Abstrait

Contexte : Il a été rapporté que la gelée royale réduirait la synthèse de mélanine et inhiberait l'expression des protéines et des gènes liés à la mélanogénèse. Dans cette étude, nous évaluons l'activité anti-mélanogénique et dépigmentante de l'acide 10-hydroxy-2-décanoïque (10-HDA) issu de la gelée royale d'Apis mellifera.

Certaines études ont suggéré quecistanchepeut aider à prévenir le vieillissement cutané enréduire le stress oxydatifetinflammation, qui peuvent tous deux contribuer àles rides, points noirs, et d'autres signes de vieillissement. Cependant, il n'est pas clair sicistanchepeutéclaircir la peauouréduire la pigmentation. En bref, bien que le cistanche puisse avoir des effets bénéfiques sur la peau, il n'est pas clair s'il peut être utilisé comme un médicament fiable.blanchiment de la peauagent. Il est toujours préférable de consulter un dermatologue pour obtenir des conseils sur les moyens sûrs et efficaces de prendre soin de votre peau.

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Méthodes :Dans cette étude, nous évaluons l'activité de blanchiment de l'{{0}}HDA par rapport aux modifications de l'activité de la tyrosinase intracellulaire, de la teneur en mélanine et des niveaux de protéines liées à la production de mélanine dans les cellules de mélanome B16F1 après traitement avec {{4 }}HDA. De plus, l'effet de blanchiment de la peau a été évalué en appliquant une crème contenant 0,5 %, 1 % et 2 % de 10-HDA sur la peau de souris (C57BL/6 J) pendant 3 semaines pour observer l'effet de la DL. *-valeurs.

Résultats:Les résultats ont montré que la 10-HDA inhibait l'expression de la protéine MITF (IC50 0.86 mM) dans les cellules de mélanome B16F1. L'analyse Western blot a révélé que la 10-HDA inhibait l'activité de la tyrosinase et l'expression de la protéine 1 liée à la tyrosinase (TRP-1), du TRP-2 et du facteur de transcription associé à la microphtalmie (MITF) dans les cellules de mélanome B16F1. De plus, le 10-HDA appliqué sur la peau des souris montre un indice moyen de blanchiment de la peau significativement augmenté (valeur L).

Conclusion :Les données de validation ont indiqué le potentiel de 10-HDA pour une utilisation dans la suppression de la pigmentation de la peau. Le 10-HDA est proposé comme candidat pour inhiber la mélanogénèse, il pourrait donc être développé comme produit cosmétique de soin de la peau.

Mots clés:Gelée royale, acide 10-hydroxy-2-décanoïque, mélanogénèse, blanchiment de la peau, inhibiteur de la mélanogénèse

Arrière-plan

La gelée royale (RJ) est une jeune abeille ouvrière (Apis mellifera) sécrétée par les glandes hypopharyngées et mandibulaires, la reine en développement en a été nourrie exclusivement toute sa vie [1]. RJ fournit des valeurs nutritionnelles élevées en raison des quantités abondantes de protéines, d'acides aminés libres, de lipides, de vitamines et de sucres [2, 3]. Les protéines bioactives de la RJ sont les principales protéines de la gelée royale (MRJP), l'apisimine et la royalisation, qui ont montré des effets immunorégulateurs et antibactériens dans plusieurs études [4–6]. L'acide 10-hydroxy-2- décanoïque (10-HDA) était le principal acide gras de la JR qui possède plusieurs effets bénéfiques pour la santé humaine, qui a démontré des activités antitumorales, antibactériennes et immunomodulatrices [7 –9]. 10-HDA ne se trouve que dans RJ, il a donc été utilisé comme marqueur de qualité des produits à base de gelée royale [10, 11]. Plusieurs activités pharmacologiques de RJ ont déjà été confirmées par des expérimentations animales, et les activités pharmacologiques, y compris anti-oxydation [12, 13], anti-inflammatoire [14], anti-tumorale [15, 16], anti-agénésie [17], antibactérien [18–20], vasodilatateur [21, 22], hypertenseur [21, 22], anti-hypercholestérolémiant [23], néphroprotecteur [24] et blanchissant la peau [25]. Sur la base de sa valeur nutritionnelle et de ses avantages pour la santé humaine, de plus en plus de produits RJ commerciaux sont disponibles sur les marchés.

La couleur de la peau des animaux et des humains est liée à la teneur en pigment mélanique de la peau. Le rôle de la mélanine est de protéger la peau contre les dommages causés par les rayons UV, mais une accumulation excessive de mélanine provoque des troubles cutanés graves tels qu'une décoloration et un vieillissement cutané pigmenté et accéléré [26]. La mélanine a été synthétisée dans les mélanocytes situés dans la couche la plus interne de l'épiderme via des mécanismes de mélanogénèse [27]. La mélanogénèse est une voie de biosynthèse complexe contrôlée par la tyrosinase, les protéines 1 et 2 liées à la tyrosinase (TRP-1 et TRP-2) et le facteur de transcription associé à la microphtalmie (MITF) [28, 29]. La tyrosinase est une enzyme limitant la vitesse pour contrôler la synthèse de la mélanine. La première étape de la production de mélanine est l'hydroxylation de la L-tyrosine en L-3,4-dihydroxyphénylalanine (L-DOPA) et la conversion de la L-DOPA en dopaquinone [30]. TRP-2 catalyse la production d'acide 5,6- dihydroxy indole-carboxylique converti à partir de dopachrome, et le produit de TRP-2, 5,6- acide dihydroxy indole carboxylique en tant que substrat pour le TRP-1 converti en indole-5,6-acide quinone carboxylique, aboutissant finalement à la synthèse de mélanine [31, 32]. L'inhibition de la synthèse de mélanine par perturbation de la mélanogenèse serait le principal moyen de prévenir ou d'améliorer les troubles hyperpigmentés, tels que le mélasma et les taches de vieillesse. Par conséquent, la recherche d'un composé potentiel, sûr et efficace pour réguler à la baisse ces facteurs de mélanogénèse serait remarquable dans l'industrie médicale et cosmétique [25, 33, 34].

Il a été démontré que la gelée royale pouvait réduire la synthèse de mélanine [22], mais le principal composé actif ou le mécanisme sous-jacent à ces activités de RJ reste inconnu. Dans notre étude précédente, nous avons découvert que la 10-HDA pouvait inhiber l'activité de la tyrosinase (données non publiées). Dans cette étude, l'effet inhibiteur sur la tyrosinase par 10-HDA a été évalué plus en détail. Des modèles in vitro de biosynthèse de mélanine utilisant une culture de cellules de mélanome B16F10 et un modèle animal de souris avec application cutanée ont tous deux été réalisés pour étudier l'effet inhibiteur de la mélanogénèse de la 10-HDA.

Méthodes

Préparation de 10-HDA à partir de gelée royale

La gelée royale a été préparée par Fu-Chang Beekeeping à Hualien, Taiwan. Des larves âgées de 3- jours ont été transférées dans des tasses à cellules royales sur les cadres, et chaque cadre contenait 3 0 tasses à reine. Les cadres ont été transférés dans des ruches d'abeilles et le RJ a été collecté 72 h après le transfert des larves. Chaque ruche contient environ 25 000 abeilles [35]. Les échantillons de RJ collectés ont été conservés à -20 degré jusqu'à une analyse plus approfondie. La gelée royale (40 g) a été chauffée au reflux avec du méthanol (400 ml × 4 × 30 min) et le surnageant a été récolté par centrifugation à 4500 xg pendant 30 min. Le surnageant a été concentré sous pression réduite pour obtenir l'extrait brut (10,76 g) nommé RJM. La RJM en suspension dans du méthanol a été purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice (SiO2 CC) puis éluée avec des gradients de chloroforme et de méthanol (300:1 à 1:1) pour obtenir dix fractions analysées par CCM. Les fractions 4 et 5 présentaient des taches significatives et, par conséquent, elles ont été soumises à une purification et à une analyse supplémentaires. Les fractions 4 et 5 ont été purifiées à plusieurs reprises par SiO2 CC (éluées avec du chloroforme/méthanol, 300 : 1 à 1 : 1) et ensuite cristallisées avec de l'acétone pour obtenir de l'acide 10-hydroxy-2-décanoïque ({{32} } HDA). La structure chimique du produit purifié a été confirmée par analyse des spectres de masse RMN et GC. L'analyse quantitative 10-HDA a été déterminée par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) avec un système de pompage Waters 1525 équipé d'un détecteur Water 2489, une colonne RP-8 GP250 (4,6 mm) et un Waters Échantillonneur automatique 717plus. La phase mobile était une solution de méthanol (60:40 v/v avec de l'eau ultrapure et déionisée) ajustée avec de l'acide phosphorique à pH 2,5, filtrée à travers une membrane (0,45 μm) et dégazée pendant 5 min. Le débit de la phase mobile a été ajusté à 1,0 ml/min et la détection a été effectuée à 225 nm. Le contenu de 10HDA dans l'échantillon purifié final est de 90 %, qui est utilisé pour une analyse plus approfondie.

Culture cellulaire et 10-traitements HDA

Des cellules de mélanome B16F10 (numéro BCRC : 60 031) ont été cultivées dans du milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) additionné de 10 % (v/v) de sérum bovin fœtal à 37 degrés dans un incubateur humidifié à CO 2- contrôlé (5 %) . Les cellules ont été ensemencées à une densité cellulaire appropriée dans un 24-puits ou une 6-plaque de puits. Après 1 jour d'incubation, les cellules ont été traitées avec différentes concentrations de 10-HDA. Le milieu a été utilisé dans le groupe témoin au lieu de 10-HDA. Ensuite, les cellules ont été récoltées et utilisées pour divers tests.

Mesure de la viabilité cellulaire

La viabilité cellulaire a été mesurée par dosage du {{0}}(4,5-diméthylthiazol-2- yl)-2,5 -bromure de diphényltétrazolium (MTT) selon le méthode rapportée par Carmichael et al. [36]. Des cellules de mélanome B16F10 ont été cultivées dans du DMEM contenant 10 % de FBS et 1 % de L-glutamine (4 mM) dans un incubateur à 5 % de CO2 à 37 degrés. Les cellules cultivées (1 × 104 cellules/puits) ont été ensemencées dans une plaque 96-puits, 10-HDA (dissoute dans du diméthylsulfoxyde (DMSO)) diluée par le milieu à une concentration de 1, 0,5, 0,1 mM et de l'acide kojique 1 mM ont été ajoutés aux puits. Le milieu a été utilisé comme blanc. Après 24-h d'incubation à 37 degrés sous 5 % de CO2, le milieu a été retiré de chaque puits, puis les puits ont été lavés deux fois avec du PBS (solution saline tampon phosphate 1 M). 200 ul de solution de MTT (2 mg/ml) ont été ajoutés à chaque puits. La réaction a été terminée en ajoutant 100 μL de DMSO après 4-h d'incubation. L'absorbance de chaque puits a été mesurée à 540 nm à l'aide d'un lecteur d'immunoessai (BIO-TEK, Winooski, VT) [20–23]. La viabilité cellulaire a été déterminée par l'équation suivante : Viabilité cellulaire (pourcentage)=[(AB)/ C] × 100 %, A : volume d'absorbance de l'échantillon, B : volume d'absorbance du blanc, C : volume d'absorbance de contrôle.

Mesure de la teneur en mélanine cellulaire

La teneur en mélanine intracellulaire des cellules de mélanome B16F10 a été mesurée en utilisant la méthode modifiée décrite par Bilodeau et al., [37]. A la fin de la culture des cellules de mélanome B16F10, les cellules ont été récoltées et lavées avec du PBS. Les cellules récoltées ont été lysées dans un tampon de lyse froid (20 mM de phosphate de sodium (pH 6,8), 1 % de Triton X -100, 1 mM de fluorure de phénylméthylsulfonyle (PMSF), 1 mM d'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA)). Après centrifugation à 15,000×g pendant 30 min, les culots ont été dissous dans du NaOH 1 N contenant 20 % de DMSO pendant 1 h à 60 degrés. La teneur en protéines dans le surnageant a été déterminée en utilisant le test de Bradford. L'absorbance à 405 nm a été mesurée et la teneur en mélanine a été calculée par rapport à un standard connu de mélanine synthétique. Niveau de mélanine (pourcentage)=[(AB)/ C] × 100 pourcent ; A : volume d'absorbance de l'échantillon ; B : volume d'absorbance à blanc ; C : volume d'absorbance témoin.

Mesure de l'activité tyrosinase cellulaire

Un dosage de l'activité tyrosinase a été réalisé selon la méthode décrite précédemment par Martinez-Esparza et al., [38], avec de légères modifications. Les cellules de mélanome B16F10 ont été lysées dans du phosphate de sodium 20 mM (pH 6,8), 1 % de Triton X-100 et 1 mM de fluorure de phénylméthane sulfonyle ou PMSF, et centrifugées à 14,000 tr/min pendant 15 min. La teneur en protéines de chaque surnageant a été déterminée en utilisant le test de Bradford avec de l'albumine sérique bovine (BSA) comme protéine standard. L'activité tyrosinase a été déterminée dans un mélange réactionnel (1 ml) contenant 50 mM de tampon phosphate (pH 6,8), 2 mM L de DOPA et 300 ug de protéines surnageantes. Après incubation à 37 degrés pendant 15 min, l'absorbance à 475 nm a été mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaques. Activité tyrosinase (pourcentage)=[(AB)/ C] × 100 pourcent ; A : volume d'absorbance de l'échantillon ; B : volume d'absorbance à blanc ; C : volume d'absorbance témoin.

Analyse Western blot

Les cellules ont été lavées 3 fois dans du PBS glacé et lysées dans du tampon RIPA (pH 7,4, 50 mM tris, 0,1 % SDS, 50 mM NaCl, 1 % NP-40, 1 mM PMSF, 10 ug/mL d'aprotinine et 10 ug/mL de leupeptine). Une aliquote du lysat a été utilisée pour déterminer la teneur en protéines par la méthode de dosage de Bradford en utilisant de l'albumine de sérum bovin comme standard. Les protéines (40 ug) ont été séparées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide SDS à 10 % et transférées sur une membrane de nitrocellulose Hybond-C Extra (Amersham Bioscience, Royaume-Uni). Les membranes ont été bloquées avec du lait écrémé à 5 % dans une solution saline tampon Tris (TBS) contenant du Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 et du NaCl 150 mM pendant 30 min. Le MITF, la tyrosinase, la dopachrome tautomérase 2 (TRP-2), le TRP-1 et l'actine (comme contrôle interne) ont été détectés à l'aide d'anticorps polyclonaux de lapin, respectivement. Les membranes ont ensuite été incubées avec un anticorps secondaire polyclonal de chèvre anti-IgG-H&L de lapin (HRP). Tous les anticorps liés ont ensuite été détectés à l'aide du substrat chimiluminescent Super Signal® West Pico (ECL) (Thermo Scientific). L'intensité du signal de chaque bande a été quantifiée avec un système densitomètre Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) équipé d'un intégrateur et normalisé avec celui du contrôle interne.

Détermination de l'activité dépigmentante chez la souris

L'activité dépigmentante a été dosée via le système modèle murin par le protocole modifié de Tai et al. [39]. L'étude a été approuvée par le comité d'éthique de l'Université nationale de Formose (numéro d'approbation : 10,401). Des souris noires femelles âgées de cinq semaines (C57BL/6 J), pesant de 20 à 25 g, ont été achetées au National Animal Laboratory Center de Taipei. Tout au long de toutes les expériences, les animaux ont été logés dans une pièce climatisée à température constante (25 degrés ± 2 degrés) et maintenus sur un cycle de 12 heures de lumière: obscurité. Les animaux ont été acclimatés pendant 7 jours avant l'expérience. Après avoir rasé leurs poils, les animaux ont reçu 1- jours de repos. Des échantillons de gel contenant du 10-HDA ont été préparés en dispersant les médicaments dans de la vaseline. Un total de quarante souris ont été également réparties en cinq groupes et chaque groupe a été enduit deux fois par jour avec 0,1 g de vaseline (témoin), 1 % d'acide kojique dans de la vaseline, 0,5 %, 1 % ou 2 % de 10- HDA dans de la vaseline. . Les applications se sont poursuivies pendant 3 semaines et l'indice de blanchiment de la peau (valeur L) a été mesuré sur la même zone de peau tous les jours avec un DermaLab® Combo (Cotex Technology, Danemark), qui est un instrument colorimétrique qui utilise un blanc à haute intensité. LED comme source lumineuse. L'instrument colorimétrique est relié à un ordinateur [40]. Nous n'avons considéré que le paramètre L, et la valeur L était la luminosité relative, allant du noir total (L=0) au blanc total (L=100). La valeur L initiale de l'indice de blanchiment de la peau a été dosée à partir de la peau de chaque souris avant d'être appliquée avec les substances testées.

analyses statistiques

Tous les résultats de cette étude ont été analysés à l'aide de la procédure de modèle linéaire général disponible dans la version 9.1 du progiciel Statistical Analysis System (Statistical Analysis System Institute, 2002). Le test à plages multiples de Duncan [41] a été utilisé pour détecter les différences entre les moyennes des traitements. Chaque expérience a été menée en triple.

Résultats

Effet de 10-HDA sur la viabilité des cellules de mélanome B16F1

La dose optimale du test de viabilité cellulaire par MTT dans les cellules de mélanome B16F1 est illustrée à la Fig. 1. Elle a clairement montré que la 10-HDA n'était pas cytotoxique pour les cellules de mélanome B16F1 à des concentrations de 0.1, { {8}}.5 et 1 mM, et l'acide kojique n'était pas cytotoxique pour les cellules de mélanome à une concentration de 1 mM. La viabilité cellulaire a diminué de manière significative (20 % de réduction) dans les cellules de mélanome exposées à 1,5 mM 10-HDA (P < 0.05) (données non présentées) et 5 mM d'acide kojique. Par conséquent, les concentrations de 0, 1, 0, 5, 1 mM de 10- HDA et 1 mM d'acide kojique ont été appliquées dans des expériences ultérieures.

Inhibition de l'activité de la tyrosinase et de la synthèse de mélanine dans les cellules de mélanome B16F10 par 10-HDA

L'acide kojique est un agent anti-mélanogenèse efficace et bien connu et a été utilisé comme contrôle positif dans cette étude. La 10-HDA a significativement (p <0.05) supprimé la synthèse de mélanine et l'activité de la tyrosinase par rapport au contrôle des cellules de mélanome B16F1 non traitées. À la dose de 1 mM, la 10- HDA a induit une réduction de 28 ± 2,4 % de l'activité de la tyrosinase cellulaire (P < 0.01) et 40.4 ± 3 .0 % de réduction de la synthèse de mélanine cellulaire (P < 0,001), tandis que l'acide kojique (1 mM) a également réduit de manière significative l'activité de la tyrosinase et la synthèse de mélanine de 14,4 ± 3,7 % (P < 0,05) et de 19,3 ± 1,5 % (P < 0,001), respectivement (Figs. 2 et 3).

Suppression de l'expression des protéines tyrosinase, TRP-1 et TRP-2 dans les cellules de mélanome B16F10 par 10-HDA

Pour déterminer si la 10-HDA peut influencer l'expression de la protéine mélanogénique, une analyse Western blot a été réalisée à l'aide du lysat de cellules de mélanome B16F10 traitées avec la 10-HDA (Fig. 4). La 10-HDA a considérablement inhibé les expressions de la tyrosinase, de la TRP-1 et de la TRP-2 dans les cellules de mélanome B16F1 par rapport à celles des cellules non traitées (Fig. 4b – d). La -actine, une protéine domestique utilisée comme contrôle interne, n'a montré aucun changement. Le 10-HDA a inhibé les niveaux d'expression protéique des enzymes mélanogènes similaires à l'acide kojique.

Effet inhibiteur de la 10-HDA sur le taux de protéines lié aux facteurs mélanogènes dans les cellules B16F10

Au cours du processus de mélanogenèse dans les cellules de mammifères, le MITF joue le rôle régulateur majeur dans la synthèse de la voie des TRP, notamment TYR, TRP{{0}} et TRP-2 [25, 26]. L'effet de la 10-HDA sur l'expression de MITF a été évalué à l'aide du Western blot. Des cellules de mélanome B16F1{{10}} ont été exposées à diverses concentrations de 10- HDA (0,1, 0,5 et 1 mM), ce qui a entraîné une régulation négative de l'expression de MITF par 10-HAD ( figure 4e). La valeur IC50 pour la 10-suppression HDA de l'expression MITF a été estimée à 0,86 mM. Les présents résultats suggèrent que les niveaux de protéines MITF sont réduits par le 10-HDA. L'effet d'hypopigmentation de la 10-HDA peut être le résultat d'une expression du gène MITF régulée à la baisse, qui réprimerait alors les expressions protéiques et géniques de la tyrosinase, TRP-1 et TRP-2.

Evaluation de l'activité dépigmentante de la 10-HDA in vivo via des souris

Pour spéculer sur le dosage humain, nous avons utilisé des souris comme modèle animal pour étudier l'activité dépigmentante de la {{0}}HDA. Après le rasage, les souris ont été traitées avec 1 % d'acide kojique dans de la vaseline, 0.5 %, 1 % ou 2 % de 10-HDA dans de la vaseline, et l'indice d'éclaircissement de la peau a été mesuré et enregistré. Pour cette étude in vivo, nous avons utilisé l'acide kojique comme contrôle positif. L'acide kojique est largement utilisé comme agent de thérapie de dépigmentation de la peau dans le monde entier. Après la première semaine de traitement, le degré de blanchiment de la peau a été significativement augmenté chez les souris traitées avec 10- HDA, par rapport au contrôle, et cette augmentation s'est poursuivie jusqu'à la fin de l'expérience. L'activité dépigmentante de 0.5, 1 et 2 % de 10-HDA était comparable à celle de l'acide kojique à 1 %. Nos résultats ont révélé que la 10-HDA était capable de favoriser de manière significative le blanchiment de la peau des souris à une concentration aussi faible que 0,5 % (Fig. 5). Par conséquent, le 10-HDA semble être un bon candidat comme agent de blanchiment de la peau pour traiter l'hyperpigmentation cutanée.

Discussion

La synthèse de la mélanine est contrôlée par la cascade enzymatique complexe de tyrosinase, TRP1 et TRP2. Le degré d'inhibition des gènes et des protéines liés à la mélanogenèse joue un rôle important dans l'efficacité d'un agent dépigmentant, qui est généralement utilisé dans le traitement de l'hyperpigmentation ou des produits cosmétiques [28]. Pour élucider le véritable effet inhibiteur de la 10-HDA sur la mélanogénèse, la teneur en mélanine et l'activité de la tyrosinase intracellulaire des cellules B16F10 ont été dosées à la même plage de concentration. Les résultats des Fig. 2 et 3 ont indiqué que la 10-HDA présentait une activité inhibitrice plus élevée sur la synthèse de mélanine dans les cellules B16F10 que l'acide kojique. Les données ont révélé que 10- HDA bloque la mélanogénèse dans les cellules de mélanome B16F10.

La mélanogenèse est dominée au moins par trois protéines régulatrices, la tyrosinase, TRP1 et TRP2 dans les mélanocytes de mammifères [29]. Les expressions de TRP-1, TRP-2 et MITF ont toutes été inhibées dans les cellules de mélanome B16F10, qui ont été traitées avec 10-HDA. Le MITF est un facteur de transcription majeur pour réguler l'expression des enzymes mélanogènes, telles que la tyrosinase, le TRP-1 et le TRP-2 [42, 43]. Selon nos données de transfert Western (Fig. 4), les cellules de mammifères traitées avec 10-HDA réduiraient l'expression de toutes les enzymes limitant le débit, y compris la tyrosinase, TRP-1 et TRP-2 , et prévenir l'accumulation anormale de mélanine au cours du processus de mélanogénèse. Ces données suggèrent que 10- HDA pourrait inhiber le processus de mélanogénèse en inhibant l'expression de MITF. Dans cette étude, nous avons démontré que la 10-HDA inhibe la mélanogenèse en régulant à la baisse la production de protéine MITF, de tyrosinase et de mélanine. La voie inhibitrice de 10-HDA sur l'expression de MITF était différente des autres inhibiteurs de la mélanogénèse, tels que l'acide kojique, l'arbutine et l'acide ascorbique, qui n'affectaient pas l'expression de MITF [44, 45]. Cela suggère que la 10-HDA a un excellent potentiel pour être utilisée comme agent de blanchiment de la peau sûr et naturel pour les cosmétiques fonctionnels [46].

Le mélanome, un cancer de la peau, résulte de la transformation maligne des mélanocytes. Les mélanomes survenant dans la peau, les surfaces muqueuses et la peau acrale endommagées par le soleil chroniquement ont été causés par une suractivation de BRAF et NRAS [47], la perte du locus CDKN2A [48], la surexpression de MITF [49], la suractivation de Kit [50 ], sur-activent mGluR1 [51, 52]…et al. Dans cette étude, la 10-HDA pourrait inhiber l'expression de MITF dans les cellules de mélanome B16F10. Cela indique que la 10-HDA a le potentiel d'être l'ingrédient d'un médicament dermique ou d'un anticancéreux contre le mélanome.

RJ a été utilisé pour de nombreuses préparations dermatologiques, notamment le rafraîchissement de la peau, la régénération de la peau, le rajeunissement, la brûlure pour guérir ou la cicatrisation des plaies [53, 54]. De plus, il a été rapporté que certains acides gras insaturés dans la RJ pourraient inhiber la synthèse de mélanine et l'activité de la tyrosinase, conduisant à la régulation à la baisse de la mélanogénèse [55], et nous avons démontré que l'effet de dépigmentation de la RJ pourrait être le résultat de la présence de {{3 }}HDA. Parce que la peau des souris est similaire à celle des humains, nous avons donc utilisé des souris comme modèle animal in vivo pour examiner l'activité dépigmentante de 10-HAD. Comme le montre la figure 5, l'indice de blanchiment de la peau de la couleur de la peau a été significativement augmenté chez les souris traitées avec 10-HAD, par rapport au témoin. De plus, Koya-Miyata et al. ont évalué l'activité de promotion de la production de collagène de 10-HDA dans des lignées cellulaires de fibroblastes produisant le facteur de croissance trans-forming - 1 (TGF- 1), qui est un facteur important pour la production de collagène [55] . Par conséquent, le 10-HDA semble être un composé naturel très prometteur pour la régénération de la peau et le traitement de l'hyperpigmentation.

Conclusion

10-HDA a inhibé non seulement l'activité de la tyrosinase, mais également les expressions des enzymes mélanogènes, y compris la tyrosinase, le TRP-1 et le TRP-2, en supprimant le MITF dans les cellules de mélanome B16F10. Par conséquent, le pigment de mélanine a été réduit dans les cellules de mélanome B16F10. De plus, le modèle animal in vivo a montré l'activité dépigmentante de la 10-HDA en application topique. Ces résultats suggèrent que la 10-HDA a un candidat qui pourrait être un inhibiteur de mélanogénèse sûr et naturel pour l'industrie cosmétique, dans laquelle la recherche d'un composé naturel et efficace est l'un des objectifs très importants pour développer un meilleur produit de soin de la peau .

Abréviations

10-HDA : acide 10-hydroxy-2-décanoïque ; BSA : albumine sérique bovine ; DMEM : milieu d'Eagle modifié de Dulbecco ; DMSO : Diméthylsulfoxyde ; EDTA : acide éthylènediaminetétraacétique ; L-DOPA : L-3,4- dihydroxyphénylalanine ; MITF : facteur de transcription associé à la microphtalmie ; MRJP : protéines majeures de la gelée royale ; MTT : 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5- bromure de diphényltétrazolium ; PBS : tampon phosphate salin ; PMSF : fluorure de phénylméthane sulfonyle ou fluorure de phénylméthylsulfonyle ; CCM : chromatographie sur couche mince ; TRP-1 : protéine 1 liée à la tyrosinase ; TRP- 2 : protéine 2 liée à la tyrosinase

Remerciements

Nous remercions Mme Li-Yu Lee de Fu-Chang Beekeeping pour la préparation de la gelée royale

Financement

Ce travail a été soutenu par une subvention du ministère des Sciences et de la Technologie, Taiwan, ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 to CC Peng).

Disponibilité des données et des matériaux

Toutes les données générées ou analysées au cours de cette étude sont incluses dans cet article publié et ses fichiers d'informations supplémentaires.

Contributions des auteurs

CCP a conçu et conçu les expériences. HZS et IPL ont réalisé les expériences. CCP et PCK ont analysé les données. CCP, PCK et JCL ont fourni des réactifs/matériels/outils d'analyse. CCP et IPL ont rédigé et révisé le document. Tous les auteurs ont approuvé la version finale du manuscrit.

Informations sur les auteurs

CCP, Docteur en Biotechnologie, professeur associé au Département de Biotechnologie, Université Nationale de Formose. HZS, Master en Biotechnologie, diplômé du Département de Biotechnologie, Université Nationale de Formose. IPL, docteur en biotechnologie, directeur du département de recherche et développement, Challenge Bioproducts Co., Ltd. PCK, docteur en chimie, professeur associé au département de biotechnologie, Université nationale de Formose. JCL, directeur général chez Honey Bee Town Co., Ltd.

Approbation éthique

Toutes les expérimentations animales ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Université nationale de Formose (numéro d'approbation : 10 401) et conformes aux directives pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire.

Consentement à la publication

Non applicable dans cette section. Cet article n'est pas une étude clinique impliquant des participants humains et ce manuscrit ne contient aucune donnée clinique individuelle.

Intérêts concurrents

Les auteurs déclarent n'avoir aucun intérêt concurrent

Note de l'éditeur

Springer Nature reste neutre sur les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Détails de l'auteur

1 Département de biotechnologie, Université nationale de Formose, Huwei, Yunlin, Taïwan. 2 Département de recherche et développement, Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Taïwan. 3 Honey Bee Town Co., Ltd., n°77-2 Huaxi, 970 Hualien City, Taïwan.

Reçu : 9 mars 2017 Accepté : 21 juillet 2017

Mise en ligne : 09 août 2017

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