Effets d'un nutraceutique à base de fruits et légumes sur les biomarqueurs de l'inflammation et de l'état oxydatif dans le plasma d'une population en bonne santé : un essai clinique contrôlé par placebo, en double aveugle et randomisé

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Résumé: Il existe des preuves scientifiques de l'effet positif depolyphénolsdes aliments végétaux surinflammation etoxydantstatut. Le but de la présente étude était de déterminer si le traitement avec un nutraceutique riche en polyphénols réduit la concentration plasmatique de certainsoxydantetinflammatoirebiomarqueurs dans une population saine. Cent huit sujets ont été sélectionnés et stratifiés par sexe dans le groupe d'intervention (n {0}}) et le groupe placebo (n=55). Quatre-vingt-douze sujets ont terminé l'étude après deux périodes de traitement de 16- semaines séparées par une période de sevrage de quatre semaines. Les résultats ont révélé des différences statistiquement significatives chez les sujets traités avec l'extrait polyphénolique par rapport au placebo : une diminution de l'homocystéine, des lipoprotéines de basse densité oxydées (OxLDL), du TNF-, du sTNFR1 et de la protéine C-réactive (CRP). La diminution la plus significative a été observée pour OxLDL (de 78,98 ± 24,48 à 69,52 ± 15,64 ; p < 0.05)="" et="" crp="" (de="" 1,50="" ±="" 0.="" 33="" à="" 1,39="" ±="" 0.37 ;="" p="">< 0,05),="" les="" deux="" montrant="" des="" différences="" significatives="" par="" rapport="" au="" placebo="" (p="">< 0,001).="" de="" plus,="" les="" catécholamines="" ont="" augmenté="" après="" l'administration="" du="" produit="" à="" l'étude,="" en="" particulier="" dans="" le="" cas="" de="" la="" dopamine="" (de="" 15,43="" ±="" 2,66="" à="" 19,61="" ±="" 5,73="" ;="" p="">< 0,05).="" ainsi,="" la="" consommation="" d'un="" alicament="" à="" base="" de="" fruits="" et="" légumes="" à="" haute="" teneur="" en="" polyphénols="" semble="" améliorer="" les="" paramètres="" liés="" aux="" bénéfices="" santé="">oxydantetinflammatoirebiomarqueurs), y compris des changements remarquables dans l'expression des catécholamines.

Mots clés : polyphénol ; biomarqueurs; stress oxydatif; fruit; légume; nutraceutique

1. Introduction

La littérature scientifique a documenté le rôle de l'alimentation dans la prévention des maladies non transmissibles telles que l'obésité, les maladies cardiovasculaires, le cancer, et toutes les causes de décès, notamment à travers la consommation de fruits et légumes pour leur forte teneur en composés bioactifs, principalement les polyphénols [1 ,2]. Il existe une relation inverse entre le régime méditerranéen, caractérisé par une forte consommation de produits riches en polyphénols, via la consommation d'aliments et de boissons riches en polyphénols tels que les fruits, les légumes, le cacao, le thé et le café, et le risque de mortalité [3,4]. Bien qu'il ait été démontré que la consommation de 800 g/jour de fruits et légumes réduit le risque de maladies cardiovasculaires et de mortalité toutes causes confondues, et que 600 g/jour réduit le risque de cancer, l'OMS et plusieurs recommandations alimentaires recommandent 400 g/jour [5]. Cependant, la plupart de la population n'atteint même pas le minimum établi par les autorités sanitaires, qui équivaut à cinq portions de fruits et légumes par jour [6,7]. Les avantages liés à un mode de vie sain sont connus dans le monde entier, avec l'émergence de nouveaux produits qui offrent la possibilité d'incorporer les composés bioactifs susmentionnés à travers des suppléments/nutraceutiques, ce qui aide à atteindre les recommandations nutritionnelles [8].

De plus, en raison du vieillissement progressif de la population, entre autres facteurs tels que l'alimentation et le mode de vie, on assiste à une augmentation accélérée des maladies neurodégénératives, avec la MA comme principal exposant, dont la prévalence double tous les 20 ans. En raison de l'impact et du coût social qu'elle engendre, de nombreuses études ont été menées sur la relation entre la consommation de fruits et légumes comme apport d'antioxydants qui réduisentoxydantdommages au niveau du cerveau [9].

Les polyphénols sont produits en tant que métabolites secondaires des plantes en tant que mécanisme de défense contre les conditions défavorables (parasites, climat ou pollution, entre autres) [10] et forment un large groupe de composés phytochimiques bioactifs, notamment les acides phénoliques, les stilbènes, les lignanes, les alcools phénoliques et flavonoïdes [11,12]. Ils apportent des effets potentiels dans la prévention et le traitement de plusieurs pathologies, telles que les maladies cardiovasculaires, le cancer, le diabète sucré, le vieillissement et les maladies neurodégénératives [13] à travers plusieurs bioactivités (activité cardioprotectrice, anti-inflammatoireactive, activité anti-âge, activité antioxydante, activité anticancéreuse, effets antimicrobiens, effets neuroprotecteurs, effets protecteurs des poumons, effets protecteurs des reins, prévention de l'ostéoporose et protection contre les rayons UV) [14]. Les polyphénols atténuentinflammationen supprimant pro-inflammatoirefacteurs de transcription d'interagir avec les protéines impliquées dans l'expression des gènes et la signalisation cellulaire [15]. La capacité vasodilatatrice, vasoprotectrice, antithrombotique, antilipémique, anti-sclérotique, anti-inflammatoire et anti-apoptotique des polyphénols est une conséquence de leurs propriétés saines [12], considérant que les polyphénols sont la principale source d'antioxydants (10 fois plus que la vitamine C et 100 fois plus élevé que la vitamine E et les caroténoïdes) [16]. En fait, la quercétine, la myricétine et le kaempférol sont des flavanols, les flavonoïdes ayant la capacité de neutralisation des radicaux libres la plus élevée, car leur structure de groupe phénolique est capable de capturer les électrons non appariés des ROS, générant des espèces réactives neutralisées [17]. Cependant, la concentration de polyphénols dans le plasma dépend fortement de la structure chimique et de la source alimentaire, de sorte qu'un apport à long terme est conseillé pour obtenir tous les avantages associés [12].

L'objectif de l'essai clinique en cours était d'évaluer si la consommation à long terme d'une grande variété de polyphénols par le biais d'un nutraceutique à base de fruits et légumes est capable d'améliorer les biomarqueurs liés àinflammationetoxydantchez les sujets sains qui ne consomment pas les quantités recommandées de fruits et légumes. De plus, la population non âgée en bonne santé a fait l'objet de quelques études d'intervention qui relient la consommation de fruits et légumes et les niveaux de catécholamines en tant que variables liées à la cognition [27,28,34].

2. Résultats

2.1. Population étudiée

Au total, 108 sujets ont été inclus dans cette étude (le tableau 1 montre leurs données démographiques), répartis en deux groupes homogènes (N1 et N2). Enfin, après le croisement et la perte de suivi, 92 sujets (N1=48, N2=44) ​​ont terminé l'intervention et ont été inclus dans l'analyse statistique finale, comme le montre la figure 1.

2.2. Biomarqueurs plasmatiques

Les moyennes et les écarts-types de tous les biomarqueurs analysés chez tous les sujets, à la fois au départ et à la fin de l'intervention après la prise d'extrait polyphénolique (EXT) ou la prise de placebo (PLA), sont représentés dans le tableau 2.

Concernant le profil lipidique, la variation du cholestérol à lipoprotéines de haute densité (HDL) selon le type de produit consommé est remarquable. Les valeurs de HDL diminuent significativement après consommation de PLA (∆4,52mg/dL<0.05),while increased="" significantly="" in="" the=""><0.05).additionally, the="" difference="" between="" both="" groups="" was="" also="" statistically="" significant="" at="" the="" end="" of="" the=""><0.05). finally,="" total="" cholesterol="" and="" triglycerides="" values="" did="" not="" show="" significant="" differences="" throughout="" the="" intervention="" after="" pla="" or="" ext="">
Regarding the vitamins analyzed, a slight increase in vitamin B12 was observed in both groups, as well as small non-significant variations in vitamin E values, as shown in Table2(p>0.05). Par exemple, la vitamine B12 variait après le traitement initial dans les groupes PLA et EXT ; cependant, aucune différence significative n'a été trouvée (p=0.43 et p=0.20, respectivement). Dans le cas de la vitamine E, les valeurs variaient dans les groupes PLA(p=0.98) et EXT(p=0.91). De plus, en comparant les groupes à la fin de l'intervention, aucune des différences significatives ont été observées pour la vitamine B12 (p=0.205) ou la vitamine E (p=0.974).

Concernant les valeurs de catécholamines, le principal résultat était l'augmentation significative de la dopamine (∆4,18pg/mL;p<0.001)after consumption="" of="" ext="" with="" respect="" to="" pla="" (p="0.22)," showing="" significant="" differences="" between="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" intervention=""><0.001). a="" significant="" increase="" in="" norepinephrine="" values="" was=""><0.05), with="" an="" increase="" of="" ∆="" 39.21="" pg/ml="" in="" the="" ext="" group,="" not="" observed="" in="" the="" pla="" group="" (p="0.72)." there="" was="" no="" signifificant="" difference="" between="" the="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" study.="" analyzing="" the="" cortisol="" and="" adrenaline="" values,="" no="" signifificant="" differences="" were="" observed="" in="" any="" group="" during="" the="" intervention,="" nor="" at="" the="" end="" of="" the="">

La fonction thyroïdienne était déterminée par les hormones T3, T4 et TSH. Au cours de l'intervention, il a été observé que les valeurs de l'hormone T3 diminuaient significativement dans les deux groupes (p < 0.05).="" les="" valeurs="" de="" l'hormone="" t4="" variaient="" de="" différentes="" manières,="" augmentant="" significativement="" dans="" le="" groupe="" pla="" (∆="" 0.57="" mcg/l ;="" p="">< 0.001)="" et="" diminuant="" de="" manière="" non="" significative="" dans="" le="" groupe="" ext="" (∆="" 0.47="" mcg="" ).="" pendant="" ce="" temps,="" les="" valeurs="" de="" l'hormone="" tsh="" sont="" restées="" constantes="" après="" la="" consommation="" des="" deux="" produits.="" en="" comparant="" l'évolution="" des="" trois="" hormones="" entre="" les="" groupes="" à="" la="" fin="" de="" l'étude,="" aucune="" différence="" significative="" n'a="" été="" observée="" pour="" t3="" (p="0.195)," t4="" (p="0.195)" ou="" tsh="" (p="">

Pour déterminer l'innocuité des produits à l'étude, les transaminases (GOT, GPT et GAMMA GT) ont été analysées afin d'évaluer la fonction hépatique des sujets, sans observer de changements significatifs (p > 0.05) dans aucun des enzymes hépatiques susmentionnées après consommation du produit ou du placebo. Par conséquent, on peut supposer que la consommation des produits est sans danger.

3. Débat

Comme indiqué ci-dessus, les données obtenues dans le présent manuscrit reflètent certaines différences entre les traitements. Cependant, dans les conditions de base, aucune différence significative n'a été observée entre les groupes, ce qui renforce les changements significatifs obtenus après la consommation du produit.

L'homocystéine plasmatique est considérée comme un indicateur de risque cardiovasculaire qui peut être modifié par l'exercice et l'alimentation. De plus, son effet neuroprotecteur élevé est bien connu [35,36]. Cependant, il semble que la nourriture fournisse un apport constant de nutriments pour maintenir un métabolisme optimal de l'homocystéine [37]. Dans notre étude, l'homocystéine a diminué significativement après la consommation du produit, comme dans les études précédentes [22,38]. Par conséquent, la consommation de polyphénols à fortes doses contribue à réduire l'homocystéine, qui pourrait être considérée comme une capacité cardioprotectrice. À leur tour, le profil lipidique, le cholestérol total et les triglycérides n'ont pas été affectés tout au long de l'intervention. Cependant, il était à noter que le cholestérol HDL plasmatique augmentait significativement après la consommation du produit et diminuait après la consommation du placebo. Ces modifications des lipoprotéines plasmatiques renforcent l'idée de la capacité cardioprotectrice du produit étudié.

La principale découverte de la présente recherche était la diminution significative de l'OxLDL, ainsi que l'augmentation du cholestérol HDL après la consommation chronique de l'extrait riche en polyphénols par rapport au placebo. Ces résultats sont en concordance avec des études antérieures soutenant que les polyphénols montrent une protection contre l'athérosclérose, inhibant ainsi la prolifération des muscles lisses vasculaires [12, 39, 40]. OxLDL est l'un des rares paramètres reconnus par l'Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA), dans le cadre des allégations fonctionnelles, et semble être une variable de résultat appropriée pour la justification des allégations de santé liées à la réduction des dommages oxydatifs sur les lipides. 41,42]. De plus, OxLDL favorise l'adhésion des monocytes aux cellules endothéliales par un mécanisme indépendant de l'expression de ICAM-1 et VCAM-1, générant des cellules spumeuses [43]. Cependant, cela ne se produit pas avec les LDL [44]. Cette liaison s'effectue par l'intermédiaire de certains récepteurs, comme le CD36. OxLDL est un ligand pour PPAR et régule positivement l'expression de CD36, favorisant l'absorption d'OxLDL par les macrophages [45] et par conséquent contribuant au développement de l'athérosclérose par l'activation du système immunitaire [46]. Fait intéressant, OxLDL favorise la dysfonction endothéliale et l'athérosclérose, diminuant ainsi le risque cardiovasculaire [47,48].

À son tour, le traitement avec le produit à l'étude a entraîné une réduction plasmatique de la CRP, une protéine de phase aiguë synthétisée dans le foie, médiée par d'autres cytokines, en particulier l'IL-1 et l'IL-6 [49]. Des niveaux élevés de CRP sont corrélés à un risque accru d'événements cardiovasculaires, même chez les individus en bonne santé [50]. Plusieurs études ont trouvé une association entre les concentrations de CRP et les événements cardiovasculaires tels que l'infarctus aigu du myocarde, les accidents vasculaires cérébraux et la progression de la maladie occlusive artérielle périphérique [51, 52]. Bien que les niveaux obtenus en CRP se situent dans les plages normales pour une personne en bonne santé, la diminution de ces niveaux montre la validité des polyphénols à cet égard.

De plus, le marqueur immuno-inflammatoire TNF- a été significativement réduit après la consommation de l'extrait. Le TNF- est une cytokine pro-inflammatoire significativement exprimée dans le tissu adipeux, ainsi que dans les leucocytes, les cellules endothéliales et les cellules musculaires [53], participant à la dérégulation endothéliale, stimulant la migration des monocytes et des macrophages et induisant l'expression de molécules d'adhésion. [54]. En effet, une augmentation du TNF- peut survenir dans un régime à faible concentration en carotènes, ce qui peut expliquer la diminution observée des taux de TNF- [55]. Par conséquent, il est logique que dans notre étude, il diminue sa valeur après consommation du produit en raison de la forte présence de carotènes dans le produit.

L'extrait polyphénolique utilisé pour la présente enquête a été testé dans plusieurs études d'intervention, avec différents temps de consommation et dans différents groupes de population, conduisant à des résultats incohérents. Lors d'une intervention d'une {{0}} semaine chez des hommes entraînés appartenant aux forces de police spéciales autrichiennes, des réductions significatives (p < 0,001)="" ont="" été="" signalées="" dans="" la="" concentration="" de="" groupes="" carbonyle="" dans="" les="" protéines="" et="" le="" tnf-="" aux="" 16e="" et="" 28e="" semaines="" .="" une="" différence="" avec="" notre="" étude="" était="" que="" dans="" leur="" étude,="" les="" échantillons="" étaient="" obtenus="" aux="" semaines="" 4,="" 8,="" 16="" et="" 28.="" notamment,="" les="" valeurs="" augmentaient="" jusqu'à="" la="" semaine="" 8="" et="" diminuaient="" à="" partir="" de="" la="" semaine="" 16="" [56].="" dans="" une="" intervention="" de="" huit="" semaines="" chez="" des="" sujets="" en="" surpoids="" et="" obèses="" de="" plus="" de="" 40="" ans,="" des="" réductions="" significatives="" du="" cholestérol="" total,="" du="" cholestérol="" ldl="" et="" du="" tnf-="" ont="" été="" rapportées,="" qui="" n'ont="" pas="" été="" obtenues="" avec="" le="" placebo ;="" néanmoins,="" aucune="" différence="" significative="" n'a="" été="" trouvée="" dans="" la="" crp,="" le="" stnfr1="" ou="" l'oxldl="" [57].="" les="" deux="" résultats="" semblent="" confirmer="" que="" l'apport="" de="" polyphénols="" à="" long="" terme,="" comme="" dans="" notre="" étude="" (16="" semaines),="" est="" associé="" à="" une="" plus="" grande="" efficacité="" contre="" l'inflammation.="" dans="" une="" autre="" intervention="" de="" huit="" semaines="" chez="" des="" femmes="" obèses,="" des="" améliorations="" significatives="" ont="" été="" observées="" dans="" plusieurs="" marqueurs="" d'oxydation="" des="" protéines="" tels="" que="" les="" protéines="" carbonyle,="" oxldl="" (p="0.015)" et="" l'oxydation="" totale="" des="" lipides="" de="" tous="" les="" lipides.="">inflammatoiremarqueurs, des réductions significatives du TNF- (p=0.011) ont été constatées. Au départ, les valeurs de TNF- étaient supérieures à la plage établie dans les groupes placebo et extrait ; à la fin de l'intervention, ils restaient élevés dans le groupe placebo et diminuaient à des valeurs normales dans le groupe ayant consommé le produit [58]. Enfin, l'efficacité de l'extrait a également été testée chez des sujets non sains, rapportant une diminution des OxLDL après une période de consommation de trois mois par de gros fumeurs [59].

Concernant les catécholamines, des augmentations significatives ont été observées de la noradrénaline et surtout de la dopamine après consommation du produit à l'étude. Cependant, aucun changement significatif n'a été observé pour le cortisol et l'adrénaline dans aucun groupe. Bien que certaines études antérieures aient rapporté une réduction du cortisol dans le plasma [60] ou la salive [61] après l'apport de polyphénols, ce n'est pas habituel et les valeurs montrent rarement des changements significatifs [62–64] concernant l'apport de polyphénols. Le fait que les valeurs d'adrénaline et de cortisol n'ont pas augmenté implique qu'une réponse adrénergique liée à la consommation du produit ne s'est pas développée. La noradrénaline et la dopamine sont également augmentées chez les patients âgés atteints de maladies neurodégénératives [65, 66] et sont liées à l'anxiété [67] et à l'amélioration cognitive [68]. De plus, la noradrénaline est étroitement liée à l'attention, ainsi qu'à la vigilance [69,70]. Les résultats obtenus dans la présente étude en termes de dopamine et de noradrénaline pourraient être liés aux améliorations au niveau cognitif observées dans une autre publication [71]. On peut affirmer que la consommation de polyphénols augmente donc les niveaux de vigilance et d'attention, ce qui est corrélé aux résultats au niveau des tests cognitifs [71]

Une limitation du présent essai clinique, telle que décrite par Di Lorenzo et al. [10] dans une étude systématique sur la biodisponibilité des polyphénols, est que l'inclusion de sujets sains dans les essais cliniques rend difficile l'évaluation de différences significatives de biomarqueurs, qui sont altérés dans des conditions pathologiques. D'autres limites de cette étude incluent le fait que les métabolites des composés phénoliques dans le produit n'ont pas été déterminés au-delà de la teneur en vitamine E ou de la réponse individuelle, ce qui pourrait affecter la biodisponibilité et la bioactivité des polyphénols [72].

Il est important de se rappeler que les volontaires de la présente étude sont des sujets sains et que les biomarqueurs de l'inflammation que nous avons déterminés se situent entre les valeurs normales dans le plasma. Ainsi, les différences observées dans l'intervalle des valeurs normales de ces biomarqueurs, bien que statistiquement significatives, ne sont pas frappantes d'un point de vue clinique. Cependant, si le produit à l'étude a obtenu des changements statistiquement significatifs chez les personnes en bonne santé, ces changements pourraient être encore plus importants chez les patients présentant des valeurs anormales [73, 74], puisque les polyphénols du produit aideraient à combattre au moins partiellement l'agent responsable de cette perturbation. du niveau plasmatique [75].

Par conséquent, les recherches futures pourraient se concentrer sur la prise en compte de ces aspects dans les populations en bonne santé et non en bonne santé.

4. Matériels et méthodes

4.1. Conception d'essai

Cette étude consistait en un essai clinique randomisé, croisé, en double aveugle, stratifié selon le sexe et contrôlé par placebo pour évaluer l'efficacité de la consommation quotidienne d'un nutraceutique encapsulé (Juice Plus plus Premium®, The Juice Plus plus Company, Collierville , TN, USA) basée sur différents fruits et légumes sur les biomarqueurs plasmatiques de l'inflammation et de l'état oxydatif. L'intervention a duré 36 semaines, soit deux périodes de 16 semaines séparées par une période de sevrage de 4 semaines. Au cours de l'intervention, les sujets sont venus au laboratoire quatre fois (au début et à la fin de chaque phase), obtenant des échantillons de sang dans des conditions de jeûne. Au début de chaque phase, le produit (EXT ou PLA) était livré aux sujets, et à la fin de chaque phase, les sujets devaient retourner les emballages pour que les chercheurs quantifient les produits restants.

Chaque sujet a signé un document de consentement éclairé et s'est vu attribuer un code numérique par ordre d'arrivée ; par la suite, un chercheur extérieur a effectué la randomisation à l'aide d'un générateur informatique (Epidat v4.1 Epi-dat, Espagne) en affectant les sujets à l'un des groupes. Ni les chercheurs ni les sujets ne savaient à quels groupes appartenaient les sujets. Le produit et le placebo ont été marqués avec des codes fournis par la société distribuée et classés en A et B, et ce n'est qu'à la fin de l'étude que les chercheurs ont été informés du code correspondant au produit et du placebo. Le protocole a été approuvé par le Comité d'examen institutionnel de l'Université catholique San Antonio de Murcie (UCAM) (date : 24 novembre 2017 ; code : CE111072). Cette étude a été réalisée conformément aux normes de bonnes pratiques cliniques et a été menée conformément à la déclaration d'Helsinki. L'essai a été enregistré sur www.clinicaltrials.gov (consulté le 11 juin 2020) (identifiant CFE/JU/44-17.) L'étude a été réalisée au Département de pharmacie de la Faculté des sciences de la santé de l'Université catholique de San Antonio de Murcie (UCAM). La législation européenne en vigueur sur la protection des données personnelles a été respectée (Règlement (UE) 2016/679).

4.2. Intervenants

Les sujets devaient remplir tous les critères d'inclusion (signer le formulaire de consentement éclairé, IMC compris entre 18,5 et 35 kg/m2, ne pas avoir de maladie chronique, ne pas consommer plus de trois portions de fruits et légumes par jour, et avoir entre 18 ans et 65 ans) et ne répondant à aucun des critères d'exclusion (être sous médication ou sous traitement pharmacologique, prendre des multivitamines, être allergique aux fruits ou légumes, être au régime, être végétarien ou végétalien, fumer, consommer plus de 3 verres d'alcool ( vin ou bière) par jour, être enceinte, avoir subi une intervention chirurgicale majeure au cours des trois derniers mois, avoir des problèmes de sommeil et avoir donné 0,5 L de sang au cours des trois derniers mois). Après vérification des critères d'inclusion/exclusion, un total de 108 sujets des deux sexes ont commencé l'étude. Une vérification a été entreprise pour s'assurer que les sujets continuaient à répondre aux critères tout au long des visites à l'unité au moyen d'une enquête sur l'indice de style de vie méditerranéen (MEDLIFE) pour évaluer les habitudes alimentaires et l'activité physique [76]. Au cours de l'intervention, 16 sujets ont été perdus de vue, de sorte que le

le nombre de sujets ayant terminé l'étude était de 92, dont les données démographiques sont présentées dans le tableau 1.

4.3. Supplément d'essai

Le produit faisant l'objet de l'enquête et le placebo avaient les mêmes caractéristiques, et tous deux étaient fabriqués et fournis par The Juice Plus plus Company, Collierville, TN, États-Unis. La présentation se présentait sous la forme de produits pharmaceutiques blancs encapsulés, fournis dans des flacons différenciés uniquement par un code. Une fois l'étude terminée, les investigateurs ont reçu quel code appartenait au produit et lequel au placebo. Les différences dans le produit commercial étaient qu'il consistait en une prise de trois types différents de capsules par jour - deux de baies mélangées, deux de fruits mélangés et deux de légumes mélangés, chacun fourni dans une bouteille séparée. Pour cette raison, et afin de pouvoir fabriquer un produit similaire et un placebo, il a été décidé de fabriquer des gélules contenant un mélange des trois gélules précitées (baies, fruits et légumes), la consommation quotidienne pour cette étude étant de six gélules - trois avant le petit-déjeuner et trois au milieu de l'après-midi, accompagnées d'eau.

Le produit faisant l'objet de l'enquête était présenté dans des gélules blanches opaques et contenait de la poudre et de la pulpe de jus de fruits, de légumes et de baies de pomme, d'orange, d'ananas, de canneberge, de pêche, de cerise acérola, de betterave, de pruneau, de datte, de mangue, de carotte, de persil, de chou frisé, de brocoli, chou, épinards, son de riz, tomate, feuilles d'artichaut, myrtilles, mûres, cassis, myrtilles, canneberges, raisin concord, baies de sureau, extrait de pépins de raisin, extrait de thé vert, racine de gingembre, framboises, cacao, grenade, mélange naturel de tocophérols ( , δ, , -tocophérols, tournesol -tocophérol), mélange de caroténoïdes naturels (lutéine, -carotène, lycopène, astaxanthine), pectine d'agrumes, bioflavonoïdes d'agrumes, zeste de citron, carbonate de calcium, poudre d'ail, spiruline, mélange d'enzymes naturelles, dioxyde de silicium , stéarate de magnésium d'origine végétale, mandarine et Lactobacillus acidophilus. Une dose quotidienne de 6 gélules fournissait 2,91 mg de carotène, 18,7 mg de vitamine E, 159 mg de vitamine C, 318 µg de folate, 6,1 mg de glutéine, 1 mg de lycopène et 0.15 mg d'astaxanthine. Le placebo était composé de cellulose microcristalline, d'amidon de riz, d'une capsule végétale (cellulose), de stéarate de magnésium et de colorants artificiels (FD&C jaune #6 et FD&C bleu #1).

La caractérisation polyphénolique du produit a été réalisée dans une précédente étude de Bresciani et al. par UHPLC-QqQ-MS, montrant un total de 119 composés polyphénoliques de différentes familles phénoliques, y compris des flavonols tels que le kaempférol et la quercétine, des anthocyanes et des flavones [77]. Concernant la biodisponibilité, la connaissance de la quantité biodisponible de polyphénols est plus intéressante que la quantité totale, puisque, dans de nombreuses situations, les polyphénols les plus abondants ne sont pas les plus actifs pour l'organisme [78]. Pour cette raison, Bresciani et al. a évalué la biodisponibilité du produit, constatant que sur les 92 molécules surveillées, seuls 20 métabolites circulants ont été identifiés dans le plasma, tous sous forme de restes de sulfate, de glucuronide ou de glycine, apparaissant à des moments différents dans le plasma en fonction de la localisation de l'absorption dans le tube digestif [79].

4.4. Variables d'étude

Toutes les variables ont été analysées quatre fois au cours de l'étude : au début et à la fin de chaque 16- semaine de phase de consommation du produit. Au cours de l'étude, les sujets n'étaient pas autorisés à commencer ou à modifier un traitement hormonal, ni à apporter des changements significatifs à leur régime alimentaire ou à leur activité physique qui pourraient affecter les variables de l'étude.

Mesures d'échantillons de sang

Les sujets devaient arriver après une période de jeûne de 12 h, n'autorisant la prise d'eau que dans les 3 h précédentes. L'exercice d'intensité modérée à élevée n'était pas autorisé 24 h avant l'extraction. Des échantillons de sang ont été prélevés dans la veine antécubitale dans un tube de prélèvement sanguin k3E/K3EDTA (3 mL) et des tubes de prélèvement sanguin avec gel sérique et activateur de caillots (5 mL) *3. Avant d'être envoyés au laboratoire (Laboratorios MUNUERA SL Murcie, Espagne), seuls les tubes de prélèvement sanguin Serum Gel et Clot Activator ont été centrifugés (4500 rpm, 5 min, 4 ◦C). Les biomarqueurs analysés pour chaque variable étaient : (a) Biomarqueurs pro-inflammatoires : OxLDL (ng/mL) par dosage ELISA dans des échantillons de sérum, TNF- (pg/mL) et sNTFR1 (ng/mL) par ELISA compétitif (marque de diagnostic DRG), CRP (mg/L) par dosage immunologique turbidimétrique (PETIA), et homocystéine (pg/mL) sur un analyseur BN ProSpec® (selon le protocole fourni dans le kit Siemens N Latex HCYOPAX 03) ; (b) vitamines : Vitamine E (mcg/mL) par HPLC avec un chromatographe JASCO (PU-980 IntelligentPLC-Plus) et une colonne Betasil-C18 (taille des particules 5 µm, 250 × 4,6 mm) connectée à une fluorescence JASCO (FP-920 Intelligent Fluorescense Detector) et de la vitamine B12 (pg/mL) par chimiluminescence avec des dosages immunologiques commerciaux utilisant l'équipement automatisé Centaur XPSiemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA) ; (c) catécholamines : Cortisol (mcg/L) en utilisant la technique de chimiominescence avec immunodosage Immulite 2000 (DPC, Gwynedd, RU), et noradrénaline (pg/mL), adrénaline (pg/mL) et dopamine (pg/mL) par HPLC avec un débit de 0,5 mL/min, une Tº de 35 °C, une sensibilité de 20, un potentiel de 0,7, une phase mobile d'acétonitrile-eau et une phase inverse de C18 à l'aide d'un détecteur électrochimique ; (d) hormones thyroïdiennes : T3 (mcg/L), T4 (mcg/L) et TSH (mU/l) à l'aide de l'équipement automatisé CentaurXP Siemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA) ; (e) statut immunitaire : IgA (mg/L) en utilisant la technique de turbidimétrie avec le test Monolab. Comme réactifs, du tampon Tris (20 mmol/L), du PEG 8000 et pH 8,3 ont été utilisés comme diluant et du sérum de chèvre, des IgA anti-humaines et pH 7,5 comme anticorps.

4.5. Analyses statistiques

Les variables continues sont présentées sous forme de moyenne ± écart-type (SD) au départ et dans leur évolution, en appliquant le test de Kolmogorov-Smirnov pour vérifier la distribution normale des données discontinues. L'analyse a été réalisée pour tous les sujets ayant participé à l'étude, dans la période de consommation du produit et du placebo. Pour les variables quantitatives, une comparaison par test t de Student a été effectuée entre les deux branches de l'étude. Pour analyser les différences entre les groupes (EXT et PLA) dans l'évolution des différentes variables, une analyse de variance à mesures répétées a été réalisée avec le temps comme facteur intra-sujet. Ainsi, des différences ont été établies pour chaque variable analysée en tenant compte de ces facteurs. Un test de Bonferroni a été réalisé pour l'analyse post-hoc. Les différences significatives ont été comparées (avec la possibilité de supposer ou non l'égalité des variances). Dans l'ensemble des tests statistiques, le niveau de signification choisi était 0.05. L'analyse statistique a été réalisée avec le logiciel SPSS 24 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA).

5. Conclusions

Nos recherches ont montré que la consommation chronique d'un extrait polyphénolique à base de baies, de fruits et de légumes dans une population en bonne santé qui ne mange pas les quantités recommandées de fruits et légumes par jour améliore le statut oxydatif et l'inflammation grâce à une amélioration de plusieurs biomarqueurs sanguins, en particulier OxLDL, CRP et HDL-cholestérol, améliorant également les valeurs des catécholamines, en particulier la dopamine.

Contributions des auteurs : Acquisition de financement, MPZ et JM ; enquête, RA et JM ; méthodologie, RA, J.Á.C., RX-M., BC, DV, MPZ et JM ; gestion de projet, JM; surveillance, JM ; validation, JM ; rédaction—révision et édition, RA, J.Á.C. et JM Tous les auteurs ont lu et accepté la version publiée du manuscrit.
Financement : Cette étude a été financée par Juice Plus Company. A aucun moment la société n'a collaboré à la conception ou à la gestion des données obtenues.
Déclaration du Comité d'examen institutionnel : Cette étude a été menée conformément aux directives de la Déclaration d'Helsinki, approuvées par le Comité d'éthique de l'Université catholique San Antonio de Murcie (UCAM) (date : 24 novembre 2017 ; code : CE111702).
Déclaration de consentement éclairé : Un consentement éclairé a été obtenu de tous les sujets impliqués dans l'étude.

Déclaration de disponibilité des données : pas nécessaire.
Remerciements : Les auteurs remercient les sujets pour leur participation à l'étude, ainsi que la société JuicePlus pour le soutien et la promotion de la recherche.
Conflits d'intérêts : Les auteurs déclarent n'avoir aucun conflit d'intérêts concernant le présent manuscrit.
Disponibilité des échantillons : Sans objet.

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