La base scientifique de la nouvelle application de Cistanche
Mar 09, 2022
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Soleil Weidong1, Chen fei2, Soleil yun2
(1. Hôpital de médecine traditionnelle chinoise de Yangzhou, Yangzhou 225009, Jiangsu ; 2. École de médecine, Université de Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)
RÉSUMÉ : Le modèle de rat d'hyperplasie prostatique beg nin (HBP) a été établi, et trois groupes de doses d'actéoside ont été administrés par voie orale pendant 4 semaines, pour étudier l'effet de l'actéoside distillé à partir deCistanche tubulosasur l'apoptose et l'ultra microstructure de la prostate chez les rats atteints d'HBP. Le changement ultrastructural de la prostate a été observé par microscopie électronique à transmission. Les résultats ont montré que l'apoptose de la prostate normale du rat n'était pas évidente, il y avait une faible
taux d'apoptose de la prostate dans le groupe modèle, dans l'actéoside à forte dose deCistanche tubulosatraitement, l'apoptose de la prostate du rat était significativement plus élevée que celle du modèle.
MOTS CLÉS:Cistanche, Cistanche tubulosa, actéoside; rat; commencer l'hyperplasie prostatique; apoptose; ultrastructural
Dans le processus de l'hyperplasie bénigne de la prostate (HBP), l'apoptose cellulaire fait partie des mécanismes qui retiennent actuellement l'attention. Le codage génétique le détermine et permet aux cellules de contrôler la mort cellulaire programmée en répondant à des signaux spécifiques.
Une fois que la prostate s'est développée jusqu'à la taille adulte, le taux de prolifération des cellules prostatiques est maintenu entre 1 % et 2 % grâce à l'équilibre du taux moyen d'apoptose. Une fois l'équilibre rompu, il est considéré comme la cause de l'HBP. Dans des conditions normales, les niveaux d'œstrogènes et d'androgènes et la circulation normale dans la prostate sont une sorte d'état d'auto-équilibre qui existe dans le processus de prolifération et d'apoptose. Lorsque l'équilibre entre la prolifération et l'apoptose est déséquilibré, cela entraînera une croissance et une expansion supplémentaires de la glande, ce qui provoque principalement l'expansion du compartiment des cellules épithéliales [1].
Dans cette expérience, nous avons établi un modèle d'hyperplasie de la prostate chez le rat pour observer et analyser l'effet de l'actéoside (coaction-like glycoside), l'un des composants chimiques deCistanchesur l'apoptose et les modifications ultrastructurales des cellules prostatiques de rat, afin d'évaluer l'effet de l'actéoside L'effet d'inhibition de l'hyperplasie prostatique fournit une base scientifique pour le développement et l'utilisation de nouvelles utilisations de la médecine chinoise Cistanche.
Cistancheextrait
1 Matériel et Méthodes
1. 1 animal expérimental
Cinquante rats SD mâles âgés de 6-7 semaines, de qualité propre, pesant 80-100 g, sont fournis par le Centre de médecine comparée de l'Université de Yangzhou.
1. 2 Réactifs et Médicaments
L'injection de propionate de testostérone provient de Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., la spécification est de 25 mg·mL-1 et le numéro de lot est 060708. La solution de colorant PI provient du Yangzhou University Testing Center. La teneur en Aktiside est de 945 g·kg-1, préparé par le Département d'analyse de la médecine chinoise, Université pharmaceutique de Chine.
1. 3 Équipement expérimental
Le microscope électronique à transmission Philips Tecnai 12 provient de Philips aux Pays-Bas ; Le cytomètre en flux FACSAria provient de BD aux États-Unis.
1. 4 Regroupements et Modélisation
Après castration selon la méthode de la littérature [3], des rats ont reçu une injection de 5 mg·(kg·j)-1de propionate de testostérone sur le dos des rats pendant 4 semaines pour établir un modèle d'hyperplasie de la prostate. Les rats modèles ont été répartis au hasard en groupes modèles : modèle plus groupe à dose élevée d'actéoside, groupe modèle plus à dose moyenne d'actéoside, modèle plus groupe à faible dose d'actéoside, dix rats dans chaque groupe ; dix autres rats normaux constituaient un groupe témoin.
1. 5 Méthode d'administration
Une semaine après la modélisation, les groupes à dose élevée, moyenne et faible d'actéoside ont reçu respectivement 60, 30 et 15 mg·(kg·j)-1 par gavage. Le groupe modèle et le groupe témoin ont reçu un volume égal de solution saline normale une fois par jour pendant quatre semaines, ont été pesés une fois par semaine et ont ajusté la posologie en fonction du poids corporel.
1. 6 Prélèvement et traitement des échantillons
1) Préparation du matériel et des échantillons : 24 heures après la dernière administration, peser les rats à jeun et sacrifier les rats par dislocation cervicale. Ouvrez immédiatement le bas-ventre, décollez les tissus autour de la prostate, libérez la prostate et prélevez une partie de la prostate pour l'utiliser dans un bain de glace. Homogénéisateur de tissus homogénéisé, suspension monocellulaire de prostate préparée et colorée avec la méthode en une étape à l'iodure de propidium [4] ; une autre partie du tissu prostatique a été fixée dans 25 g·L-1 de glutaraldéhyde pour préparer des coupes ultra-minces.
2) Préparez une suspension cellulaire unique : dans des conditions aseptiques, retirez complètement la prostate du rat et placez-la dans une boîte de Pétri, lavez le sang et les caillots sanguins à la surface du tissu prostatique avec du PBS et retirez la graisse environnante, les fibres en excès, et les membranes cellulaires. De la même prostate de rat, tissu prostatique frais d'une taille d'environ 0,5 cm3a été prélevé et coupé en morceaux pour préparer une suspension de cellules prostatiques [5]. Placez le bloc de tissu prostatique dans une boîte de Pétri et ajoutez une petite quantité de PBS ; utiliser des ciseaux ophtalmologiques pour couper le tissu dans un bain de glace, broyer l'homogénéisateur en une suspension, ajouter 1 0 ml de PBS, pipeter l'homogénat de tissu et utiliser un filet de nylon de 0,074 mm de diamètre de pore a été filtré dans le tube à essai, centrifugé à 1 500 tr min-1pendant 3 min, et le précipité a été lavé trois fois avec du PBS, chaque fois à 500 r min-1centrifugation à basse vitesse à court terme pour éliminer les débris cellulaires, jusqu'à 0.037 mm filtre à mailles en nylon de taille de pores pour éliminer les amas cellulaires. Compter les cellules et ajuster la concentration cellulaire à 2×109 cellules·L-1. Tacher avec 1 ml de solution de coloration PI, protéger de la lumière à 4 degrés pendant 10 min.
3) Préparation de coupes ultrafines : Pour la préparation de coupes de tissus ultrafines, voir la littérature [6].
2 Résultats et analyse
Fig. 1 Apoptose du modèle de rat BPH et action induite de l'actéoside
un. Groupe normal ; b. Groupe modèle ; c. groupe actéoside à forte dose ; ré. Groupe Actéoside à faible dose
2. 1 L'effet de l'actéoside sur l'apoptose de la prostate du rat
La figure 1 montre le pic d'apoptose détecté par cytométrie en flux, qui montre que l'actéoside a un effet pro-apoptotique. L'analyse statistique des résultats de l'apoptose cellulaire a montré que le taux d'apoptose des cellules de rat était significativement augmenté (24,7 ± 1,85) % et (16,1 ± 1,04) % après le traitement avec des doses élevées, moyennes et faibles du actéoside. , (14.5±0.68) % et le groupe normal (1.1±{{20}}.06) %, groupe modèle (9.5±0.5) %, groupe positif (9.83± 0,76) La différence de comparaison en pourcentage est significative (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Fig. 2 La radio de l'apoptose dans le modèle de rat BPH et l'effet de l'actéoside
2.2 L'effet de l'actéoside sur l'ultrastructure des cellules de l'hyperplasie prostatique.
Les observations au microscope électronique montrent que la prostate normale du rat a des noyaux complets, évidemment des nucléoles, et une distribution uniforme de la chromatine nucléaire ; le réticulum endoplasmique rugueux a la même taille, est bien disposé et n'a pas de vacuolisation. Il n'y a pas de microvillosités en forme de doigts à la surface de l'épithélium, pas de gonflement des mitochondries et peu de sécrétions dans la cavité. Les noyaux des cellules prostatiques du groupe modèle étaient déformés et rétrécis, et le cytoplasme était abondant. Le réticulum endoplasmique rugueux a été élargi en forme de kyste, et le kyste a été rempli de particules de protéines à haute densité. Les mitochondries étaient légèrement gonflées (il y avait aussi des vacuoles), Il y a des sécrétions de densité moyenne dans la cavité et des granules de sécrétion rondes denses ont été trouvées dans certaines cellules. Chez les rats traités avec l'actéoside, le noyau était intact par rapport au groupe modèle. Le noyau était concentré, la densité nucléaire augmentait, l'hétérochromatine s'accumulait, le cytoplasme avait des vacuoles et les vacuoles rugueuses du réticulum endoplasmique étaient réduites. Le groupe d'actéosides à faible dose avait des noyaux légèrement ridés. Rétrécissement, cytoplasme irrégulier et plus riche et réticulum endoplasmique rugueux réduit (Figure 3).
Le bienfait du cistanche : anti-Apoptose
3 Débat
L'apoptose est un processus de mort cellulaire programmée dans les organismes multicellulaires qui régule le développement du corps et maintient la stabilité de l'environnement interne, et les codes génétiques le déterminent.
Les cellules apoptotiques ont leurs caractéristiques morphologiques et biologiques uniques : rétrécissement de la chromatine nucléaire, dégradation et fragmentation importantes de l'ADN, rétrécissement à grande échelle des cellules, rétrécissement des membranes cellulaires et des saillies externes recouvrant les organites (comme les mitochondries et les ribosomes), et la formation de noyaux caractéristiques. fragments Corps apoptotiques, les cellules apoptotiques conservent non seulement une structure et une fonction complètes de la membrane cellulaire, mais ont également une structure complète d'organites, qui est différente de la nécrose cellulaire.
Le mécanisme moléculaire de l'apoptose cellulaire n'a pas été entièrement élucidé jusqu'à présent. Des études [7] ont montré qu'il existe de nombreux gènes impliqués dans la régulation génique de l'apoptose cellulaire.
L'apoptose est le processus de l'HBP qui attire actuellement plus d'attention. Il est déterminé par le codage des gènes et permet aux cellules de contrôler la mort cellulaire en répondant à des signaux spécifiques [1]. Une fois que la prostate s'est développée jusqu'à la taille adulte, le taux de prolifération des cellules prostatiques est maintenu entre 1 et 2 % grâce à l'équilibre du taux d'apoptose. La destruction de cet équilibre a toujours été considérée comme la cause de l'HBP [8]. Dans des conditions normales, le niveau d'œstrogènes et d'androgènes et la circulation régulière dans la prostate sont une sorte d'état d'auto-équilibre qui existe dans le processus de prolifération et d'apoptose. Lorsque la prolifération et l'apoptose sont déséquilibrées, cela entraînera la croissance et l'expansion des glandes, principalement en raison de l'expansion du compartiment des cellules épithéliales [9]. L'interruption de cet équilibre peut être due à des modifications des niveaux ou des fonctions des androgènes ; cela peut également être dû à toute réponse produite par la stimulation AR de la DHT ou à des changements dans les niveaux de facteur de croissance médiés par la DHT [2]. Dans cette étude, le FCM a détecté l'apoptose cellulaire et a constaté que le taux d'apoptose des cellules de la prostate chez les rats ayant reçu de fortes doses d'actéoside augmentait de manière significative. Les résultats de la microscopie électronique ont montré que les noyaux des cellules prostatiques du groupe modèle étaient déformés, que le réticulum endoplasmique rugueux était fortement dilaté en forme de kyste et que le kyste était rempli de particules de protéines à haute densité et qu'une vacuolisation a été trouvée. Les mitochondries étaient légèrement gonflées et des études connexes[ 10-11 ] Le rapport est cohérent.
Après l'intervention d'acteoside, le degré d'hyperplasie de la prostate chez les rats était plus faible. Le groupe à forte dose a également montré des signes précoces d'apoptose : le noyau des cellules de la prostate est resté intact et les vacuoles du réticulum endoplasmique étaient significativement plus faibles. Condensation des noyaux, augmentation de la densité nucléaire, accumulation d'hétérochromatine, similaire à la caractérisation des cellules du tissu prostatique chez le rat après castration [12-13]. Il montre que l'actéoside ducistanchepeut induire l'apoptose cellulaire chez les rats atteints d'hyperplasie de la prostate, réguler et rétablir l'équilibre de l'apoptose et de la prolifération des cellules prostatiques et jouer un rôle dans l'inhibition de la prolifération des cellules prostatiques. Les résultats de cette étude et d'études antérieures [14] indiquent que l'effet inhibiteur de l'actéoside, un composant chimique deCistanche tubulosa, sur l'hyperplasie de la prostate peut être liée à sa promotion de l'apoptose cellulaire, à la réduction de l'AR et à la surexpression de TGF-UR1. Le mécanisme d'action détaillé doit encore être étudié plus avant.
Bénéfice de Cistanche: améliore l'immunité
Références:
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