Abstrait:L'objectif principal de la présente étude est d'estimer, par analyse différentielle, différentes activités biologiques de la teneur en composés phénoliques totaux dans des extraits alcooliques de trois variétés de palmier dattier sensibles ou résistantes à Fusarium oxysporum. sp Albidinis. Ici, des produits à base de stilbène aux capacités antioxydantes et bioactives ont été mis en évidence dans la variété résistante Taabdount (TAAR). De plus, la fraction méthanolique de la variété de palmier dattier résistante aux TAAR contient un produit significatif, déterminé par LCMS/MS et RMN 1H, 13C, appartenant à la famille des hydroxystilbènes, qui présente des capacités antioxydantes, inhibe l'activité de la tyrosinase du champignon et active et exerce un effet protecteur sur les dommages induits par l'hypochlorite dans le protéasome 20S des cellules âgées de fibroblastes dermiques humains. Dans l'ensemble, les présents résultats indiquent que l'hydroxytoluène présent dans les Phoenix dactylifera L. résistants devrait être étudié pour comprendre la manière dont le stilbène pourrait exercer une capacité anti-vieillissement.

Le glycoside de cistanche peut également augmenter l'activité de la SOD dans les tissus cardiaques et hépatiques et réduire considérablement la teneur en lipofuscine et en MDA dans chaque tissu, piégeant efficacement divers radicaux réactifs de l'oxygène (OH-, H₂O₂, etc.) et protégeant contre les dommages à l'ADN causés par des radicaux OH. Les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche ont une forte capacité de piégeage des radicaux libres, une capacité de réduction supérieure à la vitamine C, améliorent l'activité de la SOD dans la suspension de sperme, réduisent la teneur en MDA et ont un certain effet protecteur sur la fonction de la membrane du sperme. Les polysaccharides Cistanche peuvent améliorer l'activité de la SOD et du GSH-Px dans les érythrocytes et les tissus pulmonaires de souris sénescentes expérimentalement causées par le D-galactose, ainsi que réduire la teneur en MDA et en collagène dans les poumons et le plasma et augmenter la teneur en élastine, ont un bon effet de piégeage sur le DPPH, prolonge le temps d'hypoxie chez les souris sénescentes, améliore l'activité de la SOD dans le sérum et retarde la dégénérescence physiologique du poumon chez les souris expérimentalement sénescentes Avec la dégénérescence morphologique cellulaire, des expériences ont montré que Cistanche a la bonne capacité antioxydante et a le potentiel d'être un médicament pour prévenir et traiter les maladies du vieillissement cutané. Dans le même temps, l'échinacoside dans Cistanche a une capacité significative à piéger les radicaux libres DPPH et a la capacité de piéger les espèces réactives de l'oxygène et d'empêcher la dégradation du collagène induite par les radicaux libres, et a également un bon effet réparateur sur les dommages anioniques des radicaux libres thymine.

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Mots clés:Phoenix dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (FoA); activités antioxydantes; activité anti-tyrosinase; activation du protéasome ; Analyse LC-MS/MS ; dérivés du stilbène

1. Introduction

Le palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) est une monocotylédone vivace de la famille des Arecaceae. Cet arbre revêt une importance capitale dans la vie des populations sahariennes du Sud et du Sud-Est marocain, tant sur le plan économique que social. La maladie du Bayoud, provoquée par le champignon du sol Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1], a considérablement réduit le rendement des palmiers dattiers marocains ces dernières années [2]. On estime que la FoA a disparu des deux tiers du patrimoine phénicicole marocain mais continue de détruire entre 4,5 pour cent et 12 pour cent des cultivars commerciaux de palmiers dattiers de la plus haute qualité [2]. De nombreux efforts ont été faits pour lutter contre cette maladie et exposer certains mécanismes de défense du palmier dattier [3]. Les premières études sur les éventuels mécanismes de défense du palmier dattier ont mis en évidence le rôle des composés phénoliques et du pouvoir antioxydant dans la tolérance au FoA [4,5]. L'analyse biochimique des cultivars résistants et sensibles aux composés phénoliques des racines a été la première étude biochimique qui a élucidé le bénéfice des mécanismes de défense du palmier dattier. En effet, la littérature indique que les cultivars à racines résistantes sont plus riches en 5-acide caféoyl shikimique et ses isomères de position que les cultivars à racines sensibles [5]. Ces composés ont effectivement montré une activité antifongique potentielle in vitro contre la FoA [6].

La grande capacité des antioxydants naturels à piéger les radicaux libres est à l'origine de leur popularité croissante dans les études alimentaires et médicales [7-10].

Par exemple, les espèces réactives de l'oxygène sont des facteurs aggravants des lésions cellulaires et des processus de vieillissement [11] et sont donc liées à de nombreuses maladies. En conséquence, les molécules antioxydantes peuvent aider la santé humaine en prévenant les maladies dégénératives et en ralentissant les conséquences du vieillissement [12]. Dans cette étude, nous nous intéressons à la capacité des antioxydants à favoriser l'activation du protéasome 20S et à protéger contre les dommages oxydatifs de celui-ci. Le protéasome contribue en effet au maintien de l'homéostasie cellulaire en permettant le processus cellulaire d'élimination des protéines endommagées et la destruction contrôlée des protéines à vie courte [13]. Par conséquent, l'activation du protéasome avec des antioxydants peut s'avérer être une nouvelle stratégie anti-âge [14]. De plus, ce travail vise à explorer le potentiel du contenu phénolique des racines résistantes à la FoA en tant que composés biologiques actifs.

2. Matériels et méthodes

2.1. Échantillon de plante

L'étude a été menée pour chaque échantillon avec du matériel provenant de 1 0 cultivars adultes de palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) cultivés à partir de parcelles contaminées ou non contaminées situées à Palmaria Figuig, dans le sud-est du Maroc. Les racines principales (y compris leurs racines à respiration aérienne) ont un diamètre de 0,5 à 2 cm des variétés sensibles, telles que les charas Bouffegous infectés (BI) ou non infectés (BNI). De plus, le cultivar de Taabdount (TAAR) résistant à la FoA a été collecté et les feuilles de deux plantes médicinales ont été utilisées localement comme traitement phylactique contre la FoA. De plus, du romarin (R, Rosmarinus officinalis) et de la grenade (G, Punica granatum L.) [15] ont également été collectés dans la même parcelle non contaminée où ils ont été analysés et utilisés comme témoin. Des échantillons ont été prélevés durant deux périodes de l'année, en septembre et fin janvier (entre 2013 et 2015), et conservés hermétiquement à température ambiante. Les échantillons ayant été acquis auprès d'un palmier, ils sont dûment certifiés (identification et classement) par le Ministère de l'Agriculture du Maroc [16].

2.2. Préparation des extraits

Après un lavage abondant à l'eau, les racines ou les feuilles étaient séchées à l'ombre, puis broyées au mixeur. Pour chaque échantillon (BI, BNI, TAAR, R et G), 10 mL de méthanol ont été ajoutés à 1 g de matière sèche puis laissés sous agitation pendant 4 h à température ambiante. Ensuite, ils ont été filtrés et évaporés à 37 ◦C par un roto-vap. L'extrait sec a été placé dans une solution de méthanol à une concentration finale de 10 mg/mL ou 50 mg/mL (plus tard utilisé pour doser les activités biologiques in vitro). Trois extractions indépendantes pour chaque échantillon ont été réalisées pour les dosages d'activité biologique.

2.3. Activités biologiques

2.3.1. Contenu phénolique et activités antioxydantes

La procédure décrite par Nacoulma et al. a été appliqué pour évaluer la teneur totale en composés phénoliques et en flavonoïdes totaux de chaque extrait [17], avec une adaptation finale des volumes à 200 µL à utiliser sur un lecteur de microplaques. L'absorbance à 760 nm et 510 nm, respectivement, a été déterminée par rapport à un blanc de méthanol. Courbes d'étalonnage standard de l'acide gallique (0–300 mg/L) (y=0.0083x plus 0,9106, r2=0.978) et de la quercétine (0–100 mg/L) (y {{14 }}.0008x plus 0,0597, r2=0.994), respectivement, ont été utilisés.

En utilisant le radical libre 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle, l'activité de piégeage des antioxydants a été étudiée (DPPH). En utilisant une adaptation finale des volumes à 300 µL et 275 µL, respectivement, pour utiliser un lecteur de microplaques, la capacité des extraits à diminuer le fer (III) a été évaluée, comme décrit par Nacoulma et al. [17]. Par rapport à un blanc de méthanol, l'absorbance a été mesurée à 517 nm et 700 nm, respectivement. Ensuite, à l'aide de l'équation suivante, l'activité de piégeage des radicaux libres de chaque solution a été estimée en pourcentage d'inhibition :

Une courbe d'étalonnage standard a été obtenue en utilisant l'acide ascorbique ({{0}}–100 mg/L) comme antioxydant standard (y=0.0014x plus 0.0875, r2=0.998).

2.3.2. Essai d'inhibition de la croissance de l'hélium FoAMyc

Avec une petite modification, la méthode décrite par Neri et al. [18] a été utilisé pour déterminer le degré auquel des produits chimiques purs inhibaient la croissance du mycélium FoA. Une culture de FoA âgée de 7-jour avait cinq millimètres de disques mycéliens placés sur des boîtes de Pétri avec un milieu PDA additionné des produits chimiques purs énumérés ci-dessus à 50, 75 et 100 µg/mL. Les plaques ont été incubées pendant 5 jours à 28 ◦C. Le diamètre moyen de la colonie mesuré à deux angles droits a été utilisé pour évaluer l'inhibition de la croissance du mycélium FoA. Chaque traitement consistait en trois tests utilisant trois souches différentes de FoA : FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, Belgique) et FoA Local (Palemeraie de Figuig, Maroc), ainsi qu'un contrôle négatif utilisant un milieu non ajouté.

2.3.3. Viabilité cellulaire et activité du protéasome 20S

Des fibroblastes dermiques humains normaux d'un homme de {{0}} ans (NHDF) (Promocell, Heidelberg, Allemagne) ont été utilisés, les cellules étant placées à une densité de 100,{{3 }} cellules/mL dans du RPMI à 10 % additionné de 10 % (p/v) de FBS, 1 % (p/v) de L-glutamine, 100 unités/mL de pénicilline et 100 µg/mL de streptomycine. Ils ont été conservés dans des plaques à micropuits 96- blanches ou transparentes pendant 24 h à 37 ◦ C dans un incubateur avec un environnement humidifié à 5 % de CO2. Pour le dosage de l'activité du protéasome, ainsi que pour l'évaluation des effets protecteurs sur les dommages induits par l'hypochlorite, les cellules ont ensuite été traitées avec des matériaux de test (un composé pur de 5 à 50 µg/mL, témoin positif à 0,5 et/ou 1 µM, et extraits méthanoliques de plantes de 15 à 50 µg/mL) pendant 24 h avec un maximum de 0,3 % de DMSO dans la concentration finale, simultanément, sans changement, par rapport au contrôle négatif. L'étude des effets protecteurs de l'extrait de TAAR ou de composés purs sur l'activité du protéasome signifiait que les cellules fibroblastes étaient ensuite soumises à 50 µM d'OCl- pendant 35 min (sélectionné comme optimal, sans toxicité cellulaire, oxydant-inhibiteur de la condition du protéasome 20S) [19]. Les étapes expérimentales suivantes ont été complétées par la méthodologie du fournisseur (Proteasome-Glo Chymotrypsin-Like Cell-Based Assay, Promega Corporation, USA) : premièrement, une expérience simultanée de viabilité cellulaire utilisant des tests colorimétriques au cristal violet ou MTT qui ont été effectués dans des conditions absolument similaires a été utilisé pour normaliser ce test de bioluminescence cellulaire. Les écarts-types et la fluorescence moyenne dans des échantillons en triple de deux tests distincts (n=6) sont affichés. Toutes les mesures et expériences indépendantes (n=2) ont été effectuées deux fois.

2.3.4. Effet inhibiteur sur la tyrosinase de champignon sans cellule

Pour étudier l'effet sur l'activité enzymatique, les matériaux de test (antioxydants purs ou extraits méthanoliques de plantes) ont été pré-incubés avec des enzymes dans un tampon phosphate à température ambiante. En un mot, 300 mL d'une solution de L-DOPA 5 mM à 50 tampon phosphate mM (pH 6,5) avec ou sans matériel d'essai à diverses concentrations ont été ajoutés à un 96-microplaque à puits avec 100 mL d'une solution aqueuse de tyrosinase de champignon (20 unités). Pendant 40 min, le mélange d'essai a été incubé à 25 ◦C. Après incubation, le niveau de production de dopachrome du mélange réactionnel a été mesuré par spectrophotométrie à 492 nm [20]. Une courbe d'étalonnage standard a été tracée en utilisant de l'acide gallique (0–1000 µg/mL) (y=-0,087 × plus 0,45 ; r2=0.97). Chaque mesure et expérience indépendante (n=2) a été effectuée deux fois.

2.4. Procédures d'analyses, d'isolement et d'élucidation de structure

La racine broyée (20 g) a été extraite avec 200 mL de méthanol, agitée pendant 24 h à température ambiante, filtrée, centrifugée à 10,000× g pendant 15 min, puis évaporée à 35 ◦C à l'aide d'un rotacteur appareil d'évaporation sous vide. L'extrait brut a été dilué avec 20 mL d'eau distillée, réextrait par 2 × 20 mL d'acétate d'éthyle, puis concentré à l'aide d'un système d'évaporation rotative sous vide à 35 ◦C. Le produit principal a été purifié par HPLC préparative en utilisant une colonne Waters C18 (SymmetryPrep 150 × 19 mm, granulométrie 7 µm) avec les mêmes conditions de gradient LC utilisées ci-dessus et un débit de 5 mL/min. Le pic à TA était compris entre 38,8 et 40,8 min, recueilli entre 39,2 et 40,2 min ; le volume total de la collection a été lyophilisé pour donner 27 mg du composé. MS et RMN 1H et 13C l'ont ensuite identifié.

Les analyses ont été effectuées avec un système de série LC 1200 à résolution rapide utilisant un détecteur à barrette de diodes (DAD) utilisé pour surveiller les spectres UV à 320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, Californie, États-Unis). La séparation des composés a été réalisée sur une colonne Beckman C18 (ULTRASPHERE 250 mm × 4,6 mm, granulométrie 5 µm) en utilisant un gradient de 47 min d'acétate d'ammonium 10 mM/0,2 % d'acide formique dans l'eau (v/v), pH 2,9 ({{ 13}}solvant A) et mélange 30/70 acétonitrile/méthanol (=solvant B). Le débit était de 0,8 ml/min et le solvant B a été augmenté de 5 à 35 % en 45 min et rééquilibré pendant 2 min. Dans une série avec DAD, une série ESI-QTOF 6520 (Agilent Technologies, Santa Clara, Californie, États-Unis) a été utilisée pour les analyses MS haute résolution et MS tandem ciblées (MS/MS). Les spectres ont été acquis en mode d'acquisition négatif et haute résolution (4 GHz).

Les spectres RMN 1H et RMN 13C ont été enregistrés sur un spectromètre Bruker Avance 300 fonctionnant à 300 MHz. Les désintégrations par induction libre ont été traitées avec la suite RMN MestreNova 5.3.2 de MestreLab Research SL.

2.5. Analyses statistiques

Toutes les expériences indépendantes ont été réalisées en triple. Toutes les données ont été présentées sous forme de valeurs moyennes ± ET. En utilisant la version 6 du programme GraphPad Prism, les résultats ont été analysés à l'aide du test non paramétrique de Kruskal-Wallis avec le test de comparaison multiple de Dunn. Les valeurs de p 0.05 et inférieures sont considérées comme significatives.

3. Résultats et discussion

3.1. Teneur totale en phénols et en flavonoïdes des extraits méthanoliques

En raison de leurs propriétés redox, les composés phénoliques végétaux se sont avérés avoir une variété d'impacts biologiques, y compris une activité antioxydante [21]. Le tableau 1 présente le contenu phénolique total des extraits méthanoliques de racine (500 µg/mL) de variétés sensibles de ghagras Bouffegous infectées (BI) et non infectées (BNI) par la FoA ou résistantes comme Taabdount (TAAR). Leur concentration variait de 171 ± 14 à 253 ± 47 mg d'acide gallique eq./g. La quantité la plus élevée de ces composés a été trouvée dans la variété BNI, tandis que la concentration la plus faible provenait de l'extrait de racine de méthanol de BI. Le nombre de flavonoïdes dans ces mêmes extraits (tableau 1) variait de 240 ± 25 à 406 ± 66 mg éq./g de quercétine et, encore une fois, la quantité la plus élevée était attribuée à la variété BNI. Il y a une perte d'environ 1/3 de la quantité d'un nombre total de polyphénols et de flavonoïdes entre les variétés non infectées (BNI) et les variétés infectées (BI) ou résistantes (TAAR) au FoA. Il convient donc de vérifier comment la perte de composés, qualifiée de critique pour la capacité antioxydante de la plante, peut affecter les activités biologiques qui nous intéressent.

3.2. Potentiel antioxydant des extraits méthanoliques

L'activité de piégeage des radicaux DPPH est une méthode largement utilisée pour cribler l'activité antioxydante des extraits de plantes [22]. Ce test détermine si les produits chimiques antioxydants trouvés dans les extraits sont capables de piéger l'espèce radicalaire stable DPPH. Les données expérimentales (Figure 1) révèlent que tous les extraits méthanoliques (à 100 ou 500 µg/mL) sont susceptibles d'avoir pour effet de piéger les radicaux libres avec les activités de piégeage du DPPH les plus élevées observées dans les racines de TAAR (87,0 pourcentage d'inhibition du DPPH). L'activité antioxydante ne semble pas dépendre de la présence de la quantité totale de composés polyphénoliques ou flavonoïdes. Cependant, la meilleure activité des extraits méthanoliques de racine de TAAR pourrait être due à davantage de composants donneurs d'hydrogène contenus dans l'extrait.

Le pouvoir réducteur est évalué par la capacité de l'extrait méthanolique à transformer le Fe(III) en Fe(II). Cette capacité à réduire Fe(III) peut être attribuée au nombre et à la position des groupements hydroxyles présents dans les composés phénoliques et à leur capacité à donner de l'hydrogène [23]. Le tableau 2 a montré les activités réductrices des extraits méthanoliques de nos échantillons de plantes en comparaison avec l'acide ascorbique comme standard. Les extraits méthanoliques de racines de TAAR contiennent des réductions élevées (95 ± 1 mg d'acide ascorbique eq./g), tandis que la teneur la plus faible a été obtenue à partir d'extraits de racine de BNI (27 ± 2 mg d'acide ascorbique eq./g).

Une analyse de régression a été effectuée pour corréler les résultats obtenus (coefficient de corrélation (R)). Des corrélations linéaires significatives ont été trouvées entre la teneur totale en phénols et en flavonoïdes (R {{0}}.849, p <0.05) et entre le DPPH et le dosage du pouvoir réducteur (R=0. 816, p < 0,05), mais il n'y en avait pas entre les teneurs en phénols ou en flavonoïdes des extraits méthanoliques et leurs activités antioxydantes. Enfin, tous les extraits méthanoliques ont montré des activités antioxydantes significatives contre l'activité de piégeage des radicaux DPPH et le dosage du pouvoir réducteur, mais ces activités antioxydantes ne semblent pas liées aux teneurs totales en phénols ou en flavonoïdes. Par conséquent, ces résultats impliquent qu'un type particulier de produit chimique, plutôt que la quantité de composés phénoliques ou flavonoïdes présents dans nos divers extraits, est très probablement responsable de l'activité antioxydante des extraits de plantes à l'étude. Quelques composants phénoliques précédemment décrits et très actifs peuvent également avoir un impact sur l'activité antioxydante des extraits végétaux : Indépendamment de leur concentration, les composés phénoliques présents dans le vin rouge vieilli peuvent présenter diverses propriétés antiradicalaires liées à leurs aspects structuraux [ 24].

La variété résistante au TAAR FoA présente l'activité antioxydante la plus élevée parmi les différentes variétés de palmiers dattiers. En se référant à la littérature, le développement de la résistance chez ces palmiers dattiers particuliers peut être attribué à une augmentation de la quantité de différents isomères de position de l'acide caféoyl shikimique [5].

3.3. Activité tyrosinase des champignons

L'activité tyrosinase diphénolase du champignon catalyse l'oxydation de deux dérivés de dopaquinone conduisant à la synthèse de mélanine. Les résultats présentés dans le tableau 3 montrent la capacité des composés présents dans les extraits méthanoliques de TAAR, BI et BNI à interférer avec l'hydroxylation de la l-DOPA par inhibition de l'activité de la tyrosinase de champignon. De plus, ces résultats montrent que l'extrait méthanolique de TAAR est statistiquement plus actif que les extraits de BI (p < 0.05) et BNI (p < 0,05) sur l'activité tyrosinase de champignon. Ainsi, la capacité des extraits de racine de palmier dattier à inhiber l'activité de la tyrosinase semble suivre la même tendance que pour les capacités antioxydantes.

Les tyrosinases sont principalement associées à la pigmentation de la peau, des yeux et des cheveux. En effet, les tyrosinases sont des enzymes de mélanogénèse impliquées dans les premières étapes de la biosynthèse de la mélanine, et la mélanine est associée à une protection contre les rayons ultraviolets (UV), solaires ou gamma, à une sensibilité cellulaire réduite et à une résistance de la paroi cellulaire contre les enzymes hydrolytiques [20]. A l'inverse, une surproduction de mélanine peut jouer un rôle dans des anomalies cutanées ou des maladies plus graves comme le cancer (ex. mélanome), et un excès de dopaquinone peut conduire à des maladies neurodégénératives (ex. maladie de Parkinson) [20,25]. De plus, il a été rapporté que la mélanogenèse produit du peroxyde d'hydrogène et d'autres ROS, exposant les mélanocytes humains à des niveaux élevés de stress oxydatif [26]. Plusieurs composés antioxydants naturels (phénoliques, flavonoïdes et autres) obtenus à partir de plantes ont inhibé l'activité de la tyrosinase phénolase [27,28]. Ici, l'extrait de TAAR semble contenir un ou des composés susceptibles d'inhiber le vieillissement cutané et la mélanogénèse.

3.4. Activité protéasome des extraits méthanoliques de racine de palmier dattier

Il a été rapporté que des niveaux élevés de protéasome 20S entraînent une tolérance accrue au stress oxydatif [13]. Par conséquent, la régulation de l'activité du protéasome par des extraits de racines de cultivars BI, BNI et TAAR a été étudiée. L'activité mesurée du protéasome 20S est liée à l'activité de type chymotrypsine (CT-L) dans les cellules âgées de NHDF (voir Matériels et méthodes). Comme illustré à la figure 2A, les cellules traitées avec 50 µg/mL d'extraits méthanoliques pendant 24 h ont présenté une activation significative du CT-L pour les extraits BI et TAAR et une inhibition pour BNI sans générer plus de 30 % de toxicité cellulaire. L'extrait de racine de TAAR a montré une activation engageante du protéasome par rapport à celle de 1 µM d'acide lipoïque (Ct plus) (212 % et 248 %, respectivement). Le protéasome est un complexe de protéinase cylindrique contenant un noyau de quatre anneaux empilés responsables de l'élimination du protéasome anormalement dégradé (26S) et des protéines endommagées par l'oxydation (complexe de noyau protéolytique 20S) (Ciechanover, 1998). Comme présenté dans les travaux de Hwang [29], le dysfonctionnement du protéasome peut contribuer au vieillissement de la peau humaine. En effet, il a été démontré que les cellules sénescentes vieillissantes et réplicatives ont une activité du protéasome réduite ainsi que les niveaux de protéines des sous-unités du protéasome. Le fait que les protéines cellulaires oxydées et/ou endommagées se soient accumulées plus souvent dans ces cellules suggère que la voie ubiquitine-protéasome de dégradation des protéines est impliquée dans les processus de vieillissement intrinsèques. Les figures 2B et C montrent la capacité de l'extrait méthanolique de TAAR à protéger les cellules vieillies au NHDF de l'inhibition de l'activité du protéasome 20S par l'oxydant OCl-. En effet, l'oxydant OCl- inhibe à 50 % l'activité du protéasome des cellules témoins (Ct), tandis que l'activateur le plus élevé du protéasome 20S (acide lipoïque à 1 µM, Ct plus) avec plus de 50 % d'activité d'inhibition ne parvient pas à inverser l'inhibition. de l'activité du protéasome 20S par l'OCl-, alors que toutes les autres concentrations testées (15, 50 et 75 µg/mL) d'extrait méthanolique de TAAR semblent inverser cette inhibition (0 à 19 % d'inhibition). Ces résultats suggèrent que les extraits de racine de TAAR pourraient contenir des molécules qui pourraient retarder le vieillissement cutané non seulement en stimulant l'activité du protéasome mais également en contrecarrant les effets inhibiteurs des agents oxydants. Parmi ces molécules, l'acide caféoyl shikimique est le plus susceptible d'être présent, ainsi que d'autres composés. En outre, des analyses LC-DAD-MS (MS) et RMN ont été menées pour identifier les principaux composés des extraits et sont décrites dans la section suivante.

3.5. Analyses spectrométriques

3.5.1. Analyse LC-DAD-MS d'extraits méthanoliques

L'étude comparative des racines de palmier dattier n'a révélé aucune différence qualitative, mais, à la place, des différences semi-quantitatives (dans les chromatogrammes DAD et MS) entre les cultivars (Figure 3A, D) ont été notées dans une certaine mesure. En effet, les résultats actuels ne permettent pas d'établir un lien entre la résistance des palmiers dattiers et une augmentation de la quantité de différents isomères de position de l'acide caféoyl shikimique car le cultivar résistant (TAAR) présente la plus faible abondance relative de ces composés (Figure 3C). Les trois isomères de position de l'acide caféoyl shikimique (m/z=335.0768 avec une erreur de 1,2 ppm) ont été identifiés par leurs spectres MS/MS (Figure S6) avec un fragment à m/z 179,0340, correspondant à un fragment A d'acide caféique (C9H7O4) et un fragment à m/z 135,0443, correspondant à la décarboxylation de l'acide caféique (C8H7O2). Néanmoins, un autre composé qui ne correspond pas aux acides caféoyl shikimiques (Figure 3C) et dont le temps de rétention est de 29 min avec m/z=259.0607 (ou 373.0543 pour l'adduit TFA), semble être clairement distingué entre les différents cultivars (Figure 3D). La différence dans l'accumulation de ce composé dans les racines des cultivars sensibles et résistants (0,135 pour cent), avec un ratio d'environ 1:35 (à partir de m/z=259.06, données MS), pourrait expliquer l'importance biologique activités observées pour cet extrait méthanolique de racine.

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