L'épigallocatéchine-3-le gallate favorise la maturation in vitro et le développement embryonnaire après FIV d'ovocytes porcins

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Objectif:L'épigallocatéchine-3-gallate (EGCG) est un ingrédient majeur des polyphénols de catéchine et exerce des effets protecteurs en raison de ses fortes propriétés antioxydantes. À notre connaissance, il manque encore des recherches systématiques sur les effets de l'EGCG sur la maturation in vitro (IVM) et la fécondation in vitro (FIV) des ovocytes porcins. La présente étude visait à déterminer les effets de l'EGCG sur l'IVM et la FIV des ovocytes porcins.

Méthodes : Des ovocytes porcins ont été traités avec différentes concentrations d'EGCG (5, 10 et 20 uM) et l'expansion des cellules cumulus, le taux de maturation des ovocytes, les espèces réactives de l'oxygène (ROS). les niveaux de glutathion (GSH) et de malondialdéhyde (MDA), la capacité antioxydante totale ont été déterminés. Les niveaux d'expression d'ARNm des gènes associés au stress oxydatif et à l'apoptose ont été déterminés par PCR quantitative en temps réel. Le taux de clivage et le taux de blastocystes des ovocytes après un traitement à l'EGCG de 10 μM pendant l'IVM et la FIV ont également été évalués. Résultats : L'EGCG à 5, 10 et 20 uM a significativement favorisé l'expansion des cellules du cumulus, et l'EGCG à 10 uM a augmenté le taux de maturation des ovocytes. Le traitement à l'EGCG (10 uM) a réduit les niveaux de ROS et de MDA tout en augmentant la capacité antioxydante et les concentrations de GSH dans les ovocytes matures. Les résultats de la qRT-PCR ont montré que le traitement à l'EGCG régulait à la hausse l'expression de l'ARNm de la catalase, de la glutathion peroxydase et de la superoxyde dismutase dans les ovocytes matures. De plus, le traitement à l'EGCG a également diminué les niveaux d'expression de l'ARNm de Bax et de la caspase-3 et augmenté le niveau d'expression de l'ARNm de Bcl-2 dans les ovocytes matures. De plus, le taux de clivage et le taux de blastocystes des ovocytes traités avec 10 μM d'EGCG pendant l'IVM et la FIV étaient significativement plus élevés que ceux du groupe témoin.

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Conclusion:Nos résultats suggèrent que l'EGCG favorise la maturation in vitro et le développement embryonnaire après FIV d'ovocytes porcins. Les effets protecteurs de l'EGCG sur les ovocytes pourraient être associés à ses propriétés antioxydantes et anti-apoptose. Mots clés : EGCG, ovocytes porcins, IVM, antioxydant, anti-apoptose, FIV

Introduction

La maturation in vitro (IVM) des ovocytes est une étape clé dans la production in vitro d'embryons pour le bétail.2 Les ovocytes issus d'IVM ont la capacité de fécondation et de développement en embryons, tandis que le taux de réussite du développement embryonnaire à partir d'ovocytes IVM est plus faible que celle des ovocytes maturés in vivo.3 La maturation des ovocytes nécessite à la fois une maturation cytoplasmique et nucléaire, et il a été suggéré qu'une maturation cytoplasmique incorrecte contribue au faible potentiel de développement des ovocytes IVM. Sur la base des études précédentes, une composition de milieu et des conditions de culture appropriées sont essentielles pour une IVM réussie des ovocytes.4 L'épigallocatéchine-3-gallate (EGCG) est l'un des principaux composés bioactifs du thé vert et appartient aux polyphénols de catéchine.5 L'EGCG a été bien connu pour son rôle dans la chélation des métaux de transition et donc la diminution du niveau de stress oxydatif.5 Des études expérimentales in vitro et in vivo ont montré que l'EGCG possède diverses fonctions biologiques, notamment la prévention des dommages chromosomiques par les espèces réactives de l'oxygène (ROS), antibactérien activités, activités anti-tumorales et inhibition de la lipogenèse. Dans les ovocytes IVM, Huang et al ont montré que l'EGCG dans le milieu IVM pouvait réduire le niveau de ROS et l'apoptose dans les ovocytes bovins et augmenter l'expansion des cellules cumulus. Roth et al ont montré que l'injection intrapéritonéale de l'antioxydant EGCG améliore la compétence de développement et la qualité des embryons qui se développent à partir d'ovocytes traités par hyperthermie chez la souris. Gadani et al ont montré que la supplémentation en EGCG du sperme de verrat décongelé améliorait la fécondation in vitro (FIV).8. Cependant, une étude récente de Bucci et al a démontré que la supplémentation en EGCG au milieu de décongélation n'a pas amélioré la qualité du sperme de chien ou la capacité de liaison à la zone. l'IVM et la FIV d'ovocytes porcins. La question de savoir si EGCGcan est utilisé comme antioxydant efficace pour les ovocytes porcins cultivés in vitro reste à explorer. Les effets de l'EGCG sur l'IVM et la FIV d'ovocytes porcins ont été systématiquement étudiés. De plus, le niveau de ROS, la capacité antioxydante, les niveaux d'expression de l'ARNm des gènes associés aux antioxydants et à l'apoptose dans les ovocytes ont été déterminés par les tests in vitro.

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Déclaration d'éthique des matériaux et des méthodes

Ce travail a été approuvé par le Comité d'éthique sur l'expérimentation animale de l'Université agricole de Chine du Sud.

Traitement EGCG

Le composé EGCG a été acheté auprès de Sigma-Aldrich (St. Louis, États-Unis) et a été préparé à une concentration de stock de 1 mM en utilisant un milieu M -199 (Sigma-Aldrich). Pour déterminer l'effet de l'EGCG sur l'indice d'expansion du cumulus et le taux de maturation in vitro des ovocytes, ainsi que la production de ROS des ovocytes, différentes concentrations d'EGCG(0,5, 1{{10} }, et 20 uM) ont été complétés par du milieu IVM (milieu M-199 complété avec 10 % de sérum bovin fœtal, 10 % de liquide folliculaire porcin, 0,57 mM de cystéine, 10 ng/mL de facteur de croissance épidermique, 10 UI/mL de gonadotrophine sérique de jument gestante et 10 UI/mL de gonadotrophine chorionique humaine). Pour déterminer les effets de l'EGCG sur la capacité antioxydante totale, la teneur en glutathion (GSH), le niveau de malondialdéhyde (MDA) et les niveaux d'expression de l'ARNm, l'EGCG (0 et 10 uM) a été ajouté au milieu IVM. Pour déterminer les effets de l'EGCG sur le potentiel de développement des ovocytes, l'EGCG (0 et 10 μM) a été complété pendant l'IVM et/ou la FIV, ou pendant l'IVM et/ou l'IVC.

Collecte d'ovocytes et maturation in vitro

Les ovaires ont été obtenus à partir de porcs juvéniles abattus dans un abattoir local (l'abattoir de Guangzhou Kongwangji, Guangzhou, Chine) et transférés au laboratoire dans 0.9 % de solution saline à 37 degrés en 2 heures. Le fluide folliculaire des follicules antraux de 3-8 mm a été aspiré par une seringue avec une aiguille de jauge de 18- attachée. Comme décrit précédemment, environ 50 complexes cumulus-ovocytes (COC) ont été cultivés dans 500 ul de milieu (IVM), recouvert d'huile minérale et cultivé pendant 44 h à 38,5 degrés dans un incubateur à 5 % de CO2 avec air humidifié.

Évaluation de l'expansion du cumulus et de l'IVM des ovocytes

L'expansion du cumulus a été enregistrée à 44 h d'IVM. L'évaluation a été réalisée en aveugle pour éliminer les biais. Le degré d'expansion du cumulus pour chaque COC a été évalué selon un système de notation subjectif sur une échelle de O-4, où 0 indique aucune expansion, 1 indique l'expansion minimale observable, 2 indique une expansion de la couches externes de cellules de cumulus, 3 indique une expansion de toutes les couches de cellules de cumulus à l'exception de la corona radiata et 4 indique une expansion complète de toutes les couches de cellules de cumulus.12 Le score moyen (0.0-4.{{10 }}) pour chaque groupe, dans chaque réplique (4-6 répliques), a ensuite été calculée pour obtenir une valeur appelée indice d'expansion cumulus. L'extrusion du premier globule polaire dans les ovocytes a été déterminée au microscope lumineux. Les ovocytes ont été classés comme suit : immatures (n'ont pas atteint la métaphase), matures (plaque de métaphase I présentée et corps polaire) et anormaux (toutes les aberrations chromosomiques telles que diploïde, métaphase I anormale, fuseau multidirectionnel et dispersion chromosomique). Le taux de maturation des ovocytes a été calculé comme suit : nombre d'ovocytes matures/ovocytes totaux examinés x 100 %.

Détermination des niveaux de ROS

Pour déterminer la teneur en ROS intracellulaire, 30 ovocytes matures ont été incubés pendant 20 min à 38,5 degrés C dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) contenant une sonde fluorescente de diacétate de 2',7'-dichlorofluorescéine 10uM (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Chine) dans l'obscurité. . Les ovocytes ont ensuite été lavés avec du PBS additionné de 1 % d'albumine de sérum bovin. Les images ont été capturées par un système de microscopie confocale (X71, Olympus, Japon) avec les mêmes paramètres de numérisation entre les groupes. L'intensité de fluorescence a été calculée avec le logiciel Image.J.

Dosage de la capacité antioxydante totale

La capacité antioxydante totale des ovocytes a été analysée à l'aide du kit de dosage de la capacité antioxydante totale avec la méthode ABTS (Beyotime, Pékin, Chine) selon le protocole du fabricant. Le test ABTS mesure la capacité antioxydante totale d'un échantillon et est basé sur l'ABTS· plus la décoloration radicale. Le radical cationique ABTS· plus est un chromophore qui absorbe à une longueur d'onde de 734 nm et est généré par une réaction d'oxydation d'ABTS(2,2'-and-bis-(3-ethylbenzthia-zolin-6- sulfonate d'ammonium) avec du persulfate de potassium.13

Quantification de la teneur en GSH

La teneur en GSH a été mesurée à l'aide du kit de dosage du glutathion total (S0053, Beyotime, Pékin, Chine) conformément aux instructions du fabricant. Ce kit utilise un test de recyclage enzymatique cinétique, basé sur l'oxydation du GSH par l'acide 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoïque), [DTNB] pour mesurer la teneur totale en glutathion (tGSH) des échantillons biologiques. Les étalons de glutathion ou les échantillons traités sont ajoutés aux puits de la plaque de microtitration, suivis de DTNB et de glutathion réductase. L'ajout de NADPH2 dans les puits initie la réduction progressive du DTNB par le GSH, provoquant une augmentation de la couleur qui est contrôlée à 405 nm. En bref, les échantillons ont été ensemencés dans des plaques à puits 96-, puis 150 ul de solution de détection ont été ajoutés à chaque puits. Une fois les échantillons équilibrés à température ambiante pendant 5 min, 50 μL d'une solution de NADPH -0 0,16 mg/mL ont été ajoutés. La teneur en GSH a été déterminée en divisant la valeur mesurée de l'acide 5-thio-2-nitrobenzoïque par le nombre d'ovocytes dans chaque échantillon.

Quantification du niveau de malondialdéhyde (MDA)

Le niveau de MDA dans les ovocytes a été analysé à l'aide d'un kit de dosage MDA (Beyotime) selon le protocole du fabricant. Le MDA réagit avec l'acide thiobarbiturique (TBA) pour donner un composé rouge qui a une absorbance maximale à 532 nm. Le réactif TBA a été préparé en mélangeant 0.2 mL de SDS (8,1 %), 1,5 mL d'acide acétique (20 %, pH=3.5) et 1,5 mL de TBA (0,8 %) ensemble, puis 100 ul de chaque échantillon d'ovocyte homogénéisé ont été mélangés avec ce réactif TBA de 200 ul. Le mélange a été incubé dans un bain d'eau bouillante pendant 15 min puis refroidi sur de la glace. Après refroidissement, le mélange est centrifugé à 4000 rpm pendant 10 min. L'absorbance du surnageant a été déterminée à 532 nm contre un blanc.

Fécondation in vitro et culture d'embryons L'expérience de FIV a été menée comme indiqué précédemment.14 En bref, les ovocytes prélevés à l'abattoir local ont été cultivés pendant 44 h et dénudés dans 1 mg/mL d'hyaluronidase dans du DPBS par pipetage mécanique ; puis, 10-15 ovocytes ont été regroupés et transférés dans le milieu de fertilisation TBM de 5 0 μL (NaCl 113,1 mM, 3.0 KCl mM, 7,5 mMCaCl2 : 2H2 O.2{{18} }. {{20}} Tris mM, glucose 11,0 mM, pyruvate de sodium 5,0 mM) contenant 2,5 mM de caféine et 2 mg/mL de BSA (fraction V) recouvert d'huile minérale. Le sperme frais (du porc Duroc âgé d'environ 12 mois et ayant des antécédents d'élevage multiple) fourni par la Guangxi Yangxiang Company Co. Ltd (Guangxi, Chine) a été lavé trois fois par centrifugation avec du DPBS additionné de 0,1 % de BSA à 1 500 tr/min. pendant 4 min. Les culots de spermatozoïdes ont été remis en suspension et dilués à 1 × 10 degrés spermatozoïdes/mL avec du TBM pour la capacitation dans l'incubateur à CO2 pendant 30 min. Ensuite, les spermatozoïdes capacitifs ont été ajoutés aux ovocytes contenant des gouttes avec une concentration finale de spermatozoïdes de 1 × 10 spermatozoïdes / ml et co-incubés pendant 6 heures à 39 degrés dans une atmosphère à 5% de CO2 dans l'air. Après fécondation, les ovocytes ont été lavés 3 fois avec du milieu PZM3 et cultivés avec du milieu PZM3 à 39 degrés C, 5 % d'O2, 5 % de CO2 et 90 % de N2 ; et 100 % d'humidité. Le clivage embryonnaire et la formation de blastocystes ont été évalués respectivement 48 h et 6 jours après l'insémination. Les formules pour évaluer les taux de clivage et de blastocyste étaient les suivantes taux de clivage=un nombre de clivage/nombre d'ovocytes matures ; taux de blastocystes=nombre de blastocystes/nombre d'ovocytes matures.

PCR quantitative en temps réel (qRTPCR) L'ARN total a été extrait des ovocytes matures à l'aide du réactif Trizol (Invitrogen, USA) et quantifié en mesurant l'absorbance à 260 nm. L'ARN a été inversement transcrit en ADNc à l'aide du kit HiScript"III-RT SuperMix (Vazyme, Nanjing, Chine). La PCR en temps réel a été réalisée sur un cycleur thermique qTOWER³ (Analytik Jena, Allemagne) à l'aide du kit ChamQrM Universal SYBR" qPCR Master Mix (Vazyme). Les niveaux d'expression d'ARNm des gènes détectés ont été normalisés par GAPDH et ont été calculés à l'aide de la méthode 2-AAc. Les séquences des amorces ont été présentées dans le tableau supplémentaire S1.

Analyses statistiques

Toutes les analyses de données ont été effectuées à l'aide du logiciel statistique R (version 3.6.3). Toutes les données ont été présentées sous forme de moyenne ± écart-type. Des différences significatives entre les différents groupes de traitement ont été évaluées à l'aide de tests de permutation. P<0.05 was="" considered="" statistically="">

Résultats

Effets de l'EGCG sur l'indice d'expansion Cumulus

La morphologie des ovocytes matures et des ovocytes avec la première extrusion de corps polaire, comme indiqué dans les figures supplémentaires S1A et S1B, respectivement. Tout d'abord, nous avons examiné l'indice d'expansion du cumulus dans les ovocytes après avoir été traités avec différentes concentrations d'EGCG, et comme le montre le tableau 1, l'EGCG à 5 et 10 μM a augmenté de manière significative l'indice d'expansion du cumulus par rapport au groupe témoin. （Groupe 5 μM contre 0groupe μM∶ 2,989 ±0.068 contre 2,438±0.081 ;10 μM groupe contre {{30}} groupe μM : 3,079 ± 0,110 contre 2,438 ± 0,081). Cependant, l'EGCG à 20 μM n'a eu aucun effet sur l'indice d'expansion du cumulus par rapport au groupe témoin (groupe 20 μM contre groupe 0 μM ∶ 2,879 ± 0,076 contre 2,438 ± 0,081).

Effets de l'EGCG sur le taux d'IVM des ovocytes

Les effets de l'EGCG sur le taux de maturation in vitro des ovocytes ont ensuite été déterminés. Comme le montre le tableau 2, le taux de maturation des ovocytes était plus élevé dans le groupe 5 et 20 μM par rapport au groupe témoin 0 μM EGCG ; tandis que la différence n'était pas statistiquement significative (tableau 2). D'autre part, le traitement EGCG 10 uM a augmenté de manière significative le taux de maturation des ovocytes par rapport au groupe témoin EGCG O μM (groupe 10 μM contre groupe 0 μM ∶ 58,63 ± 2,79% contre 46,27 ± 3,25%; P<>

Effets de l'EGCG sur le stress oxydatif des ovocytes

La production de ROS des ovocytes traités à l'EGCG a été déterminée par le test de production de ROS. Les images représentatives des signaux fluorescents ROS dans les ovocytes après traitement avec différentes concentrations d'EGCG ont été présentées à la figure 1A. La quantification de la coloration immuno-fluorescente a montré que l'EGCG à 5 μM n'affectait pas la production de ROS dans les ovocytes par rapport au groupe témoin 0 μM （Figure 1B）.EGCG à 10 et 20 uM considérablement réduit les niveaux de ROS des ovocytes par rapport au groupe témoin 0 μM EGCG (Figure 1B).

Comme l'EGCG à 10 μM pouvait augmenter l'indice d'expansion du cumulus et le taux de maturation des ovocytes, et également réduire le niveau de ROS dans les ovocytes, l'EGCG à 10 μM a été choisi pour les études ultérieures. Comme le montre la figure 1C, l'EGCG à 10 uM a augmenté de manière significative la capacité antioxydante des ovocytes par rapport au groupe témoin 0 uM (figure 1C). De plus, le niveau de glutathion a été augmenté tandis que le niveau de MDA a diminué dans les ovocytes traités avec 10 μM d'EGCG (Figure 1D et E).

En outre, la qRT-PCR a été réalisée pour déterminer les niveaux d'expression de l'ARNm des gènes liés au stress oxydatif, notamment la catalase (CAT), la glutathion peroxydase (GPx) et la superoxyde dismutase (SOD).EGCG à 10 μM de manière significative régulé à la hausse les niveaux d'expression d'ARNm de CAT, GPx et SOD par rapport au groupe témoin 0 μM (Figure 2A-C).

Effets de l'EGCG sur les niveaux d'expression de l'ARNm des gènes liés à l'apoptose dans les ovocytes

La qRT-PCR a été réalisée pour déterminer les niveaux d'expression de l'ARNm des gènes liés à l'apoptose, y compris

Figure I Effets de l'EGCG sur le stress oxydatif dans les ovocytes porcins matures. (A) Les images représentatives des signaux fluorescents ROS dans les ovocytes après traitement avec différentes concentrations d'EGCG. (B) Les effets de l'EGCG sur la production de ROS des ovocytes. Les effets de l'EGCG sur la capacité antioxydante (C), la concentration de glutathion (D) et la concentration de MDA (E) dans les ovocytes matures ont été déterminés par des tests in vitro respectifs. N=3 ; les différences significatives étaient indiquées par *P<>

Bax, Bcl-2 et caspase-3. L'EGCG à 10 μM a significativement diminué les niveaux d'expression de l'ARNm de Bax et de la caspase-3, et a augmenté le niveau d'expression de l'ARNm de Bcl-2 par rapport au groupe témoin OμM (Figure 3A-C). Effets de l'EGCG utilisé pendant l'IVM et la FIV sur le potentiel de développement des ovocytes

Les images représentatives des embryons et des blastocystes ont été présentées dans la figure supplémentaire SIC-S1E. OEUF

le traitement pendant la FIV a augmenté de manière significative le taux de clivage et le taux de blastocystes par rapport au groupe témoin (tableau 3). Le traitement à l'EGCG pendant l'IVM a augmenté de manière significative le taux de blastocystes, mais pas le taux de clivage par rapport au groupe témoin (tableau 3). De plus, le traitement à l'EGCG pendant l'IVM et l'IVC a augmenté de manière significative le taux de clivage et le taux de blastocystes par rapport aux trois autres groupes (tableau 3). Ces résultats ont indiqué que l'EGCG pendant l'IVM et la FIV pourrait favoriser le potentiel de développement des ovocytes.

Effets de l'EGCG utilisé pendant l'IVM et la CV sur le potentiel de développement des ovocytes

Le traitement à l'EGCG pendant l'IVC a significativement réduit le taux de clivage et le taux de blastocystes des ovocytes par rapport au groupe sans traitement à l'EGCG (tableau 4). D'autre part, le traitement à l'EGCG pendant l'IVM a augmenté de manière significative le taux de clivage et le taux de blastocystes des ovocytes par rapport au groupe sans traitement à l'EGCG (tableau 4). Le traitement à l'EGCG pendant l'IVM et l'IVC a considérablement réduit le taux de clivage et le taux de blastocystes des ovocytes par rapport au groupe sans traitement à l'EGCG et au groupe avec traitement à l'EGCG pendant l'IVM (tableau 4). Collectivement, ces résultats ont indiqué que le traitement à l'EGCG pendant l'IVM augmentait le potentiel de développement des ovocytes tandis que le traitement à l'EGCG pendant l'IVC atténuait le potentiel de développement des ovocytes.

Discussion

The IVM technique for the COC has been developed and applied to produce offspring in mammals including pigs, however, the rate of blastocytes formation following IVF is still low using IVM oocytes compared with that of in vivo-matured oocytes such as pigs. In pigs, the COCs are usually collected from medium size antral follicles(>3 mm de diamètre) où l'ovocyte a la capacité d'induire la maturation de l'ovocyte, alors que les cellules somatiques folliculaires n'acquièrent pas la capacité de répondre aux stimuli de l'ovulation. De plus, les environnements in vitro augmentent généralement la production cellulaire de ROS, qui a été impliquée comme la principale cause de dommages cellulaires. Par conséquent, l'optimisation des conditions de culture pour imiter les environnements in vivo est essentielle pour la croissance et la maturation normales des ovocytes. Dans la présente étude, différentes concentrations d'EGCG ont été ajoutées au milieu de culture de l'IVM, de la FIV et de l'IVC pour

observer la qualité de maturation des ovocytes. L'EGCG à 10 uM améliore significativement l'IVM des ovocytes porcins. Dans cette étude, la supplémentation en EGCG pendant la FIV et la CIV produit deux effets différents. La supplémentation en EGCG 10 uM pendant la FIV peut favoriser le taux de clivage des ovocytes, ce qui était cohérent avec les conclusions de Spinaci et al, montrant que la supplémentation en EGCG 10 uM pendant la FIV, mais pas en IVM, augmentait significativement le taux de fécondation.17 L'effet de l'ajout de L'EGCG pendant la FIV pourrait être due à son action sur le sperme et non sur l'oocyte.

Dans le processus de culture in vitro, les ovocytes et les embryons sont inévitablement exposés à la lumière et à une concentration d'oxygène plus élevée qu'in vivo, ce qui peut entraîner une production accrue d'osmoseurs inverses (anion superoxyde, peroxyde d'hydrogène et hydroxyle hautement réactif). Un grand nombre d'études ont montré que la supplémentation en antioxydants du milieu IVM peut améliorer la capacité de développement de l'embryon. L'EGCG agit comme un antioxydant qui modère ladélétèreeffets de l'hyperthermie maternelle sur les ovocytes folliculaires chez la souris.'Barberino et al ont démontré que l'EGCG atténuait l'apoptose des follicules préantraux par la voie de signalisation phosphatidylinositol-3-kinase/protéine kinase B après culture in vitro de tissu ovarien de mouton." Huang et al ont suggéré que l'EGCG 50 μM peut améliorer la maturation des ovocytes bovins et que le rôle protecteur de l'EGCG peut être corrélé à sa propriété antioxydante.6 En combinaison avec des études antérieures, nos résultats ont indiqué que les effets de l'EGCG sur l'IVM des ovocytes porcins peuvent être lié à l'effet antioxydant et anti-apoptose, qui a été exploré plus en détail dans la présente étude.

Une accumulation excessive de ROS peut entraîner un stress oxydatif, et nos résultats ont montré que l'EGCG peut augmenter la capacité antioxydante totale et réduire le niveau de ROS et de MDA dans les ovocytes porcins. Cela peut être dû au fait que l'EGCG peut éliminer directement les ROS et/ou que l'EGCG peut agir en synergie avec le système antioxydant. Les systèmes non enzymatiques reposent sur des molécules pour éteindre directement les ROS, tandis que les systèmes enzymatiques sont composés d'enzymes spécifiques qui détoxifient les ROS. Chez ces derniers, la famille SOD est importante dans la régulation du stress oxydatif. La SOD est la seule enzyme connue qui élimine directement les radicaux libres en catalysant la dismutation de l'anion superoxyde en peroxyde d'hydrogène. L'enzyme SOD régule les niveaux de superoxyde et de peroxyde d'hydrogène produits par les cellules, puis régule la transduction du signal cellulaire.1 La catalase est un antioxydant important et un marqueurenzymede peroxysomes. Il représente 40% du total des enzymes peroxysomes. C'est un oligomère antioxydant à utiliser avec quatre sous-unités identiques disposées en tétraèdres et c'est une enzyme importante qui protège les cellules des dommages oxydatifs des ROS.20 Le glutathion est un tripeptide composé d'acide glutamique, de cystéine et de glycine contenant des liaisons Y-amide et des groupes sulfhydryle. Il peut maintenir la fonction normale du système immunitaire et a un effet antioxydant. La glutathion peroxydase (GPX) combine l'oxydation du GSH avec la détoxification de H, O.21 Des études ont démontré que le stress thermique pouvait produire un stress oxydatif dans les ovocytes bubalins, ce qui déclenche l'élimination des ROS par le système de défense enzymatique antioxydant.22 Nos études ont constamment montré que l'EGCG réduisait le niveau de ROS et la teneur en MDA des ovocytes, tout en augmentant la teneur en GSH intracellulaire et le totalantioxydantcapacité.

Laapoptoseprocessus peut affecter la qualité et le taux de survie desovocyteset influencent ainsi le développement embryonnaire.23 Les protéines de la famille Bcl-2 jouent un rôle clé dans la régulation de la mort cellulaire grâce à l'interaction équilibrée entre les membres des protéines pro-apoptotiques et anti-apoptotiques.24 La protéine pro-apoptotique Bax est au cœur des mammifères. apoptose dépendante des mitochondries. La caspase-3 joue également un rôle irremplaçable dans l'apoptose cellulaire. La caspase-3 est l'enzyme d'épissage terminale la plus importante dans le processus d'apoptose cellulaire, et la caspase activée-3 est l'exécuteur clé de l'apoptose cellulaire. Nos résultats montrent que l'EGCG a régulé à la hausse le niveau d'expression de l'ARNm de Bcl-2, mais a diminué les niveaux d'expression de l'ARNm de Bax et de la caspase-3. Collectivement, ces résultats impliquent que les effets antioxydants et anti-apoptotique de l'EGCG dans les ovocytes porcins sont largement liés à la régulation de SOD1, CAT et GPX ainsi qu'aux gènes liés à l'apoptose.

Cet article est extrait de Drug Design, Development, and Therapy