Étude comparative sur les constituants chimiques et le contenu du Cistanche Tubulosa (Guanhua Roucongrong) et de ses produits transformés

Abstrait

Objectif:Étudier la variation (modèles de changement) de la teneur en constituants chimiques des produits transformés deCistanche tubuleuse(Guanhua Rouconrong).
Méthodes :Cinq types de morceaux de décoction ont été sélectionnés, notamment des tranches crues, des tranches cuites à la vapeur au vin, des tranches cuites à la vapeur, des tranches préparées avec des haricots noirs et des tranches traitées avec du jus de haricots noirs. Une méthode d'empreinte digitale HPLC a été établie et combinée à une évaluation de similarité, une analyse groupée (CA) et une analyse en composantes principales (PCA) pour filtrer et confirmer les composants différentiels entre le produit brut et les produits transformés. Des méthodes chimiométriques et HPLC ont été utilisées pour déterminer et comparer les différences dans les teneurs en glycosides phényléthanoïdes totaux, en polysaccharides, en flavonoïdes totaux et en quatre glycosides phényléthanoïdes parmi les échantillons bruts et traités.
Résultats:Empreintes HPLC deCistanche tubuleuse and its processed products were established. With Mark peak matching, 9 common peaks were assigned for raw slices, whereas 11 common peaks were assigned for the other four processed products. Peaks No. 2 and No. 7 were differential chromatographic peaks. By comparison with reference standards, four chromatographic peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Fingerprints of the processed products showed similar profiles with the same number of common peaks; similarity values were all >0,9. En utilisant l'échinacoside comme pic de référence, la RSD des temps de rétention relatifs des pics communs parmi les différents produits transformés variait de 0,11 % à 0,82 %, tandis que la RSD des zones de pics relatifs variait de 15,46 % à 76,07 %. Lorsque la distance interclasse était fixée à 10, CA classait les tranches brutes et les produits transformés en trois catégories. L'ACP a indiqué des différences de composition entre les échantillons bruts et traités : les 11 variables maximales ont été réduites à trois composants principaux ; différents composants principaux corrélés à différents pics chromatographiques. Sur la base de la matrice des composants et de la pondération linéaire, les scores complets ont montré que les tranches traitées au jus de haricots noirs et les tranches cuites à la vapeur au vin jaune et à l'eau étaient mieux classées. Les teneurs des échantillons bruts et traités étaient les suivantes : glycosides phényléthanoïdes totaux 3,80 % à 7,07 %, polysaccharides totaux 5,85 % à 6,70 %, flavonoïdes totaux 14,16 % à 24,26 % ; échinacoside 4,11 % à 5,99 %, acteoside 0,67 % à 1,34 %, cistanoside A 0,06 % à 0,36 % et isoacteoside 0,25 % à 1,66 %. Des différences considérables existaient entre les produits transformés.
Conclusion:La méthode d'empreinte digitale HPLC établie a une forte spécificité et distingue efficacement les tranches brutes des produits transformés deCistanche tubuleuse, et convient à l'analyse qualitative et quantitative de l'échinacoside, de l'acteoside, du cistanoside A et de l'isoacteoside dans le médicament brut et les produits transformés. Le profilage comparatif et les changements de contenu entre différents échantillons peuvent fournir une base scientifique pour l'identification et le contrôle de la qualité desCistanche tubuleuseet ses différents produits transformés.

Mots-clés : Cistanche tubuleuse; traitement; constituants chimiques; empreinte digitale; chromatographie liquide haute performance (HPLC)

 

1 Introduction

Cistanche tubuleuse(Schenk) Wight (Guanhua Roucongrong) est une plante herbacée vivace des Orobanchaceae et est une source officiellement répertoriée de Cistanches Herba dans la Pharmacopée de la République populaire de Chine (ci-après dénommée la « Pharmacopée chinoise »). La partie médicinale est la tige charnue séchée aux feuilles écailleuses. Il est de nature chaude, de saveur sucrée et salée, et pénètre dans les méridiens des reins et du gros intestin, avec pour fonctions de tonifier le yang des reins, de bénéficier de l'essence et du sang et d'humidifier les intestins pour soulager la constipation [1]. Des études pharmacologiques modernes ont confirmé de multiples activités, telles que des effets anti-âge, un renforcement immunitaire, des effets tonifiants sur les reins et aphrodisiaques, des effets laxatifs et une activité antihypertensive.

Cistanche tubuleuseest riche en glycosides phényléthanoïdes, iridoïdes et leurs glycosides, lignanes, esters d'oligosaccharides, polyols, polysaccharides, flavonoïdes et autres constituants [2]. Parmi ceux-ci, les glycosides phényléthanoïdes sont les principaux composants actifs et les composés les plus abondants ; ils sont également des composants marqueurs pour la détermination du contenu dans la pharmacopée et présentent diverses bioactivités telles que des effets antioxydants, une promotion métabolique, une amélioration de l'apprentissage et de la mémoire et une amélioration de la fonction sexuelle [3].

Cistanche tubuleusepréfère les terres salines et alcalines et les régions du désert de Gobi, parasite les racines desTamarisspp., et est principalement distribué en Mongolie intérieure, au Xinjiang et au Gansu en Chine [4]. Les zones géo-authentiques sauvages et cultivées comprennent le comté de Minfeng, Yutian, Pishan et Moyu dans la préfecture de Hotan, au Xinjiang. Sa transformation est principalement développée en morceaux de décoction tranchés, en matières végétales brutes, en extraits, en produits de santé et en aliments fonctionnels ; parmi ceux-ci, les morceaux de décoction commerciaux restent courants. Cependant, sur le marché, différents produits transformés, tels que les tranches crues, les tranches transformées au vin, les tranches inactivées par des enzymes à haute température et les tranches cuites à la vapeur d'eau, sont souvent mélangés et difficiles à distinguer.

La transformation des Cistanches Herba a évolué au fil du temps, à partir de documents anciens tels queTaiping Shenghui Fang, Zhenglei Bencao, etPuji Croc[5-7] (par exemple, laver avec du vin, sauter avec du vin, cuire à la vapeur/cuire avec du vin, tremper/cuire à sec avec du vin, faire bouillir dans l'eau, triple cuisson à la vapeur et sauté au beurre) aux méthodes modernes telles que la macération du vin (à la vapeur), la cuisson simple à la vapeur, « quatre cuissons à la vapeur et quatre au soleil » et la transformation des haricots noirs [8]. Différentes méthodes de traitement peuvent affecter la teneur en principes actifs, la sécurité et l'activité biologique. Cai Hong et coll. [9] ont constaté que l'inactivation enzymatique de matières fraîches avec de l'eau chaude à 70 degrés pendant 6 minutes entraînait des teneurs en échinacoside et en actéoside respectivement 7,3 fois et 6,5 fois supérieures à celles du séchage direct au soleil. Tie Xiaoyan et coll. [10] ont rapporté que le traitement à la vapeur améliorait nettement la qualité des morceaux de décoction par rapport aux matériaux frais. Chen Weijun et coll. [11] ont observé que la teneur en bétaïne diminuait après le traitement du vin, du sel et de la vapeur par rapport aux produits frais. Zhang Chao et coll. [12] ont montré que lors de la cuisson du vin, avec un temps de cuisson plus long, l'échinacoside, l'acteoside, le cistanoside A et le 2′-acétylactéoside diminuaient progressivement, tandis que l'isoacteoside augmentait de manière significative.

L'édition 2025 actuelle de la Pharmacopée chinoise fixe uniquement des limites pour l'échinacoside et l'actéoside dans les tranches crues et les tranches cuites à la vapeur de vin, mais ne précise pas les composants marqueurs pour les autres produits transformés et manque de méthodes efficaces de contrôle du contenu. Par conséquent, l’analyse et la comparaison des constituants caractéristiques et l’exploration des modèles de changements de composition sont particulièrement importantes pour l’identification qualitative et le contrôle quantitatif des produits bruts et transformés.

Les empreintes digitales de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) sont une représentation holistique des constituants chimiques. Avec des avantages d'intégrité, de spécificité et d'informations riches, il est largement utilisé dans l'évaluation du contrôle qualité des médicaments bruts et des préparations, l'alignement sur les normes internationales, l'identification de l'authenticité, la surveillance des processus de fabrication et la recherche sur les substances pharmacodynamiques [13]. Basée sur les empreintes digitales HPLC, cette étude a sélectionné l'échinacoside, l'acteoside, le cistanoside A et l'isoacteoside comme marqueurs de qualité, et a utilisé l'analyse de similarité, l'AC et la PCA combinées à la détermination du contenu pour comparer les constituants chimiques et les modèles de changement de contenu entre différents produits transformés, fournissant ainsi une base scientifique pour l'identification et le contrôle de la qualité.

 

2 Instruments et matériaux

2.1 Instruments

Système HPLC U3000 (Thermo Fisher) ; UPL-111Système d'eau ultrapure -20R (Sichuan Youpu) ; Balance électronique AB 265-S (Mettler Toledo) ; KQ-5200DA extracteur/nettoyeur à ultrasons (Kunshan Ultrasons) ; Four de séchage électrique GZX-9240MBE (Shanghai Boxun) ; UV-2600 Spectrophotomètre UV-Vis (Simadzu, Chine).

2.2 Médicaments et réactifs

FraisCistanche tubuleuse(Lot n° . 20241008) a été fourni par Xinjiang Congrongtang Biotechnology Co., Ltd. et authentifié par le chercheur Wang Guoping (Institut de matière médicale de la région autonome ouïgoure du Xinjiang) comme étant la tige charnue deCistanche tubuleuse(Schenk) Wight (Orobanchacées).

Substances de référence : D-glucose anhydre (lot n° . 361810, 100,00 %, Shenzhen Jinhui Biotechnology Co., Ltd.) ; l'échinacoside (numéro de lot . 111670-201907), la rutine (numéro de lot . 100080-202012), l'actéoside (numéro de lot . 11530-202315), le cistanoside A (numéro de lot . 313512) et l'isoacteoside (numéro de lot . 313413), avec une pureté de test HPLC supérieure ou égale à 91,8 %, 92,2 %, 97,6 %, 98,06 % et 98,09%, respectivement, des Instituts nationaux de contrôle des aliments et des drogues (Chine).(Remarque : une ligne de pureté est tronquée dans le texte fourni ; ce qui précède suit la partie lisible.)

Vin de riz jaune (type semi-sec, alcool 16 % ; Zhejiang Guyuelongshan Shaoxing Wine Co., Ltd.) ; méthanol et acétonitrile (qualité HPLC, Fisher Scientific, USA). Les autres réactifs étaient de qualité analytique.

3 méthodes et résultats

3.1 Préparation des tranches crues et des produits transformés deCistanche tubuleuse

Les méthodes suivantes ont été utilisées pour préparer des tranches brutes et des produits transformés, chacun en 6 lots.

Tranches crues :FraisCistanchea été coupé en tranches de 3 mm et séché à 60 degrés.

Méthode de cuisson à la vapeur :Selon la littérature [14], 20 g de tranches propres ont été mélangés avec 6 ml d'eau distillée dans un récipient scellé, humidifiés pendant 4 h [12], cuits à la vapeur sur de l'eau pendant 12 h, refroidis et séchés à 60 degrés.

Méthode de vinification :Préparé selon la méthode de cuisson du vin ou de cuisson à la vapeur (Règle générale 0213, Pharmacopée chinoise).

Remuer avec des haricots noirs :Préparé selonMatière médicale chinoise(Zhonghua Bencao) sous Cistanches Herba ; des haricots noirs ont été ajoutés à raison de 1 kg pour 10 kg deCistanchematériel.

Transformation du jus de haricots noirs :Les tranches ont été mélangées avec du jus de haricots noirs puis traitées par la méthode de cuisson à la vapeur ci-dessus ; le dosage des haricots noirs était le même que ci-dessus.

3.2 Détermination des éléments d'inspection

L'humidité a été déterminée par séchage au four (Règle générale 0832, Pharmacopée chinoise) ; cendres totales selon la règle générale 2302 ; extraits solubles dans l'alcool par la méthode de macération à froid selon la règle générale 2201. Les résultats sont présentés dans le tableau 1.

 

3.3 Analyse comparative des empreintes digitales HPLC deCistanche tubuleuseet ses produits transformés

3.3.1 Conditions chromatographiques

Colonne Waters Xterra RP18 (250 mm × 4,6 mm, 5 µm). Phase mobile : acétonitrile (A) – 0,1 % d’acide formique (B) avec élution en gradient : 0 à 12 min, 14 % A → 17 % A ; 12 à 30 minutes, 17 % A → 19 % A ; 30 à 35 minutes, 19 % A → 14 % A ; 35 à 50 min, 14 % A. Débit : 1,0 mL·min⁻¹. Température de la colonne : 30 degrés. Longueur d'onde de détection : 330 nm. Volume d'injection : 10 µL.

3.3.2 Préparation des solutions

Solutions de référence :Les substances de référence échinacoside, actéoside, cistanoside A et isoacteoside ont été pesées avec précision et dissoutes dans du méthanol à 50 % dans des fioles jaugées de 10 ml pour obtenir des solutions de 1,1301, 0,2294, 0,2255 et 0,2109 mg·mL⁻¹, respectivement ; filtré pour obtenir les solutions finales.

Exemples de solutions :0,5 g de poudre de 80 mesh d'échantillons bruts et traités a été pesé avec précision, extrait avec 50 % de méthanol dans une fiole jaugée de 25 ml, passé aux ultrasons (200 W, 40 kHz) pendant 40 min, refroidi, mélangé, laissé au repos et filtré à travers une membrane de 0,22 µm ; le filtrat a été utilisé.

3.3.3 Validation de la méthode (empreinte digitale)

3.3.3.1 Précision

La même solution échantillon a été injectée six fois consécutives. En utilisant l'échinacoside comme pic de référence, l'écart-type des temps de rétention relatifs des pics courants a été<0.48% and the RSD of relative peak areas was <2.86%, indicating good instrumental precision.

3.3.3.2 Répétabilité

Six solutions d'échantillons parallèles ont été préparées à partir du même lot (tranche brute S1). En utilisant l'échinacoside comme pic de référence, la RSD des temps de rétention relatifs a été<0.07% and the RSD of relative peak areas was <2.77%, indicating good method repeatability.

3.3.3.3 Stabilité

La même solution échantillon a été analysée à 0, 3, 6, 9, 12 et 24 h. En utilisant l'échinacoside comme pic de référence, la RSD des temps de rétention relatifs a été<0.11% and the RSD of relative peak areas was <2.33%, indicating stability within 24 h.

3.3.4 Établissement des empreintes digitales

Trente lots deCistanche tubuleuseet les produits transformés ont été analysés. Le « Système d'évaluation de similarité pour les empreintes chromatographiques de la médecine traditionnelle chinoise » (édition 2012) a été utilisé. La tranche crue S1 et la tranche J1 cuite à la vapeur au vin jaune ont été utilisées comme empreintes digitales de référence ; la méthode moyenne et une largeur de fenêtre temporelle de 0, 1 min ont été appliquées pour la correction multipoint et la correspondance des pics Mark afin de générer des empreintes digitales (Figures 1 à 2), et des chromatogrammes superposés avec des standards de référence mixtes ont été obtenus (Figure 3).

Les résultats ont montré que les quatre produits transformés présentaient des profils d’empreintes digitales similaires à ceux des tranches crues. Les tranches crues avaient 9 pics communs, tandis que les tranches cuites à la vapeur, cuites à la vapeur, mélangées avec des haricots noirs et traitées au jus de haricots noirs avaient 11 pics communs. Neuf pics communs étaient partagés par les deux. Les pics No. 2 et No. 7 étaient des pics caractéristiques distinguant les tranches brutes des produits transformés. Les profils d'empreintes digitales des quatre produits transformés étaient similaires et ne reflétaient pas clairement les différences entre eux.

3.3.5 Analyse de similarité

Using J1 as the reference fingerprint, similarity analysis was performed for different processed products (Table 2). Similarities were all >0,9, indiquant des caractéristiques d’empreintes digitales similaires parmi différents produits transformés.

3.3.6 Identification des pics communs

En comparant les temps de rétention avec des standards de référence mixtes et le chromatogramme de tranches brutes, quatre pics chromatographiques ont été identifiés : pic 4, échinacoside ; Pic 9, cistanoside A ; Pic 10, actéoside ; Pic 11, isoactéoside (Figure 2). Avec le pic 4 (échinacoside) comme pic de référence, les valeurs RSD des temps de rétention relatifs des pics communs parmi les différents lots des quatre produits transformés allaient de 0,11 % à 0,82 %, et les valeurs RSD des zones de pics relatives allaient de 15,46 % à 76,07 %.

3.3.7 Analyse groupée

SPSS 27.0 a été utilisé pour l'analyse groupée des tranches brutes et des produits transformés. Un lien inter-groupes a été appliqué et la distance euclidienne au carré a été utilisée (Figure 4). Quand la distance interclasse était<5, water-steamed slices and wine-steamed slices clustered together. When the inter-class distance was 10, raw slices and the four processed products were classified into three categories: raw materials (S1–S6) as one category; black-bean-juice-processed slices (H1–H6) as one category; and wine-steamed slices (J1–J6) together with water-steamed slices (Q1–Q6) and stir-processed-with-black-beans slices (C1–C6) as one category. When the inter-class distance was between 15 and 25, black-bean-juice-processed slices formed a separate cluster from the other samples.

3.3.8 Analyse en composantes principales

Après normalisation des zones de pics, la PCA a été réalisée à l'aide de SPSS 27.0. La valeur KMO était de 0,679 et la signification du test de Bartlett était<0.001, indicating suitability for PCA. With eigenvalues >1, trois composantes principales ont été extraites avec les valeurs propres 6,815, 1,987 et 1,105. Les taux de contribution à la variance étaient respectivement de 61,954 %, 18,063 % et 10,047 %, avec un taux de contribution à la variance cumulé de 90,064 % (tableau 3). Cela indique que la première composante principale est l’indicateur le plus important pour le score global.

La matrice des composantes a montré que dans la première composante principale, les coefficients absolus des variables de surface des pics pour les pics 2 à 9 et le pic 11 étaient relativement importants, suggérant une forte influence sur F1. Le deuxième composant principal est en corrélation avec les informations des pics 1 et 10, et le troisième composant principal est en corrélation avec le pic 1. La matrice des composants est présentée dans le tableau 4 ; le tracé d'éboulis et le tracé de chargement sont présentés dans les figures 5 et 6. En utilisant les scores des trois composantes principales et leurs taux de contribution à la variance comme poids pour la pondération linéaire, des scores complets ont été calculés (Tableau 5), indiquant que les tranches traitées au jus de haricots noirs, les tranches cuites à la vapeur d'eau et les tranches cuites à la vapeur de vin se classaient plus haut.

 

3.4 Détermination HPLC de plusieurs constituants dansCistanche tubuleuseet ses produits transformés

3.4.1 Conditions chromatographiques et spécificité

Les conditions chromatographiques étaient les mêmes que celles utilisées pour la prise d'empreintes digitales. Des solutions d'échantillon, des solutions de référence et des solutions à blanc négatif (vin de riz jaune, eau purifiée, jus de haricots noirs) ont été chacune injectées (10 µL). Les temps de rétention ont été comparés. Les solutions à blanc négatif n'ont montré aucune interférence avec l'échinacoside, le cistanoside A, l'acteoside et l'isoacteoside.[texte manquant dans la source]

3.4.2 Linéarité

Des solutions de référence d'échinacoside, d'acteoside, de cistanoside A et d'isoacteoside à des concentrations de 1,1301, 0,2294, 0,2255 et 0,2109 mg·mL⁻¹ ont été pipetées avec précision à 1, 2, 4, 8, 10 et 16 µL et injectées. Une régression linéaire a été réalisée avec la surface du pic XXX par rapport à la concentration injectée YYY (mg·mL⁻¹). Les équations linéaires et les plages sont présentées dans le tableau 6.

3.4.3 Précision

La même solution échantillon a été injectée six fois consécutives. Les valeurs RSD du contenu des quatre analytes (échinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside) étaient respectivement de 0,23 %, 2,71 %, 0,53 % et 2,08 % (tableau 7), tous<3%, indicating good instrumental precision.

3.4.4 Répétabilité

Six solutions d'échantillons parallèles ont été préparées à partir du même lot (tranche brute S1). Les valeurs RSD du contenu des quatre analytes étaient respectivement de 0,22 %, 2,46 %, 0,50 % et 2,46 % (tableau 7), toutes<3%, indicating good repeatability.

3.4.5 Stabilité (intra-journalière)

La même solution échantillon a été analysée à 0, 3, 6, 9, 12 et 24 h. Les valeurs RSD du contenu des quatre analytes étaient respectivement de 0,80 %, 1,62 %, 1,72 % et 1,49 % (tableau 7), toutes<2.0%, indicating stability within 24 h.

3.4.6 Stabilité (interjournalière)

La même solution échantillon a été analysée pendant cinq jours consécutifs. Les valeurs RSD du contenu des quatre analytes sur cinq jours étaient respectivement de 2,80 %, 2,53 %, 3,53 % et 2,88 % (Tableau 7), indiquant une stabilité dans les cinq jours.

3.4.7 Récupération

Une quantité appropriée deCistanche tubuleuseL'échantillon a été pesé et les étalons de référence d'échinacoside, d'acteoside, de cistanoside A et d'isoacteoside ont été enrichis selon un rapport de 1:1. Six solutions d'échantillons parallèles ont été préparées et analysées (injection de 10 µL). Les récupérations moyennes étaient de 99,29 %, 98,75 %, 99,45 % et 96,13 % (n=6), avec des valeurs RSD de 2,51 %, 0,38 %, 1,71 % et 0,49 %, respectivement.

3.4.8 Résultats de détermination

Pour chaque échantillon, 0,5 g de poudre a été pesé avec précision ; 10 µL ont été injectés pour déterminer et calculer le pourcentage des quatre constituants. Les résultats sont présentés dans les figures 7 à 10.

 

3.5 Détermination des glycosides phényléthanoïdes totaux, des polysaccharides totaux et des flavonoïdes totaux

3.5.1 Détermination des glycosides phényléthanoïdes totaux

3.5.1.1 Préparation de la solution de référence

Une quantité appropriée de substance de référence échinacoside a été pesée avec précision et dissoute dans du méthanol dans une fiole jaugée de 10 ml pour obtenir une solution avec une concentration de 0,32 mg·mL⁻¹. Selon la littérature [15], 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 et 1,2 ml de la solution de référence ont été pipetés, dilués à 10 ml avec du méthanol et l'absorbance (A) a été mesurée à 333 nm. L'équation de la courbe standard ajustée était Y=24.7596X+0.0147Y=24.7596X + 0.0147Y=24.7596X+0.0147, R2=0.9995R^2=0.9995R2=0.9995, avec une plage linéaire de 0,0029 à 0,0359 mg·mL⁻¹.

3.5.1.2 Préparation de la solution échantillon

100 mg d'échantillon de poudre (passés à travers un tamis de 100 mesh) ont été pesés avec précision, extraits par ultrasons avec du méthanol pendant 30 min (200 W, 40 kHz), dilués à 10 ml et filtrés à travers une membrane de 0,22 µm. Ensuite, 0,2 ml de filtrat ont été dilués à 10 ml avec du méthanol et mélangés pour analyse.

3.5.1.3 Détermination

Pour chaque échantillon, 100 mg de poudre ont été utilisés pour préparer la solution échantillon. L'absorbance a été mesurée à 333 nm et la teneur en pourcentage de glycosides phényléthanoïdes totaux a été calculée (tableau 9).

Équation (1) :
Contenu (%) =C×V×Dm×100%= \\dfrac{C \\times V \\times D}{m} \\times 100\\%=mC×V×D​×100%
où CCC est la concentration de l'analyte dans la solution échantillon, VVV est le volume de dilution, DDD est le facteur de dilution et mmm est la masse de l'échantillon (mg).

3.5.2 Détermination des polysaccharides totaux

3.5.2.1 Préparation de la solution de référence

Une quantité appropriée de substance de référence anhydre de D-glucose a été pesée avec précision, dissoute dans de l'eau purifiée et diluée à 10 ml pour obtenir une solution de 0,190 mg·mL⁻¹. Après mélange et filtration (0,22 µm), 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 et 1,0 mL ont été pipetés. Le développement de la couleur a été réalisé par la méthode anthrone-acide sulfurique [16]. L'absorbance a été mesurée à 625 nm. L'équation de la courbe standard ajustée était Y=35.1316X−0,0079Y=35.1316X - 0.0079Y=35.1316X−0,0079, R2=0.9957R^2=0.9957R2=0.9957, avec une plage linéaire de 0,0038 à 0,0190 mg·mL⁻¹.

3.5.2.2 Préparation de la solution échantillon

40 mg d'échantillon de poudre ont été pesés avec précision, dissous par ultrasons dans de l'eau purifiée pendant 30 min (200 W, 40 kHz), dilués à 10 ml et filtrés à travers une membrane de 0,22 µm.

3.5.2.3 Détermination

Pour chaque échantillon, 40 mg ont été utilisés pour préparer la solution échantillon. Ensuite, 0,1 ml de filtrat a été pipeté et complété avec de l'eau purifiée jusqu'à 2,00 ml. Après développement de la couleur par la méthode anthrone-acide sulfurique, l'absorbance a été mesurée et la teneur en pourcentage de polysaccharides totaux a été calculée (tableau 8).

3.5.3 Détermination des flavonoïdes totaux

3.5.3.1 Préparation de la solution de référence

Une quantité appropriée de substance de référence rutine a été pesée avec précision, dissoute dans de l’éthanol à 70 % et diluée à 25 ml ; filtré à travers une membrane de 0,22 µm. Ensuite, 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 et 4,0 ml ont été pipetés. Le développement de la couleur a été réalisé en utilisant la méthode nitrite de sodium – nitrate d'aluminium – hydroxyde de sodium [17]. L'absorbance a été mesurée à 510 nm. L'équation de la courbe standard ajustée était Y=11.5699X+0.0684Y=11.5699X + 0.0684Y=11.5699X+0.0684, R2=0.9989R^2=0.9989R2=0.9989, avec une plage linéaire de 0,0097 à 0,07386 mg·mL⁻¹.

3.5.3.2 Préparation de la solution échantillon

50 mg de poudre ont été pesés avec précision, dissous par ultrasons dans de l'éthanol à 70 % pendant 30 min (200 W, 40 kHz), dilués à 10 ml et filtrés à travers une membrane de 0,22 µm.

3.5.3.3 Détermination

Pour chaque échantillon, 50 mg ont été utilisés pour préparer la solution échantillon. Ensuite, 0,5 ml de filtrat ont été transférés dans une fiole jaugée de 10 ml et les réactifs colorés ont été ajoutés dans l'ordre indiqué ci-dessus. L'eau purifiée servait de blanc. L'absorbance a été mesurée et la teneur en pourcentage de flavonoïdes totaux a été calculée (tableau 8).

 

4 Discussion

Dans cette étude, les empreintes digitales HPLC deCistanche tubuleuse and its various processed products were established. Peak matching across different batches confirmed 9 common peaks in raw slices and 11 common peaks in processed products. By comparison with reference standards, four common peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Similarity analysis showed that similarity values among four processed products were all >0,9, et les profils globaux d’empreintes digitales étaient similaires, ce qui indique que leurs types constitutifs étaient proches. Cependant, les grandes différences dans la RSD des zones de pic relatives suggèrent des différences notables dans la teneur en constituants.

Par rapport aux tranches crues, les quatre produits transformés présentaient deux pics supplémentaires (pics 2 et 7), indiquant que les constituants chimiques avaient changé après la cuisson à la vapeur du vin, de l'eau ou du traitement des haricots noirs. Ces pics nouvellement générés sont présumés se former pendant le traitement ; la caractérisation de leurs composants sera abordée dans des études ultérieures.

Les résultats de l'AC ont montré que lorsque la distance interclasse était<5, wine-steamed and water-steamed slices clustered together, suggesting similar chemical composition and content. At an inter-class distance of 10, raw slices could be separated from black-bean-juice-processed slices, stir-processed-with-black-beans slices, and wine/water-steamed slices. At inter-class distances of 15–25, differences between black-bean-juice-processed slices and other samples became more prominent. PCA results indicated that three principal components had substantial influence on comprehensive evaluation.

Différentes méthodes de traitement affectaient directement les niveaux de divers constituants. Sur la base d'une détermination chimiométrique, les glycosides phényléthanoïdes totaux ont été classés comme suit : jus de haricots noirs transformés > tranches crues > cuites à la vapeur d'eau > cuites à la vapeur avec du vin > traitées sous agitation avec des haricots noirs. Polysaccharides totaux classés comme suit : cuit à la vapeur dans l'eau > cuit à la vapeur avec du vin > traité avec des haricots noirs > traité avec du jus de haricots noirs > tranches crues. Flavonoïdes totaux classés comme suit : jus de haricots noirs transformé > cuit à la vapeur dans l'eau > traité avec des haricots noirs > cuit à la vapeur avec du vin > tranches crues. Par rapport aux tranches crues, le traitement du jus de haricots noirs a augmenté le total des glycosides phényléthanoïdes, alors que d'autres méthodes de traitement l'ont diminué ; les quatre méthodes de traitement ont augmenté de manière significative les polysaccharides totaux et les flavonoïdes totaux. Entre les deux méthodes de haricots noirs, le traitement du jus de haricots noirs a produit des augmentations plus importantes des glycosides totaux de phényléthanoïdes et des flavonoïdes totaux que le traitement par agitation avec des haricots noirs, avec des différences statistiques.

 

Tableau 8. Résultats de la détermination des glycosides phényléthanoïdes totaux, des polysaccharides totaux et des flavonoïdes totaux dansCistanche tubuleuseet ses produits transformés

Produit transformé (morceaux de décoction)	Glycosides phényléthanoïdes totaux (%)	Polysaccharides totaux (%)	Flavonoïdes totaux (%)
Tranches crues	6.81 ± 0.06	5.85 ± 0.10	14.16 ± 0.24
Tranches de vin cuites à la vapeur	5.10 ± 0.05***	6.61 ± 0.05***	20.84 ± 0.33***
Tranches cuites à la vapeur	5.23 ± 0.05***	6.70 ± 0.15***	21.59 ± 0.37***
Sauté avec des tranches de haricots noirs	3.80 ± 0.02***	6.56 ± 0.09***	21.02 ± 0.35***
Tranches traitées au jus de haricots noirs	7.07 ± 0.09****	6.09 ± 0.03****	24.26 ± 0.18****

Remarques : Par rapport aux tranches crues : *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 ; par rapport aux tranches de haricots noirs traitées sous agitation : *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001.

L'échinacoside, l'acteoside, le cistanoside A et l'isoacteoside sont des glycosides phényléthanoïdes clés contribuant aux effets tonifiants sur les reins et bénéfiques pour l'essence deCistanche tubuleuse. La comparaison HPLC de ces quatre constituants a montré que les différences de surface de pic entre les pics communs pourraient servir de base pour distinguer différents produits transformés. Par rapport aux tranches crues, l'échinacoside, le cistanoside A et l'isoacteoside ont augmenté à des degrés divers dans les produits transformés, avec des augmentations plus prononcées dans les produits à base de jus de haricots noirs. L'actéoside a diminué dans trois produits transformés, mais a augmenté dans les produits traités avec des haricots noirs. Cela peut être lié à la stabilité inhérente de l'acteoside : en tant que diglycoside phényléthanoïde avec un fragment caféoyle, il peut subir un clivage de la liaison ester sous l'effet de changements de température, de temps et de pH de chauffage pour générer de l'acide caféique et s'isomériser partiellement en isoacteoside. La diminution observée de l'acteoside et l'augmentation de l'isoacteoside dans les quatre produits transformés peuvent être associées à une cuisson à la vapeur à haute température, ce qui est cohérent avec les modèles rapportés pour le traitement de Rehmanniae Radix [18].

L'échinacoside a augmenté après la cuisson à la vapeur du vin/eau et le traitement des haricots noirs dans cette étude, ce qui est contraire à Zhang Chao et al. [12]. En comparant le traitement brassé avec les haricots noirs et le traitement au jus de haricots noirs, ce dernier a montré des teneurs significativement plus élevées en échinacoside et en cistanoside A et une tendance de conversion plus prononcée de l'acteoside en isoacteoside. Dans l'ensemble, cette étude révèle des changements de composition et de contenu après diverses méthodes de traitement et vérifie le changement entre l'acteoside et l'isoacteoside. Les empreintes HPLC fournissent une méthode scientifique pour identifier les tranches brutes et les produits transformés, et offrent une référence pour l'établissement de normes de contrôle qualité et pour les analyses qualitatives et quantitatives.

 

Conflit d'intérêt

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Contributions des auteurs

XU Xiaoqin : soutien au projet, conception de l'étude, détermination expérimentale et rédaction du manuscrit ;
QING Degang : coordination globale et collecte de matériel médicinal ;
ZHANG Juan et ZHAO Peng'an : détermination des constituants et analyse des données ;
WANG Guoping : authentification des matières médicinales.

 

Usine d'échantillons Cistanche :

https://www.xjcistanche.com/about-us

 

 

Références

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