L'échinacoside améliore la fonction hématopoïétique chez les souris myélosuppression induite par 5-FU
Mar 19, 2022
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Saisai Wang, et al
Résumé
Objectifs :Nous avons cherché à étudier les effets deéchinacoside(ECH) surhématopoïétiquefonction chez les souris souffrant de dépression médullaire induite par 5-FU.
Principales méthodes :In vitro, après stimulation par l'ECH, la capacité de prolifération des cellules de la moelle osseuse (BM) et des cellules stromales de la moelle osseuse (BMSC) dérivées demyélosuppressionles souris ont été évaluées par dosage CCK8 et morphologie, respectivement. In vivo, des souris myélosuppressives ou témoins induites par 5-FU ont été administrées par voie intragastrique avec ECH(échinacoside)à 15 mg/kg ou le volume égal de solution saline normale tous les jours pendant 12 jours avant que les cellules BM ne soient isolées pour le dosage des cellules formant des colonies. Pendant ce temps, les BMSC ont été cultivés pendant 4 semaines avant que les cellules ne soient observées pour le schéma de croissance, les surnageants de culture cellulaire ont été collectés pour la sécrétion de GM-CSF par ELISA et l'ARN des cellules a été extrait pour l'EPO et le GM-CSF RT-PCR. Des cellules BM ou BMSC stimulées avec ECH pendant 24 h ou 48 h ont été collectées pour l'extraction des protéines et le Western blot.
Principales conclusions:ECH(échinacoside)stimulé la croissance des cellules BM mais pas des BMSC dérivés de souris traitées au 5-FU. L'administration intragastrique d'ECH(échinacoside)chez les souris 5-traitées au FU pourrait augmenter le nombre total dehématopoïétiqueles cellules progénitrices et les cellules progénitrices GM au niveau des souris témoins saines, mais pas les cellules progénitrices BFU. BMSCs traités à l'ECHmyélosuppressionles souris ont grandi plus vigoureusement et ont exprimé plus de GM-CSF, mais pas d'EPO. ECH a activé la voie de signalisation PI3K dans les cellules BM supprimées par 5-FU.
Importance:ECH(échinacoside)pourrait améliorer lahématopoïétiquefonction de la moelle osseuse dans 5- induite par FUmyélosuppressionsouris. ECH(échinacoside)peut être considérée comme une thérapie alternative efficace pour les patients pendant une chimiothérapie ou une greffe de CSH.
Mots clés:Echinacoside, hématopoïétique, myélosuppression, GM-CSF, voie de signalisation PI3K
Échinacoside dansCistanche
Introduction
Le fluorouracile ou 5-FU est l'un des agents chimiothérapeutiques les plus prescrits pour le traitement adjuvant et palliatif des cancers [2,9,28]. C'est un analogue de l'uracile avec un atome de fluor en position C-5 à la place de l'hydrogène et agit en inhibant de manière irréversible l'activité de la thymidylate synthase et en inhibant par la suite la réplication de l'ADN [20]. Leucopénie et atrophie dehématopoïétiquesont les deux principales toxicités liées aux applications de 5-FU chez l'homme, la souris et le porc [15,17,22].Myélosuppression, en raison d'effets inhibiteurs et cytotoxiques surhématopoïétiqueles cellules progénitrices [10] et le stress oxydatif sur la moelle osseuse [25], limitent l'application clinique des chimiothérapies à base de 5-FU.
La suppression de la moelle osseuse induite par le 5-FU entraîne une baisse du nombre total de cellules sanguines. Les symptômes cliniques qui en découlent comprennent la fièvre, l'anémie et les saignements, et les traitements dépendent principalement des transfusions et des suppléments de facteur de croissance [4]. La transfusion peut être efficace pour reconstituer les globules rouges et les plaquettes, mais le soulagement est de courte durée et nécessite des traitements répétés. Les facteurs de croissance comprennent l'érythropoïétine, le facteur de stimulation des colonies de granulocytes (G-CSF) et le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF). Ces facteurs sont des produits chimiques naturels et pourraient stimuler les performances de la moelle osseuse [7,21], mais sont coûteux en argent et ne sont pas utiles pour stimuler la croissance des globules blancs. Les thérapies alternatives efficaces sont en demande. La médecine traditionnelle chinoise est une option disponible qui gagne en popularité [5]. Au cours des dernières années, de nombreuses études se sont concentrées sur les effets des médicaments à base de plantes chinoises pour prévenir et traiter les maladies liées à la chimiothérapie.myélosuppression[33,35].
Échinacoside(ECH) (Fig. 1) est un composé phényléthanoïde extrait de la médecine traditionnelle chinoise Herba Cistanches qui est largement utilisé comme agent favorisant la circulation sanguine, les médicaments pour l'insuffisance rénale ainsi que les maladies neurodégénératives [24]. ECH(échinacoside)possède de multiples activités pharmacologiques de régénération osseuse [18], d'anti-oxydation [8,14,27], de régulation immunitaire, de neuroprotection et d'amélioration du comportement [11,16]. Il a également été révélé comme un agent protecteur contre l'hépatotoxicité [32] et les lésions pulmonaires aiguës [34]. Les récepteurs Trk et la voie aval Trk-ERK pourraient être impliqués dans son activité de protection neuronale contre les lésions de la roténone [36]. Le rôle et les nouveaux mécanismes de l'ECH dans la promotionmyélosuppressionla croissance des cellules de la moelle osseuse ne sont pas entièrement comprises. Dans cette étude, nous avons évalué les effets de l'ECH(échinacoside)surhématopoïétiquefonction chez les souris souffrant de dépression médullaire induite par 5-FU in vitro et in vivo et les mécanismes associés.
Matériaux et méthodes
Produits chimiques et biochimiques
Échinacosidea été acheté auprès de Ronghe Medical Technology and Development Corporation (Shanghai, Chine) (pureté supérieure ou égale à 98 %, déterminée par HPLC) et dissous dans du DMSO. 5-FU a été obtenu auprès de HaoRan Biotechnology Corporation (Shanghai, Chine). Le milieu de méthylcellulose avec des cytokines recombinantes (milieu MethoCult) pour cellules de souris a été acheté auprès de Stem Cell Technologies (Vancouver, Canada).
musculation cistanche
Animaux et conception expérimentale
Des souris femelles Balb/c âgées de 5- à 6- semaines, sans pathogènes spécifiques, pesant entre 15-18 g ont été achetées auprès de la Shanghai Laboratory Animal Company (SLAC, Shanghai, Chine). Les souris ont été maintenues dans l'animalerie de l'Université de Zhejiang, en Chine. Les expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité de protection et d'utilisation des animaux de l'Université du Zhejiang et suivaient le Guide pour les soins et l'utilisation des animaux de laboratoire [1,31].
Des souris ont reçu une injection intrapéritonéale d'une dose de 200 mg/kg de 5-FU pour établir la dépression de la moelle osseuse, comme décrit par Choi EH et al. [6]. Pour l'étude in vitro, des cellules de moelle osseuse (BM) et des cellules stromales de moelle osseuse (BMSC) ont été isolées 2 jours après l'injection de 5-FU. In vivo, les souris ont été réparties au hasard en 4 groupes, 5 à 6 souris dans chaque groupe (n=5–6) : 5-groupe FU/ECH, 5-groupe FU/contrôle, ECH(échinacoside)groupe et groupe de contrôle. Dans le groupe 5-FU/ECH, après l'injection de 5-FU, les souris ont été nourries quotidiennement par voie intragastrique avec de l'ECH à raison de 15 mg/kg par jour pendant 12 jours. Dans le 5-groupe FU/contrôle, au lieu de ECH(échinacoside), un volume égal de solution saline normale a été administré à des souris ayant reçu une injection de 5-FU. Pour le groupe ECH et le groupe témoin, ECH ou une solution saline normale ont été administrés par la même méthode à des souris 5-FU non traitées. Le 12ème jour, les souris ont été euthanasiées et des cellules de moelle osseuse ont été extraites pour des études ultérieures. En détail, les cellules BM ont été préparées pour le dosage des cellules formant des colonies (CFC), les BMSC étaient pour le dosage de la prolifération et les surnageants de culture cellulaire des BMSC ont été collectés pour GM-CSF ELISA et l'ARN des BMSC a été extrait pour l'EPO et le GM-CSF RT -PCR. Les expériences ont été répétées 3 fois.
Préparation des cellules BM et des BMSC
Les cellules BM ont été préparées à partir de suspensions unicellulaires extraites de moelle osseuse de souris. En bref, les souris ont été euthanasiées et trempées dans de l'éthanol pendant 5 min. Les cellules ont été évacuées du canal médullaire du tibia et de l'os fémoral par des lavages répétés avec une aiguille de calibre 23- et tamisées à travers une passoire cellulaire de 100 μm pour obtenir des suspensions unicellulaires. Les cellules de moelle osseuse érythroïde ont été lysées par une incubation à court terme (30 s) avec un tampon de chlorure d'ammonium suivie d'étapes de lavage répétées avec un milieu de culture. La viabilité et le nombre de cellules ont été déterminés par la méthode d'exclusion du bleu trypan à l'aide d'un hémocytomètre.
Pour la génération de BMSC, les cellules BM ont été autorisées à se développer dans des puits de plaques TC pendant 24 h, après avoir retiré les cellules non adhérentes et des lavages répétés avec du milieu de culture, les cellules adhérentes ont été prises comme BMSC.
Les cellules ont été cultivées à 37 degrés avec 5 % de CO2 dans un incubateur humide dans le milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) complété par 10 % de sérum bovin fœtal inactivé par la chaleur (FBS), de pénicilline/streptomycine (100 U/ml) et de L-glutamine. (2nM). Tous les réactifs de culture cellulaire ont été achetés chez Invitrogen (Shanghai, Chine).
Prolifération in vitro des cellules BM par dosage CCK8
Des cellules BM de souris traitées au 5-FU ont été étalées à une densité de 1 × 103 cellules/puits dans une plaque à puits 96- (Costar) et cultivées dans un milieu additionné de différentes concentrations d'ECH(échinacoside)({{0}} μM, 0,1 μM, 1 μM, 10 μM, 25 μM, 50 μM, respectivement). Au jour 3 ou au jour 6, les cellules ont été "pulsées" avec 20 ul de réactif en solution CCK-8 (Beyotime, Jiangsu) et cultivées pendant 4 h supplémentaires. La prolifération cellulaire a été dosée en mesurant la CCK8 colorimétrique sur un lecteur d'ultra microplaques (Molecular Devices) à 450 nm.
Échinacoside dansCistanche
Prolifération et morphologie in vitro des BMSC
Les BMSC ont été préparés dans les puits d'une plaque à puits 6- avec une densité initiale de cellules BM (également provenant de souris traitées 5- FU) de 3,5 × 106 cellules/puits. Après 24 h, le milieu de culture a été remplacé par un milieu contenant de l'ECH (50 ug/ml). Chaque semaine, la moitié des surnageants était prélevée et remplacée par un milieu de culture frais (avec ou sans ECH(échinacoside)comme indiqué). Après 4 semaines de culture, la morphologie des BMSC a été observée au microscope inversé.
Dosage des cellules formant des colonies (CFC)
Le test CFC dans le milieu MethoCult a été effectué en suivant les instructions du fabricant. En bref, des cellules BM de différents groupes de souris ont été préparées à raison de 2 × 105 par ml. Ensuite, 0,4 ml des cellules ont été ajoutés dans 4 ml de milieu MethoCult pour préparer le mélange cellulaire. Après avoir soigneusement mélangé avec une aiguille à bout émoussé de calibre 16-, 1,1 ml de mélange de cellules a été distribué dans une boîte de culture de 35 mm (Stem Cell Technologies), triplé et incubé à 37 degrés dans une atmosphère humidifiée à 5 % de CO2. pendant 7 jours. Après 7 jours de culture, des colonies constituées d'au moins 30 cellules ont été identifiées et comptées.
Réaction en chaîne par transcriptase inverse-polymérase (RT-PCR) et GM-CSF ELISA
Les BMSC dérivés de différents groupes de souris ont été cultivés pendant 4 semaines comme décrit ci-dessus. Après 4- semaine de culture, les BMSC ont été collectés pour l'extraction de l'ARN total avec le kit RNAsimple Total RNA (TianGen, Pékin). L'ADNc du premier brin a été synthétisé en utilisant 1 ug d'ARN total (traité à la DNase) en utilisant le kit de synthèse d'ADNc iScript (Bio-Rad, Richmond, CA). Les expressions du facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages (GM-CSF) et de l'érythropoïétine (EPO) ont été identifiées par RT-PCR semi-quantitative. Les séquences d'amorces PCR étaient les suivantes : GM-CSF : 5′-GGCCTTGGAA GCATGTAGAGG-3′ (sens) et 5′-GGAGAACTCGTTAGAGACGA CTT-3′ (sens inverse) ; EPO : 5′-CCTCATCTGCGACAGTCG AG-3′ (vers l'avant) et 5′-ACAACCCAT CGTGACATTTTCT-3′ (vers l'arrière) ; le gène de ménage Bêta-actine : 5′-GTATCCTGACCCT GAAGTACC-3′ (avant) et 5′-TGAA GGTCTCAAACATGATCT-3′ (inverse). L'amplification par PCR a été effectuée sur un cycleur thermique 2720 (Applied Biosystems) et les produits ont été analysés par électrophorèse sur gel d'agarose. Les niveaux d'expression de l'ARNm des cibles ont été normalisés à celui de la bêta-actine. Les surnageants des BMSC ont été collectés pour le test ELISA GM-CSF en utilisant le kit ELISA GM-CSF (JinSui, Shanghai) conformément aux instructions du fabricant.
Western blot
Cellules BM et BMSC de 5-FU induitesmyélosuppressionles souris ou les souris témoins ont été étalées à une densité initiale de 5 × 106 par puits dans des plaques à puits 6-. Après 24 h, ECH a été ajouté au milieu de culture à 50 ug/ml et les cellules ont été laissées se développer pendant 24 h ou 48 h supplémentaires avant que les cellules ne soient lysées dans un tampon RIPA 1 × (CST, Danvers, MA) contenant 1 mM de fluorure de phénylméthylsulfonyle. (PMSF). La concentration en protéines a été déterminée par le dosage des protéines BCA. 30 ug de protéines totales ont été soumis à une électrophorèse sur des gels de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide à 10 % et transférés sur des membranes de PVDF (Millipore, MA, États-Unis). Les membranes ont été bloquées avec un tampon de blocage ((Beyotime, Haimen, Chine) pendant 1 h à 37 degrés, puis incubées pendant une nuit à 4 degrés avec des anticorps contre -actine (#4967, CST), phospho-PI3 kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) (#4228, CST), phospho-Akt (Ser473) (#4060, CST), Akt (pan) (C67E7) (#4691, CST), phosphore-Stat1(Tyr701)(#9167, CST), Phospho-Stat3 (Tyr705) (#9415, CST), Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)(#9215, CST), Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204)(#4377, CST ), p38 MAPK(#9212, CST), p44/42 MAPK (Erk1/2)(#4695, CST), Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185)(#4668, CST), et SAPK/JNK(# 9258, CST), respectivement. Après lavage, les membranes ont été sondées avec un anticorps secondaire anti-lapin de chèvre conjugué à la peroxydase de raifort (Lianke, Hangzhou, Chine) suivi de la détection du signal avec FluorChem E System (Protein Simple, Santa Clara, Californie, États-Unis).
analyses statistiques
Les données ont été présentées sous forme de moyenne ± SEM. La signification des différences entre chaque groupe a été déterminée par le test t de Student. Une valeur p b 0.05 a été considérée comme statistiquement significative.
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Résultats
ECH fourni in vitro(échinacoside)stimule la prolifération des cellules BM supprimées par le 5-FU
Cellules BM de 5-FU induitesmyélosuppressionles souris ont été traitées avec ECH(échinacoside)à différentes concentrations allant de 0.01 à 50 μM pendant 3 jours ou 6 jours et la prolifération cellulaire a été évaluée par dosage CCK8. Comme le montre la figure 2, le niveau de prolifération des cellules BM traitées à l'ECH était supérieur à celui des cellules non traitées à l'ECH après 3 ou 6 jours de culture. L'effet de stimulation a montré une manière dose-dépendante.
ECH fourni in vitro(échinacoside)n'a aucun effet sur la prolifération de BMSC supprimée par 5-FU
BMSC de 5-FU induitmyélosuppressionles souris ont été traitées avec ECH(échinacoside)à la concentration de 50 ug/ml pendant 4 semaines et la prolifération cellulaire a été évaluée par l'observation de la morphologie cellulaire au microscope inversé. Comme le montre la figure 3, le schéma de croissance et la morphologie des cellules étaient similaires avec ou sans traitement ECH.
ECH administré par voie intragastrique(échinacoside)stimule la fonction hématopoïétique des granulocytes-macrophages myélosuppresseurs induits par 5-FU (CFU-GM), mais pas des cellules progénitrices érythroïdes (BFU-E)
Les modèles de prolifération et de différenciation des cellules BM de 5-FU/ ECH, 5-FU/contrôle, ECH(échinacoside), et le groupe témoin ont été évalués par dosage des CFC. Après 7 jours de culture de cellules BM en milieu MethoCult, les CFC ont été classés et dénombrés in situ au microscope optique. Comme le montre la figure 4, l'analyse des niveaux de progéniteurs a révélé une augmentation significative (pb 0.0001) du nombre de CFU-GM dans le groupe 5-FU/ECH par rapport au groupe 5-FU/témoin (169,3 ± 11,1 contre 54,5 ± 3,1), ainsi qu'avec le groupe témoin (169,3 ± 11,1 contre 129,3 ± 5,6) (pb 0,05, respectivement). Le nombre de BFU-E dans chaque groupe n'avait pas de différence (73,0 ± 11,1 contre 74,7 ± 8,6 contre 91,2 ± 5,5). Le nombre de CFU-GM et de BFU-E dans le groupe ECH était presque le même que dans le groupe témoin (données non présentées).
Fig. 4. ECH administré par voie intragastrique(échinacoside)stimule lahématopoïétiquefonction de 5-FU induitemyélosuppressiongranulocytes-macrophages (CFU-GM), mais pas les cellules progénitrices érythroïdes (BFU-E). (A) Une image représentative des unités formant des colonies. CFU-GM : unités formant colonies-macrophage granulocyte. BFU-E : unité de formation d'éclatement-érythroïde. (B) Les images représentatives des unités formant colonie de chaque groupe. (C) Nombre d'unités formant colonie de chaque groupe. Les cellules BM ont été isolées de chaque groupe et ensemencées pour le test de formation de colonies de cellules progénitrices CFU-GM et BFU-E, comme décrit dans Matériels et méthodes. Les résultats ont été obtenus à partir de 3 expériences indépendantes et exprimés en moyennes ± SEM, n=5–6. * pb 0.05 par rapport au groupe témoin, ## pb 0,0001 par rapport au 5-groupe FU.
ECH administré par voie intragastrique(échinacoside)stimule la prolifération des BMSC myélosuppression induite par le 5-FU.
Après 4 semaines de culture, la prolifération des BMSC a été évaluée par observation de la morphologie cellulaire au microscope inversé léger. Comme le montre la Fig. 5, les BMSC dans 5-FU/ECH(échinacoside)groupe a grandi plus vigoureusement que le groupe témoin.
ECH administré par voie intragastrique(échinacoside)stimule la production de GM-CSF de BMSC myélosuppressives induites par 5-FU
Après 4 semaines de culture de BMSC, les expressions d'ARNm de GM-CSF et d'EPO des cellules ont été déterminées par RT-PCR. Comme le montre la figure 6A, l'expression de GM-CSF dans les BMSC des souris avec suppression de la moelle osseuse traitées à l'ECH a été significativement augmentée par rapport au groupe 5-FU/contrôle. La production de GM-CSF dans les surnageants de culture cellulaire a été déterminée par ELISA. Comme le montre la Fig. 6B, par rapport au groupe 5-FU/contrôle, le 5-FU/ECH(échinacoside)groupe affichait une expression plus élevée de GM-CSF (pb 0.05) et étaient presque autant que le groupe témoin.
ECH(échinacoside)active la voie de signalisation PI3K dans les 5-cellules BM supprimées par FU
Cellules BM et BMSC de 5-FU induitesmyélosuppressionou des souris témoins ont été stimulées avec ECH(échinacoside)à la concentration de 50 ug/ml pendant 24 h ou 48 h avant que les cellules ne soient recueillies pour l'extraction des protéines et le Western blot. Étant donné que les mécanismes de l'ECH(échinacoside)ne sont pas beaucoup étudiés, nous avons passé au crible un panel des voies de signalisation associées, notamment les voies de signalisation JAK/STAT1, JAK/STAT3, SAPK/JNK, p-38 MAPK, p44/42 MAPK et PI3K/Akt. Comme le montre la figure 7, ECH pourrait induire une expression élevée de p-PI3K p85/p55 dans les cellules BM dérivées de souris 5-FU pour lesquelles l'induction n'était pas évidente dans les BMSC ou dans les groupes témoins. Pour toutes les autres voies, nous n'avons pas observé de grandes différences (données non présentées).
Discussion
Il semblait vrai qu'ECH(échinacoside)n'a eu aucun effet sur les souris avec une hématopoïèse normale puisque pour les souris sans traitement 5-FU, le nombre de cellules progénitrices hématopoïétiques dans l'ECH(échinacoside)était presque la même que celle du groupe témoin, de même que la prolifération et l'activation des BMSC comme indiqué par la morphologie, les sécrétions de GM-CSF et d'EPO. Ainsi, dans la session de résultat, les données de l'ECH(échinacoside)groupe ont été combinés avec un groupe témoin et décrits comme un groupe témoin.
5-Le FU en tant que médicament chimiothérapeutique dans le traitement du cancer a des impacts sur la fonction de la moelle osseuse. L'utilisation de fortes doses de 5-FU peut provoquer une suppression sévère de la moelle osseuse [19]. Dans notre étude, le modèle de suppression de la moelle osseuse a été établi avec succès chez la souris par un traitement 5-FU, comme en témoignent la diminution des unités formant des colonies et la morphologie des BMSC.
La moelle osseuse est un élément majeurhématopoïétiqueorgane composé de cellules souches hématopoïétiques (CSH) et de cellules stromales de la moelle osseuse (BMSC) [13]. Les premières cellules peuvent produire des cellules sanguines, notamment des globules rouges, des plaquettes, des monocytes, des granulocytes et des lymphocytes. Et ces dernières cellules peuvent produire de la graisse, du cartilage et de l'os qui sont définis comme des cellules mésenchymateuses ou stromales [26]. Il est bien admis que les BMSC sont des composants clés de la niche HSC où ces deux populations de cellules souches s'organisent étroitement en conséquencehématopoïétiqueet l'homéostasie squelettique [29]. Les BMSC pourraient stimuler et améliorer la prolifération des CSH en sécrétant des molécules régulatrices et des cytokines, telles que FL [23], GM-CSF [12] et SCF [12,3].
Les données in vitro ont démontré que l'ECH(échinacoside)pourrait stimuler la prolifération des cellules BM à partirmyélosuppressionsouris d'une manière dose-dépendante, bien que, en général, les cellules aient poussé plus vigoureusement au jour 3 qu'au jour 6, probablement en raison de l'environnement de culture in vitro. Au contraire, ECH(échinacoside)n'a eu aucun effet sur la prolifération des BMSC chez les souris traitées au 5-FU. Pour exclure la possibilité que l'effet négatif ne soit pas dû à la condition de croissance cellulaire, dans le cadre expérimental, nous avons également inclus Rg1, un composant d'herbe dont il a été prouvé qu'il stimule les BMSC demyélosuppressioncroissance des souris, comme témoin positif [33].
Les données in vivo ont prouvé que l'ECH(échinacoside)pourrait reconstruire efficacement l'hématopoïèse, très probablement la granulocytopoïèse et la mégacaryocytopoïèse, mais pas l'érythropoïèse, dansmyélosuppressionsouris. L'administration intragastrique d'ECH(échinacoside)aux 5-souris traitées au FU pendant 12 jours a entraîné une augmentation du nombre totalhématopoïétiquedes cellules progénitrices et des cellules progénitrices des granulocytes-macrophages, mais pas des cellules progénitrices érythroïdes comme l'indique le nombre de CFU-GM et de BFU-E provenant des dosages de CFC. Fait intéressant, nous avons remarqué que le nombre de CFU-GM dans le 5-FU/ECH(échinacoside)groupe était encore plus élevé que celui des groupes témoins. Nous avons émis l'hypothèse d'une expansion rapide de CFU-GM qui s'est produite en compensation de lamyélosuppressioncondition dirigée par 5-FU. Nos données ont également révélé que l'ECH pouvait stimuler la prolifération des BMSC et du GM-CSF mais pas la production d'EPO dansmyélosuppressionsouris, ce qui était cohérent avec les résultats des CFC.
Les résultats jusqu'à présent ont mis en évidence une nouvelle façon ECH(échinacoside)qui pourrait être utilisé pour améliorer sonhématopoïétiquefonction dansmyélosuppressionsouris (comme le montre la Fig. 8) : Dans un environnement de niche HSC, soit par culture mixte de BM in vitro, soit dans la moelle osseuse in situ, l'ECH stimule la prolifération des BMSC et la production de GM-CSF, stimule et améliore ainsi la prolifération et la différenciation des HSC. Sans l'existence de HSC, l'ECH n'est pas en mesure de stimuler la prolifération des BMSC.
Le récepteur GM-CSF est constitué de sous-unités (liaison au ligand) et (signalisation). Le GM-CSF se lie d'abord à la sous-unité, puis induit les cascades de signalisation en aval par l'interaction des protéines effectrices avec la sous-unité [30]. sous-unité transactivée JAK2, qui initie la signalisation en aval. Les modules de signalisation activés comprennent la voie Janus kinase/transducteur de signal et activateur de transcription (JAK/STAT), la voie mitogen-activated protein kinase (MAPK) et la voie phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) [30]. Fait intéressant, le résultat de notre criblage a montré que la voie PI3K était activée dans les cellules BM dérivées de souris traitées avec 5-FU, mais n'était pas évidente dans les BMSCS supprimés par 5-FU et les cellules BM normales ou BMSC. Il est probable que via l'activation de la voie GM-CSF/PI3K, ECH(échinacoside)stimule sélectivement la croissance des cellules BM.
conclusion
En résumé, nous avons démontré que ECH(échinacoside)a un effet promoteur prometteur surhématopoïétiquefonction chez les souris avec suppression de la moelle osseuse induite par 5-FU, en particulier sur les cellules granulocytaires et macrophagocytaires, ce qui suggère que l'ECH(échinacoside)peut avoir un potentiel d'application clinique dans l'inhibition de la moelle osseuse pendant la chimiothérapie ou la transplantation de CSH après un traitement avec des produits chimiques.
Déclaration de conflit d'intérêts
Il n'y a pas de conflits d'intérêts.
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