Une étude comparative des propriétés et du mécanisme anti-âge : resvératrol et restriction calorique Ⅱ

Effet du resvératrol et de la CR sur les expressions d'ARNm de SIRT1, p53 et Foxo3a dans les tissus de rats vieillissants

Conditions de stress oxydatifinduisent souvent l'expression et l'activité de SIRT1. SIRT1 module les fonctions de facteurs clés de survie, dont p53 et Foxo3a [9]. Pour déterminer l'effet du resvératrol et de la CR sur les niveaux d'ARNm de SIRT1, p53 et Foxo3a chez des rats vieillissants induits par D-Gal, des tests RT-PCR quantitatifs ont été effectués. Par rapport au groupe témoin négatif correspondant, les niveaux d'expression de l'ARNm de SIRT1 et Foxo3a ont été significativement diminués, mais le niveau de p53 a été significativement augmenté dans le groupe D-Gal (P <0.01 ; Figure 9A et 9B). De plus, le traitement simultané au resvératrol ou à la CR avec D-gal chez le rat a entraîné une augmentation des niveaux d'expression des ARNm de SIRT1 et Foxo3a, mais une diminution des niveaux de p53 par rapport au groupe témoin modèle (P <0.05). Cependant, par rapport au traitement CR, le niveau d'expression de l'ARNm de SIRT1 a été significativement augmenté dans les foies à forte dose de resvératrol plus le groupe D-gal, le niveau d'expression de l'ARNm de p53 a été significativement diminué dans les foies et les cerveaux à forte dose de resvératrol plus D- groupe gal (P < 0,05).

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Effet du resvératrol et de la CR sur les expressions de la principale protéine associée à la SIRT1-dans les tissus cérébraux de rats vieillissants

FOXO3a et p53, qui sont régulés par SIRT1, sont les molécules en aval de SIRT1. Simultanément, l'activité de SIRT1 est régulée par ses molécules en amont, par exemple, DBC1 (également connu sous le nom de KIAA1967), AROS (également connu sous le nom de RPS19BP1) et le suppresseur de tumeur HuR (également connu sous le nom de ELAVL1) [9, 10] . Pour déterminer l'effet du resvératrol et de la CR sur les niveaux de protéines de p53, FOXO3a, HuR, AROS et DBC1 chez des rats vieillissants induits par D-Gal, des tests de transfert Western ont été effectués. Par rapport au groupe témoin négatif correspondant, les niveaux d'expression des protéines FOXO3a, AROS et HuR ont été significativement diminués, mais les niveaux de p53 et DBC1 ont été significativement augmentés dans le groupe D-gal (P <0.01 ; Illustration 10). De plus, un traitement simultané au resvératrol ou CR avec D-gal chez le rat a provoqué une augmentation des expressions protéiques de FOXO3a, AROS et HuR mais a diminué les niveaux de p53 et DBC1 par rapport au groupe témoin modèle (P < 0,05). Cependant, par rapport au traitement CR, le niveau d'expression de la protéine HuR a été significativement augmenté mais le niveau de DBC1 a été significativement diminué dans les cerveaux d'une dose élevée de resvératrol plus groupe D-gal (P < 0,05). Il n'y avait aucune différence entre le groupe resvératrol plus D-gal et le groupe CR plus D-gal dans les niveaux d'expression des protéines p53, FOXO3a et AROS (P > 0,05).

Expressions de FOXO3a et p53 dans les tissus cérébraux et hépatiques

Le statut d'expression de FOXO3a et p53 a été déterminé dans les tissus cérébraux et hépatiques par immunohistochimie. L'analyse immunohistochimique de FOXO3a et p53 a révélé que l'expression de FOXO3a dans les tissus cérébraux et hépatiques était significativement diminuée et que l'expression de p53 était significativement augmentée dans le groupe D-Gal, par rapport au groupe témoin négatif (P <0.{{13} }5, Figure 11). De plus, un traitement simultané au resvératrol ou à la CR avec D-gal chez le rat a entraîné une augmentation de l'expression de FOXO3a mais une diminution de l'expression de p53 par rapport au groupe témoin modèle (P <0.05). Cependant, il n'y avait aucune différence entre le groupe resvératrol plus D-gal et le groupe CR plus D-gal dans les expressions de p53 et FOXO3a (P > 0,05).

DISCUSSION

Le processus chimique de base qui sous-tend le vieillissement a été avancé pour la première fois par lathéorie des radicaux libres du vieillissement[11], etstress oxydatifest considéré comme un facteur primordial dans le processus normal de vieillissement.Initiateur de radicaux libres AAPHavait l'habitude deinduire un stress oxydatifet établir un modèle d'oxydationsénescence cellulaire induite par le stressdans les cellules humaines IMR-90 [12, 13]. Les avantages de cette méthode sont que l'AAPH se décompose thermiquement engénérer des radicauxsans biotransformations ni enzymes, et le taux degénération radicalepourrait être facilement contrôlée en ajustant la concentration de l'initiateur [12]. AAPH s'est avéréinhiber la prolifération humaineCellules IMR- 90 en fonction de la concentration et du temps. Les résultats ont montré qu'une incubation de 2 jours avec AAPH (1 mM) augmentait significativement le pourcentage de rapport positif SA-Gal, la population de cellules apoptotiques, réduisait l'expression de l'ARNm de SIRT1 et induisait une morphologie agrandie et aplatie. Ceux-ci ont indiqué que le stress oxydatif résultant de l'AAPH conduisait les cellules IMR-90 à la sénescence. Sur la base de ce modèle de sénescence cellulaire, le traitement au resvératrol 10 μM a inhibé plus efficacement la sénescence et l'apoptose induites par l'AAPH que le traitement CR.

Le modèle animal D-gal est un modèle animal vieillissant internationalement reconnu et a été largement utilisé dans le domaine demédicaments anti-âge. Le D-gal est un nutriment physiologique qui est normalement métabolisé par la D-galactokinase et le galactose-1-phosphate chez les animaux. Cependant, un apport excessif de D-gal, qui n'est pas métabolisé par les enzymes ci-dessus mais s'accumule dans les cellules, entraîne un stress oxydatif et des dommages cellulaires [14]. Ainsi, l'administration à long terme de D-gal induit des changements qui ressemblent au vieillissement naturel chez les animaux, tels qu'une durée de vie raccourcie, un dysfonctionnement cognitif, une neurodégénérescence, un stress oxydatif, une diminution des réponses immunitaires et une formation avancée de produit final de glycation (AGE) [15]. La présente étude a indiqué la mise en place réussie du modèle de vieillissement mimétique, mis en évidence par des troubles remarquables de l'apprentissage et de la mémoire, la production de MDA, l'accumulation de lipofuscine, le déclin de la T-AOC et de la SOD et la régulation à la baisse de l'activité de la télomérase dans le cerveau. Pendant ce temps, les traitements au resvératrol ou au CR protégeaient les rats induits par le D-gal contre le stress oxydatif en augmentant l'activité des enzymes antioxydantes, en diminuant les niveaux de produits de peroxydation lipidique et en maintenant l'équilibre des systèmes oxydatifs et antioxydants. Dans les tests comportementaux et d'activité de la télomérase, le traitement au resvératrol ou à la CR pourrait inverser les troubles cognitifs induits par la D-gal et l'activité de la télomérase. De plus, les rats modèles vieillissants traités avec de fortes doses de resvératrol ont montré un effet relativement plus significatif sur le comportement que ceux traités avec la CR.

Figure 11 : Analyse immunohistochimique des expressions de p53 (A, B) et FOXO3a (C, D) dans les tissus hépatiques (A, C) et cérébraux (B, D) de rats vieillissants. Le grossissement était de 20×. NG, groupe témoin négatif ; MG, groupe témoin modèle ; RESL, groupe à faible dose de resvératrol ; Groupe RESH, haute dose de resvératrol ; CR, groupe de restriction calorique

Des études ont démontré que la RC, une réduction de 10 à 40 % de l'apport d'un régime alimentaire nutritif, pourraitretarder le vieillissement et augmenter la durée de vie, ainsi un niveau couramment utilisé de CR (réduction de 40 pour cent de l'apport alimentaire) a été appliqué chez les rats du groupe CR dans la présente étude. Néanmoins, certaines enquêtes ont révélé qu'aucun effet bénéfique de la CR sur la longévité chez les primates naturellement âgés [16]. De même, bien qu'il ait été démontré que le traitement au resvératrol induisait des effets de type CR surle métabolisme énergétiqueet le profil métabolique chez les humains obèses [17], il n'a pas amélioré la fonction métabolique chez les femmes non obèses ayant une tolérance au glucose normale [18]. La raison des différences entre ces études n'est pas claire, mais il se pourrait que la CR et le resvératrol agissent pour restaurer l'homéostasie chez les individus métaboliquement compromis, et moins chez les individus en bonne santé, une possibilité cohérente avec les fonctions connues de SIRT1 dans les études animales [19]. Par conséquent, des modèles de rats vieillissants induits par D-gal ont été appliqués pour comparer les activités anti-vieillissement du resvératrol ou du CR , plutôt que le modèle de rat naturellement vieilli.

SIRT1, une désacétylase (NAD plus) dépendante, a suscité beaucoup d'attention en raison de ses multiples rôles dans l'allongement de la durée de vie, la résistance au stress et la réduction de l'apoptose [20, 21]. De nombreuses études ont fortement laissé entendre que SIRT1 était une cible clé du resvératrol et de la CR [22]. Il existe un grand nombre de molécules en aval de SIRT1, notamment p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 et E2F1, qui sont régulées par SIRT1. Simultanément, l'activité de SIRT1 est régulée par ses molécules en amont, par exemple p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR et AROS. Le retrait aigu de nutriments active un programme transcriptionnel au niveau du promoteur SIRT1 qui est dirigé par les facteurs de transcription Foxo3a et p53. Comme p53 réprime l'expression du gène SIRT1, sa suppression par Foxo3a active la transcription de SIRT1 [23]. DBC1 et AROS ont été récemment décrits comme des régulateurs négatifs et positifs directs de l'activité de SIRT1, respectivement, HuR montre l'effet de réduction des niveaux d'expression de SIRT1 dans les cellules sénescentes âgées [9, 10].

RCretarde le vieillissement et prolonge la durée de vie médiane et maximaledans une variété d'espèces, y compris les rats, les souris, les poissons, les mouches, les vers et les levures. Cependant, de tels programmes diététiques rigoureux chez les personnes vivant librement ont soulevé des questions éthiques et méthodologiques [24]. À l'heure actuelle, l'augmentation de la durée de vie pourrait être plus importante que la simple prolongation de la durée de vie. Des recherches récentes suggèrent que le resvératrol est l'un des instigateurs les plus puissants de l'activité SIR2 parmi tous les polyphénols végétaux [25], et qu'il influence la longévité par des mécanismes similaires à ceux observés dans la restriction calorique. Ces résultats ont montré que CR et le resvératrol avaient des activités similaires de récupération des niveaux d'expression de l'ARNm de SIRT1, d'augmentation des expressions protéiques de FOXO3a, AROS et HuR et de diminution des niveaux de p53 et DBC1. Pendant ce temps, plusieurs lignes de preuves convaincantes indiquent les effets bénéfiques du resvératrol sur les systèmes neurologique, hépatique et cardiovasculaire.

MATÉRIELS ET MÉTHODES

Culture cellulaire, stress et traitements

La souche de fibroblastes diploïdes humains IMR -90 a été obtenue auprès de l'ATCC. Les cellules ont été cultivées dans un milieu essentiel minimum (MEM) (Gibco, Royaume-Uni) additionné de 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) (Gibco) à 37 degrés dans 5 % de CO2. Une fois la confluence atteinte, les cellules ont été ensemencées dans des plaques de culture 6-puits. Un jour plus tard, les cellules ont été traitées pendant 48 h avec 1 mM de dichlorhydrate de 2,2′-azobis (2- amidinopropane) (AAPH) (Sigma, États-Unis) dilué dans du MEM plus 10 % de FBS. Une incubation de 48 h avec l'initiateur de radicaux libres AAPH établit un modèle de sénescence cellulaire induite par le stress oxydatif [12, 13]. Les cellules témoins ont été incubées dans du milieu de culture seul. Après le traitement à l'AAPH, les IMR-90 ont été lavés avec du tampon phosphate froid (PBS) pH 7,4 et incubés avec un milieu de culture frais ou un milieu de culture contenant du resvératrol (groupe resvératrol) ou du MEM additionné de 3 % de FBS (groupe CR) pour une 48 h supplémentaires avant la récolte.

Activité de coloration SA-gal

L'apparition de biomarqueurs de sénescence a été contrôlée (diminution du potentiel prolifératif et augmentation de la coloration SA-gal) [26] dès le lendemain du traitement. Ensuite, les cellules ont été colorées en suivant les instructions du fabricant du kit de coloration SA-gal (CST, USA). Après coloration, au moins 300 cellules dans plusieurs champs ont été examinées et les cellules SA-gal positives ont été comptées. Ces expériences ont été répétées trois fois et les résultats ont été présentés sous forme de valeurs moyennes avec écarts-types (ET). Pour éviter une coloration non spécifique éventuellement due à la confluence cellulaire, une coloration histochimique SA-gal a été réalisée avec des cellules sous-confluentes.

Analyse par microscopie électronique à balayage

Les cellules ont été cultivées sur des lamelles dans des plaques de culture à puits 6- comme décrit ci-dessus. Une fois le resvératrol et le CR traités, les lamelles ont été retirées des plaques, puis les cellules ont été fixées dans du glutaraldéhyde tamponné au phosphate à 2,5 % et post-fixées dans du tétroxyde d'osmium tamponné à 1 %. Les spécimens fixés ont été immergés dans de l'alcool t-butylique après déshydratation à travers une série graduée d'éthanol. Les spécimens ont été lyophilisés à partir d'alcool t-butylique, puis recouverts d'or par évaporation à l'aide d'une coucheuse fine automatique (JFC-1600, JEOC, Japon) et examinés à l'aide d'un microscope électronique à balayage (JEOL, JSM{{11} }LV, Japon).

Analyse apoptotique

Après incubation au resvératrol ou au CR, toutes les cellules ont été récoltées avec de la trypsine et lavées deux fois avec du PBS, puis remises en suspension dans 400 μL de tampon de liaison à l'annexine V. Ensuite, les cellules ont été colorées en suivant les instructions du fabricant du kit de détection d'apoptose cellulaire Annexin V-FITC (BestBio, Chine). Un cytomètre en flux FACSCalibur (Becton-Dickinson, San Jose, CA) a été utilisé pour détecter la fluorescence, et le pourcentage de cellules apoptotiques a été calculé par le système logiciel interne du FACSCalibur. Environ 104 cellules ont été analysées pour chaque piste.

Procédures animales

Des rats mâles albinos Wistar, pesant environ 200 ± 10 g, ont été obtenus auprès du Experimental Animal Center du Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (SCXK 2010-0009). Les animaux ont été acclimatés pendant 2 semaines avant le dosage dans le centre animalier expérimental de l'Université de médecine chinoise du Hubei, période pendant laquelle ils ont eu libre accès à la nourriture et à l'eau ad libitum. Après acclimatation, 50 rats ont été sélectionnés et répartis en cinq groupes de dix chacun. Les animaux ont été maintenus conformément aux directives et protocoles nationaux approuvés par le Comité institutionnel d'éthique animale (IAEC).

Les rats du groupe I (groupe témoin négatif) ont reçu le véhicule seul (1 mL/kg de poids corporel de 0,9 % de solution saline) pendant 6 semaines. Les rats du groupe II (groupe témoin modèle) ont reçu du D-gal (200 mg/kg de poids corporel, Sigma Chemical, St. Louis, MO) pendant 6 semaines. Les rats du groupe III (groupe à faible dose de resvératrol) ont reçu du D-gal et du resvératrol (50 mg/kg de poids corporel) dissous dans 5 % de diméthylsulfoxyde (DMSO) pendant 6 semaines. Les rats du groupe IV (groupe à forte dose de resvératrol) ont reçu du D-gal et du resvératrol (100 mg/kg de poids corporel). Les rats du groupe V (groupe CR) ont reçu D-gal et CR (nourris avec un régime calorique inférieur de 40 % à celui des rats nourris ad libitum [27]) pendant 6 semaines. D-gal a été administré par voie intrapéritonéale, tandis que le resvératrol a été administré par voie orale pendant toute la durée de l'expérience. Les rats ont été sacrifiés le dernier jour du traitement, puis le sang, les sérums et les organes ont été immédiatement prélevés pour un dosage biologique ou stockés à -80 degrés pour une utilisation ultérieure.

Tests comportementaux

Le test du labyrinthe aquatique de Morris a été conçu pour évaluer la capacité d'apprentissage spatial et de mémoire des rats après 6 semaines après la blessure [28]. Le test du labyrinthe aquatique de Morris consistait en 4- jours d'apprentissage et d'entraînement de la mémoire et en un essai de sonde le jour 5. Les animaux étaient entraînés dans une piscine circulaire (155 cm de diamètre) avec des repères visuels. Une plate-forme d'évacuation (9,0 cm de diamètre) a été submergée à 1,0 cm sous la surface de l'eau de la piscine, qui a été maintenue à 25 ± 2 degrés . L'emplacement de la plate-forme est resté au centre du quadrant nord-ouest tout au long de la période d'entraînement de 4- jours. Chaque jour, les rats ont été entraînés pour un bloc du matin et un bloc de l'après-midi. Le rat a nagé librement jusqu'à ce qu'il trouve la plate-forme en moins de 120 s. En cas d'échec, il était placé sur la plate-forme pendant 10 s. La latence d'évasion (trouver la plate-forme d'évacuation submergée) et la vitesse de nage ont été enregistrées. L'essai de sonde a été réalisé en retirant la plate-forme et en permettant à chaque rat de nager librement pendant 120 s à l'intérieur de la piscine. Le nombre de passages de plate-forme dans le quadrant formé (où la plate-forme a été retirée) a été enregistré avec un système vidéo informatisé. La version plate-forme visible du labyrinthe aquatique n'a pas été réalisée après qu'une différence significative de vitesse de nage a été observée entre les rats traités avec D-gal et le véhicule.

Détection d'indicateurs biologiques associés au stress oxydatif

Les niveaux de MDA, SOD et T-AOC dans le sang et les tissus ont été déterminés par photométrie conformément au protocole du fabricant en utilisant des kits de dosage enzymatique disponibles dans le commerce (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR China). Toutes les expériences décrites dans cette section ont été réalisées en triple pour obtenir les moyennes et l'écart-type.

Le taux de lipofuscine a été déterminé par la méthode de Sohal [29]. En bref, nous avons pesé 200 mg de cortex cérébral, ajouté 2 ml d'extrait de chloroforme-méthanol (2:1), homogénéisé et filtré, puis lavé le résidu avec l'extrait, combiné les filtrats, ajouté l'extrait à 5 ml et mesuré l'intensité de fluorescence sur un spectromètre à fluorescence. La longueur d'onde d'émission était de 435 nm et la longueur d'onde d'excitation était de 365 nm. Le spectrofluorimètre a été standardisé pour donner une déviation de 50 aux longueurs d'onde ci-dessus avec une solution à 1 ug/ml de bisulfate de quinine dans du H2S04 0,1 M. Les résultats ont été exprimés en unités fluorescentes relatives/ml de chloroforme/g de poids de tissu humide.

Détection de l'activité TE

Pour l'extraction de la télomérase, environ 3 0 mg de tissu ont été lavés deux fois dans du PBS glacé et finalement homogénéisés dans environ 150 ml de PBS. L'activité TE a été mesurée à l'aide d'un kit ELISA TE conformément aux instructions du fabricant (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, Chine). Les limites de sensibilité des dosages étaient de 0,8 UI/L pour TE.

Analyse RT-PCR

Les niveaux d'expression de l'ARNm de SIRT1, Foxo3 et p53 dans les tissus hépatiques et cérébraux ont été analysés par analyse RT PCR. Les ARN totaux ont été extraits à l'aide de Trizol, et leur quantité et pureté ont été évaluées par un ultra microspectrophotomètre (Thermo Fisher Scientific, USA) sur la base de la mesure d'absorbance à 260 et 280 nm. Après quantification, l'ADNc a été synthétisé à l'aide d'un kit FastQuant RT (Tiangen Biotech, Pékin, Chine) selon les instructions du fabricant. Les niveaux d'expression de l'ARNm de SIRT1, Foxo3, p53 ont été mesurés par RT-PCR en utilisant TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Pékin, Chine) avec des amorces spécifiques (tableau 2). Une PCR quantitative en temps réel a été réalisée avec un système de PCR LightCycler à 480 degrés (Roche, Bâle, Suisse) en utilisant 20 μL comme volume total de chaque réaction. L'amplification par PCR a été initiée par 15 min de dénaturation à 95 degrés, puis suivie de 40 cycles de 95 degrés pendant 10 s, 59–63 degrés (température d'hybridation) pendant 20 s et 72 degrés pendant 30 s, et une incubation finale à 72 degré pendant 5 min. Le nombre de seuil de cycle obtenu pour chaque gène (valeur Ct) a été normalisé en pli de changements relatifs selon l'équation de la méthode 2-∆∆CT [30].

Tableau 2 : Liste d'amorces

Analyse Western blot

Les niveaux d'expression des protéines de p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 et DBC1 dans les tissus cérébraux ont été analysés à l'aide d'une analyse par transfert Western. La protéine totale des tissus cérébraux a été extraite à l'aide du tampon de lyse RIPA (Beyotime, Chine) conformément aux instructions du fabricant. Les concentrations de protéines ont été déterminées à l'aide du kit d'analyse de protéines BCA (Beyotime, Chine). 5 mg de protéines ont été séparés à l'aide de gels de SDS-polyacrylamide à 12 % et transférés sur une membrane PVDF (0.45 μm, Millipore, USA). Les blots ont été bloqués avec du lait écrémé à 5 % dans du TBS, puis incubés pendant une nuit à 4 degrés avec la dilution appropriée d'anticorps primaires : anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), anti-HuR (#12582, Cell Signaling Technology), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Cell Signaling Technology), action anti- - (AC004, ABclonal Technology) . Après avoir lavé les membranes pour éliminer l'excès d'anticorps primaires, les membranes ont été incubées pendant 1 h à température ambiante avec les anticorps secondaires appropriés à une dilution de 1 :2000-1 :5000 (AC004 ou AS003, ABclonal Technology). Les membranes ont été lavées 3 fois puis visualisées à l'aide de Pierce ECL Western Blotting Substrate (Thermo Scientific). -action a été utilisé comme contrôle interne.

Immunohistochimie

Les échantillons de tissus ont été fixés dans du formol tamponné neutre à 10 % dans l'heure suivant l'ablation chirurgicale et inclus en paraffine en utilisant des procédures standard. Ensuite, les échantillons fixés inclus en paraffine ont été coupés en sections de 5- μm d'épaisseur, qui ont été déparaffinées dans du xylène, réhydratées dans de l'éthanol et traitées aux micro-ondes pour la récupération de l'antigène. Les anticorps primaires dilués de manière appropriée, anti-p53 (SC -6243, Santa Cruz Biotechnology) et anti-FOXO3a (# 12829, Cell Signaling Technology), ont été incubés pendant 60 min à température ambiante dans une chambre humide. Les lames ont ensuite été rincées dans du PBS puis incubées avec l'anticorps secondaire contre l'anticorps anti-lapin et la visualisation de HRP (concentration 1:300, #074-1506, KPL). Ensuite, les lames ont été lavées et les coupes ont été développées dans la solution enzyme-substrat diaminobenzidine (DAB, Sigma). Les images des sections colorées par immunohistochimie ont été capturées par le microscope numérique Olympus (IX-73P1F, Olympus, Japon).

analyses statistiques

Les résultats ont été exprimés sous forme de moyennes ± SD pour au moins trois expériences indépendantes et ont été analysés à l'aide du logiciel SPSS 18.0. Les différences de groupe dans la latence d'évasion et la vitesse de nage dans la tâche d'entraînement du labyrinthe aquatique de Morris ont été analysées à l'aide d'une analyse de variance à deux voies (ANOVA) avec des mesures répétées, les facteurs étant le traitement et le jour d'entraînement. Les autres données ont été analysées par ANOVA unidirectionnelle suivie d'un test de Tukey post-hoc. La valeur de P inférieure à 0.05 était considérée comme significative.

CONCLUSION

Le resvératrol et le CR ont présenté des activités anti-âge similaires à la fois in vitro et in vivo, comme en témoignent leur capacité à inhiber la sénescence et l'apoptose induites par l'AAPH, et à restaurer les troubles cognitifs liés à l'âge causés par l'administration de D-gal. Leurs mécanismes anti-âge comprenaient la régulation positive de l'activité TE, la diminution des dommages oxydatifs et la régulation de la voie SIRT1. Dans l'ensemble, le resvératrol 10 μM in vitro et une dose élevée de resvératrol in vivo ont montré des activités relativement plus fortes d'anti-âge et de stimulation des niveaux de SIRT1. Ces résultats impliquaient le potentiel du resvératrol en tant que mimétique de la CR.

Abréviations

AAPH, dichlorhydrate de 2,2′-azobis (2-amidinopropane); AMPK, protéine kinase activée par l'adénosine monophosphate; ANOVA, analyse de variance ; AROS, régulateur actif de SIRT1 ; RC, restriction calorique ; DBC1, supprimé dans le cancer du sein 1 ; D-gal, D-galactose; FBS, sérum bovin fœtal; Foxo3a, boîte à fourche 3a ; HuR, Hu antigène R; MEM, milieu essentiel minimum ; PBS, solution saline tampon phosphate ; PGC-1 , coactivateur du récepteur G activé par les proliférateurs de peroxysomes-1 ; RES, resvératrol; SA -gal, -galactosidase associée à la sénescence; SD, écarts-types ; SIRT1, régulateur d'information silencieux ; TE, télomérase.

Contributions d'auteur

Conception et design de la recherche : Gang Chen ; acquisition, analyse et interprétation des données : Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu ; obtention de financement et révision critique du manuscrit pour le contenu intellectuel : Gang Chen, Ke-Li Chen ; rédaction du manuscrit : Juan Li. Tous les auteurs ont lu et approuvé la publication de ce manuscrit. REMERCIEMENTS ET FINANCEMENT

Ce travail a été financé par la China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), le projet Natural Science Foundation (81373704, 30873292).

LES CONFLITS D'INTÉRÊTS

Aucun conflit d'intérêts de la part de tous les auteurs participants.

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