Lipidomique différentielle des cellules HK-2 et des exosomes sous stimulation élevée par le glucose

Abstrait

Le métabolisme anormal des lipides cellulaires est très important dans l'apparition et la progression de la maladie rénale diabétique (DKD). Cependant, la composition lipidique et l'expression différentielle par une stimulation élevée au glucose des cellules tubulaires rénales et de leurs exosomes, qui est une partie vitale du développement de la DKD, sont largement inconnues. Dans cette étude, basée sur une analyse ciblée des lipides par marquage isotopique et spectrométrie de masse en tandem, un total de 421 et 218 espèces de lipides ont été quantifiés dans les cellules HK-2 et les exosomes, respectivement. Plus important encore, les résultats ont montré que GM3 d18 :1/22 :0, GM3 d18 :1/16 :0, GM3 d18 :0/16 :0, GM3 d18:1/22:1 ont été significativement augmentés, tandis que LPE18:1, LPE, CL66:4 (16:1), BMP36:3, CL70 :7 (16:1), CL74:8 (16 :1) ont été significativement diminués dans les cellules HK{{4{{90}}}} stimulées par le glucose. Aussi, PG36:1, FFA22:5, PC38:3, SM d18:1/16:1, CE-16 :1, CE-18 :3, CE-20 :5, et CE-22:6 ont été significativement augmentés, tandis que GM3 d18:1/24:1, GM3 ont été significativement diminués dans les exosomes sécrétés par les cellules HK-2 stimulées par le glucose. De plus, TAG, PC et CL ont diminué de manière significative dans les exosomes par rapport aux cellules HK -2 et LPA18: 2, LPI22: 5, PG32: 2, FFA16: 1, GM3 d18: 1/18: 1 , GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:0/20:0, PC40:6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE{101 }} : 5, CE-20 : 4, CE-22 : 6 n'ont été trouvés que dans les exosomes. De plus, l'expression de PI4P dans les cellules HK-2 a diminué dans un état de glucose élevé. Ces données peuvent être utiles pour fournir de nouvelles cibles pour explorer les mécanismes de DKD.

Mots clés

Lipidomique ciblée ; Tubules rénaux; Exosomes ; Maladie rénale diabétique.

Cliquez ici pour acheter le supplément Cistanche pour protéger le rein

Introduction

Les troubles du métabolisme lipidique participent à la survenue et au développement de la néphropathie diabétique (MRD) [1, 2]. Les modifications de la composition lipidique cellulaire dans le rein dans un état de glucose élevé peuvent entraîner une augmentation de la production d'oxygène actif, un dysfonctionnement mitochondrial et même induire l'apoptose [3, 4, 5, 6]. Bien que de nombreux chercheurs aient reconnu le rôle important des tubules rénaux dans le développement et la progression de la DKD, peu d'études se sont penchées sur l'expression globale des lipides dans les tubules rénaux ou les changements sous stimulation élevée par le glucose [7, 8]. Par conséquent, il est d'une grande importance d'obtenir des informations complètes sur les lipides dans les tubules rénaux, élucidant ainsi davantage le rôle des lipides dans la pathogenèse de la DKD.

Au cours des dernières années, le rôle des exosomes dans le développement de la DKD a attiré une attention croissante. Les exosomes qui peuvent coopérer avec la voie autophagie-lysosome pour soulager le stress intracellulaire ont un rôle important dans le maintien de l'homéostasie cellulaire [9, 10]. Pendant ce temps, ils agissent comme des supports pour le transfert de matériel et la communication d'informations entre les cellules [11]. Des études récentes ont révélé que la diaphonie entre les cellules tubulaires et d'autres types de cellules rénales dans le néphron pourrait jouer un rôle important dans la progression de la maladie [12, 13]. Bien que la composition lipidique des exosomes puisse affecter leurs propriétés, elle a été étudiée dans une moindre mesure par rapport à l'attention des protéines et de l'ARN [14]. Étant donné que les exosomes sécrétés par différentes cellules varient en types, contenus et fonctions lipidiques, clarifier la composition lipidique et l'expression différentielle des exosomes sécrétés par les tubules rénaux dans un état de glucose élevé fournirait une base théorique pour clarifier le mécanisme de la communication exosomale concernant les tubules rénaux. .

Ici, nous avons présenté une analyse lipidomique différentielle des tubules rénaux et de leurs exosomes sous stimulation élevée par le glucose et détecté des espèces lipidiques différentiellement exprimées de cardiolipine (CL), de ganglioside monosialodihexosyle (GM3) et d'ester de cholestérol (CE). Nous avons également initialement exploré le rôle des phosphoinositides (PIP) dans la production exosomale et observé l'absorption des exosomes tubulaires par les cellules mésangiales glomérulaires (GMC).

Supplément Cistanche

Méthodes

1. Culture cellulaire

La lignée de cellules épithéliales tubulaires proximales rénales humaines HK-2 a été achetée auprès du Shanghai Institute for Biological Sciences Cell Resource Center. Les cellules HK-2 ont été cultivées dans du glucose normal Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F-12) complété par 10 % de sérum bovin fœtal (FBS ; FSP500, ExCell). Le glucose normal DMEM/F-12 était un mélange 1:1 de DMEM (11966025, Gibco) et Ham's F-12 (11765054, Gibco) qui contenait 5,56 mmol/L de glucose. Les cellules ont été maintenues à 37 degrés dans un incubateur à 5 % de CO2. Une fois que 80 pour cent de confluence ont été atteints, les cellules ont été récoltées en utilisant la procédure standard de digestion à la trypsine et passées à un rapport de fractionnement de 1:2. Les cellules de passage ont été cultivées avec du FBS appauvri en exosomes (CMS101.03, Cellmax) dans 5,5 mmol·L-1 de glucose comme groupe témoin à blanc (NG) et 30 mmol·L-1 de glucose comme glucose élevé. groupe (HG) pendant 48 heures.

2. Isolement des exosomes

L'ultracentrifugation différentielle a été utilisée pour extraire les exosomes des surnageants de culture cellulaire HK{{0}}. En bref, les surnageants de culture de cellules HK-2 ont été collectés et centrifugés séquentiellement à 2000×g, 4 degrés pendant 10 min, puis à 10,000×g, 4 degrés pendant 30 min pour éliminer les cellules, les débris cellulaires et les grosses vésicules. Les fractions de surnageant ont été filtrées à l'aide de filtres de taille de pores de 0,22- μm. Les échantillons filtrés ont ensuite été soumis à une ultracentrifugation à 110 000 × g pendant 75 min, deux fois à 4 degrés pour sédimenter les exosomes. Les exosomes résultants ont été remis en suspension dans une petite quantité de solution tampon phosphate (PBS) et stockés à -80 degré .

3. Analyse de suivi des nanoparticules (NTA)

Les exosomes ont été décongelés dans un bain-marie à 25 degrés et placés sur de la glace, après quoi ils ont été directement dilués avec 1 × PBS pour une détection avec une détection d'impulsion résistive accordable (TRPS). Les analyses de la distribution de taille et de la concentration des exosomes ont été effectuées à l'aide de qNano Gold avec Izon Control Suite 3.3.2 d'Izon Science.

4. Détermination des protéines et western blot

Environ. 100 ul de solution de craquage prémélangée (solution de craquage RIPA et 1 % d'inhibiteur de PMSF) ont été ajoutés séparément aux échantillons de cellules et d'exosomes. Après craquage pendant 30 min, ils ont été centrifugés à 12,000×g, 4 degrés pendant 20 min. Le surnageant a été prélevé et les concentrations de protéines ont été déterminées à l'aide d'un kit d'analyse de protéines d'acide bicinchoninique (BCA; Beyotime) conformément aux instructions du fabricant. L'albumine de sérum bovin a été utilisée comme protéine standard.

Les échantillons de protéines ont été fractionnés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide-dodécyl-sulfate de sodium (SDS-PAGE). Après avoir été transférés sur une membrane PVDF (Millipore), ils ont été incubés avec différents anticorps primaires, anti-CD63 (EXOAB-CD63A-1, SBI ; 1:1000), anti-ALIX (YT6283, Immunoway ; 1:1000 ), anti-Calnexine (YT0613, Immunoway; 1:1000), anti-P62 (P0067, Sigma; 1:1000) et anti-LC3 (L7543, Sigma; 1:1000), suivis d'anti-lapin de chèvre ou de souris Ig anticorps secondaires (180202-001, SBI ; 1:5000). Des bandes spécifiques ont été détectées à l'aide d'un substrat chimiluminescent amélioré (ECL; Beyotime). -actin (BM0627, Boster) a été utilisé comme contrôle interne. L'intensité relative de la bande a été mesurée à l'aide du logiciel ImageJ.

5. Microscopie électronique à transmission (MET)

5 ul d'échantillon ont été déposés sur le filet de cuivre et incubés à température ambiante pendant 5 minutes. Une goutte d'acétate de peroxyde d'uranium à 2 % a été ajoutée au filet de cuivre et incubée à température ambiante pendant 1 min. Il a ensuite été séché pendant environ 20 min à température ambiante et observé au microscope électronique à nano-transmission (Tecnai G2 Spirit BioTwin, FEI).

Extrait de Cistanche

6. Lipidomique ciblée

Les lipides ont été extraits en utilisant une version modifiée de la méthode de Bligh et Dyer [15]. Toutes les analyses lipidomiques ont été réalisées sur une chromatographie liquide ultra-performante (UPLC) Exion couplée à un système SCIEX QTRAP 6500 PLUS. Les analyses UPLC-MS/MS ont été réalisées en mode ionisation par électrospray (ESI), avec les conditions suivantes : gaz rideau=20, tension de pulvérisation ionique=5,500 V , température=400 degré , gaz source d'ions 1=35 et gaz source d'ions 2=35. Les lipides polaires ont été séparés à l'aide d'une colonne de silice Phenomenex Luna 3 µm (diamètre intérieur 150 × 2,0 mm) avec deux phases mobiles : phase mobile A (chloroforme : méthanol : hydroxyde d'ammonium, 89,5 : 10 : 0.5) et la phase mobile B (chloroforme : méthanol : hydroxyde d'ammonium : eau, 55 : 39 : 0.5 : 5,5). La séparation des gradients a été effectuée comme suit : le gradient a été maintenu avec 95 % de A pendant 5 min, puis réduit de manière linéaire à 60 % en 7 min et maintenu pendant 4 min, après quoi il a diminué à 30 pour cent et a ensuite été maintenu pendant 15 min. Enfin, le gradient d'origine a été appliqué et maintenu pendant 5 min. Un suivi multi-réaction par spectrométrie de masse (MRM) a été établi pour diverses identifications de lipides et analyses quantitatives [16, 17]. Les espèces lipidiques polaires individuelles ont été quantifiées en se référant à des étalons internes dopés de la même classe de lipides, y compris PE-d31(16 :0/18:1), DMPE ; PG-d31(16 :0/18:1), DMPG ; PI-d31(16 :0/18:1), di-C8- PI ; PS-d31(16 :0/18:1), DMPS ; PA-d31(16 :{{1{{1{{110}}8}}4}}/18:1), PA(17 :0/17:0) ; BMP-(14:0/14:0); LPE-17 : 1 ; IPV-17 : 1 ; LPS-17 : 1 ; LPA-17 : 0 ; GM3 d18 :1/18 :0-d3 ; ré31-16 : 0, ré8-20 : 4 ; PC-d31(16:0/18:1), DMPC ; SM d18 :1/ d31-16 :0, SM d18 :1/12 :0 ; LPC-17 : 0 ; Cer d18 :1-d7/15 : 0 ; Sph-d18:1/17:0 ; CL 22 :1(3)-14 :1.

Les lipides de glycérol, y compris les diacylglycérols (DAG) et les triacylglycérols (TAG), ont été quantifiés à l'aide d'une version modifiée de HPLC/MS/MS en phase inversée. La séparation des lipides neutres a été réalisée sur une colonne Phenomenex Kinetex-C18 2.6 µm (id 4.6x100 mm) en utilisant une phase mobile contenant du chloroforme : méthanol : {{19} }.1 M d'acétate d'ammonium (100 :100 :4), à un débit de 160 µl/min. d5-BALISE (16:0)3 ; d5-BALISE (14:0)3 ; d5-TAG (18:0)3 ont été utilisés pour piquer des TAG individuels. d5-DAG (1,3-17 : 0) ; d5-DAG (1,3-18 : 1) ont été utilisés pour augmenter les DAG individuels en fonction de la technologie Neutral Miss MS/MS.

Les cholestérols libres, les stérols et leurs esters ont été analysés par HPLC-MS/MS, réalisée en mode d'ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI), avec Cholesteryl-2,2,3,4,4,6-d6 octadécone; Cholestérol-26,26,26,27,27,27-d6 comme standards internes.

Chloroforme : méthanol : (1:1), 2,4 M d'acide chlorhydrique et 0.25 M d'EDTA ont été ajoutés à l'échantillon, puis broyés à basse température. L'échantillon a été centrifugé après incubation pendant 3 heures à 4 degrés, après quoi la phase organique inférieure a été extraite. Du chloroforme a été ajouté pour la seconde extraction, suivi d'un lavage de la phase organique avec de l'acide chlorhydrique 1 N : méthanol (1:1). La phase organique a été séchée dans un concentrateur rotatif sous vide. Comme indiqué précédemment, 40 % de méthylamine : eau : n-butanol : méthanol (36:8:9:47) ont été utilisés pour la désacylation et analysés par chromatographie ionique Thermo ICS-5000. PI4P, PI3P, PI4P, PI(3, 4)P2, PI(3, 5)P2, PI(4, 5)P2 et PI(3, 4,5) P3 ont été utilisés pour construire une courbe d'étalonnage externe pour des analyses quantitatives. analyse. L'analyse a été appuyée par Lipidall Technologies Company Limited.

7. Microscopie à fluorescence

Pour visualiser l'absorption des exosomes dans les GMC (Sicencell), une quantité égale d'exosomes sécrétés par les cellules HK-2 avec ou sans stimulation élevée par le glucose ont été marqués avec PKH67 (mini67, Sigma) conformément aux instructions du fabricant. Les exosomes marqués ont été cultivés avec des GMC pendant 24h. Les GMC confluents ont été lavés trois fois avec du PBS, après quoi les cellules ont été fixées avec du paraformaldéhyde à 4 % et maintenues à l'abri de la lumière pendant 30 minutes. Les cellules ont été lavées trois fois avec du PBS et colorées avec du DAPI (28718903, Solarbio) pendant 4-6min. Après trois lavages, les GMC confluents ont été photographiés à l'aide d'un microscope confocal Nikon C2.

8. Analyse statistique

GraphPad 7.0 a été appliqué pour l'analyse statistique et la cartographie. Les données sont exprimées en moyenne ± SEM. Le test t de Student a été utilisé pour la comparaison entre les deux groupes. Une valeur P <0.05 a été considérée comme une signification statistique.

Gélules Cistanche

Discussion

Notre étude fournit les espèces lipidiques différentiellement exprimées des cellules HK{{0}} et des exosomes sous stimulation élevée par le glucose, qui n'avaient pas été signalés auparavant. Fait intéressant, les espèces de GM3, telles que GM3 d18 :1/22 :0, GM3 d18 :1/16 :0, GM3 d18 :0/16 :0 , GM3 d18: 1/22: 1 ont été significativement augmentés dans les cellules HK -2 stimulées par le glucose élevé, et GM3 d18: 1/24: 1, GM3 ont été significativement diminués dans leurs exosomes. De plus, GM3 d18: 1 /18:1, GM3 d18:1/20:1 et GM3 d18 :0/20:0 n'ont été trouvés que dans les exosomes. Le GM3 est le ganglioside le plus largement distribué dans le corps, composé de glucose, de galactose et d'acide sialique caractérisé par des groupes sialiques associés à la structure du squelette céramide [18]. Il est impliqué dans la régulation de diverses fonctions cellulaires, notamment la transduction de signalisation, la prolifération, la différenciation et l'apoptose. Selon des études récentes, la concentration sérique de GM3 est plus élevée chez les patients atteints de diabète de type 2, d'hyperlipidémie et d'obésité, tandis que le GM3 peut favoriser l'élimination des récepteurs de l'insuline et réduire la signalisation de l'insuline [19]. Nos résultats ont indiqué des niveaux élevés de toutes les espèces GM3 exprimées différentiellement dans les cellules HK -2 sous stimulation élevée par le glucose, en particulier l'augmentation de GM3 avec la chaîne latérale (22 : 0) qui était la plus évidente. Zhang et al. [20] ont également observé une expression élevée de GM3 d18:1/22:0 dans le cortex rénal de souris atteintes de néphropathie diabétique, ce qui était cohérent avec nos résultats. L'étude sur des rats diabétiques de type 2 induits par la streptozotocine menée par Anela et al. [21] ont trouvé du GM3 inchangé dans les glomérules mais une expression significativement accrue du GM3 dans les tubules rénaux, ce qui est conforme à notre découverte de modifications du GM3 dans les tubules rénaux. Kwak et al. [22] ont trouvé une diminution du contenu glomérulaire en GM3 chez les rats diabétiques induits par la streptozotocine, suivie d'une perte de barrière de filtration sélective de charge dans les glomérules. Il est important de noter que le rôle de GM3 dans les glomérules et les tubules rénaux peut varier. GM3 est également une partie importante du radeau lipidique [23]. Les changements dans les niveaux d'expression de GM3 dans les radeaux lipidiques modifient les activités du cotransporteur Na plus -glucose de type 2 (SGLT2) et du cotransporteur rénal Na plus /K plus /Cl-, qui sont tous deux dépendants des radeaux lipidiques [24]. Certains chercheurs ont supposé qu'une concentration plus élevée de GM3 augmentait les activités du cotransporteur SGLT2 et Na plus / K plus / Cl-, entraînant une augmentation de la réabsorption tubulaire et de la pression hydrostatique des artérioles efférentes, puis provoquant une lésion des cellules tubulaires rénales en endommageant l'équilibre tubuloglomérulaire. Kumari et al. [25] ont constaté que le GM3 dans les exosomes urinaires des patients présentait une différence significative entre la DKD et le diabète sucré. Pris ensemble, le rôle de l'expression élevée de GM3 sous un taux de glucose élevé dans les tubules rénaux devrait être abordé par de futures recherches.

Il est important de noter que nos résultats ont également montré que certaines espèces de CL, notamment CL66: 4 (16: 1), CL70: 7 (16: 1) et CL74: 8 (16: 1), étaient significativement diminuées chez les HK{ stimulés par le glucose élevé. {13}} cellules. Comparé aux cellules HK-2, le CL a été significativement diminué dans les exosomes. Le CL est situé presque entièrement dans la membrane interne mitochondriale et joue un rôle important dans le maintien de la structure mitochondriale. Il joue un rôle important dans la conduction électronique, la production d'adénosine triphosphate, le métabolisme énergétique et l'apoptose [26, 27]. Dans le diabète, les changements morphologiques mitochondriaux et le dysfonctionnement sont souvent accompagnés d'un changement pathologique du CL [28,29]. Les cellules épithéliales des tubules rénaux proximaux nécessitent suffisamment d'ATP pour maintenir le transport actif et la réabsorption de diverses substances. Cellules fortement consommatrices d'énergie, les cellules épithéliales des tubules rénaux proximaux sont riches en mitochondries [30]. La fragmentation mitochondriale a été observée dans les cellules épithéliales tubulaires proximales au début du diabète. Zhang et al. [31] ont découvert que la CL était essentielle au maintien de la fonction mitochondriale tubulaire chez les souris atteintes de diabète de type 1. Nos résultats peuvent fournir une nouvelle base théorique pour étudier le mécanisme de lésion mitochondriale de DKD.

Les exosomes jouent un rôle important dans le maintien de l'homéostasie cellulaire en coopérant avec la voie autophagie-lysosome. Des études antérieures ont montré que des changements dans les niveaux d'expression des PIP pourraient affecter à la fois la sécrétion d'exosomes et l'autophagie cellulaire en régulant la transformation des MVB [32, 33, 34]. Nina et al. [35] ont trouvé que dans les cellules PC-3, l'inhibition de PIKfyve, dont le substrat est PI3P, augmentait la sécrétion d'exosomes et induisait une autophagie sécrétoire, montrant ainsi que ces voies étaient étroitement liées par les PIP. Sur la base de ce qui précède, nous avons observé les changements dans les PIP, la production exosomale et l'autophagie dans les cellules HK -2 stimulées par le glucose élevé. Nos résultats ont montré qu'une glycémie élevée stimulait à la fois la sécrétion d'exosomes et l'activation de l'autophagie dans les cellules HK-2, tandis qu'une diminution significative de l'expression de PI4P a été constatée. D'autres études sont nécessaires pour étudier le mécanisme de régulation de l'exosome-autophagie des PIP impliqués dans la stimulation élevée du glucose.

En tant que messagers, les exosomes jouent un rôle important dans la signalisation intracellulaire et les changements fonctionnels dans le développement de la DKD [36, 37, 38]. Nous avons marqué par fluorescence les exosomes libérés par les cellules HK-2 et démontré leur absorption de paracrine par les GMC. Comparés à leurs cellules mères, les exosomes ont une composition particulière, ce qui les rend plus stables et fonctionnels en raison des domaines riches en cholestérol, en sphingolipides, en phospholipides saturés et en radeaux lipidiques [39]. Même de petits changements dans la composition lipidique peuvent affecter les propriétés de la membrane, ayant ainsi un effet important sur sa fonction. Dans la présente étude, nous avons constaté que TAG, PC et CL étaient significativement diminués dans les exosomes par rapport aux cellules mères HK -2, tandis que 13 espèces de lipides, dont LPA18 : 2, LPI22 : 5, PG32 : 2, FFA16 : 1, GM3 d18 :1/18 :1, GM3 d18 :1/20 :1, GM3 d18 :{{30}}/20 :0, PC40 : 6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE-20 :5, CE-20 :4, CE-22:6 ont été détectés uniquement dans exosomes. Le travail présenté ici fournit une base pour une analyse plus approfondie des rôles paracrines des exosomes libérés par les cellules tubulaires.

Poudre de cistanche

conclusion

En conclusion, notre étude a démontré l'importance de l'analyse lipidomique en fournissant de nouvelles cibles pour explorer la pathogenèse de la DKD. D'autres études sur la fonction des lipides différentiels exprimés ainsi que les études lipidiques complètes sur d'autres cellules du néphron et leurs exosomes pourraient fournir une nouvelle perspective qui permettrait d'élucider davantage le mécanisme de la DKD.

Les références

1. Stephanie Eid, Kelli M. Sas, Steven F. Abcouwer, Eva L. Feldman, Thomas W. Gardner, Subramaniam Pennathur. et coll. Nouvelles connaissances sur les mécanismes des complications du diabète : rôle des lipides et métabolisme des lipides. Diabétologie. 2019 ; 62(9) : 1539-49.

2. Krisztian Stadler, Ira J. Goldberg, Katalin Susztak. L'évolution de la compréhension de la contribution du métabolisme des lipides à l'insuffisance rénale diabétique. Curr Diab Rep. 2015 ; 15(7): 40.

3. Michal Herman-Edelstein, Pnina Scherzer, Ana Tobar, Moshe Levi, Uzi Gafter. Altération du métabolisme des lipides rénaux et de l'accumulation de lipides rénaux dans la néphropathie diabétique humaine. J Lipid Res. 2014 ; 55(3) : 561-72.

4. G Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Alessia Fornoni. Interaction entre les lipides et les mitochondries dans l'insuffisance rénale diabétique. Curr Diabetes Rep. 2019 ; 19 : 144.

5. Kerri J. Grove, Paul A. Voziyan, Jeffrey M. Spraggins, Suwan Wang, Paisit Paueksakon, Raymond C. Harris. et coll. La néphropathie diabétique induit des altérations des profils lipidiques glomérulaires et tubulaires. J Lipid Res. 2014 ; 55(7) : 1375-85.

6. Kelli M. Sas, Jiahe Lin, Thekkelnaycke M. Rajendiran, Tanu Soni, Viji Nair, Lucy M. Hinder. et coll. Interactions lipides-lipides partagées et distinctes dans le plasma et les tissus affectés dans un modèle de souris diabétique. J Lipid Res. 2018 ; 59(2) : 173-83.

7. Joseph V. Bonventre. Pouvons-nous cibler les lésions tubulaires pour prévenir le déclin de la fonction rénale chez les diabétiques ? Sémin Néphrol. 2012 ; 32(5) : 452-62.

8. Bi-Cheng Liu, Tao-Tao Tang, Lin-Li Lv, Hui-Yao Lan. Lésion des tubules rénaux: une force motrice vers la maladie rénale chronique. Rein International. 2018 ; 93(3) : 568-79.

9. Nina Pettersen Hessvik, Alicia Llorente. Connaissances actuelles sur la biogenèse et la libération des exosomes. Cell Mol Life Sci. 2018 ; 75(2) : 193-208.

10. Leila Salimi, Ali Akbari, Nassrollah Jabbari, Behnam Mojarad, Ali Vahhabi, Sławomir Szafert. et coll. Synergies dans les exosomes et les voies d'autophagie pour l'homéostasie cellulaire et la métastase des cellules tumorales. Cell Biosci. 2020 ; 10 : 64.

11. Suresh Mathivanan, Hong Ji, Richard J. Simpson. Exosomes : organites extracellulaires importants dans la communication intercellulaire. J Protéomique. 2010 ; 73(10) : 1907-20.

12. Maja Kosanović, Alicia Llorente, Sofija Glamočlija, José M. Valdivielso, Milica Bozic. Vésicules extracellulaires et fibrose rénale : une odyssée vers une nouvelle approche thérapeutique. Int J Mol Sci. 2021 ; 22(8): 3887.

13. Lin-Li Lv, Ye Feng, Min Wu, Bin Wang, Zuo-Lin Li, Xin Zhong. et coll. Le miARN -19b-3p exosomal des cellules épithéliales tubulaires favorise l'activation des macrophages M1 dans les lésions rénales. La mort cellulaire diffère. 2020 ; 27(1) : 210-26.

14. Raghu Kalluri, Valérie S. LeBleu. La biologie, la fonction et les applications biomédicales des exosomes. Science. 2020 ; 367(6478): eaau6977.

15. Jieli Lu, Sin Man Lam, Qin Wan, Lixin Shi, Yanan Huo, Lulu Chen. et coll. La lipidomique ciblée à couverture élevée révèle de nouveaux prédicteurs des lipides sériques et une dérégulation des voies lipidiques antérieure à l'apparition du diabète de type 2 chez les adultes chinois normoglycémiques. Traitements diabétiques. 2019 ; 42(11) : 2117-26.

16. Sin Man Lam, Raoxu Wang, Huan Miao, Bowen Li, Guanghou Shui. Une méthode intégrée pour l'interrogation directe de l'homéostasie des sphingolipides dans les tissus cardiaques et cérébraux de souris tout au long du développement postnatal jusqu'à la sénescence reproductive. Anal Chim Acta. 2018 ; 1037 : 152-58.

17. Sin Man Lam, Zehua Wang, Jie Li, Xun Huang, Guanghou Shui. La séquestration des acides gras polyinsaturés dans les phospholipides membranaires de la larve dauer de Caenorhabditis elegans atténue la biosynthèse des eicosanoïdes pour une survie prolongée. Rédox Biol. 2017 ; 12 : 967-77.

18. Masako Nishikawa, Makoto Kurano, Takahiro Nitta, Hirotaka Kanoh, Jin-ichi Inokuchi, Yutaka Yatomi. Les taux sériques de GM3(d18 :1-16 :0) et GM3(d18 :1-24 :1) peuvent être associés au lymphome : une étude exploratoire sur les maladies hématologiques. Sci Rep. 2019; 9 : 6308.

19. Takashige Sato, Yutaka Nihei, Masakazu Nagafuku, Seiichi Tagami, Rina Chin, Mitsunobu Kawamura. et coll. Niveaux circulants de ganglioside GM3 dans le syndrome métabolique : une étude pilote. Obes Res Clin Pract. 2008 ; 2(4) : 231-38.

20. Biyu Hou, Ping He, Peng Ma, Xinyu Yang, Chunyang Xu, Sin Man Lam. et coll. Profilage complet du lipidome du rein dans la néphropathie diabétique à un stade précoce. Avant Endocrinol (Lausanne). 2020 ; 11 : 359.

21. Anela Novak, Nikolina Režić Mužinić, Vedrana Cikeš Čulić, Joško Božić, Tina Tičinović Kurir, Lejla Ferhatović. et coll. Distribution rénale du ganglioside GM3 dans des modèles de rats diabétiques de types 1 et 2. J Physiol Biochem. 2013 ; 69 : 727-35.

22. Dong Hoon Kwak, Young Il Rho, Oh Deog Kwon, Seon Ho Ahan, Ju Hung Song, Young Kug Choo. et coll. Diminution du ganglioside GM3 dans les glomérules diabétiques induits par la streptozotocine chez le rat. Vie Sci. 2003 ; 72(17) : 1997-2006.

23. Yong Chen, Jie Qin, Zheng W. Chen. Le NSOM topographique par fluorescence visualise directement les polarités pic-vallée des radeaux GM1/GM3 dans les fluctuations de la membrane cellulaire. J Lipid Res. 2008 ; 49(10) : 2268-75.

24. Pia Welker, Alexandra Böhlick, Kerim Mutig, Michele Salanova, Thomas Kahl, Hartmut Schlüter. et coll. L'activité du cotransporteur rénal Na plus -K plus -Cl- - et le trafic induit par la vasopressine dépendent du radeau lipidique. Am J Physiol Physiol rénal. 2008 ; 295(3) : F789-F802.

25. Sangeeta Kumari, Ajeet Singh. La lipidomique exosomale urinaire révèle des marqueurs de la néphropathie diabétique. Métabolomique actuelle. 2018 ; 6 : 131-39.

26. Alexandre V. Panov, Sergueï I. Dikalov. Cardiolipine, radicaux per hydroxyle et peroxydation lipidique dans les dysfonctionnements mitochondriaux et le vieillissement. Oxyd Med Cell Longev. 2020 ; 2020 : 1323028.

27. Giuseppe Paradies, Valeria Paradies, Francesca M. Ruggiero, Giuseppe Petrosillo. Rôle de la cardiolipine dans la fonction et la dynamique mitochondriales dans la santé et la maladie : aspects moléculaires et pharmacologiques. Cellules. 2019 ; 8(7): 728.

28. Edgard M Mejia, Hieu Nguyen, Grant M Hatch. Biosynthèse des cardiolipines chez les mammifères. Chim Phys Lipides. 2014 ; 179 : 11-6.

29. G. Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Shamroop K. Mallela, Xiaochen Liu, Judith Molina, Alexis Sloan. et coll. Le déficit de la cassette de liaison à l'ATP A1 provoque un dysfonctionnement mitochondrial induit par la cardiolipine dans les podocytes. J Clin Invest. 2019 ; 129(8) : 3387–400.

30. Alejandra Guillermina Miranda-Díaz, Ernesto Germán Cardona-Muñoz, Fermín Paul Pacheco-Moisés. Le rôle de la cardiolipine et des dommages mitochondriaux dans la transplantation rénale. Oxyd Med Cell Longev. 2019 ; 2019 : 3836186.

31. Guanshi Zhang, Jialing Zhang, Rachel J. DeHoog, Subramaniam Pennathur, Christopher R. Anderton, Manjeri A. Venkatachalam. et coll. DESI-MSI et METASPACE indiquent des anomalies lipidiques et des composants membranaires mitochondriaux altérés dans les tubules rénaux proximaux diabétiques. Métabolomique. 2020 ; 16(1): 11.

32. Johan-Owen De Craene, Dimitri L. Bertazzi, Séverine Bär, Sylvie Friant. Les phosphoinositides sont des acteurs majeurs du trafic membranaire et des voies de signalisation lipidique. Int J Mol Sci. 2017 ; 18(3): 634.

33. Kay O. Schink, Kia-Wee Tan, Harald Stenmark. Phosphoinositides dans le contrôle de la dynamique membranaire. Annu Rev Cell Dev Biol. 2016 ; 32 : 143-71.

34. Tore Skotland, Nina P. Hessvik, Kirsten Sandvig, Alicia Llorente. Composition lipidique exosomale et rôle des éther-lipides et des phosphoinositides dans la biologie des exosomes. J Lipid Res. 2019 ; 60(1) : 9-18.

35. Nina Pettersen Hessvik, Anders Øverbye, Andreas Brech, Maria Lyngaas Torgersen, Ida Seim Jakobsen, Kirsten Sandvig. et coll. L'inhibition de PIKfyve augmente la libération d'exosomes et induit une autophagie sécrétoire. Cell Mol Life Sci. 2016 ; 73 : 4717-37.

36. Margherita AC Pomatto, Chiara Gai, Benedetta Bussolati, Giovanni Camussi. Vésicules extracellulaires en physiopathologie rénale. Avant Mol Biosci. 2017 ; 4 : 37.

37. Xiaoming Wu, Yanbin Gao, Liping Xu, Wanyu Dang, Huimin Yan, Dawei Zou. et coll. Les exosomes des cellules endothéliales glomérulaires traitées au glucose élevé déclenchent la transition épithéliale-mésenchymateuse et le dysfonctionnement des podocytes. Sci Rep. 2017; 7 : 9371.

38. Xiao-ming Wu, Yan-bin Gao, Fang-qiang Cui, Na Zhang. Les exosomes des cellules endothéliales glomérulaires traitées au glucose élevé activent les cellules mésangiales pour favoriser la fibrose rénale. Biol ouvert. 2016 ; 5(4) : 484-91.

39. Tore Skotland, Kirsten Sandvig, Alicia Llorente. Lipides dans les exosomes : connaissances actuelles et voie à suivre. Prog Lipid Res. 2017 ; 66 : 30-41.

Weidong Wang, Tingting Li, Zhijie Li, Hongmiao Wang, Xiaodan Liu

Département de néphrologie, Premier hôpital affilié à l'Université médicale de Chine, 155 North Nanjing Street, Shenyang, Liaoning, République populaire de Chine, 110001