Effets des glycosides totaux de Cistanche Deserticola sur la prolifération, l'apoptose et l'expression de la protéine liée à la voie de signalisation Wnt/-caténine des cellules HepG2

FENG Duo1,2, WANG Jing2, JIANG Yong-jun3, ZHOU Shi-qi1, DUAN Hao1, GUO Yu1, ZHAO Jian1, YAN Wen-jie1,*

（1.Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances and Functional Food, College of Biochemical Engineering, Beijing Union University, Beijing 100023, Chine; 2. Institute of Food and Nutrition Development, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Beijing 100081, Chine; 3. Mongolie intérieure Sankou Biotechnology Co., Ltd., Ordos, Mongolie intérieure 017000, Chine）

Abstrait: Pour explorer l'effet inhibiteur deglycosides totaux deCistanche désertique(TG) sur les cellules HepG2 et son mécanisme. Dans cet article, différentes concentrations (0, 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 ug/mL) de TG ont été traitées pendant 24 h sur des cellules cancéreuses du foie HepG2, et la viabilité des cellules HepG2 a été détectée à l'aide du test CCK8 . La méthode de double coloration Hoechst33342/PI et l'annexine V-FITC/PI ont été utilisées pour détecter l'apoptose des cellules HepG2. Le phénomène de migration cellulaire a été détecté par le test de migration cellulaire. Pendant ce temps, les changements de progression du cycle cellulaire ont été détectés par cytométrie en flux. Et l'expression de -fetoprotein(AFP), -catenin, Disheveled (Dsh) et GSK-3 a été détectée par western blot. Les résultats ont montré que la TG pouvait réduire la prolifération des cellules HepG2 de manière dépendante de la concentration, avec seulement 31,04 % de viabilité cellulaire lorsque la TG était de 42 ug/mL. De plus, la TG pourrait endommager la structure cellulaire et induire l'apoptose cellulaire, et le taux d'apoptose pourrait atteindre 32,44 % par détection AV/PI. De plus, la TG pourrait également favoriser la nécrose cellulaire et limiter la migration cellulaire. Il y avait des différences significatives entre le groupe traité et le groupe témoin. Pendant ce temps, une concentration élevée de TG pourrait arrêter les cellules HepG2 dans la phase G2/M. Enfin, par rapport au groupe témoin, l'expression relative de -caténine et Dsh a diminué, tandis que GSK -3 a augmenté dans les groupes traités par TG. En conclusion, la TG pourrait inhiber la croissance des cellules HepG2 en affectant la progression du cycle cellulaire, en favorisant l'apoptose et en limitant la migration cellulaire. Le mécanisme peut passer par la voie de signalisation Wnt/-caténine, qui a activé GSK-3 pour dégrader la -caténine afin d'inhiber le cancer du foie.

Mots clés: Cistanche désertique; glycosides totaux; cellule HepG2; anti-hépatome; Voie du signal Wnt/-caténine

Cistanche deserticola maappartient à une substance médicinale et alimentaire homologue et est une plante herbacée vivace parasite des Orobaceae.Il a les effets antioxydant, anti-fatigue, anti-âge, anti-tumoral, protection du foie, régulation endocrinienne, amélioration de la capacité de mémoire et anti-ostéoporose. Il est connu comme "Ginseng du désert". Après avoir confirmé que la deserticola deserticola est devenue une substance médicinale et alimentaire homologue en 2018, elle a attiré beaucoup d'attention. Elle peut non seulement jouer la valeur d'application clinique de la phytothérapie chinoise, mais également affecter l'effet d'intervention nutritionnelle des aliments.Il montre également un grand potentiel dans le développement de nouveaux produits naturels contre le cancer du foie [2-3]. La recherche nutritionnelle et les effets fonctionnels des aliments deserticola deserticola sont de plus en plus approfondis [4].

Cistanche vivant dans le désert

Ces dernières années, il a été rapporté que Cistanche deserticola a uneanti-tumoraleffet. Ye et al. [5]ont découvert que l'échinacée extraite du sel de Cistanche deserticola peut inhiber la prolifération des cellules HepG2 en réduisant l'expression de TREM2 et en bloquant la voie du signal PI3K/AKT ; Certains chercheurs ont découvert que les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche deserticola peuvent inhiber la prolifération des cellules HepG2 [6] ; L'échinoside a un certain effet inhibiteur sur la prolifération des cellules 786-O du cancer du rein [7] et des cellules cancéreuses du côlon SW480 [8] ; Dans une autre étude, il a été démontré que les glycosides phényléthanoïdes de Cistanche deserticola réduisent les lésions hépatiques chez les souris porteuses de tumeurs H22 et améliorent la fonction immunitaire en réduisant les niveaux d'AFP, affectant ainsi la croissance tumorale [9]. La décoction de Cistanche deserticola [10] et le polysaccharide [11] peuvent tous deux passer par la voie de signalisation Wnt/ - La caténine améliore les symptômes cliniques des rats parkinsoniens et joue un rôle neuroprotecteur. De plus, des études ont montré que l'échinacée peut inhiber Wnt par/ - La voie de signalisation de la caténine joue un rôle anti-cancer du sein [12] ; En outre, il peut également réduire les cellules THP -1 dans la leucémie aiguë humaine - expression de la protéine caténine [13]. Depuis le début, la voie de signalisation Wnt/ - caténine a fait l'objet d'une attention considérable [14]. Il est rapporté qu'il peut être observé dans 20 % - 35 % des cas de CHC [15] - Activation de la caténine. Il existe de plus en plus de preuves que la voie de signalisation Wnt/ - Caténine joue un rôle important dans la survenue et le développement du cancer du foie [16], mais si les glycosides totaux de Cistanche deserticola régulent Wnt/ - Il existe peu de rapports sur l'effet anti-hépatome de la voie de signalisation caténine. Les glycosides totaux de l'extrait de Cistanche deserticola, y compris les glycosides phényléthanoïdes et d'autres glycosides [17], ont été étudiés dans cette expérience en étudiant la prolifération, l'apoptose, la migration et les niveaux d'expression des protéines associées des cellules HepG2 induites par les glycosides totaux de Cistanche deserticola (TG) , pour explorer le mécanisme d'inhibition des TG contre le cancer du foie et pour expliquer le mécanisme potentiel des TG contre le cancer du foie, pour fournir une base scientifique certaine pour enrichir davantage l'application clinique de Cistanche deserticola dans le domaine du cancer du foie.

Le glycoside de phényléthanol est le principal composant actif de Cistanche deserticola

1.Matériel et méthodes

1.1 Matériaux et instruments

Des cellules HepG2 (carcinomes hépatocellulaires humains) ont été achetées au Cell Center de l'Institut de médecine fondamentale de l'Université médicale de Pékin, en Chine.Les glycosides totaux dePoudre d'extrait de Cistanche(fraction massique supérieure ou égale à 75 %, combinée à l'échinacoside et au bord de la piscine, fournie par Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.) ont été dissoutes dans du milieu DMEM aux concentrations correspondantes de TG pour les expériences ultérieures.

Poudre d'extrait de Cistanche

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Le sérum bovin fœtal a été acheté chez Gibco, USA; Les anticorps (solution mixte de pénicilline-streptomycine gentamicine), le milieu DMEM-H, le kit de détection de l'apoptose cellulaire et du cycle cellulaire, la solution d'annexine V-FITC/colorant et la solution de colorant d'apoptose Hoechst 33342/PI ont été achetés auprès de Genview ; Le kit de détermination de la concentration de trypsine et de protéine BCA 0,25 % a été acheté auprès de Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd ; Les anticorps anti-caténine de lapin ont été achetés chez ABclonal; L'anticorps de lapin anti-Dsh (ADAR1) a été acheté chez Bios; Des anticorps de lapin anti-GSK3 et des anticorps de lapin anti-AFP ont été achetés auprès d'Affinity. Incubateur de cellules à CO2 (Innova CO-170), centrifugeuse de bureau à basse température et à grande vitesse (3K15, Sigma, Allemagne), instrument de marquage enzymatique multifonctionnel (INFINITE M NANO TECAN), microscope à fluorescence (C-SHG1, Nikon, Japon ), cytométrie en flux (FACSCALIBUR, BD, USA), appareil d'électrophorèse (EN027015, BIO-RAD, USA), appareil de transfert membranaire (043BR57802, BIO-RAD, USA).

1.2 Méthode expérimentale

1.2.1 Passage cellulaire

Les cellules HepG2 ont été cultivées dans un milieu complet DMEM contenant 10 % de sérum bovin fœtal et 1 % d'anticorps triples (100 U/mL de pénicilline, 100 mg/mL de streptomycine et de gentamicine) dans un incubateur à 5 % de CO2 à 37 heures. degré . Une fois que les cellules ont atteint une confluence de 80 % à 90 %, elles ont été digérées avec 0,25 % de trypsine (- EDTA) et repiquées dans un rapport de 1:2 à 4. Après 2-3 jours de croissance cellulaire, la croissance logarithmique des cellules en phase ont été prélevées pour une sous-culture ou des expériences ultérieures

1.2.2 Effet des TG sur la morphologie des cellules HepG2

Des cellules HepG2 de la phase de croissance logarithmique ont été prélevées et inoculées dans une plaque 24-puits avec une concentration cellulaire de 5 par puits × 104 pièces/mL, après que les cellules adhèrent à la paroi, ajouter TG à la concentration finale de 0, 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 μ G/mL, 0,5 mL par puits, cultivé pendant 24 heures, et observé la morphologie cellulaire de chaque groupe au microscope optique.

1.2.3 Effet des TG sur la prolifération des cellules HepG2

Prendre des cellules HepG2 au stade de croissance logarithmique et ajuster la concentration cellulaire à 1 × 104 pièces/puits, inoculées dans des plaques de 96 puits, en ajoutant 100 pièces par puits μ 50. Incuber dans un incubateur cellulaire. Après que les cellules ont adhéré à la paroi, elles sont traitées avec des médicaments selon 1.2.2 ci-dessus, et chaque groupe a six reperforations, cultivées pendant 24 heures. Le taux de survie cellulaire a été mesuré à l'aide de la méthode CCK8 et la valeur d'absorbance (DO) a été mesurée à une longueur d'onde de 450 nm. Le taux de survie cellulaire et le taux d'inhibition cellulaire ont été calculés en utilisant la formule suivante.

Dans la formule, le groupe blanc ne contient que du liquide CCK8, tandis que le groupe témoin contient 0 groupe de traitement μ G/mL, groupe expérimental : groupe de traitement 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 μ G/mL.

1.2.4 Effet des TG sur le cycle cellulaire HepG2

Prendre des cellules en phase de croissance logarithmique et appuyer sur 5 × Une densité cellulaire de 105 cellules par puits a été inoculée dans une plaque à six puits, et un système de 2 mL par puits contenait 5 × 105 cellules ont été placées dans une boîte de culture et soumises à un traitement médicamenteux comme décrit au point 1.2.2 ci-dessus. Après la culture, les opérations suivantes ont été effectuées selon les instructions du kit.

1.2.5 Effet des TG sur la migration des cellules HepG2 :

Sélectionnez les cellules en phase de croissance logarithmique et posez-les sur une plaque à six puits. Un système de 2 ml par puits contenant 6 × 105 cellules a été retiré lorsque l'adhésion cellulaire et l'agrégation cellulaire étaient supérieures à 90 %. Mener un traitement médicamenteux selon 1.2.2 ci-dessus. À 0 h, sélectionnez au hasard 5 champs de vision sous le microscope pour les photographies, placez-les dans l'incubateur pour une culture supplémentaire pendant 24 heures, prenez des photos sous le microscope optique, utilisez le logiciel Image J pour analyser la zone de zéro des cellules et calculez le taux de migration selon la formule suivante (2) [18].

1.2.6 Méthode de double coloration Hoechst 33342/PI pour la détection de l'apoptose

Sélectionnez les cellules en phase de croissance logarithmique et posez-les sur une plaque à puits {{0}}, avec un système de 0,5 ml contenant 3 × 104 cellules ont été traitées avec des médicaments selon 1.2.2 ci-dessus et 1 ml de tampon de coloration cellulaire a été ajouté, suivi de 5 µL de colorant Hoechst et de 5 µL de solution de colorant LPI pour la coloration. Incuber dans l'obscurité à 37 degrés pendant 7-10min, sortir une 24-plaque trouée, l'humidifier avec du PBS et prendre des photos avec un microscope à fluorescence pour observation.

1.2.7 Détection de l'apoptose des cellules HepG2 par double coloration Annexine V-FITC/PI

Sélectionner les cellules en phase de croissance logarithmique et les déposer sur une plaque à six puits, avec un système de 2 ml par puits contenant 2 × 105 cellules ont été traitées avec des médicaments selon 1.2.2 ci-dessus, et les opérations ultérieures ont été effectuées conformément aux instructions du kit, l'ajout de 5 μL d'annexine V-FITC et de 5 μL de solution de coloration PI a été incubé à 4 degrés dans l'obscurité, puis placé sur cytométrie en flux pour la détection de l'apoptose.

1.2.8 Effet de TG sur l'expression des protéines dans les cellules HepG2

Appuyez sur 2 × 106 cellules / cellule ont été traitées avec des médicaments selon 1.2.2 ci-dessus, en utilisant 80 μ L de lysat (RIPA: PMSF =100: 1) lyse les protéines, puis en utilisant l'électrophorèse SDS-PAGE pour séparer chaque échantillon de protéine (50 échantillons par puits μ g) Complétez le transfert de protéines sur la membrane PVDF dans un bain de glace, en utilisant 1 × Nettoyez la bande avec une solution tampon TBST, scellez lentement la table d'agitation BSA à température ambiante pendant 1 heure et ajoutez un anticorps (AFP, GSK3) en proportion-, - caténine, Dsh), incuber à 4 degrés pendant la nuit, puis incuber la membrane PVDF avec l'anticorps secondaire dilué à température ambiante pendant 1-2 heures. GAPDH est utilisé comme référence interne. Après avoir développé et fixé la membrane PVDF, observer les changements dans l'expression de la protéine cible [6].

1.3 Analyse des données

L'analyse de signification à facteur unique ANONA a été réalisée à l'aide du logiciel statistique SPSS 25.0 pour exprimer ; Les données expérimentales de cytométrie en flux ont été analysées à l'aide de Flowjo ; Utilisez Graphpad Prism 8.0.2 pour dessiner. P<0.05 indicates a statistically significant difference, while P<0.01 indicates a highly significant difference.

2.Résultats et analyse

2.1 Effet des TG sur la morphologie des cellules HepG2

figure 1 cellules hepg2 traitées avec différentes concentrations de tg pendant 24 h (200x)

Au cours du processus d'apoptose, tout d'abord, son volume diminuera et se déformera progressivement, puis les cellules adhérentes subiront lentement des processus tels que le rétrécissement, l'arrondi, la perte et la pycnose chromosomique intracellulaire. Certains noyaux subiront une rupture, une marginalisation et la formation de vésicules apoptotiques. Comme observé sur la figure 1, 3,5 et 10,5 μ Lorsque les cellules HepG2 ont été traitées avec g/mL de TG, le volume cellulaire a progressivement diminué ; Et puis observer visuellement 21 μ À g/mL, le noyau a commencé à rétrécir et le volume est devenu plus petit ; trente et un virgule cinq μ À g/mL, les cellules étaient accompagnées de débris flottants et cellulaires ; quarante-deux μ À g/mL, la membrane cellulaire se rompt complètement, les cellules subissent une lyse, une nécrose se produit et la limite n'est pas claire. Les cellules sont dans un état d'effondrement imminent et de mort.

2.2 Effet des TG sur la prolifération des cellules HepG2

Figure 2 Effet des TG sur la prolifération des cellules HepG2

Remarque : * représente la même chose que 0 μ La différence était significative à g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Comme on peut le voir sur la figure 2, après 24 heures de traitement avec différentes concentrations de TG, la prolifération des cellules HepG2 est limitée à des degrés divers. Comparé au taux de survie des cellules dans le groupe témoin, le taux de survie des cellules dans le groupe de traitement montre une tendance à la baisse avec une concentration croissante, qui est de 96,95 %, 92,59 %, 92,78 %, 77,24 %, 31,04 %, et la concentration est de 3,5, 10,5 et 21, respectivement μ Il n'y avait pas de différence significative en g/mL et la diminution était faible, tandis que 31,5 % μ G/mL et 42 μ À g/mL, il y avait une différence significative (P<0.01), with an IC50 of 37.77 after TG treatment μ g/mL. CCK8 test results indicate that when TG concentration is 21 μ When the concentration is above g/mL, the inhibitory effect on HepG2 cells is better.

2.3 Effet des TG sur le cycle cellulaire HepG2

Figure 3 Effets de différentes concentrations de TG sur le cycle cellulaire des cellules HepG2

Comme le montre la figure 3, après 24 heures de traitement avec différentes concentrations de TG, il a été constaté qu'à mesure que la concentration augmentait, la phase G0/G1 diminuait progressivement, représentant 59,9 %, 56,7 %, 56 %, 54 %, 33,4 % et 29,1 %, respectivement, avec une diminution significative ; La proportion de la phase S était de 14,3 %, 15,8 %, 16,8 %, 18,7 %, 25,1 % et 27,6 %, respectivement, avec des degrés d'augmentation variables ; 3.5-21 par rapport au groupe témoin (23,88 %) μ À g/mL, la phase G2/M a peu changé, représentant 25,85 %, 24,92 % et 25,33 %, respectivement. Lorsque TG est de 31,5 μ G/mL et 42 μ At g/mL, il a augmenté de manière significative, 37,89 % et 39,42 %, respectivement. Ce test a révélé que la TG à de faibles concentrations (3,5-21 μ G/mL), n'inhibe pas la division et la prolifération cellulaire de la manière principale qui affecte le cycle cellulaire, et à des concentrations élevées (31,5 μ G/mL et 42 μ G/mL) peut induire un arrêt cellulaire en phase S et en phase G2/M, inhibant ainsi la prolifération cellulaire. Dans le même temps, lorsque TG est de 31,5 μ G/mL et de 42 μ At g/mL, subG1 a également augmenté, ce qui est cohérent avec les recherches de Sun Qian et al. [19] que les dérivés de l'artémisinine peuvent augmenter le pic subG1 des cellules HepG2 à des concentrations élevées. Il a également découvert qu'avec l'augmentation de la concentration d'artémisinine, la proportion de cellules en phase G2/M augmente. Les résultats du cycle cellulaire suggèrent que TG peut favoriser l'inhibition de la progression du cycle cellulaire, induisant ainsi l'apoptose cellulaire.

2.4 Effet des TG sur la migration des cellules HepG2

Figure 4 Effets de différentes concentrations de TG sur la migration des cellules HepG2

Remarque : * représente la même chose que 0 μ La différence était significative à g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

La métastase des cellules cancéreuses est l'une des clés du traitement du cancer, et la récidive du cancer y est également étroitement liée. Afin d'étudier si TG peut inhiber la migration des cellules HepG2, une méthode de grattage a été utilisée pour observer la migration cellulaire. Comme le montre la figure 4, avec l'augmentation de la concentration de TG, la mobilité 24-heure diminue progressivement, et l'effet d'inhibition évident est. La mobilité est de 14,82 % , 13,42 % , 12,66 % , 10,11 % , 8,46 % , 7,24 % , 21 μ G/mL ont montré des différences significatives (P<0.05), 31.5 μ G/mL and 42 μ G/mL showed a significant difference (P<0.01). The results of this experiment indicate that TG can inhibit the migration of liver cancer cells, thereby limiting the metastasis of cancer to other tissues.

2.5 Méthode de double coloration Hoechst 33342/PI pour la détection de l'apoptose

Figure 5 Effets de différentes concentrations de TG sur Hoechst 33342/PI dans les cellules HepG2

La coloration nucléaire a été réalisée avec Hoechst 33342 pour détecter la condensation de la chromatine [20]. Les cellules normales présentaient un bleu faible, les cellules apoptotiques présentaient un bleu élevé/un rouge faible et les cellules nécrotiques présentaient un bleu faible/un rouge élevé. Comme on peut le voir sur la figure 5, par rapport au groupe témoin, dans le groupe de traitement TG, la concentration de chromatine et la fragmentation nucléaire ont été observées. Dans le même temps, lorsque TG était à 3.5-21, il a été observé que μ Dans la gamme de g/mL, la fluorescence bleue augmentait progressivement, suggérant que TG inhibe principalement la prolifération cellulaire par apoptose à de faibles concentrations ; Et au-dessus de 21 μ À g/mL, la fluorescence rouge augmente, suggérant que les TG endommagent et détruisent principalement la structure cellulaire pour tuer les cellules à des concentrations plus élevées. Les résultats de cette expérience indiquent que le traitement avec TG peut induire l'apoptose et la nécrose des cellules HepG2.

2.6 Annexine V-FITC/PI double coloration pour détecter l'effet de TG sur l'apoptose des cellules HepG2

Figure 6 Effet de TG sur la double coloration AV/PI des cellules HepG2

Remarque : * représente la même chose que 0 μ La différence était significative à g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Pour déterminer plus avant l'effet induisant l'apoptose de la TG sur les cellules HepG2, nous avons utilisé la méthode de double coloration à l'annexine V-FITC/PI pour colorer les cellules HepG2. Comme le montre la figure 6, avec l'augmentation de la concentration, le taux d'apoptose montre une tendance à la hausse, 0, 3,5, 21, 41 μ Les taux d'apoptose de g/mL étaient de 5,63 %, 7,65 %, 10,93 % et 32,44 %, respectivement, de manière dose-dépendante. Les résultats ont montré que la TG peut induire l'apoptose en détruisant l'intégrité membranaire des cellules HepG2. Ce résultat est cohérent avec les résultats de coloration AV/PI des cellules HepG2 discutés par Qi Xinxin et al. [6].

2.7 Effet de TG sur l'expression des protéines dans les cellules HepG2

Figure 7 Expression protéique dans les cellules HepG2 traitées avec différentes concentrations de TG

Remarque : * représente la même chose que 0 μ La différence était significative à g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

L'alpha-foetoprotéine (AFP) est utilisée comme marqueur sérique pour le diagnostic et les tests d'efficacité du cancer primitif du foie [21]. Comme on peut le voir sur la figure 7, par rapport au groupe témoin, le niveau d'expression de l'AFP dans le groupe de traitement a diminué, ce qui suggère que les TG peuvent inhiber dans une certaine mesure la survenue d'un cancer du foie, mais la probabilité d'inverser le cancer du foie est très faible. . De plus, Dsh - Le niveau de caténine a diminué de manière linéaire avec l'augmentation de la concentration du médicament ; GSK-3 Augmentation progressive, mais pas de manière dose-dépendante. Par conséquent, on suppose que TG peut réguler l'expression relative de Dsh - caténine et GSK -3, via la voie de signalisation classique Wnt / - caténine pour induire l'apoptose dans les cellules HepG2.

3 .Discussion et conclusion

Le cancer du foie est l'une des tumeurs malignes les plus courantes en Chine et se classe également parmi les trois principales maladies mortelles[22]. Les principales méthodes de traitement du cancer du foie comprennent la résection chirurgicale, la transplantation hépatique, la chimioradiothérapie et l'immunothérapie [23-25]. Il est rapporté qu'en 2016, le taux d'incidence du cancer du foie en Chine était de 9,57 % et le taux de mortalité atteignait 13,92 % [26]. "En raison des symptômes non spécifiques du cancer du foie précoce, une fois que les symptômes apparaissent, ils se situent principalement aux stades intermédiaire et avancé. Par conséquent, les gens sont plus actifs dans l'utilisation de la médecine traditionnelle chinoise pour traiter le cancer du foie [27]."Les gens croient que les composés naturels ont la moindre toxicité moléculaire et se sont révélés bénéfiques pour le traitement du cancer du foie, ils recherchent donc activement de nouveaux composés naturels pour le cancer du foie.

Les glycosides totaux de Cistanche deserticola peuvent inhiber les cellules cancéreuses du foie au stade précoce du cancer du foie

Ces dernières années, les multiples effets deCistanche désertiqueont attiré beaucoup d'attention et sont progressivement devenus l'un des points chauds du développement de la recherche sur les aliments sains et les médicaments. La morphologie cellulaire et les expériences CCK-8 ont confirmé qu'une certaine concentration de TG peut détruire la morphologie cellulaire et inhiber la croissance et la prolifération des cellules HepG2, et la concentration est directement proportionnelle au taux d'inhibition cellulaire.

Le cycle cellulaire fait référence à l'ensemble du processus qu'une cellule subit depuis la fin d'une mitose jusqu'à la fin de la division suivante. Il est divisé en deux étapes : l'interphase et la division. La cytométrie en flux utilise des colorants fluorescents pour distinguer la phase G0/G1, la phase S et la phase G2/M. Grâce à la détection du cycle cellulaire, on constate qu'après un traitement avec différentes concentrations de TG, on constate qu'à des concentrations élevées de TG (31,5 μ G/mL et 42 μ G/mL) peuvent empêcher les cellules d'être en phase G2/M et affectent l'activité des cellules HepG2, entraînant une cytotoxicité, inhibant ainsi la prolifération cellulaire. Au cours de la progression du cancer, les cellules cancéreuses des tumeurs primaires envahissent les tissus normaux adjacents, métastasent vers des sites distants et forment de nouvelles colonies. On estime qu'un total de 90 pour cent de la mortalité liée au cancer est due à des métastases [28]. La voie de signalisation Wnt est impliquée dans le processus de transformation des cellules épithéliales en cellules mésenchymateuses et de la transformation des cellules mésenchymateuses en cellules épithéliales pour favoriser la métastase du cancer. Dans le carcinome hépatocellulaire (CHC), des taux élevés de - caténine sont associés à une augmentation des métastases et à un mauvais pronostic [29]. Dans cette étude, il a été constaté que le taux de migration des cellules HepG2 traitées avec TG pendant 24 heures diminuait progressivement avec l'augmentation de la concentration, de manière dépendante de la concentration.Cela indique que la TG peut contrôler la migration des cellules cancéreuses et empêcher la propagation du cancer, éventuellement grâce à la réduction de la voie de signalisation Wnt - Expression de la caténine.En général, les noyaux affectés apparaissent plus petits ; Certaines chromatines se concentrent ou s'agrègent à la périphérie, tandis que d'autres ont des caractéristiques typiques telles que la fragmentation de la chromatine nucléaire et la formation de corps apoptotiques [30-31]. Hoechst 33342 est un colorant fluorescent bleu qui peut pénétrer la membrane cellulaire et a une faible toxicité pour les cellules. Certaines études ont montré que les caractéristiques morphologiques des cellules apoptotiques, y compris la coagulation et la fragmentation nucléaires, ont été observées dans les cellules HepG2 colorées avec Hoechst 33342 [32]. Dans cette expérience, il a été constaté qu'après 24 heures de traitement TG, la proportion de cellules présentant une coagulation de la chromatine et des fragments nucléaires fluorescents augmentait de manière concentration-dépendante, ce qui est cohérent avec les résultats de l'étude de Yang et al. [33] sur l'apoptose induite par le gingérol des cellules HepG2. En utilisant la méthode de double coloration Annexin V-FITC/PI pour détecter les cellules HepG2 traitées avec TG pendant 24 heures, il a été constaté quele taux d'apoptose des cellules a progressivement augmenté avec l'augmentation de la concentration.

Pourtal glycosides de Cistanche deserticol

Dsh, - Catenin et GSK-3 est un Wnt typique/ - Disheveled (Dvl/Dsh) est un régulateur important de la voie de signalisation de la caténine, qui est une protéine clé de la voie de signalisation Wnt et peut transmettre les signaux Wnt en aval effecteurs [34]. Dans la voie de signalisation Wnt classique, Dsh est convoqué à la membrane cellulaire par le récepteur Frizzled, qui agit comme un proto-oncogène et est associé au facteur inhibiteur de l'axe somatique (Axin), au gène de la polypose adénomateuse coli (APC) et à GSK -3 Liaison pour former un complexe de dégradation qui inhibe GSK-3 oui - La dégradation par phosphorylation de la caténine provoque - La caténine pénètre dans le noyau et fonctionne [34-36]. - La caténine est principalement exprimée dans la membrane cellulaire des cellules normales et est liée à l'adhésion cellulaire. Il participe également à la transmission de l'information des voies de signalisation Wnt, régulant la prolifération et la différenciation cellulaire. Lorsque la voie de signalisation Wnt est anormalement activée, - La redistribution de la caténine peut être une des causes de survenue tumorale [37]. Selon certaines informations, il peut être observé dans 20 % - 35 % des cas de CHC [15] - Activation de la caténine. Dans le même temps, il est également possible de supprimer Wnt par/ - La voie de signalisation de la caténine active l'autophagie pour inhiber la prolifération des cellules HepG2 [38]. Cette étude a révélé qu'après le traitement par TG, les cellules HepG2, Dsh - Le niveau de caténine diminuait de manière linéaire avec l'augmentation de la concentration du médicament ; GSK-3 Augmentation progressive, mais pas de manière dose-dépendante. Par conséquent, on peut en déduire que TG passe par la voie de signalisation Wnt/-caténine pour induire l'apoptose dans les cellules HepG2.

Les biomarqueurs les plus largement utilisés du cancer primitif du foie dans le monde sont - L'alpha-foetoprotéine (AFP) [39]. L'AFP joue un rôle important dans la surveillance précoce, la classification pathologique, la sélection du traitement et le pronostic des patients atteints d'un cancer primitif du foie. Quelle que soit la méthode de traitement, lorsque le taux d'AFP est supérieur à 400 ng/mL, cela entraînera une faible survie [40]. En détectant le niveau d'expression de la protéine AFP dans les cellules traitées avec TG,il a été constaté que la TG peut réduire efficacement l'expression de l'AFP, ce qui indique que la TG peut jouer un rôle dans l'inhibition des cellules cancéreuses du foie au stade précoce du cancer du foie.

Thé Cistanche

En résumé,les glycosides totaux de Cistanche deserticola inhibent la prolifération et la croissance des cellules HepG2 en influençant la progression du cycle cellulaire, en détruisant la structure cellulaire, en favorisant l'apoptose et en limitant la migration cellulaire.Le mécanisme d'action peut passer par la voie du signal Wnt/ - caténine, activant GSK-3 Dégradation - la caténine peut inhiber le cancer du foie, mais des recherches supplémentaires sont nécessaires. À l'avenir, les experts et les universitaires pourront explorer en profondeur l'application de Cistanche deserticola dans Wnt/ - Les molécules protéiques en amont et en aval de la voie de signalisation de la caténine sont utilisées pour vérifier les gènes cibles et explorer davantage le mécanisme d'action des glycosides totaux de Cistanche deserticola contre les cellules HepG2. De plus, en tant que substance médicinale et alimentaire homologue, la cistanche deserticola peut être consommée dans l'alimentation quotidienne pour assurer à la fois la prévention et le traitement, et également fournir une certaine base théorique pour la pratique de la Great Food Outlook, favorisant la construction d'une "Chine en bonne santé", et l'amélioration du niveau de santé de la population.

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