Effets antioxydants des phényléthanoïdes de Cistanche Deserticola

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Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota," Tadato Tani,6 et Tsuneo Namba"

L'extrait acétone-H2O (9:1) de la tige de Cistanche deserticola a montré une forte activité de piégeage des radicaux libres. Neuf composés phényléthanoïdes majeurs ont été isolés de cet extrait. Ils ont été identifiés par RMN comme l'acteoside, l'isoacteoside, l^acetylacteoside, le tubuloside B, l'échinacoside, le tubuloside A, le syringalide A 3z-a-rhamno- pyranoside, le cistanoside A et le cistanoside F. Tous ces composés ont montré des activités de piégeage des radicaux libres plus fortes qu'un -tocophérol sur le radical 1,1 -diphenyI-2-picrylhydrazy 1 (DPPH) et xanthine/xanthine oxydase (XOD) a généré un radical anion superoxyde (Oj). Parmi les neuf composés, l'isoacteoside et le tubuloside B, dont le groupement caféoyle est en position d' du glucose, ont montré un effet inhibiteur sur la XOD. Nous avons en outre étudié les effets de ces phényléthanoïdes sur la peroxydation lipidique dans les microsomes hépatiques de rat induite par des méthodes enzymatiques et non enzymatiques. Comme prévu, chacun d'entre eux a présenté une inhibition significative à la fois de l'acide ascorbique/Fe2 plus et de l'ADP/NADPH/Fe3 plus la peroxydation lipidique induite dans les microsomes hépatiques de rat, qui étaient plus puissants que l'a-tocophérol ou l'acide caféique. L'effet antioxydant s'est avéré être potentialisé par une augmentation du nombre de groupes hydroxyles phénoliques dans la molécule.

Mots clés: Cistanche deserticola; les phényléthanoïdes;antioxydant; radical DPPH (1 ,1 -diphényl-2-picrylhydrazyle); radical anion superoxyde; peroxydation lipidique

tige de Cistanche deserticola

La tige de Cistanche spp. (Cistanche Herba, famille des Orobanchacées) est un tonique de la médecine traditionnelle chinoise utilisé pour l'insuffisance rénale caractérisée par l'impuissance, la sensation de froid dans les reins et les genoux, la stérilité féminine et la constipation due à la sécheresse de l'intestin chez le sénile.Un certain nombre de constituants dont des phénylethmoïdes (parfois appelés phénylpropanoïdes),2) des idoïdes3* et des polysaccharides4) ont été isolés de ces plantes. Sato et al5} ont rapporté que certains phényléthanoïdes de ce médicament brut ont montré un effet protecteur contre la diminution des comportements sexuels et d'apprentissage chez les souris suspendues chargées de stress. Les phényléthanoïdes sont les principaux constituants de ces plantes et sont considérés comme contribuant aux diverses actions de ce médicament.6)

Les phényléthanoïdes sont largement distribués dans le règne végétal et certains se sont avérés avoir l'activité d'anti-anoxie, 7) anti-néoplasique, 8) inhibition enzymatique, 9 * anti-inflammatoire, 10) antinéphrite, 1 n anti-micro-organisme et immunomodulation.12) Des études sur l'activité antioxydante de certains phényléthanoïdes de Pedicularis ont également été rapportées,13 -15), mais aucun rapport n'a été trouvé traitant de l'activité antioxydante des phényléthanoïdes de l'espèce Cistanche.

Il est bien reconnu que les radicaux libres sont impliqués de manière critique dans diverses pathogenèses telles que le cancer, les troubles cardiovasculaires, l'arthrite, l'inflammation, ainsi que dans les processus dégénératifs associés au vieillissement.16™18) Dans notre dépistage d'agents anti-âge issus de ressources naturelles , nous avons constaté que chacun des extraits CHC13 (C), EtOAc (E), acétone (A), acétone-H2O (9: 1) (AH) et aqueux (H) de la tige de Cistanche deserticola présentait un puissant DPPH l'activité de piégeage des radicaux (Fig. 1), parmi laquelle, la plus forte a été présentée par l'extrait d'acétone-H?.(9:1) (AH). L'extrait d'acétone-H2O (9:1) contenait un taux élevé de phényléthanoïdes, qui étaient probablement des constituants actifs des effets de piégeage des radicaux libres. Nous avons isolé les principaux phényléthanoïdes de cet extrait et étudié les effets antioxydants par leur piégeage sur le radical DPPH et le radical anion superoxyde généré par xanthine/XOD, et leur inhibition de l'acide ascorbique/Fe2 plus et ADP/NADPH/Fe3 plus peroxydation lipidique induite dans le foie de rat microsomes.

Cistanche désertique

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Réactifs Polyamide C-200 (75一150/zm) et gel de silice (Wakogel C-200, 75—150^m) poudre pour chromatographie sur colonne, DPPH (1,1 -diphényl{{ 8}}picrylhydrazyl), xanthine, XOD (xanthine oxydase), NBT (nitroblue tetrazolium), ADP, g-NADPH, acide caféique et a-tocophérol ont été achetés chez Wako Pure Chemicals, Osaka, Japon. Le bis(diméthylacétal) de malonaldéhyde provenait de Tokyo Kasei, Tokyo, Japon. La BSA (albumine de sérum bovin) et l'allopurinol provenaient de sigma,St. Louis, États-Unis D'autres produits chimiques étaient de qualité analytique.

Instruments L'absorbance UV a été mesurée sur unSpectrophotomètre d'enregistrement Shimadzu UV-2200, les spectres RMN ont été transportés sur un système de RMN JEOL GX-400 ou JEOL JNM-LA 400WB FT.

Matériel végétal Un médicament brut commercial (produit à Nei Monggol, acheté au marché des médicaments bruts de Bozhou, province d'Anhui, Chine, 1995 ; le spécimen de référence, TMPW n° 15479 déposé au Musée de la matière médicale, Centre de recherche analytique pour l'ethnomédecine, Centre de recherche Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) ont été identifiées comme étant des tiges de Cistanche deserticola YC Ma en comparant ses caractères morphologiques et anatomiques avec un échantillon authentique fourni par le professeur Dawen Shi, Département de pharmacognosie, Université médicale de Shanghai, Chine.

Extraction et isolement Le médicament brut en poudre (5,87 kg) a été extrait consécutivement avec CHC13 (12, 9 1x2) et EtOAc (9 1 x 3) à température ambiante et reflué avec de l'acétone (9 1 x 3), acétone-玦0 (9:1,91x3) et H2O (7.5 1x4) pour donner les extraits de CHC13 (C) (28.7g), EtOAc (E) ( 13,4 g), acétone (A) (95 g), acétone-H2O (9:1) (AH) (175 g) et H2O (H) (2,51 kg), respectivement. Une portion de lOOg de l'extrait acétone-H2O (9:1) a été soumise à une colonne de polyamide C-200 (4{{50}}0 g) et éluée avec H2O ({{41 }}) puis MeOH (5 1). L'éluant MeOH (20 g) a été chargé dans une colonne de gel de silice (600 g) et élué avec CHCl3-MeOH-H2O (8 : 3 : 0,3) (5 1) pour donner 10 fractions. Chaque fraction a été soumise à une colonne Sephadex LH-20 et éluée avec divers rapports de MeOH-H2O (0 à 50 % ); neuf principaux phényléthanoïdes 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , 9 (75 mg) ont été obtenus.

Animaux Mâles Std : Des rats Wistar (âgés de 8 semaines, 230 à 250 g) ont été utilisés. Les animaux ont été achetés au Shizuoka Laboratory Animal Center et ont été nourris avec un granulé de laboratoire (Clea Japan) et ont reçu de l'eau à volonté.

Préparation de suspension microsomale de foie de rat Une fraction microsomale de foie de rat a été préparée par le procédé de Kiso et al. 19) mais sans prétraitement au phénobarbital. Après que les animaux eurent jeûné pendant 24 h, les foies ont été perfusés avec une solution glacée de 0,9 % de NaCl in situ, puis coupés en morceaux fins et homogénéisés dans une solution froide de KC1 à 1,15 % (1.{{9} } ml/g de poids de foie humide). L'homogénat a été dilué quatre fois avec une solution de KC1 à 1,15 % et centrifugé à 8 000 g pendant 20 min à 4 degrés. La fraction surnageante a ensuite été récupérée et ultracentrifugée à 105 000 g pendant 60 min. Le culot obtenu a été remis en suspension dans le même volume de solution de KCl à 1,15 %. La teneur en protéines a été déterminée par la méthode de Lowry et en utilisant l'albumine comme standard.

Préparation des échantillons Les échantillons testés ont été dissous dans de l'eau ou de l'éthanol et dilués avec de l'eau à diverses concentrations. Les concentrations finales d'éthanol étaient inférieures à 1 % dans tous les systèmes de dosage, à l'exception du dosage de piégeage des radicaux DPPH. L'éthanol à une concentration finale inférieure à 1 % n'a montré aucun effet sur ces systèmes de dosage.

Effet de piégeage des radicaux DPPH L'effet de piégeage correspondait à l'intensité de l'extinction des radicaux DPPH, comme décrit par Hatano et al. 30 min à température ambiante, puis la densité optique a été mesurée à 520 nm. Pour le blanc, EtOH a été utilisé à la place de la solution DPPH, et pour le contrôle, H2O a été utilisé à la place de la solution échantillon. Les valeurs IC50 ont été calculées à partir de droites de régression où l'abscisse représentait la concentration du composé testé et l'ordonnée le pourcentage moyen de réduction du radical DPPH à partir de quatre tests séparés.

Effets sur la génération de radicaux anion superoxyde La production d'anions superoxyde dans le système xanthine/XOD a été déterminée en utilisant une demi-taille de la méthode d'Imanari et al.22) Un mélange composé de 900/zl de 0.05m Na2CO3 (pH 10.2), 50 /il chacun de 3mM xanthine, 3mM EDTA, 1.5mg/ml BSA, 0.75mM NBT et l'échantillon testé a été ajouté avec 50 de 0.1 mg/ml XOD pour commencer le réaction. Après incubation pendant 30 minutes, la réaction a été arrêtée avec 50 ul de CuCl2 6 mM et l'absorbance a été mesurée à 560 nm. La solution témoin a été préparée de la même manière, mais 50 /il de H2O ont été utilisés à la place de la solution échantillon. Dans la solution à blanc, 50 /il de H2O ont été utilisés à la place de la solution XOD. Les valeurs de CI50 ont été calculées à partir de lignes de régression où l'abscisse représentait la concentration logarithmique du composé testé et l'ordonnée le pourcentage moyen d'inhibition de la réduction de NBT de quatre dans des tests dépendants.

Effets inhibiteurs sur l'activité de XOD Les effets inhibiteurs sur l'activité de XOD ont été estimés par la méthode de Hatano et al.* avec quelques modifications. Un mélange composé de 600/11 d'un tampon (0.1 m solution de phosphate, pH 7,5), 50 以 de solution XOD (0,068 U/ml dans le tampon) et 50 卩 1 de solution d'échantillon ont été pré-incubés pendant 10 min à 25 degrés. Ensuite, 300 ul de solution de xanthine (0,1 mM dans du tampon) ont été ajoutés au mélange, et la solution résultante a été incubée pendant 30 minutes à 25 degrés. La réaction enzymatique a été terminée en ajoutant du HCl 1 n (100 ug/zl) et l'absorbance du mélange réactionnel a été mesurée à 295 nm. La concentration d'acide urique formé dans le mélange a été calculée à partir de l'absorbance, après soustraction de l'absorbance de la solution à blanc qui a été préparée comme décrit ci-dessus, sauf que la solution XOD a été remplacée par 50 ug de tampon. Les effets inhibiteurs sur XOD ont été exprimés par le pourcentage d'inhibition (pourcentage) de la formation d'acide urique par rapport à celui du contrôle, dans lequel de l'eau a été utilisée à la place de la solution d'échantillon. L'inhibiteur XOD bien connu, l'allopurinol, a été utilisé comme contrôle positif.

Effets inhibiteurs sur la peroxydation lipidique dans les microsomes hépatiques de rat La peroxydation lipidique dans les microsomes hépatiques de rat induite non enzymatiquement par ascorbique/Fe2 plus et induite enzymatiquement par ADP/NADPH/Fe3 plus a été mesurée par la méthode de Kiso et al.19) avec quelques modifications .

a) Acide ascorbique/Fe2 plus peroxydation lipidique induite dans des microsomes de foie de rat : le mélange réactionnel était composé de 390/11 de 100 mM de KC1/45 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 50 pl de fraction microsomale dans 1,15 % de KC1 (20 mg de protéines/ml) et 50 µm d'une solution d'échantillon. Après avoir ajouté 10/11 d'acide ascorbique 10 mM/FeSO4 0,5 mM, puis incubé à 37 degrés pendant 20 min, le mélange réactionnel a été refroidi dans de la glace pour arrêter la réaction. La peroxydation lipidique a été mesurée par la méthode à l'acide thiobarbiturique24) et exprimée en production de MDA (malondialdéhyde). Ce

b) ADP/NADPH/Fe3 plus peroxydation lipidique induite dans des microsomes de foie de rat : le mélange réactionnel contenait 290贝 de 100 mM de KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/il de suspension microsomale dans 1,15 % de KC1 (20 mg de protéines/ml) et 50 以 d'échantillon dans de l'eau. Cinquante de ADP 20 mM fraîchement préparé, 50//I de NADPH 1 mM et 10 de FeCl3 2 mM ont été ajoutés puis incubés à 37 degrés pendant 30 min. La peroxydation lipidique a été mesurée et la CI50 a été calculée par la méthode ci-dessus.

bienfaits du cistanche : protège le foie

RÉSULTATS

Détermination de la structure Par comparaison directe de leurs données ^H-NMR et 13C-NMR avec la littérature,2* les neuf phényléthanoïdes ont été identifiés comme étant le 2,-acétylactéoside (1), le cistanoside A (2), le tubuloside A (3), l'échinacoside ( 4), l'actéoside (5), le syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6), le tubuloside B (7), l'isoactéoside (8) et le cistanoside F (9), respectivement (Fig. 2). Cependant, pour l'actéoside, un composé représentatif des phényléthanoïdes, les attributions des signaux 13C-RMN de C-3 et C-4 dans la fraction aglycone, C-3, C-4 , C-5 et C-6 dans la fraction caféique dans les rapports précédents25) prêtaient à confusion. Par la méthode de 2D-NMR telle que HMBC et HMQC, nous avons attribué sans ambiguïté les données 13C-NMR de l'actéoside en tant que fraction aglycone Cl : 131,49, C-2 : 117,14, C-3 : 146,07, C{ {41}} : 144,62, C-5 : 116,34, C-6 : 121,29, Ca : 72,33, C# 36,54 ; fraction caféoyle Cl : 127,63, C-2 : 115,26, C-3 : 146,79, C-4 : 149,78, C-5 : 116,55, C-6 : 123,24 , Ca : 168,33, Cg : 114,68, Cy : 148,04; fraction glucose C-l' : 104,16, C-2' : 75,97, C-3' : 81,66, C4 : 70,39, C-5' : 76,16, C-6' : 62,35 ; et fraction rhamnose : Cl : 102,99, C-2 : 72,22, C-3 : 72,05, C-4 : 73,79, C-5 : 70,58, C-6 : 18h46.

Les relations structure-activité ont été étudiées pour ces neuf phényléthanoïdes par leur radical DPPH et leurs activités de piégeage des radicaux anion superoxyde générés par la xanthine/XOD, l'acide ascorbique/Fe2 plus et la peroxydation lipidique induite par ADP/NADPH/Fe3 plus dans les microsomes hépatiques de rat. L'acide caféique et l'a-tocophérol, qui sont des piégeurs de radicaux libres et des antioxydants bien connus, ont été utilisés comme substances témoins positives.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalide A S'-a-rhamnopyranoside (6) (IC5O=5.52 /zm) > cistanoside F (9) (IC50=6.29 /im) > a-tocophérol (IC{{10 }}.2//m). Tubuloside B ⑺, échinacoside (4), 2/-acétylacétoside (1), tubuloside A (3), actéoside (5) et isoactéoside (8) (IC5O=2.99一3.49 /im), dont chacun a quatre groupes hydroxyle phénoliques dans la molécule a également montré une activité plus forte que le cistanoside A (2) dont le 3-OH du fragment aglycone a été méthylé. Le syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) qui n'a qu'un seul groupe OH dans le fragment aglycone a montré une activité relativement faible. Le cistanoside F (9), qui n'a que deux groupes hydroxyle situés au niveau de la fraction caféoyle mais n'a pas d'aglycone phényléthanol, a présenté l'activité la plus faible.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanoside A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tocophérol (IC50 > 10 〃m).

Effets inhibiteurs sur l'activité de XOD Seuls l'isoactéoside (8) et le tubuloside B (7), dont la fraction caféoyle est en position 6z du glucose, ont eu des effets inhibiteurs sur l'activité de XOD et d'autres phényléthanoïdes, qui ont une fraction caféoyle au ^- position du glucose, n'a montré aucun effet aux concentrations testées (25-200 m) (tableau 1). isolé neuf composés phényléthanoïdes majeurs à partir de cet extrait et déterminé leurs structures par RMN. système comme tubuloside B (7)M2'-acétylactéoside (1) iso-actéoside (8) échinacoside (4) tubuloside A (3) côté M actéo (5) > syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9) ; dans le système ADP/NADPH/Fe3 plus comme tubuloside B (7)2,-acétylactéoside (^^iso actéoside (8) actéoside (5) > tubuloside A (3) > côté échinaco (4) > syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6)> cistanoside A (2)> cistanoside F (9). Ces deux ordres étaient similaires à ceux des tests de piégeage des radicaux libres ci-dessus, en particulier dans le test de piégeage des radicaux DPPH. Pourtant, le nombre de groupes hydroxyle phénoliques dans la molécule a joué le rôle le plus important dans l'inhibition de la peroxydation lipidique dans les microsomes hépatiques de rat.

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DISCUSSION

Nous avons testé les activités de piégeage des radicaux libres des différents extraits au solvant de la tige de Cistanche deserticola sur le radical DPPH et avons constaté que l'extrait acétone-H2O (9:1) présentait la plus forte activité. Pour trouver les constituants actifs de l'activité de piégeage des radicaux libres, nous avons isolé neuf composés phényléthanoïdes majeurs de cet extrait et déterminé leurs structures par RMN.

Les effets antioxydants de ces phényléthanoïdes ont été évalués par leur activité de piégeage des radicaux libres et leur activité anti-peroxydation lipidique. L'a-tocophérol largement connu a été utilisé comme substance témoin positive. Comme lela lipophilie de l'a-tocophérol peut affecter ses activités dans les systèmes de dosage actuels, sauf dans le dosage de piégeage des radicaux DPPH, nous avons pris l'acide caféique comme autre substance témoin positive.

Dans un premier temps, nous avons effectué des tests sur les activités de piégeage des radicaux libres. Tous les 9 phényléthanoïdes testés ont sans aucun doute montré des activités de piégeage des radicaux DPPH et des anions superoxydes plus fortes que l'a-tocophérol, mais certains étaient plus forts et d'autres plus faibles que l'acide caféique. L'activité de piégeage des radicaux a augmenté avec une augmentation du nombre de groupes hydroxyles phénoliques. On pense que le parallélisme incomplet des activités de piégeage des radicaux DPPH et des anions superoxydes est dû aux caractères différents entre les espèces radicalaires et certains autres facteurs impliqués dans ces deux systèmes de réaction,21,26) car le radical DPPH est un radical induit chimiquement qui réagit avec des piégeurs de radicaux d'une manière chimique simple, tandis que le radical anion superoxyde est généré par la xanthine/XOD, une réaction enzymatique.

Si les phényléthanoïdes inhibent le radical anion superoxyde généré par la xanthine/XOD, l'inhibition peut être considérée comme le résultat de leur activité de piégeage des radicaux anion superoxyde ou (et) de leur inhibition de l'enzyme XOD23). effets inhibiteurs de la xanthine oxydase. Il est intéressant de noter que, sélectivement, seuls l'isoacteoside (8) et le tubuloside B (7), dont le groupement caféoyle est en position 6/ du glucose, ont démontré une inhibition. Ils ont montré un effet à la concentration de 25-200jtiM sur 3,4xlO^3U/ml (10ug/ml) de XOD, bien que l'activité ait été plus faible que l'allopurinol ; d'autres composés, dont le groupement caféoyle est en position 《 du glucose, n'ont montré aucun effet inhibiteur. Ce résultat a fourni le premier rapport sur l'effet inhibiteur des phényléthanoïdes sur l'enzyme XOD. Chan et al21) ont rapporté que l'acide caféique et certains de ses analogues avaient des effets inhibiteurs sur l'activité XOD, cependant, nous n'avons trouvé aucun effet de l'acide caféique dans les conditions de réaction actuelles. Dans ce test, la concentration en XOD était similaire à celle du test d'effet sur la génération de radicaux anion superoxyde (4,3 /zg/ml), mais la concentration en composés était beaucoup plus élevée que dans ce dernier. Par conséquent, l'inhibition de la génération Oj par ces phényléthanoïdes est due à leur activité de piégeage des radicaux, mais pas à leur activité inhibitrice de l'enzyme XOD.

Cette réaction radicalaire en chaîne conduisant finalement à la peroxydation lipidique est bien connue.28,29) Nous avons donc étudié ces composés phényléthanoïdes pour leurs effets sur la peroxydation lipidique dans les microsomes hépatiques de rat induite par le système enzymatique ADP/NADPH/Fe3 plus et celle induite par le système non enzymatique acide ascorbique/Fe2 plus . Tous ces composés ont montré des effets de peroxydation anti-lipides plus forts que l'acide caféique et l'a-tocophérol dans les deux systèmes. Il est généralement admis que les deux systèmes sont catalysés par des ions fer, soit Fe2 plus ou Fe3 plus , impliqués dans les radicaux peroxyle lipidiques,30,31) et que le radical hydroxyle OH joue le rôle le plus important dans la peroxydation lipidique,32 _34) bien que l'initiation de OH ait été remise en question dans certains rapports.35祁6) D'autre part, le radical anion superoxyde OJ, qui est le produit principal de l'attaque e_ sur O2 dans la chaîne radicalaire, est plutôt mal radical réactif et n'entraîne pas la peroxydation lipidique elle-même. Bien que ces phényléthanoïdes aient montré une activité de piégeage plus faible sur le radical anion superoxyde que l'acide caféique, ils ont montré une action anti-peroxydation lipidique beaucoup plus forte que ce dernier. Par conséquent, nous pensons qu'ils peuvent, comme certains autres polyphénols aromatiques briseurs de chaîne, inhiber la peroxydation lipidique ci-dessus dans les microsomes hépatiques de rat en chélatant les ions Fe2 plus ou Fe3 plus, et également en piégeant le radical superoxyde Oj pour décomposer la réaction radicalaire en chaîne. .37,38) De plus, ils peuvent également piéger des espèces radicalaires plus toxiques telles que le radical hydroxyle et les radicaux peroxyle lipidiques pour interrompre directement la peroxydation lipidique à une puissance plus élevée que l'acide caféique.38,39)

Li et al. ont étudié certains glycosides phényléthanoïdes dont l'actéoside (verbascoside) (5), l'isoactéoside (isoverbascoside) (1) et l'échinacoside (4) de Pedicularis pour leur inhibition de l'auto-oxydation de l'acide linoléique dans les micelles, un système non biologique,13) pour leur protection contre l'hémolyse oxydative in vitro,14''1 et aussi pour leurs effets de piégeage sur le superoxyde généré par NBT/PMS/NADH et l'inhibition de la peroxydation lipidique induite par l'acide ascorbique/Fe2 plus dans les microsomes hépatiques de souris.15) Une activité similaire -structure relation a été observée dans les rapports de Li et al. et nos résultats. Autrement dit, les activités des phényléthanoïdes pour inhiber la peroxydation lipidique dépendent principalement du nombre et de la position stérique des groupes hydroxyle phénoliques.15) Sur la base de leur stéréochimie, les groupes hydroxyle phénoliques du groupement caféoyle sur l'actéoside (5), le tubuloside A ( 3), et l'échinacoside (4), qui ont le caféoyle en position 4z du glucose, formeraient plus facilement une liaison hydrogène avec les groupes hydroxyle du rhamnosyle que ceux de l'isoacteoside (8) et du tubuloside B (7), qui ont le caféoyle en position 6' du glucose. Ainsi, ce dernier a réservé plus de groupes hydroxyles phénoliques libres que le premier et a donc montré une activité anti-peroxydation lipidique plus forte. Nous avons également remarqué que la 2z-acétylation de ces phényléthanoïdes, bien que légèrement, renforçait leurs effets antioxydants. Par exemple, l'actéoside (5) et l'isoactéoside (8), lorsqu'ils sont 2'-acétylés en 2/-acétylactéoside (1) et tubuloside B (7), respectivement, ont montré des activités plus fortes dans les quatre systèmes de dosage. En raison de la supériorité de la stéréochimie et de la 2'-acétylation, le tubuloside B (7) a présenté la plus forte activité antioxydante parmi les échantillons testés. Peut-être en raison de la substitution d'un troisième fragment sucre en position 6'~, cette corrélation ne correspondait pas bien dans le cas du tubuloside A (3) ou de l'échinacoside (4) ; cependant, dans le système ADP/NADPH/Fe3 plus, le tubuloside A ⑶ présentait toujours une activité anti-peroxydation lipidique plus forte que l'échinacoside (4).

De plus, l'ordre de l'activité de piégeage des radicaux DPPH a montré un meilleur parallélisme avec celui de la peroxydation anti-lipidique que l'ordre de l'activité de piégeage des radicaux de l'anion superoxyde. Cela a prouvé à nouveau que le dosage de piégeage des radicaux DPPH est une méthode pratique et fiable pour le dosage des antioxydants, bien que le radical DPPH soit un radical induit chimiquement tandis que le radical anion superoxyde pourrait être un radical biologiquement endogène.

En conclusion, tous les neuf phényléthanoïdes ont présenté des activités significatives de piégeage des radicaux libres et des effets de peroxydation anti-lipidique dans la présente étude. L'effet antioxydant a été potentialisé par une augmentation du nombre de groupes hydroxyles phénoliques dans la molécule. Comme on peut l'imaginer, les effets antioxydants de ces phényléthanoïdes prouvés ici peuvent jouer un rôle important dans les actions du médicament Cistanchis Herba et peuvent expliquer en partie les mécanismes des activités de certains phényléthanoïdes contre les néoplasmes,8* l'inflammation10) et la néphrite, 1 n dans lequel les radicaux libres sont fortement impliqués.

Cistsanche Echinacoside : Anti-oxydation

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