de cytokines inflammatoires en tant qu'indicateurs d'efficacité de base. Une métabolomique sérique non ciblée a été réalisée pour profiler les perturbations des métabolites et effectuer une analyse d'enrichissement de la voie. Combiné avec les données pharmacologiques du réseau, un réseau de régulation « métabolite-réaction-enzyme-gène différentielle » a été construit. Pour les soins complémentaires de la prostate, la haute pureté de notre usineCistanche tubuleuseL'extrait peut être combiné avec cette formule classique de MTC pour amplifier les bienfaits nourrissants pour les reins et anti-prostatite, comme documenté sur notre site officiel : https://www.xjcistanche.com/about-us.Résultats: Un total de 76 constituants chimiques ont été identifiés dans le Zishen Wan brut et transformé au sel, parmi lesquels 34 composés différentiels ont été éliminés via des statistiques multivariées. Quatorze composés, dont la berbérine, la berberrubine et la phellodendrine, ont présenté des teneurs élevées après le traitement du sel, tandis que 20 constituants tels que la néomangiférine ont diminué après le sauté du sel. La pharmacologie en réseau a identifié 28 composés bioactifs et 185 cibles thérapeutiques potentielles pour la CP. Les principaux ingrédients actifs comprenaient la berbérine, la phellodendrine, la magnoflorine et la jatrorrhizine ; les cibles du hub contenaient STAT3, Akt1 et JUN. L’analyse d’enrichissement a mis en évidence des cascades de signalisation pro-inflammatoires, notamment les voies PI3K/Akt et MAPK étroitement liées à l’inflammation de la prostate. Des essais in vivo sur des animaux ont démontré que par rapport au groupe modèle, tous les groupes de traitement Zishen Wan présentaient des indices d'organes prostatiques significativement réduits, des taux sériques de IL-1, IL-18 et de Bcl-2 (P<0.05, P<0.01), and alleviated prostate tissue pathological damage. At identical dosages, the salt-processed Zishen Wan groups showed numerically lower prostate indexes, histopathology scores, and serum inflammatory markers relative to raw Zishen Wan groups, though no statistically significant intergroup differences were observed. Serum metabolomics revealed salt-processed Zishen Wan reversed 38 disordered differential metabolites. Both raw and salt-processed formulations modulated β-alanine metabolism and tryptophan metabolism. Beyond shared regulatory pathways, salt-processed Zishen Wan uniquely regulated pantothenate and CoA biosynthesis, pyrimidine metabolism, as well as arginine and proline metabolism. Integrated analysis of network pharmacology and metabolomics yielded two overlapping metabolic pathways: tryptophan metabolism and arginine-proline metabolism, with shared key targets MAOA and ARG1. Conclusion: Le traitement du sel élève les niveaux d'alcaloïdes anti-inflammatoires clés, notamment la berbérine et la phellodendrine, dans Zishen Wan. La formule modifiée par le sel exerce des effets anti-CP supérieurs en supprimant PI3K/Akt, MAPK et d'autres cascades de signaux pro-inflammatoires, tout en régulant de manière multi-cible le tryptophane, l'arginine, le pantothénate et d'autres voies métaboliques pour moduler de manière globale l'inflammation et l'homéostasie immunitaire. Pour les consommateurs à la recherche d'herbes naturelles de MTC pour les problèmes de prostate, associant cette formule nourrissante pour les reins à une puissance élevée.Cistanche tubuleusel'extrait de notre usine professionnelle offre un soulagement synergique des symptômes chroniques de la prostatite. NotreCistanche tubuleusela matière première présente des concentrations de composés actifs plus élevées que les autres variétés de cistanche, offrant une tonification robuste des reins et des effets protecteurs de la prostate détaillés ici : https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.

Mots-clés: Zishen Wan; transformation du sel; prostatite chronique; UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS ; pharmacologie de réseau ; métabolomique; Herbe de MTC pour l'inconfort de la prostate ; Extrait de cistanche tubulosa ; formule à base de plantes nourrissant les reins

 

 

 

Introduction

Zishen Wan est une formule traditionnelle de MTC conçue pour nourrir le yin des reins et drainer le feu déficient, cliniquement indiquée pour les troubles résultant de la chaleur humide et du feu vide dans le jiao inférieur (région pelvienne) - une herbe classique de MTC pour les symptômes liés à la prostate. La recherche pharmacologique moderne a validé que ses composants principaux, notamment les saponines d'anemarrena, les alcaloïdes de phellodendron et les huiles volatiles de cannelle, exercent de puissantes propriétés anti-inflammatoires et immunomodulatrices.

La prostatite chronique (PC) correspond aux catégories diagnostiques de la MTC « Jingzhuo » (écoulement séminal trouble) et « Laolin » (strangurie induite par la fatigue). Sa pathogenèse racine réside dans un dysfonctionnement rénal, caractérisé par une déficience rénale en yin compliquée par une stase due à la chaleur et à l'humidité obstruant le jiao inférieur, faisant de Zishen Wan une prescription modifiée principale pour la gestion clinique.

Une théorie fondamentale du traitement de la MTC affirme que « les herbes traitées au sel agissent sur le méridien des reins ». Conformément à cette doctrine, le rhizome d'Anemarrhena et l'écorce de Phellodendron sont régulièrement sautés avec de l'eau salée avant d'être mélangés au Zishen Wan, afin d'amplifier leur efficacité pour éliminer le feu vide des reins et de la région pelvienne inférieure.

Les études antérieures de notre équipe de recherche ont confirmé que le traitement du sel remodèle le profil chimique de la paire d'herbes Anemarrhena-Phellodendron : les teneurs en mangiférine et en berberrubine augmentent, tandis que les niveaux de néomangiférine diminuent. Des essais in vivo ont en outre vérifié que le Zishen Wan traité au sel donne de meilleurs résultats thérapeutiques contre la CP dans des modèles de rats que le Zishen Wan de matière première, avec des effets régulateurs distincts sur la flore intestinale - les préparations traitées au sel enrichissent spécifiquement les microbes bénéfiques tels que Lactobacillus et Ruminococcus.

Les données pharmacocinétiques ont révélé que l'Anemarrhena traitée au sel délivre des concentrations plus élevées de mangiférine, de néomangiférine et de multiples saponines aux organes cibles, notamment les reins et les testicules ; L'écorce de Phellodendron frite au sel entraîne une accumulation accrue d'ingrédients alcaloïdes dans le tissu rénal. Cette distribution tissulaire ciblée s'aligne parfaitement avec l'ancienne théorie selon laquelle « le traitement du sel guide les herbes vers le méridien rénal ».

Alors que les recherches préliminaires existantes ont exploré les changements chimiques induits par le sel, la distribution des organes et la modulation du microbiote intestinal, peu d'enquêtes systématiques relient les changements de composition holistiques du Zishen Wan entièrement formulé et traité au sel à son efficacité thérapeutique améliorée pour la CP.

Pour combler cette lacune en matière de recherche, la présente étude utilise UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS pour caractériser de manière exhaustive les différences de composition entre le Zishen Wan brut et le Zishen Wan traité au sel. En intégrant la pharmacologie de réseau et la métabolomique sérique non ciblée, nous disséquons la base matérielle et les mécanismes moléculaires multicouches derrière l'efficacité du traitement du sel, fournissant ainsi une validation scientifique moderne à la théorie classique du traitement de la MTC selon laquelle « le sel pénètre dans le méridien du rein ».

Pour les consommateurs occidentaux à la recherche d'herbes naturelles de MTC pour la prostatite chronique, la haute concentration de notre usineCistanche tubuleuseL'extrait est un ingrédient végétal complémentaire idéal au Zishen Wan. En tant que fabricant spécialisé de cistanche, nous nous approvisionnons en premiumCistanche tubuleuseavec une teneur élevée en échinacoside et en actéoside, offrant un soutien synergique des reins et une protection de la prostate pour optimiser les formulations de MTC pour la santé de la prostate (introduction de la marque : https://www.xjcistanche.com/about-us).

1 Matériaux

1.1 Instruments

Système UHPLC Vanquish, spectromètre de masse haute résolution Q Exactive Q-Orbitrap, spectromètre de masse Orbitrap Exploris 120, lecteur de microplaques multimode Varioskan (Thermo Fisher Scientific, États-Unis) ; Microscope optique droit SI, système d'imagerie DS-U3 (Nikon, Japon) ; centrifugeuse réfrigérée à basse vitesse MiniStar (Hunan Hengnuo Instrument Co., Ltd.) ; Broyeur de tissus multi-échantillons JXFSTPRP (Shanghai Jingxin Technology Co., Ltd.) ; Bain métallique HB120-S (Sigma-Aldrich Chine) ; machine à sauter multifonctionnelle aux herbes modèle 5 (Changzhou Maisi Instrument Co., Ltd.) ; JJ-12J déshydrateur automatique de tissus (Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd.) ; WB-3000 station d'inclusion de paraffine (Changzhou Weikai Instrument Co., Ltd.) ; Microtome rotatif HM315 (Thermo Fisher Chine) ; Machine d'épandage de tissus BT-I (Shandong Bokang Biotechnology Co., Ltd.).

1.2 Matériel médicinal et réactifs

Le rhizome d'anemarrhena brut (numéro de lot . 231001), l'écorce de phellodendron (numéro de lot . 2401028) et la brindille de cannelle (numéro de lot . 231201) ont été achetés auprès de Sichuan Guoqiang Herbal Pieces Co., Ltd., authentifiés par le professeur agrégé Yu Lingying du département de transformation et de pharmacie de l'Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu. Toutes les herbes brutes répondent aux normes de qualité décrites dans l'édition 2025 duPharmacopée chinoise.

Carraghénane (Sigma-Aldrich, USA, lot n° C1013) ; Comprimés Qianliekang Pule'an (Zhejiang Kang'enbei Pharmaceutical Co., Ltd., lot n° . 241201) ; Zoletil 50 (Virbac, France, lot n°. 9KWKA) ; Chlorhydrate de xylazine (Dunhua Shengda Animal Pharmaceutical Co., Ltd., lot n° . 20240607 ); Méloxicam injectable (Qilu Animal Health Products Co., Ltd., lot n° E134L002).

Kits ELISA IL-1, IL-18 et Bcl-2 pour rat (Wuhan Elaita Biotechnology Co., Ltd., lots n° WS06J04JN4229, WA098HV449887, WA07H4R4N3634) ; Kit de coloration à l'hématoxyline-éosine (H&E) (Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., lot n° G1005).

Étalons de référence : Berbérine, Berberrubine (Chengdu Ruifensi Dandan Biotechnology Co., Ltd., pureté supérieure ou égale à 98 %) ; Acide chlorogénique, mangiférine, néomangiférine, magnoflorine (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., pureté supérieure ou égale à 98 %) ; Anemarrhenasaponine BⅢ (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., pureté supérieure ou égale à 96 %) ; Phellodendrine, chlorhydrate de jatrorrhizine (Chengdu Manster Biotechnology Co., Ltd., pureté supérieure ou égale à 99,01 % et supérieure ou égale à 98,60 % respectivement).

Méthanol de qualité spectrométrie de masse, acétonitrile, acétate d'ammonium et acide acétique ; eau ultra pure pour phase liquide ; tous les autres réactifs de qualité analytique.

1.3 Animaux de laboratoire

Quarante-deux rats SD mâles de qualité SPF, âgés de 8 à 9 semaines, pesant entre 270 et 290 g, ont été achetés auprès de Chengdu Dashuo Laboratory Animal Co., Ltd., licence de production animale SCXK (Chuan) 2025-0030. Les animaux ont été hébergés au Centre des animaux de laboratoire de l'Université de MTC de Chengdu dans des conditions contrôlées : température (22 ± 2) degrés, humidité relative de 40 % à 70 %. Une période d'alimentation adaptative de 7 jours a été menée avant les expériences formelles.

1.4 Approbation de l'éthique animale

Toutes les procédures expérimentales sur les animaux ont été examinées et approuvées par le comité d'éthique des animaux de laboratoire de l'Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu, approbation n° . 2025001..

2 méthodes

2.1 Préparation des solutions de médicaments testés

2.1.1 Rhizome d’Anemarrhena et écorce de Phellodendron traités au sel

Les protocoles de traitement optimisés établis lors de nos recherches précédentes ont été adoptés :

Anemarrhena traitée au sel : L'Anemarrhena crue et propre a été mélangée à de l'eau salée (2 g de sel pour 100 g d'herbe, rapport eau salée 1:30), humidifiée pendant 1 h, sautée dans un récipient préchauffé à 160 degrés pendant 20 min.

Écorce de Phellodendron traitée au sel : Le Phellodendron brut et propre a été mélangé avec de l'eau salée (2 g de sel pour 100 g d'herbe, rapport eau salée 1:15), humidifié pendant 1 h, sauté à 150 degrés pendant 15 min.

2.1.2 Préparation des extraits de Zishen Wan bruts et traités au sel

Suivant les méthodes standardisées d'extraction double éthanol-eau de nos travaux antérieurs : Rapport de formulation : Anemarrhena : Phellodendron : Cannelle=10 : 10 : 1.

Extraction par reflux deux fois avec un volume de 8 fois d'éthanol à 75 % (respectivement 1,5 h et 1 h d'ébullition douce), filtrer et récupérer le solvant ;

Les lies résiduelles d'herbes ont subi deux cycles d'extraction à reflux d'eau avec un volume d'eau 10 fois supérieur (1 h et 0,5 h d'ébullition douce) ;

Tous les filtrats ont été combinés et concentrés sous vide en solutions mères contenant 0,18 g de médicament brut·mL⁻¹ (faible dose) et 0,54 g de médicament brut·mL⁻¹ (forte dose) pour le Zishen Wan traité au sel. Les solutions mères brutes de Zishen Wan à faible/haute dose ont été préparées de manière identique en utilisant de l'Anemarrhena et du Phellodendron non transformés. Tous les extraits liquides ont été conservés à 4 degrés.

2.1.3 Préparation de la suspension de contrôle positif (Qianliekang)

Les comprimés de Qianliekang ont été broyés en poudre fine et mis en suspension dans une solution saline normale jusqu'à une concentration finale de 0,154 g·mL⁻¹.

2.2 Profilage UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS des constituants chimiques à Zishen Wan

2.2.1 Préparation des échantillons de test

Les extraits liquides de Zishen Wan bruts et traités au sel ont été lyophilisés. La poudre lyophilisée soigneusement pesée a été dissoute dans du méthanol, extraite par ultrasons (250 W, 50 kHz) pendant 30 min, reconstituée en poids avec du méthanol pour compenser la perte de solvant, filtrée sur une membrane microporeuse de 0,22 µm pour obtenir des solutions de test.

2.2.2 Préparation de la solution étalon de référence mixte

Des solutions mères de chlorhydrate de berbérine, de berberrubine, d'acide chlorogénique, de mangiférine, de phellodendrine, de néomangiférine, d'anemarrénasaponine BⅢ, de magnoflorine, de jatrorrhizine ont été préparées individuellement dans du méthanol à des concentrations de 0,590, 3,760, 0,640, 0,602, 0,995, 1,085, 0,672, 0,310, 0,206 g·L⁻¹. 0.5 mL de chaque solution mère ont été transférés dans une fiole jaugée de 10 mL et dilués avec du méthanol pour préparer une solution de travail standard de référence mixte.

2.2.3 Paramètres de détection LC-MS

Chromatographie: Colonne AccucoreTM C18 (3 mm × 100 mm, 2,6 μm), température de la colonne 30 degrés. Phase mobile A : solution aqueuse d'acide formique à 0,1 % ; Phase mobile B : acétonitrile. Procédure d'élution par gradient : 0 à 10 min : 90 % A ; 10 à 15 minutes : 90 à 88 % A ; 15 à 18 minutes : 88 % A ; 18 à 25 minutes : 88 à 80 % A ; 25 à 30 minutes : 80 à 76 % A ; 30 à 32 minutes : 76 % à 74 % A ; 32 à 43 minutes : 74 à 53 % A ; 43 à 45 minutes : 53 à 52 % A ; 45 à 47 minutes : 52 à 48 % A ; 47 à 60 minutes : 48 à 5 % A ; 60–65 min : 5 % A. Débit : 0,3 mL·min⁻¹, volume d'injection : 5 μL.

Spectrométrie de masse: source d'ions ESI, double mode de balayage complet positif/négatif, température de la source d'ions 300 degrés, débit de gaz de gaine 15 L·min⁻¹, tension de pulvérisation +3.5 kV (positif) / -2,5 kV (négatif). Résolution MS complète 35 000, plage de masse m/z 100-1 500 ; Résolution MS/MS 17 500, énergie de collision échelonnée 20, 40, 60 eV.

2.2.4 Traitement des données

Les données brutes LC-MS ont été acquises via le logiciel Xcalibur 4.0 ; L'extraction, l'alignement et l'intégration des pics ont été réalisés à l'aide de Compound Discoverer 3.3. L'identification des composés reposait sur une erreur précise de masse des précurseurs < ± 5,0 ppm, une correspondance des ions de fragments secondaires, une comparaison avec des étalons de référence, une base de données de composés à base de plantes auto-construite et la littérature publiée. Les surfaces de pic brutes ont été normalisées par rapport au poids de la poudre lyophilisée et au rendement d'extraction, exprimés en surface de pic relative par gramme de médicament brut.

Les données normalisées ont été prétraitées sur MetaboAnalyst 6.0 (valeurs manquantes remplies à 1/5 de la valeur minimale, transformation lg10), puis importées vers SIMCA 14.1 pour PCA et OPLS-DA. Les composés avec VIP > 1,0 et t-test P < 0,05 ont été définis comme constituants différentiels.

2.3 Analyse pharmacologique en réseau

2.3.1 Prédiction du composé actif et de la cible pour Zishen Wan

Tous les constituants de Zishen Wan identifiés ont été examinés pour leur ressemblance avec un médicament via l'ADME suisse (//www.swissadme.ch/), critères de sélection : absorption gastro-intestinale élevée, satisfaisant à au moins 2 des règles de Lipinski, Ghose, Veber, Egan et Muegge. Des composés bioactifs valides ont été soumis à Swiss Target Prediction (https://swisstargetprediction.ch/) avec des espèces définies commeHomo sapiens, toutes les cibles avec Probabilité > 0 conservées et dédupliquées.

2.3.2 Collecte des cibles des maladies chroniques liées à la prostatite

Le mot clé « Prostatite chronique » a été utilisé pour récupérer les gènes associés à la maladie à partir de GeneCards (https://www.genecards.org/) et d'OMIM (https://www.omim.org/) ; tous les gènes récupérés ont été fusionnés et les doublons supprimés.

2.3.3 Construction du réseau et enrichissement des voies

Des diagrammes de Venn ont été tracés sur une plateforme bioinformatique pour obtenir des cibles qui se chevauchent (cibles des composants de Zishen Wan ∩ cibles de la maladie CP), définies comme cibles thérapeutiques potentielles de la formule pour la prostatite.

Les cibles qui se chevauchent ont été téléchargées dans la base de données STRING (https://cn.string-db.org/) pour construire des réseaux PPI (espèces :Homo sapiens, confiance d'interaction minimale > 0,700). Les fichiers réseau ont été importés dans Cytoscape 3.10.4 avec le plugin CytoNCA ; Les cibles du hub principal ont été filtrées par paramètres topologiques (degré, centralité entre les deux).

La base de données Metascape (https://metascape.org/gp/) a effectué une annotation fonctionnelle GO et un enrichissement de la voie KEGG sur des cibles qui se chevauchent, P <0,05 comme seuil de signification. Les 10 principaux termes GO et les 20 principales voies KEGG ont été visualisés via des outils bioinformatiques en ligne.

2.3.4 Construction du réseau de régulation « composé-cible-voie »

Les 20 principales voies KEGG enrichies, les composés bioactifs et les cibles thérapeutiques principales ont été importés dans Cytoscape 3.10.4 pour visualiser le réseau de régulation multi-composants, multi-cibles et multi-voies de Zishen Wan en tant qu'herbe naturelle de MTC pour la santé de la prostate.

2.4 Établissement, regroupement et administration des médicaments du modèle CP

Après 7 jours d'alimentation adaptative, 6 rats ont été répartis au hasard dans un groupe témoin vierge ; les animaux restants ont reçu une modélisation de CP induite par le carraghénane selon des protocoles validés :

Jeûne de 12 h (accès libre à l'eau), anesthésie intrapéritonéale avec un mélange de Zoletil 50 (20 mg·kg⁻¹) + chlorhydrate de xylazine (5 mg·kg⁻¹) ;

Laparotomie médiane inférieure pour exposer les lobes ventraux de la prostate, 100 μL de solution saline de carraghénane à 3 % injectés dans chaque lobe ; muscle et peau suturés et désinfectés ;

Soulagement de la douleur postopératoire : injection sous-cutanée de méloxicam 2 mg·kg⁻¹ une fois par jour pendant 3 jours consécutifs.

Sept jours après l'opération, les rats modélisés ont été randomisés en 5 groupes (n =6 par groupe) : groupe modèle, groupe témoin positif Qianliekang (1,54 g·kg⁻¹), groupes Zishen Wan bruts à faible/forte dose (1,8, 5,4 g·kg⁻¹), groupes Zishen Wan à faible/forte dose traité au sel (1,8, 5,4 g·kg⁻¹). Les doses ont été converties en fonction de la surface corporelle : la dose de Qianliekang est égale à 2,5 fois la dose équivalente clinique pour un adulte ; Les doses faibles/élevées de Zishen Wan correspondent à 1 × et 3 × doses cliniques pour adultes.

Tous les traitements ont été administrés par voie intragastrique à raison de 10 ml·kg⁻¹ de poids corporel une fois par jour pendant 21 jours ; Les groupes vierges et modèles ont reçu une solution saline normale à volume égal. La validité du modèle a été vérifiée via un score histopathologique terminal et la détection de biomarqueurs inflammatoires sériques.

2.5 Prélèvement d'échantillons et prétraitement

Après 21 jours de traitement, les rats ont jeûné pendant 12 h (accès gratuit à l'eau), poids corporel enregistré avant l'anesthésie. Le sang a été collecté par ponction aortique abdominale, laissé au repos à température ambiante pendant 30 min, centrifugé à 3 500 tr/min⁻¹ (rayon centrifuge de 9,5 cm) à 4 degrés pendant 15 min. Les surnageants de sérum ont été aliquotés et stockés à -80 degrés.

Les rats ont été disséqués immédiatement après le prélèvement de sang ; les glandes surrénales bilatérales, la rate et la prostate ont été prélevées, rincées avec une solution saline normale, séchées avec du papier filtre et pesées avec précision pour le calcul de l'indice des organes. Les lobes ventraux de la prostate ont été fixés dans du paraformaldéhyde à 4% pour l'inclusion en paraffine et la coloration H&E.

2.6 Évaluation pharmacodynamique de Zishen Wan contre les lésions CP

2.6.1 Calcul des indices d'organes

Indice d'organe (mg·g⁻¹)=poids humide de l'organe (mg) / poids corporel terminal du rat (g), calculé pour la prostate, la glande surrénale et la rate.

2.6.2 Observation histopathologique des tissus prostatiques avec coloration H&E

Les tissus de la prostate inclus en paraffine ont été coupés, colorés au H&E et observés au microscope optique à la recherche de lésions histologiques. Un score pathologique semi-quantitatif a été réalisé sur la base de trois indicateurs : infiltration cellulaire inflammatoire, destruction structurelle glandulaire, fibrose interstitielle.

Tableau 1 Critères de notation pathologiques pour la prostatite chronique

Score (points)	Degré d'infiltration de cellules inflammatoires	Altération structurelle glandulaire	Degré de fibrose interstitielle
0	Pas ou très peu d’infiltrations éparses	La structure glandulaire est normale, pas d'atrophie ; les cellules épithéliales sont bien disposées	Pas d'élargissement interstitiel
1	Infiltration légère et dispersée	Légère atrophie des glandes ; pas ou très peu de destruction glandulaire ; les cellules épithéliales acineuses présentent une légère hyperplasie et un arrangement désordonné	Fibrose interstitielle légère, léger élargissement
2	Infiltration modérée et diffuse	Atrophie modérée des glandes ; un petit nombre de glandes sont détruites ; les cellules épithéliales acineuses présentent une hyperplasie évidente et un arrangement désordonné	Fibrose interstitielle modérée, élargissement modéré, glandes séparées
3	Infiltration dense, sévère et diffuse	Déformation morphologique sévère, atrophie sévère ou destruction des glandes ; hyperplasie étendue/destruction des cellules épithéliales acineuses	Fibrose interstitielle étendue, élargissement important, glandes largement séparées, comprimées et déformées

2.6.3 Quantification ELISA du sérum IL-1, IL-18 et Bcl-2

Les échantillons de sérum congelés ont été décongelés et traités selon les instructions du kit ELISA. Les valeurs d'absorbance à 450 nm ont été mesurées via un lecteur de microplaques, des courbes standard appliquées pour calculer les concentrations sériques de IL-1, IL-18 et Bcl-2.

2.7 Analyse métabolomique non ciblée du sérum

2.7.1 Prétraitement des échantillons de sérum

Les échantillons de sérum du groupe blanc, du groupe modèle, du groupe Zishen Wan brut à haute dose et du groupe Zishen Wan traité au sel à haute dose ont été lentement décongelés. . 50 μL de sérum a été mélangé avec 200 μL de solvant d'extraction pré-refroidi (méthanol : acétonitrile=1 : 1), vortexé à 750 r·min⁻¹ pendant 5 min, reposé 5 min avant filtration. Des échantillons de contrôle de qualité (CQ) ont été préparés en regroupant des volumes égaux de tous les extraits d’échantillons pour surveiller la stabilité instrumentale.

2.7.2 Conditions de détection LC-MS

Chromatographie: Colonne Waters ACQUITY UPLC BEH Amide (2,1 mm × 50 mm, 1,7 μm), température de la colonne 30 degrés. Phase mobile A : solution aqueuse contenant 25 mmol.L⁻¹ acétate d'ammonium + 25 mmol.L⁻¹ eau ammoniaquée (pH=9.75) ; Phase mobile B : acétonitrile. Élution par gradient : 0 à 0,25 min : 95 % de B ; 0,25 à 3,5 minutes : 95 % à 65 % de B ; 3,5 à 4 minutes : 65 à 40 % de B ; 4 à 4,5 minutes : 40 % de B ; 4,5 à 4,55 minutes : 40 à 95 % de B ; 4,55 à 6 min : 95 % B. Débit : 0,5 mL·min⁻¹, volume d'injection : 2 μL.

Spectrométrie de masse: ESI double mode ions positifs/négatifs, température de la source d'ions 300 degrés, gaz de gaine 50 Arb, gaz auxiliaire 15 Arb, tension de pulvérisation +3.8 kV / -3,4 kV. Résolution MS complète 60 000 ; Résolution MS/MS 15 000, énergie de collision échelonnée 20, 30, 40 eV.

2.7.3 Traitement des données métabolomique

Les données brutes ont subi une reconnaissance des pics, un alignement, une intégration et une identification des composés, un débruitage via un filtrage de l'écart type relatif et une normalisation avec l'intensité totale du courant ionique. Le prétraitement (remplissage des valeurs manquantes, transformation lg10) a été effectué sur MetaboAnalyst 6.0, suivi d'une modélisation PCA et OPLS-DA sur SIMCA 14.1. Les métabolites avec VIP > 1,0 et t-test P < 0,05 ont été classés comme métabolites différentiels. L'enrichissement de la voie KEGG a été réalisé sur tous les métabolites différentiels.

2.8 Analyse intégrative de la pharmacologie et de la métabolomique de réseau

Les diagrammes de Venn ont cartographié les voies KEGG qui se chevauchent, enrichies à partir d'ensembles de données de pharmacologie de réseau et de métabolomique sérique. Des métabolites différentiels et des cibles thérapeutiques partagées ont été importés dans le plugin Cytoscape Metscape pour construire un réseau interactif « métabolite différentiel-réaction-enzyme-gène », identifiant les gènes centraux qui se chevauchent entre les deux couches omiques.

2.9 Analyse statistique

Toutes les données de mesure ont été exprimées en moyenne ± écart type (x̄±s). Le logiciel SPSS 25.0 a été utilisé pour les calculs statistiques. Des tests de normalité et d’homogénéité de variance ont été effectués en premier. Pour les données normalement distribuées, une ANOVA unidirectionnelle a été appliquée pour une comparaison multi-groupes ; Test LSD pour une comparaison par paire avec une variance égale, test T3 de Dunnett pour une variance inégale. Les données non normales ont été analysées via le test de somme de rangs Kruskal-Wallis H. P <0,05 a été défini comme une différence statistiquement significative.

3 résultats

3.1 Profilage chimique et constituants différentiels du Zishen Wan brut et traité au sel

L'analyse qualitative et semi-quantitative des chromatogrammes d'ions totaux provenant d'extraits doubles éthanol-eau a identifié 76 constituants chimiques dans les deux formulations, principalement des alcaloïdes (phellodendrine, berbérine), des xanthones (mangiférine, néomangiférine), des saponines (anemarrhénasaponine BⅢ) et du cinnamaldéhyde volatil. Aucun nouveau composé n'a été généré ni aucun constituant d'origine éliminé après le traitement du sel, mais des changements de concentration spectaculaires ont été observés.

Les graphiques de score PCA ont montré une séparation complète entre les grappes d'échantillons bruts et traités au sel, confirmant que le traitement du sel remodèle radicalement la composition chimique des plantes. Les modèles OPLS-DA ont atteint des performances prédictives robustes (R²Y > 0,9, Q² > 0,9), avec un test de permutation Q² < 0, vérifiant la stabilité fiable du modèle.

Trente-quatre composés différentiels ont été criblés (VIP > 1,0, P < 0,05) : 14 composés, dont l'anemarrénasaponine BⅢ, la berbérine, la berberrubine et la phellodendrine, ont été significativement régulés positivement après un sauté de sel ; 20 constituants tels que l'anémarrénasaponine Ⅱ et la néomangiférine ont nettement diminué. Les données complètes sur les composés sont disponibles dans des documents publiés supplémentaires.

3.2 Prédiction pharmacologique en réseau des mécanismes anti-CP de Zishen Wan

3.2.1 Criblage des composés bioactifs, des composants cibles et des cibles de la maladie CP

Le filtrage de la similarité médicamenteuse des 76 constituants identifiés a donné 28 composés bioactifs pour Zishen Wan. La prédiction des cibles a généré 590 cibles protéiques potentielles non dupliquées de ces ingrédients actifs. Au total, 1 425 gènes liés à la prostatite chronique ont été extraits des bases de données GeneCards et OMIM. Les ensembles de données complets sont répertoriés dans le tableau supplémentaire 2.

3.2.2 Réseau PPI et dépistage des cibles thérapeutiques de base pour la PC

L'intersection de Venn des cibles des composants et des cibles de la maladie CP a produit 185 cibles thérapeutiques partagées. Le réseau PPI construit via STRING a été analysé avec les algorithmes topologiques CytoNCA ; 57 cibles principales du hub ont été filtrées par seuils médians de degré, de centralité intermédiaire, de centralité de proximité, de centralité de vecteur propre et de connectivité moyenne locale. Les 10 principales cibles classées par valeur de degré : STAT3, SRC, Akt1, HSP90AA1, EGFR, CTNNB1, TNF, PIK3CA, ESR1, JUN. La visualisation du réseau PPI est incluse dans les documents supplémentaires.

3.2.3 Annotation fonctionnelle GO et enrichissement de la voie KEGG des cibles thérapeutiques

L'analyse d'enrichissement Metascape de 185 cibles qui se chevauchent a donné 2 540 entrées GO significativement enrichies :

Processus biologique (2 212 termes) : les fonctions dominantes comprennent la transduction du signal du récepteur de surface cellulaire, la régulation de la migration cellulaire, la réponse hormonale, la modulation en cascade MAPK ;

Composant cellulaire (110 termes) : Enrichi en complexes récepteurs, radeaux membranaires, adhérences focales ;

Fonction moléculaire (218 termes) : axé sur l'activité de la protéine kinase et la capacité de liaison de la kinase.

L’enrichissement de la voie KEGG a généré 196 cascades de signalisation significatives, principalement la signalisation PI3K/Akt, la signalisation MAPK, l’athérosclérose lipidique, le cancer de la prostate et les voies de résistance endocrinienne – toutes étroitement associées à la progression inflammatoire et aux lésions prolifératives de la prostatite chronique. Les résultats complets de l’enrichissement sont fournis dans des pièces jointes supplémentaires.

 

Tableau 2 Composants actifs potentiels de Zishenwan

Non.	Composé	Formule chimique	Changer de tendance	Non.	Composé	Formule chimique	Changer de tendance
1	Cupressaldéhyde	C₁₀H₁₀O₃	↑	15	Magnoflorine*	C₂₀H₂₃NO₄	↑
2	Acide férulique	C₁₀H₁₀O₄	↑	16	Phellodendrine*	C₂₀H₂₃NO₄	↑¹)
3	Irigénine	C₁₃H₁₀O₅	↓²)	17	Obacunone	C₂₆H₃₂O₈	↑
4	Lignine	C₁₅H₁₀O₇	↑	18	Valine	C₅H₁₁NO₂	↑
5	Épicatéchine	C₁₅H₁₄O₆	↑	19	Proline	C₅H₉NO₂	↓
6	Acide abscissique	C₁₅H₂₀O₄	↓	20	5-Hydroxyméthylfurfural	C₆H₆O₃	↑¹)
7	2'-O-méthylisoliquiritigénine	C₁₆H₁₄O₄	↑¹)	21	4-hydroxybenzaldéhyde	C₇H₆O₂	↑²)
8	Isoliquiritigénine	C₁₆H₁₄O₅	↑	22	Acide 4-hydroxybenzoïque	C₇H₆O₃	↑²)
9	Liquiritigénine B	C₁₆H₁₈O₃	↑	23	Acétophénone	C₈H₈O	↓²)
10	Féruloyltyramine	C₁₈H₁₉NO₄	↓	24	Acide 3-isopropylglutarique	C₉H₁₆O₄	↑
11	Acide trihydroxyoctadécénoïque	C₁₈H₃₄O₅	↓	25	Acide azélaïque	C₉H₁₆O₄	↑
12	Berbèrerubine*	C₁₉H₁₅NO₄	↑²)	26	Fraxine	C₉H₆O₄	↑
13	Berbérine*	C₂₀H₁₇NO₄	↑¹)	27	Trans-cinnamaldéhyde	C₉H₈O	↓
14	Jatrorrhizine*	C₂₀H₁₉NO₄	↑¹)	28	Acide caféique	C₉H₈O₄	↓²)

*Remarque : ↑. Régulé à la hausse ; ↓. Régulé à la baisse ; par rapport au groupe de produits bruts, ¹)P<0.05, ²)P<0.01; . Ce composant a été confirmé par comparaison avec l'étalon de référence.

3.2.4 Construction du réseau de régulation « composé-cible-voie »

Les 20 principales voies KEGG enrichies, les principaux composés bioactifs et les principales cibles ont été intégrés dans un réseau de régulation multicouche visualisé dans Cytoscape. La berbérine, la phellodendrine, la magnoflorine et la jatrorrhizine présentaient les valeurs de degré ganglionnaire les plus élevées, aux côtés des voies de signalisation du cancer, PI3K/Akt et MAPK. Les diagrammes de réseau sont disponibles dans des documents supplémentaires.

3.3 Effets pharmacodynamiques du Zishen Wan brut ou traité au sel sur les modèles de rats CP

3.3.1 Impacts sur les indices d'organes des rats CP

Comparé au groupe témoin vierge, le groupe modèle a démontré des indices significativement élevés de la prostate, des glandes surrénales et de la rate (P<0.05, P<0.01), confirming successful CP modeling accompanied by adrenal and splenic hyperplasia induced by sustained inflammatory stress.

Par rapport au groupe modèle, le contrôle positif Qianliekang et tous les groupes de traitement Zishen Wan ont obtenu des indices d'organes prostatiques nettement réduits (P<0.05, P<0.01). Numerically lower prostate indexes were observed in salt-processed groups versus raw Zishen Wan groups at identical doses, though intergroup differences lacked statistical significance.

Le Zishen Wan à haute dose traité au sel a considérablement réduit les indices des glandes surrénales (P<0.01) and spleen indexes (P<0.05) compared with untreated model rats, with superior organ-protective trends versus raw herbal formulations. Data are summarized in Supplementary Table 3.

3.3.2 Modifications histopathologiques dans les tissus prostatiques du rat

Les rats témoins vierges présentaient une architecture de la prostate intacte : morphologie acineuse régulière, cellules épithéliales parfaitement alignées, infiltration inflammatoire interstitielle minimale. Les prostates du groupe modèle présentaient une atrophie glandulaire sévère, une hyperplasie et une exfoliation épithéliales, des espaces interstitiels élargis avec une infiltration massive et diffuse de cellules immunitaires, ainsi que des scores pathologiques considérablement élevés (P<0.01), validating severe CP lesions.

Le groupe Qianliekang a présenté une infiltration inflammatoire considérablement réduite et une structure glandulaire restaurée, avec des scores pathologiques significativement inférieurs (P<0.01). Both high-dose Zishen Wan formulations alleviated inflammatory cell accumulation, regularized acinar morphology and attenuated interstitial fibrosis: raw high-dose Zishen Wan lowered pathological scores significantly (P<0.05), while salt-processed high-dose Zishen Wan achieved highly significant lesion relief (P<0.01). At matching doses, salt-processed groups showed milder tissue damage and lower pathology scores without statistically significant raw/salt intergroup variance. Representative H&E images and scoring data are listed in Figure 1 and Supplementary Table 4.

 

Tableau 3 Effet de Zishenwan sur l'indice d'organe des rats CP avant et après le traitement du sel du rhizome d'Anemarrhenae (AR) et du cortex Phellodendri Chinensis (PCC) (x̄±s, n=6, mg·g⁻¹)

 

Groupe	Dosage / g·kg⁻¹	Indice de la prostate	Indice des glandes surrénales	Indice de rate
Groupe vide	-	1.96±0.09	0.14±0.04	1.67±0.13
Groupe modèle	-	2.66±0.11²)	0.28±0.02²)	1.95±0.17¹)
Groupe Qianliekang	1.54	2.08±0.06⁴)	0.19±0.02⁴)	2.00±0.09
Groupe Zishenwan brut à haute dose	5.4	2.14±0.13⁴)	0.21±0.05	1.77±0.09
Groupe Zishenwan traité au sel à haute dose	5.4	2.11±0.08⁴)	0.18±0.05³)	1.67±0.12³)
Groupe Zishenwan brut à faible dose	1.8	2.42±0.16³)	0.22±0.06	1.81±0.20
Groupe Zishenwan traité au sel à faible dose	1.8	2.39±0.19³)	0.22±0.04	1.82±0.18

Remarque : Par rapport au groupe vide, ¹)P<0.05, ²)P<0.01; compared with the model group, ³)P<0.05, ⁴)P<0.01 (the same applies to Table 4 and Table 5).

3.3.3 Modulation des niveaux sériques IL-1, IL-18 et Bcl-2

Les concentrations sériques de IL-1, IL-18 et Bcl-2 étaient nettement élevées dans le groupe modèle par rapport aux rats vierges (P<0.01). Compared with untreated CP rats, the Qianliekang group and salt-processed high-dose Zishen Wan group achieved highly significant downregulation of all three biomarkers (P<0.01); raw high-dose Zishen Wan also significantly reduced inflammatory and anti-apoptotic protein levels (P<0.05, P<0.01). Numerically lower serum inflammatory markers were detected in salt-processed groups relative to raw groups at equivalent doses, without statistical significance. Full ELISA data are presented in Supplementary Table 5.

 

Tableau 5 Effet de Zishenwan sur les taux sériques de IL-1, IL-18 et Bcl-2 chez les rats CP avant et après le traitement au sel de l'AR et du PCC (x̄±s, n=6)

Groupe	Dosage / g·kg⁻¹	IL-1 / ng·L⁻¹	IL-18 / ng·L⁻¹	Bcl-2 / ug·L⁻¹
Groupe vide	-	66.96±16.51	33.28±10.98	0.20±0.05
Groupe modèle	-	120.60±11.06²)	56.65±6.62²)	0.43±0.07²)
Groupe Qianliekang	1.54	89.20±7.28⁴)	39.12±4.31⁴)	0.26±0.06⁴)
Groupe Zishenwan brut à haute dose	5.4	93.60±15.29³)	43.28±6.91³)	0.28±0.06⁴)
Groupe Zishenwan traité au sel à haute dose	5.4	88.48±11.81⁴)	37.22±5.21⁴)	0.27±0.05⁴)
Groupe Zishenwan brut à faible dose	1.8	103.50±15.79	47.17±9.62	0.33±0.09
Groupe Zishenwan traité au sel à faible dose	1.8	98.03±14.06	46.66±6.32	0.32±0.06

3.4 Élucidation de la métabolomique sérique du mécanisme d’efficacité synergique du traitement du sel

3.4.1 Modélisation statistique multivariée

Les tracés PCA n'ont révélé aucun échantillon aberrant, avec un regroupement serré des échantillons de contrôle qualité pour valider les performances de détection LC-MS stables. Une séparation claire entre les groupes vierges et modèles a confirmé une grave perturbation de l'homéostasie métabolique sérique déclenchée par des lésions de CP. Les groupes de Zishen Wan bruts et traités au sel se chevauchaient partiellement tout en restant distinctement séparés du groupe de modèles pathologiques. Les modèles OPLS-DA ont atteint un pouvoir explicatif et prédictif robuste (R²Y > 0,6, Q² > 0,6), avec un test de permutation Q² intercept < 0, vérifiant des performances de classification fiables. Les tracés multivariés sont joints dans des documents supplémentaires.

3.4.2 Identification des métabolites sériques différentiels

Les métabolites différentiels ont été dépistés via OPLS-DA VIP > 1,0 et test t P < 0,05 :

Blanc vs Modèle : 215 métabolites différentiels

Zishen Wan vs Model traité au sel : 212 métabolites différentiels

Zishen Wan brut vs modèle : 158 métabolites différentiels

Zishen Wan traité au sel ou brut : 117 métabolites différentiels

Le Zishen Wan traité au sel a inversé les niveaux anormaux de 38 métabolites perturbés, dont 23 métabolites partagés normalisés par les formulations brutes et traitées au sel, ainsi que 15 métabolites régulés de manière unique, exclusifs au Zishen Wan traité au sel. Des listes complètes de métabolites sont fournies dans des documents supplémentaires.

3.4.3 Analyse de l’enrichissement des voies métaboliques KEGG

L'analyse d'enrichissement de tous les métabolites différentiels a identifié 14 cascades métaboliques principales restaurées par l'intervention de Zishen Wan, centrées sur le métabolisme de l'-alanine et de l'acide indole acétique.

Blanc vs modèle : les voies perturbées incluent le métabolisme de la pyrimidine, le métabolisme de l'alanine, la biosynthèse du pantothénate et du CoA ;

Zishen Wan brut vs modèle : les voies restaurées incluent le métabolisme de l'histidine, le métabolisme de l'alanine, le métabolisme du tryptophane, le métabolisme de la taurine et de l'hypotaurine, le métabolisme de l'acide arachidonique ;

Zishen Wan vs modèle traité au sel : huit voies de régulation enrichies : métabolisme de la pyrimidine, biosynthèse du pantothénate et du CoA, métabolisme de l'alanine, métabolisme de l'histidine, métabolisme de la taurine et de l'hypotaurine, métabolisme du tryptophane ;

Zishen Wan traité au sel vs brut : voies différentielles centrées sur le métabolisme du tryptophane, de l'alanine, de l'histidine et de la taurine.

Les voies avec une valeur d'impact sur la voie > 0,1 ont été intégrées dans des graphiques à bulles matriciels pour une comparaison intuitive :

-métabolisme de l'alanine : voie centrale commune régulée dans toutes les comparaisons intergroupes ;

Biosynthèse du pantothénate et du CoA, métabolisme de la pyrimidine : voies de régulation uniques activées uniquement par le Zishen Wan traité au sel ;

Métabolisme de l'arginine et de la proline : Cascade métabolique exclusive modulée par des formulations traitées au sel ;

Métabolisme du tryptophane, de l'histidine et de la taurine : régulé par le Zishen Wan brut et traité au sel, avec une ampleur réglementaire plus forte dans les groupes traités au sel. Toutes les données d'enrichissement des voies sont résumées dans le tableau supplémentaire 6 et dans des documents visuels supplémentaires.

 

Tableau 6 Principaux métabolites différentiels sériques chez les rats CP après intervention avec différentes formulations de Zishenwan

 

Non.	Métabolite	Formule chimique	Identifiant HMDB	B/A	C/B	D/B	D/C
1	-Alanine	C₃H₇NO₂	HMDB0000056	↓	↑¹)	↑²)	↑¹)
2	Acide indoleacétique	C₁₀H₉NO₂	HMDB0000197	↓	↑	↑²)	↑
3	Tryptophane	C₁₁H₁₂N₂O₂	HMDB0030396	↓	↑¹)	↑²)	↑¹)
4	Acide guanidinoacétique	C₃H₇N₃O₂	HMDB0000128	↓	↑	↑¹)	↑
5	Uracile	C₄H₄N₂O₂	HMDB0000300	↓²)	↑²)	↑²)	↑
6	5,6-Dihydrouracile	C₄H₆N₂O₂	HMDB0000076	↓¹)	↑	↑²)	↑
7	Acide aspartique	C₄H₇NO₄	HMDB0000191	↓	↑¹)	↑¹)	↑¹)
8	Arginine	C₆H₁₄N₄O₂	HMDB0000517	↓	↑	↑²)	↑
9	Acide pantothénique	C₉H₁₇NO₅	HMDB0000210	↓	↑	↑¹)	↑²)
10	Acide urocanique	C₁₀H₁₂N₂O₃	HMDB0000684	↑	↓¹)	↓¹)	↓
11	Acide uroquinique	C₁₀H₇NO₃	HMDB0000715	↑¹)	↓¹)	↓¹)	↓
12	Acide palmitique	C₁₆H₃₂O₂	HMDB0000220	↑¹)	↓	↓²)	↓
13	Acide urique	C₅H₄N₄O₃	HMDB0000289	↑²)	↓	↓	↓²)
14	Proline	C₅H₉NO₂	HMDB0000162	↑	↓	↓²)	↓

Remarque : ↑. Régulé à la hausse ; ↓. Régulé à la baisse ; A. Groupe vide ; B. Groupe modèle ; C. Groupe Raw Zishenwan ; D. Groupe Zishenwan transformé au sel ; comparaison intergroupe ¹)P<0.05, ²)P<0.01.

 

3.5 Analyse pharmacologique et métabolomique en réseau intégrative

La comparaison de Venn de 196 voies KEGG issues de la pharmacologie en réseau et de 8 voies métaboliques spécifiques au traitement du sel a identifié deux cascades principales qui se chevauchent : le métabolisme du tryptophane et le métabolisme de l'arginine-proline.

Les métabolites différentiels des groupes Zishen Wan modèle vs traité au sel et Zishen Wan brut vs traité au sel ont été importés dans Metscape pour construire des réseaux « métabolite-réaction-enzyme-gène », identifiant les gènes centraux partagés cohérents avec les cibles thérapeutiques de la pharmacologie du réseau :

Réseau (modèle vs Zishen Wan traité au sel) :

Métabolisme du tryptophane : MAOA, COMT

Métabolisme de l'arginine et de la proline : ARG1

Métabolisme de la tyrosine : COMT

Synthèse de novo des acides gras : FASN

Réseau (Zishen Wan brut ou traité au sel) : Ré-enrichissement des voies de synthèse du tryptophane, de la tyrosine et des acides gras, ainsi que de nouvelles cascades : métabolisme des purines (MPO, XDH), cycle de l'acide tricarboxylique (IDH1).

Le métabolisme du tryptophane est apparu comme la seule voie partagée à fort impact (impact > 0,1) dans les deux réseaux omiques intégrés, indiquant son rôle central dans l'efficacité anti-prostatite améliorée par le traitement du sel. Un sous-réseau cartographiant les interactions régulatrices du métabolisme du tryptophane a révélé une diaphonie entre MAOA, COMT et plusieurs isoformes du CYP450 (CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2D6, CYP3A4, CYP19A1). Des diagrammes de réseau interactifs complets sont joints dans des documents supplémentaires.

 

4 Discussion

4.1 Le traitement du sel modifie les profils chimiques des plantes pour créer une base matérielle protectrice de la prostate

Le profilage chimique LC-MS a confirmé que le traitement du sel induit des changements de concentration importants de composés bioactifs clés dans Zishen Wan, avec une élévation importante de la berbérine, de la berberrubine et de la phellodendrine. Les recherches existantes démontrent que la berberrubine régule positivement l'expression du transporteur rénal OCT2 pour améliorer l'accumulation ciblée sur les reins d'alcaloïdes de phellodendron, servant de composé marqueur principal soutenant la théorie de la MTC du « guide des herbes traitées au sel sur les méridiens rénaux ».

 

 

Cistanche tubuleuseextrait

Visiter la liste pour plus de détails

 

Service de soutien de Wecistanche-Pour plus de détails sur la coopération
E-mail :wallence.suen@wecistanche.com

 

 

La berbérine et la phellodendrine sont des herbes naturelles de MTC bien documentées pour l'inflammation de la prostate : elles suppriment les cascades PI3K/Akt/mTOR, NF-κB et MAPK liées à l'inflammation médiée par la CP, à la fibrose interstitielle et aux douleurs pelviennes. Les données pharmacocinétiques valident en outre que le traitement du sel élève la distribution de ces alcaloïdes dans les tissus rénaux, établissant ainsi une base matérielle directe pour l'efficacité anti-prostatite supérieure du Zishen Wan traité au sel.

Pour les consommateurs recherchant un soutien prostatique autonome ou complémentaire, la haute concentration de notre usineCistanche tubuleusel'extrait complète parfaitement cette formule. Contrairement aux cistanches ordinaires du désert, notreCistanche tubuleuseextraitcontient des niveaux significativement plus élevés de glycosides phényléthanoïdes (échinacoside, actéoside), produisant de puissants effets nourrissants sur les reins, anti-inflammatoires et protecteurs des voies urinaires pour amplifier les bienfaits thérapeutiques de Zishen Wan pour les hommes souffrant d'inconfort chronique de la prostate. Notre introduction complète à la production et à la R&D : https://www.xjcistanche.com/about-us ; guide détaillé de santé de la prostate cistanche : https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.

 

4.2 Zishen Wan traité au sel exerce des effets pharmacodynamiques anti-inflammatoires et réparateurs tissulaires supérieurs

IL-1 et IL-18 sont des cytokines effectrices terminales libérées par les inflammasomes NLRP3 activés, provoquant une infiltration inflammatoire persistante dans la prostatite chronique. La surexpression de Bcl-2 inhibe l'apoptose des cellules immunitaires inflammatoires, perpétuant ainsi les lésions inflammatoires pelviennes soutenues.

Les données pharmacodynamiques in vivo vérifiées, à la fois brutes et traitées au sel, Zishen Wan réduisent efficacement l'hypertrophie de la prostate, inversent les lésions du tissu glandulaire et suppriment les pro-inflammatoires sériques IL-1, IL-18 ainsi que le Bcl-2 anti-apoptotique. Les formulations traitées au sel affichaient systématiquement des tendances thérapeutiques numériquement supérieures sur tous les indicateurs d'efficacité, confirmant que le sauté au sel potentialise la capacité anti-inflammatoire de la formule pour les symptômes de la CP.

4.3 Le traitement du sel améliore la restauration de l’homéostasie métabolique via des voies métaboliques énergétiques et immunitaires uniques

La métabolomique sérique a démontré que le Zishen Wan brut et traité au sel rétablissait le métabolisme perturbé de l'alanine, élevant les niveaux sériques d'alanine et d'aspartate pour stimuler la défense antioxydante et la synthèse des protéines tissulaires pour la réparation des lésions de la prostate - avec des effets de normalisation plus forts observés dans les groupes traités au sel.

De manière unique, le Zishen Wan traité au sel inverse les perturbations de la biosynthèse du pantothénate-CoA et du métabolisme de la pyrimidine. . - l'alanine et l'acide pantothénique agissent comme des précurseurs essentiels pour la synthèse du CoA, un processus régulé positivement par la signalisation PI3K/Akt. La CoA fonctionne comme un cofacteur central pour le métabolisme énergétique cellulaire et les réactions d'acétylation anti-inflammatoires ; des niveaux élevés de pantothénate sérique, de 5,6-dihydrouracile et de -alanine dans les groupes de traitement traités au sel indiquent que Zishen Wan modifié par le sel active PI3K/Akt pour faciliter la production de CoA, restaurer l'équilibre énergétique cellulaire de la prostate et atténuer les lésions inflammatoires.

4.4 Les Omics intégrés révèlent les principaux mécanismes immuno-métaboliques de la synergie de traitement du sel

4.4.1 Métabolisme du tryptophane : cascade de régulation immunitaire centrale

Le métabolisme du tryptophane régit l’homéostasie immunitaire et la réponse inflammatoire. Son métabolite, l'acide indole acétique, agit comme un ligand AhR pour exercer une activité anti-inflammatoire robuste. L'analyse intégrée a identifié les enzymes CYP450 (CYP1A1, CYP1B1) comme médiateurs principaux convertissant le tryptophane en agonistes AhR pour équilibrer les ratios de cellules immunitaires Th17/Treg et supprimer l'inflammation.

À l'inverse, un excès de kynurénine active la signalisation AhR-STAT3 pour induire un IL-6 pro-inflammatoire, tout en stimulant également PI3K/Akt pour déclencher l'activation de l'inflammasome NLRP3 et la libération de IL-1. Le Zishen Wan traité au sel régule positivement le tryptophane sérique et l'acide indole acétique tout en abaissant les niveaux de kynurénine, en modulant le CYP450, STAT3 et d'autres cibles centrales pour bloquer les cascades pro-inflammatoires AhR/STAT3 et PI3K/Akt et rééquilibrer la fonction immunitaire dans les lésions CP.

4.4.2 Métabolisme arginine-proline : intervient dans la réparation des tissus et l'anti-fibrose

Le métabolisme arginine-proline coordonne la résolution inflammatoire et la régénération tissulaire. L'arginine agit comme précurseur pour la synthèse de l'oxyde nitrique, de la créatine et des polyamines ; Le guanidinoacétate sert d’intermédiaire essentiel à la production de créatine, qui exerce des effets protecteurs sur les tissus lors de lésions inflammatoires. La cible centrale partagée ARG1 catalyse la synthèse de polyamines pour accélérer la réparation des tissus prostatiques.

Le Zishen Wan traité au sel élève l'arginine sérique et le guanidinoacétate en régulant positivement l'activité de l'ARG1 pour stimuler la synthèse de créatine et de polyamine pour la protection des glandes, tout en abaissant les concentrations sériques de proline pour inhiber les dépôts excessifs de collagène et ralentir la progression de la fibrose interstitielle dans la CP.

4.4.3 Cascades métaboliques anti-inflammatoires supplémentaires uniques au Zishen Wan traité au sel

La comparaison différentielle des métabolites entre les groupes bruts et traités au sel a révélé des voies de régulation supplémentaires, notamment la synthèse de novo des acides gras et le métabolisme des purines :

Synthèse des acides gras : le palmitate, le produit final de cette voie, active la signalisation MAPK des macrophages pour déclencher la libération par l'inflammasome NLRP3 de IL-1 médiateurs de la douleur. La cible principale de la pharmacologie du réseau, JUN (facteur de transcription en aval MAPK) et FASN (enzyme limitant la vitesse de voie), contrôlent conjointement la biosynthèse du palmitate. Le Zishen Wan traité au sel réduit les niveaux de palmitate sérique en supprimant conjointement JUN et FASN, bloquant ainsi l'activation inflammatoire de MAPK/NLRP3 pour soulager l'inflammation et la douleur pelviennes.

Métabolisme des purines : un taux élevé d’acide urique sérique dans la CP reflète des dommages inflammatoires oxydatifs. Le Zishen Wan traité au sel régule à la baisse la XDH et la MPO pour réduire la génération d'acide urique et d'espèces réactives de l'oxygène, atténuant ainsi les lésions tissulaires oxydatives médiées par les neutrophiles dans la prostate.

4.5 Limites de la recherche et orientations futures

Bien que le Zishen Wan traité au sel ait systématiquement surpassé les formulations brutes pour tous les indicateurs pharmacodynamiques, les différences numériques entre les groupes n'ont pas atteint une signification statistique, probablement attribuable à la variation biologique individuelle et à la taille limitée de l'échantillon. Néanmoins, la tendance constante à la supériorité thérapeutique s’aligne sur des concentrations élevées d’alcaloïdes actifs et une capacité de régulation plus large de la voie métabolique observée dans les échantillons traités au sel.

En résumé, le traitement du sel régule positivement les alcaloïdes anti-inflammatoires clés de Zishen Wan, permettant la suppression synergique à plusieurs composants des voies de signalisation pro-inflammatoires PI3K/Akt et MAPK, ainsi qu'une modulation multi-cible des cascades métaboliques du tryptophane, de l'arginine, du pantothénate et des acides gras pour améliorer de manière synergique l'efficacité anti-inflammatoire, immunorégulatrice et de réparation des tissus contre la prostatite chronique.

Cette étude établit des preuves moléculaires préliminaires pour la théorie classique de la MTC selon laquelle « le traitement du sel guide les herbes vers le méridien rénal ». Cependant, les cibles principales et les voies de signalisation identifiées via la prédiction omique nécessitent une validation directe des protéines via des tests Western blot ; les changements pharmacocinétiques in vivo des constituants végétaux avant et après le traitement du sel restent non caractérisés. Des recherches de suivi permettront de vérifier le niveau de protéines des cibles principales prévues, combinées à une analyse pharmacocinétique à base de plantes pour élucider davantage la connotation scientifique complète de l'efficacité synergique du traitement du sel pour la santé des reins et de la prostate.

Pour les formulateurs de marques occidentales développant des herbes naturelles de MTC pour les suppléments de prostatite chronique, combinant l'extrait d'herbes Zishen Wan traité au sel avec notre haute puissanceCistanche tubuleuseL'extrait offre deux avantages nourrissants pour les reins et anti-prostatite, créant ainsi des produits de bien-être différenciés pour hommes adaptés à la demande des consommateurs européens et américains pour des solutions de soutien de la prostate à base de plantes.

 

Conflit d'intérêt

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt financier concurrent.

 

Références

[1] Zhang CL, Fan LH, Fan SM. Progrès de la recherche sur la pilule Zishen [J]. Pharm Clin Chin Mater Med, 2019, 10(Z2):59-64. [2] Wang WJ, Yang ZM, Li A. Progrès de la recherche sur les constituants chimiques, les effets pharmacologiques du rhizome Anemarrhenae et analyse prédictive de ses marqueurs de qualité [J]. Chine J Chin Mater Med, 2025, 50(4):934-945. [3] Li JQ, Zhang Q, Chen YT. Avancées dans les effets pharmacologiques de la déméthylèneberbérine[J]. Chin Pharmacol Bull, 2025, 41(1):7-12. [4] Zhou JH, Ding ZH, Song PR. Effet anti-inflammatoire et mécanismes du cinnamaldéhyde : une revue[J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med, 2026, est ce que je:10.13412/j.cnki.zyyl.20250929.009. [5] Su M, Tan FX, Lv J. Étude sur la base matérielle du cortex Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri Chinensis contre l'inflammation basée sur la pharmacologie de réseau, l'amarrage moléculaire et la vérification expérimentale [J]. Nat Prod Res Dev, 2022, 34(4):687-698. [6] Li SL, Lu GG, Zhao YB. Progrès de la recherche dans le traitement de la prostatite chronique/du syndrome de douleur pelvienne chronique avec la médecine traditionnelle chinoise[J]. Chine J Chin Mater Med, 2024, 49(10):2648-2653. [7] Fan SM, Yang YX, Zhang CL. Modifications de l'empreinte digitale HPLC et des composants multi-index de la paire d'herbes Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri chinensis avant et après le traitement au sel [J]. Chin Tradit Pat Med, 2023, 45(3):820-828. [8] Zhang CL, Fan SM, Li X. Étude comparative sur les effets de différentes pilules Zishen composées de rhizome d'Anemarrhenae crus ou salés et de cortex Phellodendri Chinensis sur la prostatite chronique et la flore intestinale [J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med, 2021, 37(1):34-40. [9] Su XN. Base matérielle et étude pharmacocinétique du rhizome d'Anemarrhenae traité au sel [D]. Nanjing : Université de médecine chinoise de Nanjing, 2020. [10] Zhang F, Meng L, Li PP. Différences d'absorption entre le Phellodendron chinense brut et traité à l'eau salée dans les reins de rats [J]. Chin Tradit Pat Med, 2020, 42(11):2954-2959. [11] Fan SM, Zhang CL, Wang JQ. Effet de la compatibilité des médicaments à distiques Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri Chinensis Cortex sur le métabolisme des glucolipides chez les rats diabétiques de type 2 avant et après traitement au sel [J]. Formulaire Chin J Exp Tradit Med, 2021, 27(3):22-29. [12] Xiong Y, Cheng SY, Zhang DD. Mécanisme des capsules Jingangteng pour améliorer la prostatite chronique non bactérienne basé sur le microbiote intestinal et la métabolomique [J]. Chine J Chin Mater Med, 2025, 50(19):5521-5533. [13] GeXT. Étude sur le mécanisme de traitement du « cortex Phellodendri Chinensis traité au sel entrant dans le rein » basé sur la technologie de « pêche au ligand d'absorption cellulaire » [D]. Shenyang : Université de médecine traditionnelle chinoise du Liaoning, 2025.